Главная >> Диссертации - все темы

Pages: |

| 2 |

«ИССЛЕДОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ АМПАССЕ, КАЛЬЦИЕВОЙ СОЛИ N-(5ГИДРОКСИНИКОТИНОИЛ)-L-ГЛУТАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ ...»

-- [ Страница 1 ] --

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК

ИНСТИТУТ ХИМИЧЕСКОЙ ФИЗИКИ ИМЕНИ Н.Н. СЕМЕНОВА

На правах рукописи

КИСЕЛЕВ АЛЕКСЕЙ ВИТАЛЬЕВИЧ

ИССЛЕДОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ

АМПАССЕ, КАЛЬЦИЕВОЙ СОЛИ N-(5ГИДРОКСИНИКОТИНОИЛ)-L-ГЛУТАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ

14.03.06 - Фармакология, клиническая фармакология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Научные руководители академик РАН профессор В.И. Сергиенко доктор физико-математических наук С.В. Стовбун Москва –

2.2. Методика обучения условной реакции пассивного избегания (УРПИ)........... 2.3. Методика обучения условной реакции активного избегания (УРАИ), в условиях модели «Шаттл – бокс»

3. Методы исследования неврологтческого статуса и двигательной активности животных

3.1. Методика приподнятого крестообразного лабиринта

3.2. Оценка ориентировочно - исследовательского поведения и двигательной активности животных. Методика открытого поля

3.3. Исследование неврологического дефицита по шкале Stroke-index McGrow. 3.4. Исследование нарушения координации движений в тесте вращающегося стержня

3.5. Определение болевой чувствительности и агрессивности

4. Формирование синдрома отмены

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Исследование нейропротективных свойств ампассе на различных моделях нейродегенерации

1.1. Изучение эффектов ампассе на модели массивной кортикальной ишемии....... 1.1.1. Изучение влияния ампассе на площадь ишемического поражения коры на модели массивной кортикальной ишемии

1.1.2. Изучение влияния ампассе на обучение и память животных с массивной кортикальной ишемией

1.2. Изучение эффектов ампассе на модели геморрогического инсульта, вызванного посттравматической гематомой

1.2.1. Изучение влияния ампассе на гибель и неврологический дефицит крыс с ГИ

1.2.2.Изучение влияния ампассе на обучение и память животных с ГИ.............. 1.3. Изучение эффектов ампассе на когнитивный и неврологический дефицит у крыс в условиях естественного старения

1.3.1 Изучение влияния ампассе на нарушения обучения и памяти у старых крыс (в возрасте 24 месяцев)

1.3.2. Изучение влияния ампассе на неврологический дефицит у старых крыс (в возрасте 24 месяцев)

1.4. Изучение эффектов ампассе на память и неврологический дефицит у крыс в условиях дефицита холинергической системы (на модели ускоренного старения)............ 1.4.1. Изучение влияния ампассе на обучение УРАИ крыс с холинергическим дефицитом

1.4.2. Изучение влияния ампассе на обучение УРПИ крыс с холинергическим дефицитом

1.4.3. Изучение влияния ампассе на ориентировочно-исследовательское поведение и эмоциональное статус крыс с холинергическим дефицитом

1.4.4. Изучение влияния ампассе на неврологические нарушения крыс с холинергическим дефицитом

1.5. Изучение эффектов ампассе на тремор, вызванный холиномиметиком ареколином

1.6. Изучение эффектов ампассе на память и неврологический дефицит у крыс в условиях острой алкогольной интоксикации

1.6.1. Изучение влияния ампассе на вызванный этанолом неврологический дефицит

1.6.2. Изучение влияния ампассе на нарушения двигательного и ориентировочноисследовательского поведения, вызванные этанолом

1.6.3.Изучение влияния ампассе на обучение УРПИ, нарушенное этанолом....... 2. Исследование ноотропных и антиамнестических свойств ампассе у интактных крыс и на моделях различных амнезий

2.1. Изучение эффектов ампассе на модели гипобарической гипоксии и гипоксии с гиперкапнией в гермообъеме

2.2. Изучение ноотропного эффекта ампассе в Т-образном лабиринте

2.3. Изучение антиамнестического эффекта ампассе на различных моделях амнезии

2.3.1. Изучение влияния ампассе на модели амнезии УРПИ, вызванной скополамином

2.3.2. Изучение влияния ампассе на модели амнезии УРПИ, вызванной МЭШ..... 3. Исследование возможных побочных эффектов ампассе при длительном применении и после его отмены у крыс

3.1. Изучение эффектов ампассе на поведение и память животных при хроническом и однократном введении

3.1.1. Изучение основного антиамнестического действия ампассе при хроническом введении

3.1.2. Изучение влияния длительного введения ампассе на поведение крыс в тесте открытого поля

3.1.3. Изучение влияния длительного введения Ампассе на болевую чувствительность и агрессивность крыс

