«ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ЛИПОФИЛЬНОЙ ФРАКЦИИИ (УГЛЕВОДОРОДНОГО ЭКСТРАКТА) ЛИСТЬЕВ ШАЛФЕЯ И ЕЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ...»

компонентного состава эфирного масла из листьев шалфея лекарственного, полученного различными методами гидродистилляции.

В ходе изучения состава образцов эфирного масла, полученного гидродистилляцией методом Гинзберга и методом Клевенджера, проведена идентификация и сравнительная оценка относительного компонентного состава эфирного масла по более чем 90 соединениям.

условно разбита на две группы: группа I - соединения, относящиеся к определённому биосинтетическому типу терпеноидов; группа II соединения, которые не относятся к классу терпеноидов (неизопреноидные компоненты).

Из класса терпеноидов (группа I) в составе эфирного масла шалфея лекарственного идентифицированы следующие компоненты. Монотерпены биосинтетическим типам туйана, ментана, пинана, камфана и изокамфана, изоборнилана и фенхана, метилированного циклогексана, ациклических монотерпеноидов. Сесквитерпены и сесквитерпеноиды представлены аромадендрана, бурбонана; входящими в биогенетическое древо гумулана, а также компонентами ациклического строения. В ряду дитерпенов и биосинтетическому типу лабдана.

При сравнении двух методов гидродистилляции выявлены различия, касающиеся, прежде всего, относительного содержания (%) ряда изопреноидных компонентов эфирного масла. Так, довольно существенное различие наблюдалось при сравнении суммарного относительного содержания компонентов монотерпенов и монотерпеноидов(%):

типа туйана - соответственно 26.64 и 33.74; например, для стереоизомерных - и -туйонов (I = 1133, 1144) – (в совокупности) 24.93 и 32.60, напротив, для стереоизомерных туйолов (I = 1154, 1170, 1188) - (в совокупности) 1.50 и 0.92.

типа ментана - соответственно 14.98 и 19.11; например, 1,8-цинеол (I = типа пинана - соответственно 4.94 и 7.00; например, -пинен (I = 950) и 4.90 и 3-пинанон (I = 1208) - 0.06 и 0.20.

типа камфана и изокамфана - соответственно 24.70 и 29.02;

например, камфора (I = 1183) - 11.83 и 16.05; камфен (I = 969) - 2.48 и 4.65 и 2-метил-5-(2-метил-3-метиленбицикло[2.2.1]гепт-2-ил)-2-пентенол-санталол (I =1842) - 0.08 и отсутствует.

В группе ациклических монотерпеноидов различие в суммарном относительном содержании компонентов несущественно соответственно 2.47 и 1.60; однако, например, линалоол (I = 1108) и 0.66.

Суммарное относительное содержание компонентов сесквитерпенов и сесквитерпеноидов (%): типа аромадендрана - соответственно 9.81 и 3.20;

например, 1,1,4,7-тетраметилдекагидро-1H-циклопропа-[e]азулен-4-ол стереоизомерные ледол и глобулол (I = 1662, 1669) - (в совокупности) 9.25 и 2.84.

Наконец, в исследуемых пробах выявлены различия, касающиеся относительного количественного состава дитерпеноидов биосинтетического типа лабдана(%): суммарно - соответственно 5.15 и 2.17; например, лабдатриен-биформен (I = 1925) - 0.07 и 0.38; лабда-8(20),14-диен-13ол (I = 1981) - 4.75 и 1.70 и лабд-14-ен-8,13-диол – склареол (I = 1994) - 0.33 и 0.09.

Таким образом, на примере проведённого сравнительного анализа относительного компонентного состава эфирного масла шалфея лекарственного, полученного посредством гидродистилляции по методу Гинзберга и по Клевенджера, убедительно показано, что рассмотренные методы гидродистилляций не являются однозначными. Наблюдаемые различия в количественном компонентном составе вызваны, по-видимому, окислительными и деструктивными реакциями, протекающими в процессе гидродистилляции.

4.2 Сравнительный анализ эфирного масла, полученного из листьев шалфея лекарственного различного срока хранения.

Целью данного исследования является сравнительное изучение компонентного состава эфирного масла, полученного из свежих, высушенных листьев шалфея лекарственного и сырья хранившегося длительное время. Компонентный состав полученных образцов эфирного масла изучали методом газовой хромато-масс-спектрометрии на приборе фирмы Agilent Technologies.

Соединения, идентифицированные в образцах эфирного масла шалфея (2-метилпролпенил)ц иклопропан 2,4гептадиен гептатриен альфа-Туйен 4метилбицикл о-[3.1.0]гекс-2-ен (Tricyclene) альфа-Пинен

СК СК СК

4метиленбици клогекс-2- етилциклоп ТрансПинока кса-3,5диеналь 1,8диен-7- л-3,7Octadie ne-2,6diol ТрансКарвео 4,11,11- пилметилметиле 1,1,4,7Тетрам етилa,2,3,5, 6,7,7a, Аллилметокси ндекадиенон идроaHциклопропа[e ро-1Hциклопропа[e ]азуленол- ЛедолСтереоI= 1.0]додекадиен альфабицикл ксенил)тетр 5-(2метил- ]гепт-2ил)-2- Лабдатриен В ходе изучения качественного состава образцов эфирного масла, полученных как из свежего растительного материала, так и из высушенного сырья, и сырья, подвергшегося длительному хранению, идентифицировано и проведено сравнение более чем по 113 компонентам смеси. Данные представлены в табл. 4.2.1. Совокупность идентифицированных компонентов эфирного масла условно разбита на две группы: группа I – соединения, относящиеся к определённому биосинтетическому типу терпенов; группа II - соединения, которые не относятся к классу терпенов и терпеноидов неидентифицированные компоненты.

