«ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ЛИПОФИЛЬНОЙ ФРАКЦИИИ (УГЛЕВОДОРОДНОГО ЭКСТРАКТА) ЛИСТЬЕВ ШАЛФЕЯ И ЕЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ...»

Если растение оставляют для получения семян, то их убирают тогда, когда подсохнут чашечки у большинства нижних цветков. Далее их досушивают и очищают на веялках.

Заготавливают листья в течение лета. Сбор производят главным образом механизированным способом, иногда вручную. Траву скашивают косилками, высушивают на токах или в сушилках, затем обмолачивают, отделяют листья от стеблей путем просеивания через решета [19,40].

1.3. Химический состав шалфея лекарственного и его биологическая активность.

1.3.1. Химический состав растения шалфей лекарственный.

Химический состав листьев шалфея изучен достаточно полно.

Основными биологически активными веществами являются терпеноиды эфирного масла и флавоноидные соединения – апигенин, генкванин, космосиин, скутелляреин, цирсимаритин, гомоплантагенин, изоскутелляреин, лютеолин, гесперитин [29,147,156,158].

Кроме того, в листьях найдены алкалоиды, дубильные вещества, урсоловая, олеановая и хлорогеновая кислоты, витамин Р, никотиновая кислота, горечи, фитонциды, уваол, парадифенол [49,50,78,205].

Из семян выделено жирное масло, содержащее глицерид линолевой кислоты.

В корнях обнаружены высокоактивные антиоксиданты и дитерпеновые хиноны - ройлеаноны.

А в цветках найден сальвинин монометиловый эфир сальвина [83].

лекарственного.

Листья содержат эфирное масло (0,5-2,5%), в состав которого входят цинеол (до 15%), l--туйон, d--туйон, d--пинен, сальвен, d-борнеол (8d-камфора, цедрен [168]. По ФС и ГФ XI требуется содержание эфирного масла не менее 0,8% в цельном сырье [97].

Исходя из данных, полученных методом газовой хроматографии, автореферата Карасавиди А.О. следует, что в состав эфирного масла шалфея лекарственного входит не менее 19 соединений терпеноидной природы. Их количественное содержание варьируется от 0,08 до 28,93%. В наибольшем количестве содержится: камфоры - 28,9%; -туйона - 27,8%; -туйона цинеола -1,8 9,9% [40,41].

Также было проведено исследование компонентного состава масла шалфея, которое получали из высушенных наземных частей растения (цветков, листьев, стеблей) двумя дистилляционными процессами: дистилляция водой 120 мин и дистилляция паром 90 мин (прямое пропускание пара через сырье). Было установлено, что дистилляция водой превосходит дистилляцию паром в извлечение компонентов. Методом газовой хроматографии обнаружено компонентов эфирного масла шалфея: трициклен, a-туйен, a-pпинен, камфен, сабинен, -пинен, мирцен, 3-oктанол, -фелландрен, -терпинен, p-цимен, лимонен, 1,8-цинеол, (Z)--oкимен, (E)--oкимен, -терпинен, фенхон, терпинолен, линалол, -туйон, -туйон, 2-этилгексаноловая кислота, камфора, пинокамфон, бомеол, терпинен-4-oл, миртенол, -фенкай ацетат, линалил ацетат, бомил ацетат, карвакрол, -кубинен, эвгенол, -янген, -копанен, -бурбон, -кариофеллен, aромадендран, -хамулен, aллo-aромадендран, -муролен, -муролен, -кадинен, кадинен, транс-каламенен, (E)--бисаболен, -калакорен, кариофеллен оксид, виридифлор, -бисаболол, эпи--бисаболо, (Z)--транс-бергамотол, (Z,E)фарнезол, кариофеллен ацетат, (2,Z)-фамезол, (Z)-ланцелол, (Z)--трансбергамотол ацетат, (Z,E) фарнезил ацетат, скареол.

В масле всех частей растения в наибольшем количестве (более1,5%) присутствовали: a-пинен, камфен, лимонен, 1,8-цинеол, -пинен, -туйон, -туйон, камфора, бомеол, -кариофеллен, -хумулен, -мурулен, -кадинен, виридифлор, скареол [67,139, 150,192,193].

Причем содержание a-пинен, 1,8-цинеол было обнаружено в большем Бициклические монотерпены представляют собой соединения с двумя конденсированными неароматическими циклами (большим и малым) и одной двойной связью [179].

Тип пинана - «мостик» внутренний, между С2 и С4. Имеются углеводороды (пинены) и кислородные производные (например, спирт миртенол, кетон пинокарвон).

Тип туйана (или сабинана) - «мостик» внутренний, между С6 и С4. Из углеводородов известен сабинен, а из кислородных производных - спирты сабинол, туйол, кетон туйон [109,114,144,146,153].

1.3.3. Антибактериальная активность масла шалфея лекарственного.

Эфирные масла с глубокой древности применяются с антисептической целью, однако раньше они использовались эмпирически, и только после выявления микроорганизмов в литературе стали появляться сообщения об их антимикробных свойствах. Исследования антимикробного действия эфирного масла получило дальнейшие развитие после открытия феномена фитонцидов. Из 7 основных семейств, которые служат источниками эфирных масел: Астровые, Вересковые, Зверобойные, Ароидные, Сельдерейные, Сосновые, Яснотковые, наибольшим фунгистатическим эффектом против Aspergillus niger обладали представители семейства Яснотковые [187,190].

Они задерживали рост гриба в концентрации от 250 до 400 мкг/мл [29,206].

следующих микроорганизмах: Escherichia coli, Salmonella enteritidis, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Sarcina lutea, Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae, Aspergillus niger. Выявлено, что концентрация масла, которая останавливала рост B. Subtilis составляла 2%, St. Aureus - 0,2%, E. coli и P. Aeruginosa - 4%. На другие штаммы микроорганизмов масло также оказывает антибактериальное действие [138,140,142,149,159].

углеводородного экстракта листьев шалфея лекарственного.

В качестве экстрагента для получения углеводородного экстракта из листьев шалфея лекарственного использовался «Петролеум», который представляет собой высококипящую фракцию нефти [106,111,172,173].

Гомеопаты используют «PETROLEUM», называемый еще «Каменным или горным маслом», для лечения широкого спектра заболеваний [37,113].

1.4.1 Описание экстрагента и изучение его токсичности.

К сожалению, в РФ не производится данный препарат, поэтому вместо него используется авиационный керосин. Мнение ученых о нем довольно противоречивые. По-видимому, это связано с различными марками керосина, условиями его хранения, с различным способом введения его в организм: вдыхание паров, прием внутрь, втирание в кожу. Следует отметить, что керосин является прекрасным растворителем, и при неправильном хранении в него могут попадать токсические вещества, изменяя картину фармакологического эффекта и токсического воздействия.

Керосин - это тот же продукт перегонки нефти в диапазоне температур 180-300С. По внешнему виду - это светло-желтая жидкость, с красивой голубой флюоресценцией и своеобразным запахом. В воде керосин нерастворим, растворяется в 90° спирте до 1 - 1,5%, легко растворим в эфире, серной кислоте и хлороформе. Удельный вес керосина - 0,75-0,85.

Температура, при которой он начинает кипеть 90°С [18,79].

Целебные свойства керосина известны человеку с давних времен.

Изучение доступной литературы показывает, что в начале ХХ века керосин широко использовался для лечения животных и человека. В 1936 году Н.И.

Вещезеров в экспериментах доказал, что керосин, введенный в желудок животным, не оказывает тяжелых токсических воздействий [24]. В 1939 году М.И. Эммануэль [цитировано по 64] применял керосин для лечения больных людей. Имеются сведения об его использовании во время Первой мировой противопаразитарного препарата.

Зарегистировано, что влечет за собой тяжелых токсических явлений. Однако, повторные приемы больших его количеств (до 1 литра) сопровождаются выделением белка в моче, сильным жжением и болями в области желудка, обморочным состоянием, дрожанием и симптомами гастроэнтероколита [24].

Также отмечены токсические эффекты, вызванные химическими ожогами керосином у людей [84,102], случай острого отравления ребенка керосином без смертельного исхода, отравления людей бензином и керосином [25,64].

В работах академика Маленкова А.Г., члена-корреспондента Самылиной И.А., академика Чебышева Н.В., Стреляевой А.В. доказано, что токсичность авиационного керосина сопоставима с токсичностью этанола [66,95,118].

1.4.2. Фармакологическое действие петролеума.

Благодаря содержанию в керосине раздражающих, дезинфицирующих и биологически активных веществ, он издавна применяется в народной медицине.

Керосин применяется в разных лечебных направлениях. Например, в Германии, фармацевтическая фирма "Веледа" выпускает очищенный керосин под названием "Петролеум", который можно применять для растирания при ревматических заболеваниях суставов (при артритах). Он обладает положительным раздражающим и отхаркивающим действием при кашле и тяжелых бронхитах (может применяться и для детей). При этом рекомендуется принимать 1 каплю очищенного керосина или "Петролеума" на 1 стакан молока или чая до трех раз в день.

Существует народный способ лечения воспаления миндалин (при ангине) очищенным керосином: этим способом можно лечить ангину только в самом начале этой болезни. В профильтрованный керосин или "Петролеум" обмакивают кусочек ваты, намотанный на конец палочки. Затем этой ваткой смазывают миндалины во рту. Необходимо смазывать глубоко; насколько ватка на палочке может достать, и делать это каждые 30-60 минут в течение одного дня.

Ангина быстро проходит [20,87,92,99].

Еще его применяют как средство борьбы со вшами. Для этого вымытые волосы смачивают керосином, на голову надевают платок и выдерживают в течение 30 минут. Затем волосы тщательно и интенсивно расчесывают гребнем для удаления гнид и лишь, затем промывают теплой водой с мылом и высушивают. Этот способ известен на Руси уже столетиями и используется до сих пор особенно там, где отсутствуют специальные лекарственные препараты. Для этой же цели применяют мыльно-керосиновую эмульсию (керосин - 45г, зеленое мыло - 30г, горячая вода - 25 мл.).

1.4.3. Применение петролеума в гомеопатии.

Впервые использование петролеума было предложено С.Ганеманом [119].

Согласно разработкам Ж.Шаретта растворы низкого разведения на 96% спирте гораздо лучше действуют на болезнь [82,119,120,203].

Главные показания:

1. Экзема, появляющаяся на различных частях тела: кистях рук, на волосистой части головы, за ушами на стопах и даже в области мошонки или ануса.

Заболевание характеризуется появлением везикулезных и пустулезных высыпаний, возникающих параллельно с существованием кровоточащих трещин. Нередко подобные симптомы сопровождаются выделением характерного зловонного пота локализующегося в подмышечных впадинах и на ногах. Отмечается тенденция к ухудшению симптоматики в зимний период.

2. Гнойные заболевания кожи, характеризующиеся тем, что при малейшей царапине происходит нагноение.

3. Гастрит, симптомами которого являются специфические стреляющие боли в области желудка, возникающие в первую очередь у пациента в ночное время суток и натощак и заканчивающиеся после конкретного приема пищи.

Заболевание так же характеризуется периодическими приступами волчьего аппетита, который возникает по ночам.

4. Укачивание в транспорте, или морская болезнь с характерными симптомами в виде головокружения, тошноты, рвоты во время поездок на каком-либо транспорте.

5. Хронический цистит, специфическими симптомами которого являются выделение мочи по каплям, а также постоянные позывы к мочеиспусканию.

6. Артроз, возникающий на фоне расстройства обменного процесса в организме, характеризуется специфическим хрустом во время любого движения больного.

усиливающегося по ночам, а также при принятии горизонтального положения. При этом кашель имеет сильную отдачу в голову.

8. Грипп также с характерным сухим кашлем, вечерним ознобом, появлением ощущения жара на лице и похолодания в конечностях. Нередко фиксируются жалобы больных на приступы бреда, когда, кажется, что кто-то лежит рядом на кровати, что одна из конечностей двойная, что пациент раздвоился (Ж.Шаретт).

9. Снижение слуха наряду с появлением характерного шума в ушах.

10. Головная боль, локализующаяся обычно в области затылка. Нередко у пациента создается ощущение свинцового затылка [43-48,90,92,98].

1.5. Применение листьев шалфея.

1.5.1. Применение в академической и народной медицине.

ГФ XI предлагает использовать листья шалфея лекарственного в качестве противовоспалительного средства. Листья шалфея входят в состав сбора «Элекасол», грудного №3, «Сальваром» для ингаляции, во вторую пропись сбора Здренко, а также выпускаются измельченные листья в картонных коробках и препарат Сальвин [34,55].

В Европейской и Немецкой фармакопеях фармакологическое действие не оговаривается [163,172].

В народной медицине шалфей широко используется в ряде стран [152,154,155,178].

В Болгарии листья шалфея применяют как средство, ограничивающие потоотделение, показанное при ночных потах у больных туберкулезом легких;

для женщин в климактерический период, а также как средство, уменьшающие лактацию у кормящих матерей; при гастритах, колитах, язве желудка, воспалении печени и желчного пузыря.

В Польше шалфей лекарственный широко используется в лечебной практике как противовоспалительное, дезенфицирующие, мягчительное, вяжущие и снижающие потоотделение средство. Наружно используется при выпадении волос.

В Германии его применяют довольно широко и многосторонне как укрепляющее центральную нервную систему средство, при дрожании рук, против ночных потов, и как средство уменьшающее лактацию [30].

Во Франции трава шалфея используется так же широко, как и в других странах.

Австрийские ученые обнаружили в листья шалфея лекарственного РР-фактор и витамины группы В, действующие также, как эстрогенный гормон. Кроме того, его используют при заболеваниях желудка и кишечника, при катаре зева, ангине, как болеутоляющие средство в виде полосканий [4].

В корейской медицине используется в качестве болеутоляющего и противовоспалительного средства при ревматоидном артрите, болях в конечности, аллергической дисменорее, воспалении лимфатических узлов, фурункулезе [80].

В отечественной народной медицине шалфей также высоко ценится, как лечебное средство используются листья шалфея при гастритах, колитах, при заболевании печени, почек, при бронхитах, как отхаркивающее, мягчительное и мочегонное средство; при дрожательном параличе (при этом заболевании настой шалфея рекомендуется долго томить, принимать внутрь и делать шалфейные ванны). Зеленые листья, высушенные без стеблей, считаются полезными также при плохой памяти, ночных потах и водянке.

Во многих странах шалфей применяется как средство, обладающее антиоксидантной активностью [182,183,194,195] Наиболее широко применяется шалфей в виде полосканий при ангине, гингивитах, при язвах в области углов рта (особенно у детей), при свинке и др. Применяется в виде отвара, настоя, настойки, порошка [191,196,197].

Свежая трава применяется наружно при опухолях [69,160,165].

1.5.2. Шалфей лекарственный в гомеопатии.

Сальвия (Salvia officinalis) - шалфей аптечный - применяется в гомеопатии с 1898 г на основании данных общей медицины [129].

Является антидотом Тамарикса, а шалфею в свою очередь базилик служит антидотом [145].

Сальвия действует на секреторные железы, на сердце и сосуды, на нервно-мозговую систему [62,172].

Характерные признаки. Приливы крови к голове и к груди. Летучий жар с учащенным и полным пульсом, беспокойством и выступлением по всему телу обильного пота. Ощущение сухости во рту и зев, несмотря на усиленное слюноотделение, горький вкус, запор. Чувство общей слабости, разбитости.

угрюмость; неспособность к умственной работе; рассеянность.

Ухудшение страданий: днем, около полудня, зимою, от восточных ветров. Соответствует преимущественно женщинам, особам высокого роста, смуглым, худощавым.

изнурительные, как у чахоточных. Менее эффективен при ночных потах у больных туберкулезом с щекочущим, удушающим кашлем. Параличная слабость членов. Приливы крови к одним органам и отливы от других.

Замещающие кровотечения. Климактерий. Чрезмерное истечение молока из грудных желез у кормящих женщин.

Разведения. НМГ. Действие проявляется быстро, часа через 2 после приема, и длится от 2 до 6 дней [7,22,26,31,56,70,74-77,113,169].

1.6.

лекарственного.

Был проведен анализ нормативной документации РФ и зарубежных стран, который показал, что качество лекарственного растительного сырья листья шалфея лекарственного (рис.1.6.1) нормируется в частных фармакопейных статьях РФ, Германии, Европы.

Рис.1.6.1. Лекарственное растительное сырье - Folia Salviae officinalisцельное свежее и измельченное высушенное Выписка из Гомеопатической фармакопеи Германии [171].

Salvia officinalis - Шалфей лекарственный Используются свежие листья лекарственного растения Salvia officinalis L.

Листья обладают при растирании пряным запахом, слабым горьким вкусом.

Описание.

Листья сидячие или короткочерешковые. Листовая пластинка от 20 до 100мм в длину и от 10 до 50мм в ширину. Форма листа от удлиненнояйцевидной до эллиптической. Верхняя часть листа заостренная или слегка округлая. Лист в основании слегка клиновидный, сужающийся у черешка, часто с сердцевидным основанием и с одним или двумя ушками. Край листа слегка городчатый или ровный. Листовая пластинка с верхней стороны кажется морщинистой с нижней стороны неровной за счет того, что основная и боковые жилки листа образуют выступающую вперед сеть.

Листовая пластинка в начале развития с двух сторон опушена, позже становится с двух сторон оголенной.

Лекарственная форма:

Получение.

Матричная настойка и разведения по методу 3а.

Свойства.

Матричная настойка представляет собой зелено-коричневую жидкость с пряным запахом и пряным, слегка горьким вкусом.

Качественный анализ.

А. 5 мл матричной настойки смешивают с 5 мл петролейного эфира. Смесь 15 минут отстаивается. Отслоившаяся органическая фаза смешивается с 0,5 мл разбавленного раствора натрия гидрооксида и 0,5 мл воды. Смесь тщательно перемешивается. Верхний слой должен окрашиваться в розовый или краснокоричневый цвет.

Б. при добавлении к 2-ум мл матричной настойки 0,1 мл раствора хлорида закисного железа смесь становится оливково-зеленой.

В. 2 мл матричной настойки смешивается с 2-мя мл воды. Смесь взбалтывается с 3-мя мл и отделенная органическая фаза выпаривается под концентрированной серной кислотой. Смесь должна окраситься в темнокрасный цвет.

Г. Хроматография. Анализ проводится с помощью тонкослойной хроматографией на пластинках силикагеля.