Класс терпенов (группа I) в числе идентифицированных компонентов эфирного масла шалфея лекарственного представлен монотерпенами и монотерпеноидами, относящимися к биосинтетическим типам:

тип туйана – стереоизомерные - и -туйоны; стереоизомерные туйолы;

сабинол; -туйен; сабинен; 1-изопропил-4-метиленбицикло[3.1.0]гекс-2ен;

тип ментана – 1,8-цинеол; лимонен; п-цимол; -терпинен; -фелландрен;

-терпинен; терпинолен; дегидро-п-цимол; цис--терпинеол; 4-терпинеол;

-терпинеол; -терпинилацетат; ментол; тимол; карвакрол; цис- и транскарвеолы; карвилацетат; карвон; п-мент-6-ен-2-он; фелландраль;

тип пинана – -пинен; -пинен; транс-пинокарвеол; транспинокарвилацетат; 3-пинанон; 3,6,6-триметил-2-норпинанон; миртенол;

миртенилацетат; 2,6,6-триметилбицикло-[3.1.1]гепт-2-ен-4-илацетат;

тип камфана и изокамфана - камфора; борнеол и изоборнеол;

5-кетоборнилацетат; 1,7,7триметилтрицикло-[2.2.1.0,2,6]гептан (трициклен); камфен (; 2-метил-5-(2метил-3-метиленбицикло[2.2.1]гепт-2-ил)-2-пентен-1-ол (санталол);

тип изоборнилана и фенхана - -фенхен; фенхон;

тип метилированного циклогексана - -циклоцитраль;

изопропилиден-3-метил-гекса-3,5-диеналь; 2,6-диметил-3,7-октадиен-2,6диол; цис-гераниол (нерол); неролидол;

Сесквитерпены и сесквитерпеноиды представлены компонентами, входящими в биогенетическое древо гермакрана, и относящиеся к биосинтетическим типам:

калакорен;

тип эудесмана - -селинен и сесквитерпеновый лактон эудесма-5,11(13)диен-8,12-олид;

тип аромадендрана ледол; 1,1,4,7-тетраметил-1a,2,3,5,6,7,7a,7bоктагидро-1H-циклопропа[e]азулен (леден); леден оксид; аромадендрен (1454; 0.06/0.03); аромадендрен оксид; 1,1,4,7-тетраметилдекагидро-4aHциклопропа[e]азулен-4a-ол (палюстрол); спатуленол;

тип бурбонана - -бурбонен;

идентифицированные компоненты - -кариофиллен; -кариофиллен; кариофиллен оксид; 10,10-диметил-2,6-диметиленбицикло[7.2.0]ундекан;

гумулен; 1,5,5,8-тетраметил-12-оксабицикло[9.1.0]додека-3,7-диен; 2,5,9триметилциклоундека-4,8-ди-енон;

В ряду дитерпенов и дитерпеноидов идентифицированы компоненты, относящиеся к биосинтетическому типу лабдана, - лабда-8(20),12,14-триен (биформен); лабда-8(20),14-диен-13-ол; лабд-14-ен-8,13-диол (склареол);

Неизопреноидные компоненты (группа II) - 1,1-диметил-2-(2-метил-2пролпенил)циклопропан; 2-гексеналь; 2,4-диметил-2,4-гептадиен; 5-метилгептатриен; 1-октен-3-ол; 4-метилбицикло[2.2.2]октан-1-ол; 1,2,2,3тетраметил-3-циклопентен-1-ол; 6-метил-5-(1-метилэтилиден)-6,8-нонадиенон; геранилацетон; гексагидрофарнезилацетон); 2,2,6-триметил-6-(4-метилп-винилгваякол; п-эвгенол;

3-циклогексен-1-ил)тетрагидро-2H-пиран-3-ол;

6-аллил-4-метокси-1,3-бензодиоксол (миристицин); жасмон; 2,5,8-триметилдигидронафталин;

Неидентифицированные компоненты (группа III).

Таким образом, качественный состав образцов эфирного масла, полученного из свежего, высушенного сырья и сырья хранящегося в течение длительного времени в целом идентичен. Однако в образцах эфирного масла из высушенного сырья в значительном числе случаев наблюдается увеличение относительного содержания некоторых компонентов, содержащих кето-группу или ароматическое ядро, например, стереоизомерные туйоны, камфора, -камфоленаль, 5-метил-2-(1метилэтилиден)-4-гексеналь, а также п-цимол, тимол, карвакрол и 6-аллил-4метокси-1,3-бензодиоксол (миристицин). При этом в эфирном масле из высушеннго сырья довольно часто наблюдается снижение относительного содержания компонентов, содержащих гидроксильную, эпоксидную функции или О-ацетильную группу, а также некоторых компонентов, относящихся к моно-, би- и трициклическим терпенам, претерпевающих окисление двойных связей, например, линалоол, линалилацетат, борнеол и стереоизомерные борнилацетаты, 5-кетоборнилацетат, стереоизомерные туйолы, цис-сабинол, 4-тер-пинеол, -терпинеол, аромадендрен оксид, -кариофиллен оксид, 1,5,5,8-тетраметил-12-оксабицикло-[9.1.0]-додека-3,7-диен, а также -пинен, -терпинен, -терпинен, аромадендрен, -копаен, -кадинен, 1-изопропил-7метил-4-метилен-1,2,3,4,4a,5,6,8a-октагидронафталин, - и -кариофиллены.