Исследуемый раствор: 10 мл матричной настойки смешивается трехкратно с 5мл пентана. Отделенная органическая фаза высушивается безводным нитритом натрия и фильтруется. Фильтрат выпаривается под вакуумом досуха.

Остаток растворяется в 1 мл метанола.

Раствор свидетелей: 10 мг борнеола, 20 мг борнеолацетата и 30 µl цинеола растворяются в 10мл метанола.

Для исследования используется по 10 µl исследуемого раствора.

Хроматографирование ведется в системе растворителей эфир диизопропилового спирта в соотношении по объему 20:80. Длина пробега 100мм. После испарения органических растворителей хроматограмма обрабатывается анисовым альдегидом и прогревается 5-10 мин, при температуре 105-110°С. Результаты хроматографирования оцениваются в течение 10 минут при дневном освещении. На хроматограмме свидетелей в нижней зоне детектируется коричнево-фиолетовая зона борнеола, в средней части серо-фиолетовая зона цинеола и над ней коричнево-фиолетовая зона борнеолацетата.

На хроматограмме исследуемого раствора выше старта одна или две интенсивные зоны от голубого до темно-фиолетового цвета. Чуть выше стандартного образца борнеола две или три фиолетовые зоны. Между ними и зоной стандартного образца цинеола детектируется одна фиолетовая зона.

Могут присутствовать зона от фиолетового до розового цвета на уровне на уровне зоны стандартного образца борнеолацетата. На уровне линии растворителя детектируются одна или две фиолетовые или голубоватофиолетовые зоны.

Анализ чистоты.

Относительная плотность: от 0,895 до 0,915.

Сухой остаток: не менее 1.2% Хранение: в защищенном от света месте [171].

Выписка из Европейской Фармакопеи.

Листья Шалфея – Salvia officinalis.

Salviae officinalis folium.

Признаки.

Масло листьев шалфея (Salvia officinalis) богато туйоном.

Листья шалфея имеют макроскопические и микроскопические признаки, описанные в идентификационных тестах А и В, С.

Идентификация.

А. Листовая пластина шалфея лекарственного (Salvia officinalis) от 2 до 10см длинной и от 1 до 2см шириной, от продолговато-яйцевидной до эллиптической формы. Вершина округлая или слегка заостренная; основание округленное или клиновидное, сужающиеся у черешка. Верхняя поверхность листовой пластины зеленовато-серая и тонкозернистая; нижняя сторона белая и опушенная с плотной сетью рельефных жилок.

В. Измельчить в порошок. Порошок от светло-серого до коричневозеленого. Микроскопируют, используя раствор хлорал гидрата R. Порошок имеет следующие диагностические признаки: многочисленные волоски с узкими изогнутыми удлиненными клетками и утолщенными клетками в основании, а также фрагменты этих волосков; фрагменты верхней эпидермы с многоугольными клетками; фрагменты нижней эпидермы с извилистыми клетками и многочисленными диацитными устьицами. Имеются редкие железистые волоски с одно или двуклеточной головкой и состоящие из 1- клеток; эфирно-масличные железки с одноклеточной ножкой и головкой, состоящей из 8 радиально расположенных клеток.

С. Проверка тонкослойной хроматографией с использованием силикагеля как покрывающей субстанции.

Исследуемый раствор. Встряхнуть 0,3г свежей порошковой субстанции с 5мл эфира R в течение 5 минут и фильтруйте с 2г безводного сульфата натрия R.

Раствор свидетелей: растворить 5 l туйона R и 2 l цинеола R в 20 мл эфира R. Нанести отдельно на пластину полосой по 20 l каждого раствора.

Длина пробега смеси 5 объемов этилацетата R и 95 объемов толуола R 15см.

Высушить пластину на воздухе. Опрыскать раствором анисового альдегида R и сушить при 105-110 °С 10 минут. Посмотреть пластину в УФ-свете при длине волны 365 нм.

Полученная хроматограмма с растворами свидетелей имеет в нижней трети яркую зону флуоресценции цинеола и в средней трети красную зону флуоресценции туйона.

Полученная хроматограмма с исследуемым раствором имеет яркую флуоресцирующую зону соответствующую цинеолу и красную флуоресцирующую зону соответствующую туйону, обе приблизительно присутствуют и другие зоны.

Тесты.

Посторонние вещества (примеси): стеблей не более 3% и других примесей не более 2%.

Воды (влажность): не более 10%, определяемой дистилляцией 20 г.

Зола общая: не более 10%.

Количественное определение.

дистилляции. Используется 20 г сырья, которое помещают в колбу на 500 мл и приливают 250 мл воды, и 0,5 мл ксилена в градуированную трубку.

Скорость дистилляции 2-3мл/мин. 2 часа.

Хранение.

Хранить в хорошо закрытом резервуаре, защищенном от света [43].

Нами проведен сравнительный анализ нормативной документации на листья шалфея лекарственного (табл.1.6.1).

Сравнительный анализ нормативной документации на листья шалфея Внешние признаки Описание сырья Описание сырья Описание сырья сырья Количественное Эфирного масла отсутствует Эфирного масла Лекарственные отсутствуют Матричная настойка отсутствуют Фармакологическое Противовоспалительн отсутствует отсутствует 1.7. Анализ ассортимента лекарственных препаратов, содержащих шалфей.

Наиболее распространенными на Российском фармацевтическом рынке являются следующие лекарственные препараты, содержащие шалфей:

рассасывания N20 (Нидерланды), Шалфей без сахара N20 таблетки для рассасывания (Россия), Доктор Тайсс Шалфея экстракт c витамином C N12/N24 (Германия), Доктор Тайсс Шалфей - раствор для местного применения (Германия), Доктор Тайсс шалфей спрей для рта 30мл (Германия), Кармолис жидкость 250 мл (Австрия), Бронхолин шалфей сироп 125г (Казахстан), Шалфея листья 50г (Россия), Шалфея листья фильтр-пакет Масло шалфея лекарственного 10 мл (Австрия) [66,81,89].

В крупных аптечных сетях можно встретить следующие лекарственные препараты, содержащие шалфей: Лосьон-спрей для горла с эдельвейсом и шалфеем 30 мл (Швейцария), Ангинал спрей с шалфеем 30 г. (Чешская Республика), Стоматофит 45 и 120 мл (Польша), Стоматофит А 45 и 120 мл (Россия), Эвкалипт-М пастилки N12/N24, Сальвин 1,0% спиртовой раствор во флаконах по 10 мл (Украина), Кармолис капли 20, 50, 100 мл (Австрия).

Препараты шалфея существуют в следующих лекарственных формах, представленных в табл.1.7.1:

Лекарственные формы, в состав которых входит шалфей Растворы для Доктор Тайсс Шалфей - раствор для 7 23, наружного местного применения; Кармолис применения жидкость; Стоматофит; Лосьон Мази, гели, крема Кармолис гель для наружного 3 приема внутрь Таким образом, 30 препаратов содержащих шалфей находятся в лекарственных формах (30-100%) [35,36]. Для наглядности построена круговая диаграмма (рис.1.7.1):

Рис.1.7.1. Распределение препаратов шалфея по лекарственным формам(%) Как видно из выше представленной диаграммы (рис.1.7.1.) наиболее распространенными лекарственными формами, на долю которых приходится около 1/2 (27% и 17%) всех препаратов, содержащих шалфей лекарственный, являются растворы для наружного применения и чаи. Столько же приходится на такие лекарственные формы как таблетки, масла, мази, гели, крема и спреи.

Препараты производятся в различных странах, представленных в таблице ниже приведенной (табл.1.7.2.).

Страны производители препаратов содержащих шалфей Страна производитель Количество препаратов % Как видно из данных табл.1.7.2 более 50% препаратов производятся в Российской Федерации. Среди иностранных производителей лидирующую позицию занимают Нидерланды - 41%. Далее идет Германия, которая почти вдвое меньше производит препаратов шалфея, - 23,5% и Австрия - 12%.

Для наглядности приведена диаграмма на рис.1.7.2 процентного соотношения препаратов, содержащих шалфей, производимых в 8 странах:

Рис.1.7.2. Процентное соотношение производимых препаратов в различных странах. 1- Россия; 2- Нидерланды; 3- Германия; 4- Австрия; 5- Казахстан; 6 Швейцария; 7- Чехия; 8- Польша Наиболее распространенными лекарственными формами, на долю которых приходится более 1/3 (27% и 17%) всех препаратов, содержащих шалфей лекарственный, являются растворы для наружного применения и чаи. Более 50% производимых препаратов приходятся на долю Российской Федерации. Среди иностранных производителей лидирующую позицию занимают Нидерланды - 41% [91].

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Объектами исследования являлись:

1. Углеводородный экстракт листьев шалфея лекарственного (Salvia officinalis L.), полученный из высушенного сырья.

2. Настойка гомеопатизированная матричная листьев шалфея лекарственного (Salvia officinalis L.), полученная из высушенного сырья.

3. Спиртовое извлечение из листьев шалфея лекарственного (Salvia officinalis L.), полученное из высушенного сырья.

4. Спиртовое извлечение из листьев шалфея лекарственного (Salvia officinalis L.), полученное из свежего сырья.

5. Эфирное масло, полученное различными методами гидродистилляции из свежего, высушенного и сырья с длительным сроком хранения.

6. Экстрагент - петролеум (фракция нефти, выкипающая при температуре 180-300°С), полученный на основе авиационного керосина.