Примечательно, что в эфирном масле, полученном из сырья длительного хранения наблюдается появление сесквитерпенового лактона эудесманового типа - эудесма-5,11(13)-диен-8,12-олид, - образование которого можно объяснить процессами окислительной циклизации.

В ходе спектрофотометрического исследования образцов эфирного масла шалфея лекарственного, полученных из высушенного сырья и сырья с длительным сроком хранения различий в сигналах поглощения обнаружено не было. В обеих пробах зарегистрированы 2 максимума поглощения – при 273 и 235 нм (рис.4.2. 1).

Рис.4.2. СФМ исследование полученного эфирного масла.

ГЛАВА 5 ИЗУЧЕНИЕ УГЛЕВОДОРОДНОГО ЭКСТРАГЕНТА

(ПЕТРОЛЕУМА).

5.1.Изучение качественного и количественного состава петролеума.

Нами изучен петролеум, как фракция нефти, выкипающая при температуре 180-300°С, полученная на основе авиационного керосина ТС- (ГОСТ 10.227-86). По своим физико-химическим свойствам рассматриваемая фракция представляет собой бесцветную прозрачную жидкость (с плотностью d = 0.71 г/см3) с резким характерным запахом, практически не смешивающуюся с водой и хорошо смешивающуюся с органическими растворителями (хлороформом, бензолом, толуолом, этилацетатом).

Элементный анализ образца петролеума показал относительное содержание (%) элементов: С - 85.81; H - 14.24; S и N - в следовых количествах.

Нами выполнено исследование компонентного состава петролеума методом газо-жидкостной хромато-масс-спектрометрии (рис.5.1.1.).

Сигнал детектора Рис.5.1.1. Хроматограмма образца петролеума.

Обнаруженоно более 175 индивидуальных соединений, относящихся к различным классам углеводородов, в составе исследуемого образца петролеума, из них идентифицировано 160 соединений.

Оценен суммарный состав компонентов экстрагента, относящихся к различным классам углеводородов, и определено их относительное суммарное содержание (%), и содержание каждого компонента в отдельности (табл.5.1.1.-5.1.4). Среди компонентов количественно преобладающими являются н-алканы (31.90 %), арены (29.50 %) и разветвлённые (изо-) алканы (26.45 %). В меньшем количестве в петролеуме представлены цикланы (9. %) и алкены (2.20 %) Диаграмма суммарного состава классов углеводородов петролеума представлена на рис.5.1.2.

АЛКЕНЫ

ЦИКЛАНЫ

Рис.5.1.2. Относительное суммарное содержание (%) различных групп углеводородов, содержащихся в петролеуме Тетрадекан Пентадекан № Соединение Структурная формула Относительное Диметилгексан Диметилгексан Диметилгептан Диметилгептан Диметилгептан Диметилгептан Диметилгептан Диметилгептан 3-этилгептан 3-этилгептан Диметилоктан Диметилоктан Диметилоктан Диметилоктан Диметилнонан Диметилнонан Диметилнонан Диметилнонан Диметилдекан Диметилдекан Триметилдекан Диметилундекан Диметилундекан Диметилундекан Метилтетрадекан Метилтетрадекан 2пропилциклопро изоПропилциклобут Этилциклопента Пропилциклопен изо-Пропилциклопентан Гексилциклопент циклопентан циклопентан циклопентан 1этилциклопентан 2этилциклопентан 3этилциклопентан 2пропилциклопен 3метилциклопента 3метилциклопента циклопентан циклопентан циклопентан циклопентан циклопентан 2этилциклопентан Тетраметилциклопентан Циклогексан Метилциклогекса Этилциклогексан Пропилциклогек втор-Бутилциклогексан циклогексан циклогексан циклогексан 2этилциклогексан 4этилциклогексан пропилциклогексан 4метилциклогекса циклогексан циклогексан циклогексан циклогексан Тетраметилциклогексан 1,1,3-триметилциклогексан Метилциклогепт Бицикло[3.3.0]ок Пропилбензол Бутилбензол вторБутилбензол Пентилбензол Гексилбензол Гептилбензол бутилбензол 2-фенилпентан о-Этилтолуол м-Этилтолуол п-Этилтолуол о-Пропил-толуол п-Пропил-толуол п-изо-Бутилтолуол п-втор-Бутилтолуол этилпропил)бензол 4-этилбензол 2-метилбензол Триметилбензол Триметилбензол Триметилбензол 2-этилбензол 2-изобутилбензол 2,4диметилбензол 4-этилбензол 1-этилбензол 1-этилбензол Тетраметилбензол Тетраметилбензол Тетраметилбензол 1,3,5триметилбензол 1,3,4триметилбензол Пентаметилбензо Гексаметилбензо Метилнафталин Метилнафталин Диметилнафтали 5.2. ИК-спектроскопическое исследование петролеума.