7. Препараты, полученные на основе углеводородного экстракта из листьев шалфея лекарственного.

2.2. Методика получения липофильных фракций (углеводородного экстракта, спиртовых извлечений, настойки гомеопатизированной матричной гомеопатизированной и эфирного масла).

Углеводородный экстракт из листьев шалфея лекарственного (Salvia officinalis L.) готовили методом мацерации в соотношении сырья и экстрагента 1:10 по массе. Брали точную навеску (50 г.) высушенных листьев шалфея лекарственного, соответствующих частной фармакопейной статье ГФ XI издания [34,115].

Мацерацию проводили в течение 2-х недель при периодическом перемешивании каждые 3 дня, затем фильтровали через бумажный фильтр и анализировали физико-химические свойства [21,42].

Спиртовые извлечения из шалфея лекарственного (Salvia officinalis L.) готовили методом мацерации в соотношении сырья и экстрагента 1:10. При изготовлении использовали свежие и высушенные листья шалфея лекарственного в количестве 50г [23,54,112].

Получение гомеопатизированных настоек проводилось в соответствии с ОФС 42-0027-05 «Настойки гомеопатические матричные» по методу 4.

Эфирное масло для исследований получали методом гидродистилляции.

Исходное свежее и высушенное сырье - листья шалфея - помещали в перегонную колбу и осуществляли гидродистилляцию: методом Гинзберга и методом Клевенджера [34,198].

2.3. Методы исследования В работе использованы реактивы, растворители, стандарты, отвечающие требованиям соответствующей нормативной документации.

Определение смешиваемсти (ОФС 42-0049-07 ГФ XII издания), а определение кислотного числа и сухого остатка углеводородного экстракта и спиртовых извлечений из листьев шалфея лекарственного проводили согласно методике ГФ XI издания. При определении смешиваемости использовались растворители марки «ХЧ»: хлороформ, гексан, этиловый эфир уксусной кислоты, спирт этиловый. Окраску определяли согласно ОФС 42-0050-07 ГФ XII издания. В статью включены методы контроля качества лекарственных средств по показателям «цветность» и «цветность раствора»

[32-34].

Определение прозрачности и степени мутности проводили согласно ОФС 42-0051-07 ГФ ХII издания путем сравнения испытуемой жидкости с растворителем визуально [32].

Определение плотности проводили согласно методике изложенной в ГФ XII издания в ОФС 42-0037-07. При определении плотности мы действовали согласно методу №1, который используется для определения плотности жидкостей с точностью до ± 0,001 г/см3 с помощью пикнометра [32].

Идентификацию БАВ (терпеноидов, флавоноидов, дубильных веществ) проводили методом хроматографии в тонком слое сорбента на пластинках растворителей: бензол:этилацетат (7:3); хлороформ; бензол:этилацетат (5:1);

петролейный эфир:диэтиловый эфир (4:1); хлороформ:спирт (7:3); Безводная муравьиная кислота:этилацетат:толуол (10:30:60); вода:безводная муравьиная кислота:этилацетат (6:6:88); 15% уксусная кислота. В качестве растворов свидетелей использовались : РСО 1,8-цинеола, РСО -пинена, РСО мирцена, РСО галловой кислоты, рутин 0,025% в 60% спирте, кверцетин 0,025% в 96% спирте [51,134,177].

Другие реактивы и стандартные образцы, необходимые для проведения ТСХ, готовили в соответствии с требованиями ГФ XI издания, Вып. 2 [34].

углеводородного экстракта, настойки гомеопатизированной матричной, углеводородного экстрагента (петролеума) изучали методом газовой хромато-масс-спектрометрии. Исследование проводили на приборе фирмы Agilent Technologies, состоящем из: 1) газового хроматографа 7890 (колонка HP-5, 50 м x 320 мкм x 1.05 мкм) и 2) масс-селективного детектора 5975 C с квадрупольным масс-анализатором. Температурная программа хроматографирования: при 40°С - изотерма 2 мин; далее программируемый нагрев до 250°С со скоростью 5°С/мин; при 250°С - изотерма 15 мин; далее программируемый нагрев до 320°С со скоростью 25°С/мин; при 320°С изотерма 5 мин. Инжектор с делением потока 1:50. Температура инжектора 250°С. Температура интерфейса 280°С. Газ носитель - гелий; скорость потока -1 мл/мин. Хроматограмма образцов - по полному ионному току. Условия масс-спектрометрического анализа: энергия ионизирующих электронов эВ; регистрация масс-спектров в положительных ионах в диапазоне (m/z) от 20 до 450 со скоростью 2.5 скан/сек. Программное обеспечение - ChemStation E 02.00. Идентификацию компонентного состава (качественный анализ) соответствующим значениям хроматографических линейных индексов удерживания (I). Относительное содержание (%) компонентов смеси (количественный анализ) вычисляли из соотношения площадей хроматографических пиков (методом простой нормировки) [57,107,108,171,201].

Оптические спектры поглощения петролеума, экстрактов и эфирного масла были выполнены на однолучевом спектрофотометре Hitachi U 1900в, при комнатной температуре и атмосферном давлении (кварцевая кювета имеет длину оптического пути 10мм). Данные регистрировали и записывали с интервалом 2 нм со скоростью сканирования 1200 нм в минуту в диапазоне от 800 до 200 нм [184].

Изучение воздействия ультразвука на экстракцию проводили в течение разного времени (10 и 60 минут), используя ультразвуковой прибор CITIZEN SW 1500 [15,39,72].

Антиоксидантную активность листьев шалфея лекарственного изучали, используя амперометрическую установку ЦветЯуза-01-АА Амперометрическая установка ЦветЯуза-01-АА представляет собой электрохимическую ячейку со стеклоуглеродным анодом и катодом из нержавеющей стали, к которым приложена разность потенциалов 1,3В [68,182]. Анализируемая проба с помощью шестиходового крана-дозатора с объемом петли 20 мкл вводится в поток элюента (слабый водный раствор ортофосфорной кислоты), прокачиваемый насосом через электрохимическую ячейку со скоростью 1,2 мл/мин. При прохождении пробы через ячейку регистрируется ток электрохимического окисления АО, развертка которого во времени выводится на монитор компьютера. Предварительно строится градуировочная зависимость сигнала (площади под амперометрической кривой) образца сравнения - галловой кислоты, от ее концентрации. Зная площадь под кривой, даваемой исследуемым экстрактом в пределах диапазона градуировки, можно определить в нем содержание АО в пересчете на галловую кислоту и, соответственно, содержание АО в тканях исследуемого растения (в мг/г или мкмоль/г):

САО = (S /S0)· C0· K· Vэкстр / m, где S - площадь под амперометрической кривой исследуемого образца, нА·с;

S0 - площадь под амперометрической кривой галловой кислоты, нА·с; C0 концентрация раствора галловой кислоты, мг/мл или мкмоль/мл; К коэффициент разбавления анализируемого экстракта перед введением в прибор, Vэкстр - объем полученного экстракта, мл; m - масса навески анализируемого образца в граммах [121,125,133,186,207].

При исследовавнии крови животных на пециломикоз использовали окраску метиленовым синим или голубым. С этой целью брали 1 г краски и растворяли в 99 мл физиологического раствора - это маточный раствор. Из него брали 1 мл и вновь растворяли в 99 мл физиологического раствора.

Получали рабочий растворитель, который перед исследованием крови разливали по 4 мл в каждую чистую пробирку. От животного брали в пипетку 0,02 мл крови и растворяли её в 4 мл рабочего растворителя, затем выдерживали в течение 10-15 минут в холодильнике при низкой плюсовой температуре для лучшего окрашивания и фиксации препарата [11,185,188].

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА ИЗУЧЕНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ

ЛИПОФИЛЬНЫХ ФРАКЦИЙ ЛИСТЬЕВ ШАЛФЕЯ

ЛЕКАРСТВЕННОГО.

Изучение степени окраски проводили двумя методами. Согласно первому методу испытание проводили в одинаковых пробирках из бесцветного, прозрачного, нейтрального стекла с внутренним диаметром около 12 мм, используя равные объемы - 2,0 мл углеводородного экстракта и воды, или растворителя. Сравнивали окраску в дневном отраженном свете, горизонтально (перпендикулярно оси пробирок) на матово-белом фоне.

Согласно второму методу испытание проводили в одинаковых пробирках из бесцветного, прозрачного, нейтрального стекла с внутренним диаметром от 15 до 25 мм, используя равные слои высотой 40мм испытуемой жидкости и воды, или растворителя. Сравнивали окраску в дневном отраженном свете сверху вдоль вертикальной оси пробирок на матово-белом фоне.

Рис.3.1.1. Углеводородный экстракт высушенных листьев шалфея лекарственного и вода очищенная При изучении прозрачности и степени мутности углеводородного экстракта испытание проводили в пробирках с притертой пробкой из прозрачного бесцветного стекла с внутренним диаметром около 15мм. Для сравнения брали по 10 мл растворителя и испытуемой жидкости. Испытание проводили при освещении электрической лампой матового стекла мощностью 40 Вт, расположенной над образцом, просматривая растворы перпендикулярно вертикальной оси пробирок на черном фон (рис.3.1.1.).

Исследуемую жидкость считали прозрачной, если она по прозрачности не отличалась от воды или растворителя, используемого при приготовлении испытуемой жидкости.