Проведены исследования многокомпонентного состава петролеума интерпретированы нами, исходя из валентных и деформационных колебаний связей в молекулах исследуемой смеси на основании опубликованных сведений. Сильные полосы поглощения при 2956 и 2864 см-1 характеризуют соответственно антисимметричные и симметричные валентные колебания связи C-H в CH3-группе насыщенных углеводородов. Сильные полосы поглощения при 2924 и 2856 см-1 обусловлены, соответственно, антисимметричными и симметричными валентными колебаниями связи C-H в CH2-группе насыщенных углеводородов. Полоса поглощения при 2924 см кроме того, характеризует валентные колебания связи C-H метильных заместителей как в моно-, так и в дизамещённых бензолах. Полосы поглощения средней интенсивности при 1460 и 1380 см -1 обусловлены, соответственно, антисимметричными и симметричными деформационными колебаниями связи C-H в CH3-группе насыщенных углеводородов как нормального, так и изостроения. Наконец, полосу поглощения средней внеплоскостных деформационных колебаний связи CAr-H с участием внеплоскостных колебаний углеродного скелета.

Рис.5.2.1. ИК-спектры петролеума

ГЛАВА 6. ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ

УГЛЕВОДОРОДНОГО ЭКСТРАКТА ЛИСТЬЕВ ШАЛФЕЯ

ЛЕКАРСТВЕННОГО И ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ НА ЕГО ОСНОВЕ.

6.1.

углеводородного экстракта шалфея лекарственного.

Согласно методике, изложенной в частной фармакопейной статье в Немецкой государственной фармакопее и в общей фармакопейной статье «Гранулы гомеопатические» ОФС 42-0023-04 РФ нами были получены гранулы гомеопатизированные на основе углеводородного экстракта С3 и С6. Также нами были проанализировали некоторые показатели качества.

Для получения лекарственной формы гранулы предварительно необходимо получить разведения (потенции) гомеопатические по способу Ганемана - изготовление во многих емкостях, при этом использовалась методика, указанная в общей фармакопейной статье 42-0027-05 «Настойки гомеопатические матричные». Оценку качества гранул гомеопатизированных проводили по следующим показателям: внешнему виду, распадаемости, количеству гранул в 1г.

невооруженным глазом в массе трех навесок гомеопатизированных гранул углеводородного экстракта шалфея, взвешенных с точностью до 0,01 г. Они также должны быть однородны по окраске и размеру, иметь шаровидную форму.

Распадаемость определяли помещением 10 гранул в коническую колбу вместимостью 100мл, в которую прибавляли 50 мл воды очищенной, имеющей температуру 37±2°С. Колбу медленно покачивали 1-2 раза в секунду. Нами было проведено 5 таких определений (табл.6.1.1.).

Гранулы гомеопатизированные должны распадаться в течение не более 5 мин.

Анализ распадаемости гранул гомеопатизированных Оценку количества гранул в 1 г проводили весовым методом. Для этого в навеске препарата (масса навески для каждого размера гранул сахарных приведена в таблице ОФС «Гранулы гомеопатические»), взвешенной с точностью до 0,01 г, подсчитывали количество гранул. Нами использовались гранулы №5. Результаты отражены в табл. 6.1.2.

Характеристика вспомогательного компонента – гранул сахарных № пробы Полученные гранулы гомеопатизированные на основе углеводородного экстракта листьев шалфея соответствуют требованиям ОФС 42-0023-04 по разделам описание, распадаемость и количество гранул в 1 г.

6.2. Гомеопатизированная и аллопатическая шалфейно-петролеумная мазь для лечения кожного пециломикоза.

Гомеопатизировання шалфейно-петролеумная мазь.

В результате теоретической проработки и экспериментальных исследований предложен следующий состав гомеопатизированной мази:

вазелин, глина голубая кембрийская, шалфейно-петролеумный экстракт и эфирные масла (можжевельника, лаванды, герани).

Проведен эксперимент по изучению длительности хранения различных концентраций мази. Результаты данного исследования показали целесообразность включения в состав мази воды 50 мл на один кг мази. В воде растворяли 40 крупок гомеопатизированного препарата SalviumpetroleumС6.

Экспериментально было определено соотношение в составе мази глины и вазелина, оно составило 1:2.

Испытания противопециломикозной активности проведено на 7 цыплятах месячного возраста, лапки которых были поражены пециломикозом.

Контрольную группу составили 2 цыпленка, которых лечили мазью аллопатической (шалфейно-петролеумной), 5 цыплят лечили гомеопатизированной мазью. Цыплята обеих групп выздоровели от кожного пециломикоза. Разница в сравнимаемых группах незначительна.

Аллопатическая шалфейно-петролеумная мазь для лечения кожного Мазь для лечения кожного пециломикоза содержит 9,0-10,0 г керосинового экстракта, полученного при настаивании в течение двух недель высушенных листьев шалфея лекарственного и авиционного керосина в соотношении 1-4:5, и вазелина до 100,0 (см. приложение 1).

Нижеследующие иллюстрирует получение мази. Методом мацерации в соотношении сырья и экстрагента 1-4:5 получают керосиновый экстракт из высушенных листьев шалфея лекарственного (влажность не более 14%). В стеклянный сосуд темного стекла с плотной крышкой помещают 5, высушенных измельченных листьев шалфея лекарственного (степень измельчения 10 мм), заливают авиационным керосином в количестве 25,0 и настаивают в течение 2-х недель в темном месте при периодическом помешивании. Затем полученное извлечение отфильтровывают.