лекарственного представляет собой прозрачную жидкость темно-зеленого цвета с резким специфическим запахом.

3.2.

лекарственного.

Была изучена смешиваемость 1мл полученного углеводородного экстракта листьев шалфея лекарственного с различными растворителями.

Проводили по три параллельных определения. В качестве растворителей нами были взяты гексан, этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат), хлороформ, спирт этиловый 96%, вода очищенная. Как видно на рисунке (рис.3.2.1.) углеводородный экстракт хорошо смешивается с гексаном, этиловым эфиром уксусной кислоты, хлороформом в соотношении 1:1. И плохо смешивается с этиловым спиртом и водой очищенной в соотношении 1:1.

Только при добавлении к 1 мл углеводородного экстракта из листьев шалфея лекарственного 100 мл этилового спирта наблюдалось полное смешение исследуемой жидкости и растворителя. А при добавлении к 1мл углеводородного экстракта 1000 мл воды смешения так и не наблюдалось.

Рис.3.2.1. Смешиваемость углеводородного экстракта с различными растворителями в соотношении 1:1: 1-вода очищенная; 2-гексан; 3-этилацетат;

4-хлороформ; 5-этиловый спирт 96% 3.3. Кислотное число углеводородного экстракта листьев шалфея.

Кислотным числом называют количество миллиграммов едкого калия, необходимое для нейтрализации свободных кислот, содержащихся в 1г исследуемого вещества.

Кислотное число (Кч) вычисляли по формуле:

Где а - количество миллилитров раствора едкого натрия (0,1моль/л), израсходованное на титрование; б - навеска вещества в граммах; 5, количество миллиграммов едкого калия, соответствующее 1 мл раствора едкого натрия (0,1 моль/л) [37].

Было исследовано по 5 образцов углеводородного экстракта и самого экстрагента. Кислотное число углеводородного экстракта составило Kч(э) = 1,82±0,03; Петролеума Кч(п) = 0,71±0,03.

3.4. Определение сухого остатка углеводородного экстракта листьев шалфея лекарственного.

10 мл углеводородного экстракта из листьев шалфея пипеткой помещали во взвешенный бюкс, предварительно высушенный при температуре 100-105°С до постоянной массы. Выпаривали на водяной бане досуха и сушили два часа при 102,5 ± 2,5°С до постоянной массы, затем охлаждали в течение 30 минут в эксикаторе, на дне которого находился безводный хлорид кальция, и немедленно взвешивали на электронных весах [14].

Содержание сухого остатка вычисляли по формуле:

a – масса бюкса вместе с экстрактом, c – масса бюкса с сухим остатком.

Сухой остаток углеводородного экстракта шалфея представляет собой аморфное вещество темно-зеленого цвета, без запаха, практически не растворимое в воде, хорошо растворимое в спирте, толуоле, хлороформе, гексане, ацетоне.

Сухой остаток (рис.3.4.1) углеводородного экстракта из высушенных листьев шалфея составляет 1,32±0.07 с 90% доверительной вероятностью.

Была проведена математико-статистическая обработка, которая дала следующие данные, представленные в табл.3.4.1.

Рис.3.4.1. Сухой остаток углеводородного экстракта из высушенных листьев шалфея Математико-статистическая обработка опредления сухого остатка Значен Средне диспер Стандарт Стандарт Доверитель Относител Относител результ значен отклонен отклонен интервал погрешнос погрешнос 1, 1, 1, 1, 3.5. Определение плотности углеводородного экстракта, спиртовых извлечений и петролеума.

Плотность - это масса единицы объема вещества. Определение плотности проводили согласно методике изложенной в ГФ XII издания в ОФС 42-0037-07.

При определении плотности мы действовали согласно методу №1, который используется для определения плотности жидкостей с точностью до ± 0,001 г/см3 с помощью пикнометра.

Чистый сухой пикнометр взвешивали с точностью до 0,0002 г, заполняли с помощью маленькой воронки дистиллированной водой немного выше метки, закрывали пробкой и выдерживают в течение 20 мин. в термостате при температуре (20±0,1)C. При этой температуре уровень воды в пикнометре доводили до метки, отбирая излишек воды с помощью свернутой в трубку полоски фильтровальной бумаги. Затем пикнометр снова закрывали пробкой и выдерживали в термостате еще 10 мин. После этого вынимали и вытирали фильтровальной бумагой весь пикнометр и внутреннюю поверхность горлышка. Потом проверили положение мениска воды, которое должно быть на уровне метки, и оставили под стеклом аналитических весов на 10 мин. с последующим взвешиванием.

Пикнометр освободили от воды, высушили, промыли последовательно этиловым спиртом и эфиром, после удалили остатки эфира продуванием воздуха, и заполнили пикнометр испытуемыми жидкостями и проводили те же операции, что и с водой дистиллированной. В качестве испытуемых жидкостей брали: петролеум, углеводородный экстракт из высушенных листьев шалфея лекарственного и спиртовые извлечения из свежих и высушенных листьев шалфея.

Плотность ро20 (г/см3) вычисляли по формуле:

m - масса пустого пикнометра, в граммах;

m1 - масса пикнометра с дистиллированной водой, в граммах;

m2 - масса пикнометра с испытуемой жидкостью, в граммах;

0,99703 - значение плотности воды при 20C, в г/см3 (с учетом плотности воздуха);

0,0012 - значение плотности воздуха при 20C и барометрическом давлении 101,1 кПа (760 мм рт. ст.).

Плотность петролеума составила 0,7869±0,001 г/см3; углеводородного экстракта листьев шалфея - 0,7919±0,001 г/см3; спиртового извлечения из высушенных листьев шалфея - 0,8290±0,001 г/см3; спиртового извлечения из свежих листьев шалфея 0,8156±0,001 г/см3.

3.6. Разработка методики проведения тонкослойной хроматографии.

хроматографического портрета.

Тонкослойная хроматография (ТСХ) – это наиболее простой вариант хроматографии. Ее преимущество заключается в том, что при небольших затратах можно быстро и эффективно разделить различные смеси при их минимальном объеме, а также в том, что пластинки для хроматографии производятся промышленным способом.

диссертации, для определения терпеноидных соединений в эфирном масле шалфея лекарственного наиболее оптимальными системами растворителей являются: хлороформ, гексан:эфир (8:2), бензол:хлороформ (25:75), гексан:этилацетат (9:1), гексан:этилацетат (96:4), бензол:этилацетат (85:15), бензол:метанол (1:1). Причем наилучшее разделение компонентов наблюдалось в системе гексан:эфир (8:2) [40,41].

Выбор систем растворителя проводился с учётом их доступности, использовались пластинки «Silufol» и «Sorbfil». Для получения достоверных результатов мы соблюдали все необходимые условия хроматографирования.

элюированием. Камеры насыщались парами растворителя в течении 2- часов, для увеличения эффективности разделения и сокращения времени хроматографирования. Нанесение проб и рабочих стандартных образцов (РСО) проводили микрошприцами.

Расстояние от нижнего края пластинки до линии старта – 10 мм, боковых краёв пластинки до точки нанесения пробы – 15 мм. Между наносимыми пробами не менее 10 мм (для избежания краевых эффектов). Фронт пробега растворителя или системы растворителей зависел от используемой пластинки. Обработку полученных хроматограмм проводили вручную.

Сравнительный анализ углеводородного экстракта и спиртовых извлечений из листьев шалфея лекарственного (Salvia officinalis L) проводили методом тонкослойной хроматографии на пластинках «Silufol» (5х15 см) и «Sorbfil» (10х10 см) в различных системах растворителей.

бензол:этилацетат (7:3). Схема хроматографического исследования приведена ниже в табл.3.6.1.1.

Схема хроматографического исследования различных извлечений из листьев Вид хроматографии Восходящая хроматография на пластинках «Sorbfil»

Объект исследования 1.Спиртовое извлечение из высушенных листьев Система растворителей Бензол:этилацетат (7:3) Детектирующий агент 1% раствор п-диметиламинобензальдегида в 75% НФ: пластинка «Sorbfil»

ПФ: Бензол:этилацетат (7:3) Детектирующий агент 1% раствор п- 7-0,65; 8-51; 9-0,38; 10-0, диметиламинобензальдегида в 75% растворе серной кислоты А – Спиртовое извлечение из высушенных Rf В: 1-0,97; 2-0,72; 3-0, листьев шалфея лекарственного Б – Углеводородный экстракт из листьев шалфея лекарственного Рис.3.6.1.1. Хроматограмма спиртовых и углеводородных извлечений из листьев шалфея на пластине «Sorbfil» в системе растворителей бензолэтилацетат (7:3) При хроматографировании с использованием пластинки «Sorbfil» в системе растворителей бензол: этилацетат (7:3). Наблюдалось 10 зон адсорбции в месте нанесения спиртового извлечения из высушенных листьев шалфея лекарственного; 5 зон адсорбции - углеводородного экстракта из листьев шалфея лекарственного и 3 зоны адсорбции спиртового извлечения из свежих листьев шалфея лекарственного.

Результаты хроматографического исследования спиртового и углеводородного извлечения из листьев шалфея лекарственного коричнево-красное коричнево-красное коричнево-красное коричнево-оранжевое коричнево-оранжевое Зоны располагались по всей пластине и детектировались 1% раствор пдиметиламинобензальдегидом в 75% растворе серной кислоты.

Как видно из хроматограммы (рис.3.6.1.1.) в углеводородном и спиртовых извлечениях из высушенных и свежих листьев шалфея лекарственного обнаруживаются пятна с Rf 0,72, соответствующие РСО цинеолу.

Также нами был проведен хроматографический анализ углеводородного хроматографирования несколько изменились в качестве подвижной фазы использовался хлороформ, в качестве неподвижной фазы использовали пластинки: «Silufol» и «Sorbfil». По окончании хроматографирования пластинку с сорбентом обрабатывали путем опрыскивания 1% раствором последующим нагреванием при температуре 105-110С до обнаружения окрашенных зон (табл.3.6.1.3.).

Схема хроматографического исследования углеводородного и спиртовых извлечений из листьев шалфея лекарственного Вид хроматографии Восходящая хроматография на пластинках «Silufol»

Объект исследования 1.Спиртовое извлечение из высушенных листьев Система растворителей Хлороформ Детектирующий агент 1% раствор п-диметиламинобензальдегида в 75% Нами были получены следующие результаты, представленные на рис.3.6.1.2.

Рис.3.6.1.2. Хроматограмма спиртового и углеводородного извлечений из высушенных листьев шалфея лекарственного на пластине «Silufol»

При хроматографировании наблюдалось 4 зоны абсорбции в области нанесения спиртового извлечения из высушенных листьев шалфея лекарственного и 1 зона абсорбции в области нанесения углеводородного экстракта из высушенных листьев шалфея лекарственного.

Результаты хроматографического исследования углеводородного и спиртовых извлечений из листьев шалфея лекарственного Спиртового высушенных листьев лекарственного При хроматографировании в данной системе мы наблюдали достаточно четкое разделение зон углеводородного и спиртового экстрактов из высушенных листьев шалфея лекарственного (табл.3.6.1.4). Однако, проведя аналогичное исследование на пластине «Sorbfil» было получено наиболее полное разделение (табл.3.6.1.5).

Схема хроматографического исследования углеводородного экстракта Объект исследования 1.Углеводородный экстракт листьев шалфея Детектирующий агент 1% раствор п-диметиламинобензальдегида в 75% Рис.3.6.1.3. Хроматограмма спиртового и углеводородного извлечений из высушенных листьев шалфея лекарственного на пластине «Sorbfil»

Наилучшее разделение компонентов наблюдалось на пластинке «Sorbfil», на которой выявлено 6 пятен в зоне нанесения спиртового извлечения и 5 пятен (рис.3.6.1.3)в зоне углеводородного экстракта, тогда как на пластинке «Silufol» выявлено 4 пятна в зоне нанесения спиртового извлечения и 1 пятно в зоне углеводородного экстракта. При дневном свете на хроматограмме в зоне нанесения раствора-свидетеля обнаруживается пятно зеленовато-коричневого цвета с Rf 0,82.

Также было проведено хроматографирование в системах растворителей:

гексан; петролейный эфир:диэтиловый эфир (4:1); хлороформ:спирт (7:3), но к сожалению, четкого разделения не наблюдалось, а чаще даже зоны адсорбции были завышены (табл.3.6.1.6).

Результаты хроматографического исследования углеводородного экстрактра Еще одной из наиболее оптимальных систем растворителей оказалась система бензол: этилацетат (5:1).

Схема хроматографического исследования углеводородного и спиртовых извлечений из листьев шалфея лекарственного.

Вид хроматографии Восходящая хроматография на пластинках «Sorbfil»

Объект исследования 1.Углеводородный экстракт листьев шалфея Детектирующий агент 1% раствор п-диметиламинобензальдегида в 75% Условия:

НФ: «Sorbfil»

ПФ: Бензол:этилацетат (5:1) Детектирующий агент ванилин в 75% растворе серной кислоты Rf А: 1-0,97; 2-0,93; 3-0,86; 4-0,80;

А – углеводородный экстракт из листьев Rf Б: 1-0,95; 2-0,86; 3-0,80; 4-0,74; 5-0,65; 6шалфея 0,57; 7-0, Б – спиртовое извлечение из высушенных Rf Г: 1-0, листьев шалфея Рис.3.6.1.4. Хроматограмма спиртового и углеводородного извлечений из высушенных листьев шалфея лекарственного, а также масла шалфея Результаты хроматографического исследования после обработки хромагограммы детектором - ванилином в 75% растворе серной кислоты представлены в табл.3.6.1.8.

Результаты хроматографического исследования углеводородного и спиртовых извлечений из листьев шалфея лекарственного лекарственного светло-сиреневое светло-сиреневое темно-сиреневое светло-сиреневое светло-желтое светло-желтое желто-коричневое При хроматографировании было детектировано в углеводородном экстракте 4 зоны адсорбции, в спиртовом извлечение из высушенных листьев шалфея 6 зон адсорбции. Из-за маленькой концентрации спиртовое извлечение из свежих листьев шалфея лекарственного не дало ни одной зоны адсорбции. Масло шалфея дало 1 зону адсорбции соответствующую РСО цинеола.

3.6.2. Определение дубильных веществ.

В извлечениях из листьев шалфея методом ТСХ были обнаружены дубильные вещества – галловая кислота по схеме (табл.3.6.2.1) представленной ниже:

Схема хроматографического исследования углеводородного экстракта Объект исследования 1.Углеводородный экстракт листьев шалфея Система растворителей Безводная муравьиная кислота:этилацетат:толуол Детектирующий агент 3% водный раствор железоаммониевых квасцов кислота:этилацетат:толуол (10:30:60) Rf В: 1-0,97; 2-0,35; 3-0, Детектирующий агент 3% водный раствор Rf Г: 1-0, железоаммониевых квасцов А – углеводородный экстракт из листьев шалфея Б – спиртовое извлечение из высушенных листьев шалфея В – спиртовое извлечение из свежих листьев шалфея Г – РСО галловой кислоты Рис.3.6.2.1. Хроматограмма спиртового и углеводородного извлечений из высушенных и свежих листьев шалфея лекарственного на обнаружение галловой кислоты Результаты хроматографического (рис.3.6.2.1.) исследования после Результаты хроматографического исследования на наличие дубильных Углеводородного экстракта Спиртового извлечения из Спиртового извлечения из шалфея лекарственного шалфея лекарственного лекарственного При хроматографировании во всех извлечениях, кроме углеводородного экстракта, из шалфея лекарственного была идентифицирована галловая кислота с Rf 0,36.

3.6.3. Определение флавоноидов.

Определение флавоноидов проводилось на пластинах «Sorbfil» в различных системах растворителей: вода:безводная муравьиная кислота:этилацетат (6:6:88); хлороформ:спирт (7:3); 15% уксусная кислота. В качестве детектора использовались: 10% спиртовой раствор гидроксида натрия, 2% спиртовой раствор алюминия хлорида. В качестве стандартов использовали 0,025% спиртовой раствор рутина и 0,025% спиртовой раствор кверцетина. Неплохое разделение наблюдалось в системе растворителей вода:безводная муравьиная кислота:этилацетат (6:6:88) после обработки хроматограммы 10% спиртовым раствором гидроксида натрия. В зоне нанесения углеводородного экстракта из листьев шалфея обнаруживалось пятна с Rf 0,84 желто-зеленого цвета и 0,94 желтовато-коричневого цвета ; в зоне нанесения спиртового извлечения из высушенных листьев было обнаружено 2 пятна с Rf 0,88 темно-зеленого цвета и 0,94 насыщенно коричневого цвета; в зоне нанесения спиртового извлечения из свежих листьев наблюдалось тоже 2 пятна с Rf 0,90 коричнево-зеленого цвета и 0, коричнево-зеленого цвета; Rf рутина 0,19 желтого цвета, а Rf кверцетина 0, коричневого цвета.

Самое хорошее разделение наблюдалось при использовании 15% уксусной кислоты в качестве подвижной фазы. Схема хроматографического анализа приведена ниже (табл. 3.6.3.1.).

Схема хроматографического исследования углеводородного экстракта листьев шалфея лекарственного на наличие флавоноидных соединений Объект исследования 1.Углеводородный экстракт листьев шалфея Система растворителей 15% раствор уксусной кислоты Детектирующий агент 2% спиртовой раствор алюминия хлорида ПФ: 15% уксусная кислота Детектор 2% спиртовой раствор алюминия хлорида А – углеводородный экстракт из листьев Б – спиртовое извлечение из высушенных Rf В: 1-0,91; 2-0,87; 3-0, листьев шалфея В – спиртовое извлечение из свежих листьев Рис.3.6.3.1. Хроматограмма спиртового и углеводородного извлечений из высушенных и свежих листьев шалфея лекарственного на обнаружение флавоноидных соединений.

Результаты хроматографического исследования углеводородного и спиртовых извлечений из листьев шалфея лекарственного на наличие Углеводородного высушенных листьев шалфея лекарственного 4 коричнево-зеленое коричнево-зеленое При хроматографировании был идентифицирован кверцетин с Rf 0,82 во всех извлечениях, полученных из свежих и высушенных листьев шалфея лекарственного(табл.3.6.3.2.).