Эксперименты проводились на рандоинбредных белых крысах самцах (массой 210-220 г). Группы крыс составляли по 30 особей (по 10 на каждый срок обследования). Мазь шалфейно-керосиновая и чистый шалфейнокеросиновый экстракт наносились на выбритую поверхность кожи животных в количестве 0,2 г ежедневно в течение 30 дней. Площадь аппликации составляла 1 см2. В течение первых 14-ти дней эксперимента у подопытных крыс не было зарегистрировано отклонений от контроля по всем биохимическим показателям. Однако после 30 дневного воздействия керосинового экстракта шалфея наблюдались обратимые признаки местнораздражающего действия в виде гиперемии кожи и появления тонких корочек. При нанесении испытуемой мази такие явления носили единичный характер. При обследовании крыс после аппликации керосиновым экстрактом шалфея наблюдали изменения гематологических показателей (снижение цветового показателя и ускорение процессов свертывания крови).

В группе крыс, которым наносилась испытуемая мазь, колебания гематологических и биохимических показателей не отличаются от контрольных групп животных.

Испытание на пециломикозную активность проводили, сравнивая эффективность шалфейно-керосиновой мази с низораловой мазью, используемой при кожном пециломикозе. Сравнение мазей проводили на аутбредных белых крысах-самцах массой 210 – 230 г.

В общей сложности у 39-х крыс в эксперименте развился кожный пециломикоз. До начала и после лечения проводили гематологические и биохимические исследования крови животных (табл.6.2.1.,6.2.2.). Как видно из приводимых данных, у крыс, заразившихся кожным пециломикозом, отмечено в крови уменьшение количества эритроцитов, гемоглобина, общего белка и лейкоцитов, увеличение количества эозинофилов, глюкозы, активности АлАТ, АсАТ, ЩФ.

17 крыс лечили - шалфейно-керосиновой мазью, а 14 крыс – препаратом сравнения - низораловой мазью.

В течение 30 дней ежедневно у 17-ти крыс смазывались шалфейнокеросиновой мазью тонким слоем утром и вечером пораженные участки кожи. У всех животных исчезли фиолетовые участки и наступило выздоровление, такой же эффект получен при лечении 14 крыс низораловой мазью. У животных нормализовалась кровь в группе, которую лечили шалфейно-керосиновой мазью. В группе крыс, леченных низораловой мазью, не наступило нормализации показателей крови (табл.6.2.3-6.2.5).

Таким образом, в отличие от низораловой мази шалфейно-керосиновая мазь обеспечила воздействие не только на местный очаг инфекции, но и очаги, которые развились в легких.

Результаты исследования крови крыс, зараженных пециломикозом, до мкмоль/л Результаты исследования крови крыс, зараженных пециломикозом, при изучении действия шалфейно-керосиновой мази Показатели крови После 30-дневного применения новой мази Результаты исследования крови крыс, зараженных пециломикозом, до применения низораловой мази (препарат сравнения) Результаты исследования крови крыс, зараженных пециломикозом при применении низораловой мази (препарат сравнения) Показатели крови После 30-дневного применения низораловой мази Результаты исследования крови интактных крыс, при изучении Показатели крови До использования мазей, После 30-дневного мкмоль/л Кроме того, в различных целях заражалось от больных пециломикозом животных 40 белых мышей массой 18-20 г различными способами введения культуры пециломицессов грибов: внутрибрюшинно, подкожно и просто внутрь. У 37-ми мышей были поражены грибами хвосты. Их разделили на три группы: 7 составили контрольную, которую не лечили (первая группа), мышей хвосты которых обрабатывались низораловой мазью (вторая группа), 18 мышей хвосты которых смазывались шалфейно-керосиновой мазью. В течение 5 дней все 7 мышей первой группы погибли от пециломикоза. Во второй группе 7 погибло мышей на 6 и 7-й день после лечения, в третьей группе все 18 мышей выздоровели. Следовательно, шалфейно-керосиновая мазь обладает не только эффектом лечения кожного пециломикоза, но и выраженным противогрибковым действием.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Наши исследования посвящены изучению шалфея лекарственного (Salvia officinalis L.) (см. приложение 3), а именно изучение биологически активных веществ липофильной фракции (углеродного экстракта) листьев шалфея лекарственного и созданию на ее основе новых препаратов. В качестве экстрагента нами был использован петролеум, полученный на основе авиационного керосина ТС-1 (ГОСТ 10.227-86). Углеводородный экстракт (петролеумный) из листьев шалфея лекарственного (Salvia officinalis L.) готовили методом мацерации в соотношении сырья и экстрагента 1:10 по массе. На основе углеводородного экстракта получены гомеопатизированные разведения (потенции) по способу Ганемана, на основе которых получены гранулы гомеопатизированные.

Также на основе углеводордного экстракта получена мазь для лечения кожного пециломикоза, которая содержит 9,0-10,0 г керосинового (петролеумного) экстракта, полученного при настаивании в течение двух недель высушенных листьев шалфея лекарственного и авиционного керосина в соотношении 1-4:5, и вазелина до 100,0. На данную мазь получен патент Российской Федерации RU 2475245 C1 Россия: МПК7 А 61 К 31/537 (см.

приложение 1).