наблюдалось на пластинках «Sorbfil», чем на пластинках «Silufol». Наиболее оптимальными системами растворителей были: бензол:этилацетат (7:3), хлороформ и бензол:этилацетат (5:1). Максимальное разделение углеводородного экстракта из высушенных листьев шалфея лекарственного было достигнуто при хроматографировании на пластинках «Sorbfil» в системе растворителей бензол:этилацетат (7:3) и детектором 1% раствором п-диметиламинобензальдегидом в 75% растворе серной кислоты. Было детектировано 10 зон абсорбции, одна из которых соответствовала ГСО цинеола. Методом ТСХ были идентифицированы дубильные вещества – галловая кислота и флавоноидные соединения – кверцетин. При проведении сравнительного анализа спиртовых и углеводородного экстрактов из высушенного и свежего сырья шалфея лекарственного методом ТСХ было установлено, что качественный состав компонентов, входящих в углеводородный экстракт в целом идентичен составу спиртового извлечения из высушенных листьев шалфея лекарственного.

3.7. Сравнительное хромато-масс-спектрометрическое исследование углеводородного экстрагента, спиртовых и углеводородных извлечений из листьев шалфея лекарственного.

компонентный состав экстрагента, углеводородного и спиртовых извлечений из листьев шалфея лекарственного.

Данные по сравнение компонентного состава спиртовых извлечений, полученных из высушенного и свежих листьев шалфея лекарственного, представлены в табл.3.7.1.

Сравнение компонентного состава спиртовых извлечений из высушенного и 1,7,7-Триметилтрициклогептан 20 6-метил-2,3-дигидроН-пиран-4-он Миртенол метил)-2-фурCHO Борнилацетат Глицерилтриацетат (Триацетин) (п-Винилгваякол) Эукарвон 34 4-оксо-7-винилбицикло[3.2.0]гептO 1-ил)ацетальдегид ацетофенон -Кариофиллен -Кариофиллен Аромадендрен 3-ИзопропенилСК 41 1,2,3,4,4a,5,6,7октагидронафталин (Валенцен) 42 1,2,3,5,6,8aгексагидронафталин (-Кадинен) 5,6,7,7а-тетрагидроO -Кариофиллен -оксид 1,1,4,7-Тетраметилдекагидро-1H-циклопропа[e]азулен-4-ол Аромадендрен О-Ацетилированный С15Н29ОАс метилтетрадецен 51 2-ил)-2-пентен-1-ол (Санталол) Этилпальмитат 53 8(20),12,14-триен (Склареол) Этиллинолеат Этиллиноленат Как видно из вышеприведённых данных, преобладающим компанентом как в свежем, так и в высушенном сырье является один из дитерпеноидов лабданового типа - Лабда-8(20),14-диен-13-ол.

Следует отметить, что соединения, такие как 4-терпинеол, -терпинеол, фитол, леден оксид, аромадендрен оксид, аромадендрен, тимол, миртенол, пинен, туйен, мирцен, валенцен, а также 4,4,7a-триметил-5,6,7,7a-тетрагидробензофуран-2(4H)-он в свежем сырье находятся в следовых количествах либо отсутствуют, тогда, как в высушенном сырье отмечается достаточно высокое их содержание.

Кроме того, в высушенном сырье ощутимо увеличивается по сравнению со свежим содержание лимонена (от 0.27 до 1.28), 1,8-цинеола (от 3.44 до 6,64 45), -пинен (от 0.17до 4.99), камфора (от 9.13 до 14.86).

высушенном и свежем сырье не является эквивалентным, хотя и близок по содержанию некоторых компонентов. По-видимому, уменьшение некоторых из указанных выше компонентов связано с процессом образования их окисленной формы в ходе высушивания и хранения сырья.

В углеводородном экстракте из листьев шалфея лекарственного методом ГХ-МС было идентифицировано более 100 соединений, 6 из которых относятся к терпеноидам: 1,8-цинеол, -туйон, камфора, борнеол, кариофиллен, лабда-8(20), 14-диен-13-ол.

компонентов углеводородного экстракта из высушенных листьев шалфея и спектры стандартных образцов, полученных из библиотеки полных массспектров NIST-05.

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 (Text File) Scan 5492 (27.778 min) in C:\ 2010\ _14\ _14\ 1402.D\ DATA.MS Рис.3.7.1. Масс-спектр компонента углеводородного экстракта из листьев шалфея (1,8-цинеол) (replib) Eucalyptol Рис.3.7.2. Масс-спектр стандартного образца 1,8-цинеола При сравнении данных масс-спектров видны совпадения полос 43, 55, 58, 71, 81, 84, 93,96, 108, 125, 139, 154, что и указывает на наличие в углеводородном экстракте 1,8-цинеола.

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 (Text File) Scan 6083 (30.435 min) in C:\ 2010\ _14\ _14\ 1402.D\ DATA.MS Рис.3.7.3. Масс-спектр компонента углеводородного экстракта из листьев шалфея (-туйон) (mainlib) Thujone Рис.3.7.4. Масс-спектр стандартного образца -туйона Сравнивая данные масс-спектры регистрируем совпадения следующих полос: 41, 55, 67, 81, 91, 95, 110, 152, что указывает на наличие в экстракте туйона.

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 (Text File) Scan 6446 (32.066 min) in C:\ 2010\ _14\ _14\ 1402.D\ DATA.MS Рис.3.7.5. Масс-спектр компонента углеводородного экстракта из листьев шалфея (камфора) 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 (mainlib) Bicyclo[2.2.1]heptan-2-one, 1,7,7-trimethyl-, (1S)Рис.3.7.6. Масс-спектр стандартного образца камфоры Можно проследить следующие совпадения полос в масс-спектрах: 15, 41, 55, 69, 81, 95, 108, 137, 152, что и указывает на наличие в углеводородном экстракте камфоры.

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 (Text File) Scan 6579 (32.664 min) in C:\ 2010\ _14\ _14\ 1402.D\ DATA.MS Рис.3.7.7. Масс-спектр компонента углеводородного экстракта из листьев шалфея (борнеол) 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 (replib) Bicyclo[2.2.1]heptan-2-ol, 1,7,7-trimethyl-, (1S-endo)Рис.3.7.8. Масс-спектр стандартного образца борнеола Сравнивая масс-спектры прослеживается совпадение полос 41, 55, 67, 95, 110, 121, 139. Соответственно можно сделать вывод о наличие в исследуемом образце борнеола.

(Text File) Scan 8366 (40.697 min) in C:\ 2010\ _14\ _14\ 1402.D\ DATA.MS Рис.3.7.9. Масс-спектр компонента углеводородного экстракта из листьев шалфея (-кариофиллен) (mainlib) Caryophyllene Рис.3.7.10. Масс-спектр стандартного образца -кариофиллена На рис.3.7.9 и 3.7.10 четко прослеживается совпадение полос 41, 55, 69, 79, 93, 105, 120, 133, 147, 161, 175, 189, 204, что указывает на наличие -кариофиллена.

(Text File) Scan 13044 (61.724 min) in C:\ 2010\ _14\ _14\ 1402.D\ DATA.MS Рис.3.7.11. Масс-спектр компонента углеводородного экстракта из листьев шалфея (лабда-8(20), 14-диен-13-ол) (mainlib) 1-Naphthalenepropanol, -ethenyldecahydro-,5,5,8a-tetramethyl-2-methylene-, [1S-[1(R*),4a,8a]]Рис.3.7.12. Масс-спектр стандартного образца лабда-8(20), 14-диен-13-ола При сравнении полученных спектров видно совпадение полос 41, 55, 69, 81, 95, 107, 123, 137, 147, 161, 177, 189, 216, 229, 244, 257, 272, что указывает на наличие лабда-8(20)-диен-13-ола в исследуемом образце.

Ниже приведена сводная таблица (табл.3.7.2) идентифицированных веществ в углеводородном экстракте из листьев шалфея лекарственного.

В табл.3.7.2 представлены не все вещества, которые удалось экстрагировать петролеумом из листьев шалфея лекарственного, ввиду сложности и трудности идентификации.

Соединения, идентифицированные в углеводородном экстракте листьев Лабда-8(20),14-диен-13-ол 3.8. Сравнительное СФМ исследование эфирного масла, экстрагента и извлечений из свежих и высушенных листьев шалфея лекарственного.

спектрофотометрических характеристик спиртовых извлечений, полученных из высушенного и свежего сырья, углеводородного экстракта - из высушенного сырья листьев шалфея лекарственного, а также самого экстрагента и эфирного масла шалфея.

Рис.3.8.1. Спектр спиртового извлечения из высушенных листьев шалфея лекарственного (диапазон измерения от 250 до 750 нм, разбавлении спиртом 1:100) Рис.3.8.2. Спектр спиртового извлечения из свежих листьев шалфея лекарственного (диапазон измерения от 200 до 750 нм, при разбавлении спиртом 1:10) Было зарегистрировано несколько максимумов поглощения при 286 и 328 нм с соответствующими значениями абсорбции 1.57 и 1.65, что, повидимому, соответствует флавоноидным соединениям; кроме того, максимумы поглощения при 406, 534, 606 и 664 нм с соответствующими значениями абсорбции 0.50, 0.05, 0.04 и 0.18, которые можно отнести к полосам, относящимся к феофитолу. Идентичные полосы поглощения присутствуют и в спиртовом извлечении из свежих листьев шалфея.

Рис.3.8.3. Спектр углеводородного извлечения из листьев шалфея (диапазон измерения от 200 до 750 нм, при разбавлении спиртом 1:250) Рис.3.8.4. Спектр углеводородного извлечения из листьев шалфея (диапазон измерения от 200 до 750 нм, при разбавлении спиртом 1:100) Рис.3.8.5. Спектр экстрагента (диапазон измерения от 200 до 900 нм, при разбавлении спиртом 1:500) Рис.3.8.6. Спектр углеводородного извлечения из листьев шалфея (диапазон измерения от 200 до 400 нм, при разбавлении спиртом 1:100 с вычетом спектра петролеума) В углеводородном экстракте шалфея при разбавлении спиртом 1: наблюдаются только два пика поглощения, относящиеся только к экстрагенту-петролеуму: 220 и 270 нм с соответствующими значениями абсорбции 3.75 и 2.35. При разбавлении 1:100 удаётся зарегистрировать четыре пики при 230, 258, 265 и 400 нм с соответствующими значениями абсорбции 3.9, 0.36, 3.8 и 0.13. В углеводородном извлечении из листьев шалфея при разбавлении спиртом 1:100 с вычетом спектра петролеума зарегистрировано три пика при 234, 257, 267 нм с соответствующими значениями абсорбции 0.69, 0.36, 0.34.

Компоненты эфирного масла оказываются экранированы экстрагентом в углеводородном экстракте из листьев шалфея.

Рис.3.8.7. Спектр масла шалфея (диапазон измерения от 200 до 700 нм, при разбавлении спиртом 1:500) Спектрофотометрическая картина для эфирного масла шалфея представлена: максимумом при 224 нм с абсорбцией поглощения 4.58 и при 285 и 328 нм с абсорбцией поглощения 0,7 и 0,8 соответственно (рис.3.8.1-3.8.7).

3.9. Изучение воздействия ультразвука на экстракцию.

Нами было изучено влияние ультразвука на петролеумные и гексановые экстракты, спиртовые извлечения из листьев шалфея лекарственного.

Которые мы подвергли воздействию ультразвука в ультразвуковом приборе CITIZEN SW 1500 в течение разного времени (10 и 60 минут).

Определение сухого остатка углеводородного экстракта, 3.9.1.

подвергнутого действию ультразвука.

Определение сухого остатка петролеумного и гексанового экстрактов шалфея и спиртовых извлечений, подвергнутых действию ультразвука в течение 10 и 60 минут проводили следующим образом: 10 мл экстракта или извлечения пипеткой помещали во взвешенный бюкс, предварительно высушенный при температуре 100-105С до постоянной массы. После чего на водяной бане выпаривали досуха и сушили 2 часа при 102,5±2,5С до постоянной массы, затем охлаждали в течение 30 минут в эксикаторе, на дне которого находился безводный хлорид кальция, и немедленно взвешивали на электронных весах.

Содержание сухого остатка вычисляли по формуле:

Х – сухой остаток в %, a – масса бюкса вместе с экстрактом/извлечением, b – масса бюкса, c – масса бюкса с сухим остатком.

В качестве модели для сравнения использовали спиртовое извлечение листьев шалфея лекарственного.

Сухой остаток экстрактов и извлечений шалфея (табл. 3.9.1.1) представляет собой аморфное вещество темно-желто-зеленого цвета, без запаха, практически не растворимое в воде, хорошо растворимое в спирте, ацетоне хлороформе, гексане, толуоле.

Сухой остаток углеводородных экстрактов шалфея.

Экстракт шалфея Действие ультразвука, мин Сухой остаток,% Таким образом, более длительное воздействие ультразвука приводит к увеличению процента сухого остатка, самое высокое значение сухого остатка имеет спиртовое извлечение.

3.9.2. Сравнительный хроматографический анализ углеводородных экстрактов листьев шалфея.

гексановых экстрактов шалфея лекарственного (Salvia officinalis L), подвергнутых действию ультразвука в течение 10 и 60 минут, проводили на пластинках «Silufol» (15х15) в подвижной фазе бензол:этилацетат (5:1).

Схема хроматографического исследования приведена ниже в табл.3.9.2.1.

Схема хроматографического исследования петролеумного и гексанового экстрактов шалфея, подвергнутых действию УЗ Вид хроматографии Восходящая хроматография на пластинках «Silufol»

Объект исследования 1. Гексановый экстракт (10 мин УЗ) листьев Система растворителей бензол:этилацетат 5: Нами были получены следующие результаты представленные на рис.3.9.2.1.

НФ: пластинка «Silufol»

ПФ: бензол: этилацетат (5:1) Детектор УФ А - Гексановый экстракт (10 мин УЗ) листьев шалфея лекарственного Б - Гексановый экстракт (60 мин УЗ) R Д: 1-0,77; 2-0, листьев шалфея лекарственного В - Петролеумный экстракт (10 мин УЗ) Rf Е: 1-0, листьев шалфея лекарственного Г - Петролеумный экстракт (60 мин УЗ) листьев шалфея лекарственного Д - Спиртовое извлечение листьев шалфея лекарственного Е - РСО цинеол Рис.3.9.2.1. Хроматограмма экстрактов и извлечений листьев шалфея на пластинке «Silufol» в системе растворителей бензол: этилацетат (5:1) По данным хроматографического анализа (рис.3.9.2.1) можно сделать вывод о незначительном влиянии воздействия ультразвука на петролеумный и гексановый экстракты. Влияние воздействия ультразвука на спиртовое извлечение более выражено (на хроматограмме появились дополнительные пятна спиртового извлечения, присутствует большая интенсивность окраски пятен).

Рис.3.9.2.2. Спектрофотометрического исследования углеводородного экстракта, подвергнутого действию ультразвука По данным спектрофотометрического исследования можно сделать вывод о более интенсивной экстракции действующих веществ в липофильном экстраганте (рис.3.9.2.2.).

3.10. Изучение настойки гомеопатизированной матричной настойки, полученной из высушенных листьев шалфея.

Нами была получена настойка гомеопатизированная матричная, качество которой было проанализировано согласно требованиям фармакопейной стаьи.

Методом хромато-масс-спектрометрии было идентифицировано более веществ (табл.3.10.1).

Из идентифицированных соединений наибольшее количество приходится на лабда-8(20),14-диен-13-ол(34,27 %), на -туйоны (9,90%), на ледол (8,40%), на этиллиноленат (5,15%), на этилпальмитат (5,14%), на камфору (4,64%), на этиллинолеат (4,00%), на -кариофиллен (3,86%), на -кариофиллен (3,44%), на 1,8-цинеол (2,45%), на борнеол (2,21%), на 3,5-дигидрокси-6-метил-2,3дигидро-4H-пиран-4-он (1,67%), на 2-(7-гидрокси-3,3-диметил-4-оксо-7винилбицикло-[3.2.0]гепт-1-ил)-цетальдегид (1,56%), на 5-(гидрокси-метил)-2фур-альдегид (1,42%). Из идентифицированных соединений наименьшее количество приходится: на 4,4,7a-триметил-5,6,7,7a-тетра-гидро-1-бензо-фуранH)-он (0,03%), на -терпинеол (0,06%), лимонен (0,08%), на -кадинен (0,13%), на 4-терпинеол (0,15%), на п-цимол (0,21%), на 2,4-дигидрокси-2,5диметил-3(2H)-фуранон на 4-ацетил-2-метоксифенол(0,30%), на валенцен (0,35%).

Среднее количество приходится: на 5-кетоборнил-ацетат (0,67%), на моноэтил-сукцинат (0,72%), на 2-метокси-4-винилфенол (0,76%), на этилстеара т(0,78%), на борнилацетат (0,90%), на 4-гидрокси-ацетофенон (1,12%).

Соединения, идентифицированные в настойке гомеопатизированной

№ СОЕДИНЕНИЕ СТРУКТ. Ф-ЛА RT INTEGR %

неспецифическим фактором повреждения клеток и тканей, играет важную роль в патогенезе большого числа заболеваний. Цель исследования определение суммарного содержания природных антиоксидантов (АО) в экстрактах шалфея лекарственного амперометрическим методом.

Для проведения исследований брали листья шалфея и измельчали в ступке до размера частиц 1-2мм и навеску 1.0г заливали 96%-ным спиртом, дистиллированной водой или их смесью с соотношением 70:30. Объем экстрагента составлял 100 мл, температура 200С и 950С - для воды и 200С и 75-800С - для спирта. Экстрагирование проводили в течение 10 минут (без термостатирования), а экстракты быстро отфильтровывали через бумажный фильтр «синяя лента». Измерения проводили на амперометрической установке «ЦветЯуза-01-АА».

Рис.3.11.1. Суммарная антиоксидантная активность извлечений из шалфея лекарственного.

Установлено, что в зависимости от состава экстрагента и температурного режима экстракции величина АО (по галловой кислоте) в экстрактах шалфея лекарственного варьировалась (рис.3.11.1. и табл.3.11.1.) от 4,11 до 18, мг/г.

Влияние экстрагента и температурного режима экстракции на антиоксидантную активность листьев шалфея лекарственного

ЭКСТРАГИРОВАНИЯ

ГЛАВА 4. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЭФИРНОГО МАСЛА,

ПОЛУЧЕННОГО ИЗ ЛИСТЬЕВ ШАЛФЕЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО С

ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ ГИДРОСТИЛЛЯЦИИ

И РАЗЛИЧНОГО СРОКА ХРАНЕНИЯ.

лекарственного с использованием 1 и 2 метода гидродистилляции.