Работа начиналась с получения новых препаратов из лекарственного сырья грецкого ореха, когда мы пользовались авиационным керосином, а затем перешли к петролеуму. Эти исследования были опубликованы в совместной работе [105], когда был получен препарат ириллен из зеленых плодов, зеленых свежих листьев и коры грецкого ореха с использованием авиационого керосина и петролеума. На 5-ти видах животных была изучена токсичность ириллена и было доказано, что препарат не токчисичен. Также была обнаружена его противопаразитарня активность [38].

Работа по изучению токсичности ириллена выполнена согласно "Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ" [85], а при создании препарата использованы фармакопеи стран мира [141,145]. Данный препарат в различных дозах вводили внутрижелудочно аутбредным белым мышам (40 самцов и 40 самок) живой массой 20–22 г и такому же количеству белым аутбредным крысам живой массой 190–210 г. По Литчфильду и Уилкоксону высчитаны летальные дозы, изготовленного ириллена, для белых мышей: LД50 составила 16377 ± 457,5 мг/кг, LД16=12986,4 мг/кг, LД84=18976,6 мг/кг; для белых крыс:

LД50 составила 16998,0 ± 535,4 мг/кг, LД16=12875,3 мг/кг, LД84=18583,4 мг/кг.

Изготовленный ириллен следует отнести к препаратам малотоксичным и практически нетоксичным (IY и Y класс токсичности). В эксперименте изучена противоэхинококкозная активность ириллена на хлопковых крысах, зараженных альвеолярным эхинококкозом [95,100].

Установлено, что индексы торможения роста паразитных ларвоцист (ИТРПЛ) для ириллена оказались следующими: ИТРПЛ-1 - 88,69%, ИТРПЛИТРПЛ-3 - 93,72%, для чеблина - СК-1 соответственно 88,12;

91,47; 93,14, для тодикампа 85,92%; 89,76; 90,37; для албендазола - 48,15;

75,16; 61,23%.

Этот эксперимент вновь был повторен. Результаты подтверждены. Для ириллена ИТРПЛ-1 - 88,93%, ИТРПЛ-2 - 92,12%, ИТРПЛ-3 - 94,15%, для чеблина - СК-1 ИТРПЛ-1 - 88,67%, ИТРПЛ-2 - 91,83%, ИТРПЛ-3 - 93,17%;

для тодикампа соответственно 84,36; 88,27; 89,68%.

Всё это касалось эхинококкоза с пециломикозом, которые превратились в народнохозяйственную и медицинскую проблему [1,2,7,8,9,12,16].

Противопаразитарная активность ириллена была изучена также при эймериозе кур.

Зуевым С.С. с соавторами были предложены и изучены углеводородные (петролеумные) экстракты травы тысячелистника обыкновенного и листьев мяты перечной. На основе петролеумных экстрактов получены гомеопатизированный препарат (гранулы) и аллопатическая мазь для лечения псороптоза и изучена токсичность данных препаратов.

Данные исследования стали теоретической основой для создания петролеумного экстракта листьев шалфея. Шалфей лекарственный известен в качестве лекарственного растения с древних времен [5,71,189]. Листья шалфея лекарственного - оффицинальное лекарственное растительное сырье, которое вошло в ведущие фармакопеи мира [34,141,163,164,172-176,180].

Листья шалфея богаты липофильной фракцией, в них содержится до 1% эфирного масла, каротиноиды, фиофетол, витамины и другие классы соединяй. Основное фармакологическое действие листьев шалфея лекарственного связывают именно с липофильными биологически противовоспалительным действиям. На основе листьев шалфея получен ряд лекарственных препаратов: Сальвин, Донельвин, настойка шалфея, сбор кровоостанавливающим, мягчительным и ограничивающим потоотделение действием. Петролеум – известный гомеопатический препарат, который вошел в фармакопеи Германии, США, Франции, обладающий широким спектром фармакологической активности. Исходя, из выше сказанного можно прогнозировать фармакологическую активность петролеумного извлечения из листьев шалфея. Петролеум, являясь липофильным экстрагентом и препаратом, извлекает из шалфея основную липофильную фракцию, что и было нами доказано с помощью хромато-массспектрометрического исследования. В петролеумном экстракте шалфея были идентифицированы основные маркерные соединения: лабда-8(20),14-диенол, 1,8-цинеол, -туйон, камфора, борнеол, -кариофиллен.

При изучении петролеума использовались те же условия хромато-массспектрометрии, что и в работах Зуева С.С. с соавторами [92,99]. Однако если Зуев С.С. с соавторами идентифицировал 100 компонентов оговорив в своей работе о большом количестве неидентифицированных пиков, то нам удалось идентифицировать более 160 компонентов (см. приложение 2). Так как петролеум это много компонентная система, то при проведении хроматомасс- спектрометрического исследования петролеумного экстракта листьев шалфея большинство терпеноидных соединений присущих шалфею экранируется компонентами экстрагента. Петролеум, по-видимому, являясь липофильным веществом экстрагирует весь комплекс терпеноидов шалфея.

Для того, чтобы прогнозировать какие компоненты эфирного масла присутствуют в петролеумном экстракте необходимо изучить состав эфирного масла шалфея. Нами было получено эфирное масло шалфея двумя фармакопейными методами – Гинзберга и Клевенджера и проанализирован состав эфирного масла методом хромато-масс-спектрометрии. В эфирном масле, полученном разными методами было идентифицировано компонентов, причем качественный состав практически не отличался, хотя был зафиксирован разброс относительного содержания различных классов терпеноидов. Значительное различие в суммарном относительном содержании наблюдается в классах монотерпенов и монотерпеноидов типа:

туйана, ментана, пинана, камфана и изокамфана; а в группе ациклических монотерпеноидов различие в суммарном относительном содержании компонентов несущественно. Также различия наблюдаются в классах сесквитерпенов и сесквитерпеноидов - типа аромадендрана и дитерпеноидов биосинтетического типа лабдана. По-видимому все идентифицированные компоненты должны присутствовать в составе петролеумного экстракта из листьев шалфея лекарственного.

Так как петролеумный экстракт из листьев шалфея планировался для получения гомеопатизированных и аллопатических препаратов необходимо было ответить на вопрос использования свежего или высушенного сырья.

Большинство гомеопатических фармакопей мира предлагаю использовать [3,145,166,172,173]. В аллопатических фармакопеях приоритет отдается высушенному сырью. Был проведен сравнительный анализ извлечений из информативных методов-хромато-масс-спектрометрии. Ранее проведенные исследования спиртового извлечения из листьев шалфея показали наличие маркерных соединений терпеноидного ряда – n-винилгваякол. Так, например, Dragon в своих исследованиях идентифицировал методом хромато-массспектрометрии 19 соединений, а Карасавиди 20 соединений [40,41].

Нам удалось идентифицировать и проанализировать в спиртовом извлечении из свежего и высушенного сырья более 60 компонентов, при этом условия проведения анализа отличались. Ученым K. Szentmihalye из Будапешта с соавторами была проведена хромато-масс-спектрометрия гексанового извлечения из листьев шалфея лекарственного (1:10).

Исследование проводилось на приборе FISON GC800 c использованием газового хроматографа НР-5890 (капиллярная колонка 30м х 0,32мм х 0,25м) и масс-селективного детектора Eingine-5989. K. Szentmihalye было идентифицировано 19 соединений: линалоол, линалил ацетат, гераниол, борнеол, борнил ацетат, изоборнеол, -туйон, -туйон, -пинен, –пинен, камфен, мирцен, лимонен, экалиптол, -терпинеол, -кариофиллен, кариофилленол, -хумулен,-хумулен, -фаренцен, -муролен. Из них в наибольшем количестве преобладали монотерпены: линалоол, -туйон, хумулен [202]. Мы исследование проводили на приборе фирмы Agilent Technologies с использованием газового хроматографа 7890 (колонка HP-5, 50 м x 320 мкм x 1.05 мкм) и масс-селективного детектора 5975 C с квадрупольным масс-анализатором. В высушенном и свежем сырье были идентифицированы основные маркерные соединения: 1,8-цинеол, -пинен, фенхен, -терпинен, п-цимол, лимонен, -туйоны, линалоол, -терпинен, камфора, борнеол, -терпинеол, борнилацетат, -кариофиллен, валенцен, кариофиллен, 5-кетоборнил-ацетат, -кадинен, ледол, -кариофиллен эпоксид, лабда-8(20),14-диен-13-ол, лабд-14-ен-8,13-диол, этилстеарат, этиллиноленат, этиллинолеат.

Было проанализировано эфирное масло, полученное из свежего, высушенного и сырья хранившегося длительный срок.

Хромато-масс-спектрометрическим анализом в образце эфирного масла, полученного из свежих листьев шалфея лекарственного, удалось идентифицировать 49 компонентов, в образце эфирного масла, полученного из высушенных листьев шалфея лекарственного – 94 компонента, а в образцах эфирного масла, полученного из сырья хранившегося длительный срок – 95 компонентов. Ученым M.S. Abu-Darwish с соавторами было проведено хромато-масс-спектрометрическое исследование по изучению компонентного состава эфирного масла шалфея, полученного методом гидродистилляции в течение 3 часов с помощью аппарата Клевенджера. В работе использовался газовый хроматограф Hewelett-Packard 6890 с полидемитилсилоксановой колонкой 30м х 0.25мм с масс селективным детектором Agilent Technologies 5973. В эфирном масле шалфея были идентифицироаны следующие компоненты:

-туйен, -пинен, камфен, пинен, мирцен, р-цимен, 1,8-цинеол, камфениол, цис-туйен, транс-туйон, камфора, борнеол, изоборнеол, миртенал, -терпинеол, линалил ацетат, борнил ацетат, тимол, карвокрол, -терпенил ацетат, Е- -кариофиллен, хумулен, спатуленол, кариофиллен оксид, виридифлорол [135]. В эфирном масле из свежего сырья в группе монотерпенов и монотерпеноидов наблюдается преобладание -пинена, туйона, камфоры, -туйен и сабинена.

Количественное содержание некоторых из компонентов в эфирном масле из свежих листьев шалфея лекарственного в 3-6 раз превышало содержание, чем в эфирном масле из высушенных листьев. В эфирном масле из высушенного сырья было обнаружено в 19 раз больше карвона, в 1,2 раза больше цинеола, в 1,6 раза больше борнеола и терпинеола. В группе сесквитерпенов и сесквитерпеноидов в наибольшем количестве (примерно в 3-7 раз) преобладали -кариофиллен, ледол, -кариофиллен оксид в эфирном масле из высушенного сырья. Также в эфирном масле из высушенного сырья отмечено преобладание дитерпенов и дитерпеноидов - лабда-8(20),12,14триен, лабда-8(20),14-диен-13-ол, лабд-14-ен-8,13-диол. В эфирном масле, полученном из сырья длительного хранения отмечалось превалирование окисленных форм и появление соединения – эудесман.

Наблюдаемые различия в качественном и количественном компонентном составе эфирного масла, полученного из свежих и высушенных листьев, вероятно, связан с окислительными и деструктивными процессами, протекающими в результате высушивания, а также, возможно, связанна с ферментативными процессами, протекающими в лекарственном растительном сырье во время высушивания. В эфирном масле, полученном из высушенных листьев наблюдается снижение относительного содержания компонентов, содержащих гидроксильную, эпоксидную функции или Оацетильную группу, а также некоторых компонентов, которые претерпевают окисление двойных связей. Отдельно следует отметить, что количественное содержание эфирного масла было максимальное в высушенном сырье, а очень низкое содержание (менее 0,5%) в сырье длительного хранения.

Пециломикоз – грибковое заболевание, обусловленное инфекцией различными видами условно-патогеных грибов рода Paecilomyces, впервые описанное М.А. Ахуновой [10,181].

Главным резервуаром пециломикозной инфекции в природе является почва, а в организме человека – кровь. Основные пути проникновения пециломикозной инфекции – респираторный, пероральный и трансплацентарный. Грибы рода Paecilomyces сапрофитируют в почве в виде мицелиальной формы, а при попадании в организм человека или животного трансформируются в тканевую паразитическую форму в виде сферул. Зрелая сферула этих грибов – округлые тельца с двухконторной оболочкой, внутри которой заключены эндоспоры. Размеры зрелых сферул варьируют от 10 до 29 мкм, эндоспор от 0,3 до 1,5 мкм. Заболевание сопровождается тяжелыми поражениями жизненно важных органов, которые могут привести к летальному исходу [13].

обладающих противогрибковым действием, одним из них являются листья антибактериальная активность масла на следующих микроорганизмах:

Escherichia coli, Salmonella enteritidis, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Sarcina lutea, Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae, Aspergillus niger. Выявлено, что концентрация масла, которая останавливала рост B. Subtilis составляла 2%, St. Aureus – 0,2%, E. coli и P.

Aeruginosa – 4%. На другие штаммы микроорганизмов масло также оказывало антибактериальное действие [157]. В работе Tularat Sookto c соавторами была изучена антимикробная активность эфирного масла и экстракта из листьев шалфея лекарственного на 13 штаммах бактерий и штаммах грибов, в том числе и на Candida albicans. Эфирное масло показало эффеки при минимальной ингибирующей концентрации 9 г/л [200].

Нами было сделано предположение, что углеводородный экстракт из высушенных листьев шалфея лекарственного также будет обладать противогрибковым действием, а именно действовать на условно-патогенные почвенные грибы рода Paecilomyces.

Испытание на противопециломикозную активность проводили, сравнивая эффективность шалфейно-керосиновой мази (мазь на основе петролеумного экстракта шалфея) с низораловой мазью, используемой при кожном пециломикозе и других грибковых заболеваниях. Сравнение мазей проводили на 60 аутбредных белых крысах-самцах массой 210 – 230 г. Предложенная нами мазь показала высокую противопециломикозную активность и низкую токсичность. Нами было установлено, что в отличие от низораловой мази шалфейно-керосиновая мазь (мазь на основе петролеумного экстракта шалфея) обеспечила воздействие не только на местный очаг инфекции, но и очаги, которые развились в легких.

противопециломикозной активности шалфейно петролеумной мази на цыплятах месячного возраста, лапки которых были поражены пециломикозом.

22 цыпленка (контрольная группа) лечили мазью аллопатической (шалфейнопетролеумной), 25 цыплят лечили гомеопатизированной мазью. Цыплята обеих групп выздоровели от кожного пециломикоза. Разница в сравнимаемых группах незначительна.

В современной кардиологии пециломикозные атипичные миокардиты (ПАМ) вызвали интерес и в элитных журналах стали появляться публикации [104]. Мы также начали работать со специалистами лечебного факультета и предложили применять в комплексном лечении пециломикоза официнальные гомеопатические препараты шалфея лекарственного. Нами был получен положительный результат.

Эклампсия собак тяжелое заболевание, которое трудно поддаётся лечению.

Заболевание сопровождалось приступами эклампсии, которые начинались с мелких фибриллярных сокращений мышц передних конечностей до 40 секунд.

Затем наступают тонические судороги от 30 секунд до одной минуты скелетной мускулатуры с задержкой дыхания, расширением зрачков. В заключительном этапе приступа эклампсии, который длится от 30 секунд до двух минут наблюдали клонические судороги передних и задних конечностей с постепенным восстановлением дыхания с выделением пены изо рта. После прекращения судорог больные животные несколько минут находятся в коматозном состоянии. После прекращения приступа собаки переходят в сонливое состояние, не реагируя даже на появление кошек.

Эклампсия собак сопровождается глубокими изменениями в крови:

снижением количества гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, общего белка, альбуминов, глобулинов, увеличением количества холестерина, триглицеридов, глюкозы, общего билирубина, креатинина, АлАТ, АсАТ, щелочной фосфатазы. Отклонения величин статистически достоверно