3.1.4. Изучение влияния длительного введения ампассе на судорожную готовность крыс, вызванную коразолом

3.2. Изучение влияния отмены хронического введения ампассе на поведение крыс

3.2.1. Изучение влияния ампассе на ориентировочно-исследовательское поведение у крыс после отмены хронического введения

3.2.2. Изучение влияния ампассе на эмоциональный статус крыс после отмены хронического введения

3.2.3. Изучение влияния отмены хронического введения ампассе на болевую чувствительность и агрессивность крыс

3.2.4. Изучение влияния отмены длительного введения ампассе на судорожную готовность крыс, вызванную коразолом

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

AMPA (-амино-3-гидрокси-5- метил-4-изоксазол пропионовая кислота Arc - цитоскелет-связанный белок (семейство «ранних» генов) A25-35 – бета амилойд BDNF– нейротрофический фактор мозга Вcl-xL и Вcl-2 – антиапоптотические белки bFGF - фактором роста фибробластов основного BrdU - 5-бромо-2дезоксиуридин CaMKII - кальмодулинкиназа CamKK2 - кальций/кальмодулиновый каскад cAMP - циклический монофосфат протеинкиназа CNTF - реснитчатым нейротрофическим фактором CREB - цАМФ-зависимый белок, транскрипционный фактор ЕRK - сигнал- регулируемая киназа GAP-43 - маркер аксонального роста GDNF - фактор роста глии GluR1/GluR2 - субъединицы АМРА рецептора GTPase - регуляторные сигнальные пути G-белки - нуклеотид-связанные регуляторные белки НРА - гипоталамо-гипофизарный путь HDAC - ингибиторы гистондеацетилаз HGF - фактор роста гепатоцитов IdU - 5-йодо-2-дезоксиуридин IGF-1 - инсулиновый фактор роста IL-1 – интерлейкин 1, провоспалительный цитокин IL-4 - интерлейкин 4, противовоспалительный цитокин IL-6 - интерлейкин 6, провоспалительный цитокин InsP3R - инозитол 1, 4, 5-трифосфатные рецепторы JNK - терминальная киназа LPS - липополисахарид-токсин LTP - явление длительной синаптической потенциации MAP2 - мРНК microtubule-associated protein MAPK/ERK - активированный протеинкиназный путь MEF2 - транскрипционным фактором миоцитов NeuN - нейрональный маркер NF-kB - ядерный фактор каппа, транскрипционный фактор NGF– nerve growth factor NMDA – N-метил-D-аспарагиновая кислота PD98059 - ингибитор ERK-пути PGE2 - простогландин Е PGs – простаглондины PI3K - фосфотидил инозитод 3-киназы Rac1/Cdc42-PAK цитоархитектуры шипика RhoA-ROCK-LIMK-Cofilin - регуляторный сигнальный путь, ответственный за полимеризацию актина SGZ – субгранулярная зона гиппокампа SVZ - субвентрикулярная зона боковых желудочков SYN - синаптофисин, маркер синаптогенеза SZT - стрептозотоцин TNFa - фактор некроза опухоли VEGF - эндотелиальный фактор роста сосудов БА – болезнь Альцгеймера ГИ – геморрагический инсульт ДП - долговременная потенциация ИПГ – интрацеребральная посттравматическая гематома Каспазы-3 - маркер апоптоза МАРК - митоген активированная киназа ММР-2 и ММР-9 – металопротеазы МЭШ – максимальный электрошок ПСУ - постсинаптического уплотнения РКМ - протеинкиназа М РКС - атипичная протеинкиназа С УРАИ - условная реакция активного избегания УРПИ – условная реакция пассивного избегания ЦОГ-1, - 2 циклооксигеназа-1, - ЧМТ – черепно-мозговая травма Каждый год от болезней, сопровождающихся нейродегенерацией, таких как, болезнь Альцгеймера, Паркинсона, цереброваскулярные расстройства, погибают или становятся нетрудоспособными миллионы людей в мире. В частности, в ряде стран болезнь Альцгеймера занимает одно из первых мест среди других болезней в качестве причины смерти (Brookmeyer R., Johnson E. et al., 2007). Инсульт занимает третье место среди болезней, вызывающих смерть пациентов, а травмы мозга являются наиболее частыми заболеваниями, приводящими к нетрудоспособности лиц в молодом возрасте (Скворцова В.И., 2001). Сосудистая патология мозга относится к тяжелым и социально значимым заболеваниям, что обусловлено высоким процентом смертности и инвалидизации населения. В России ежегодно инсультом заболевают 400–450 тыс.

человек, из них на долю ишемических инсультов приходится более 80%. Показатели заболеваемости и смертности от инсульта среди лиц трудоспособного возраста в России увеличились за последние 10 лет более чем на 30% (смертность – 41 случай на 100 тыс.

населения). Препараты с ноотропным действием, применяемые в настоящее время для лечения когнитивных расстройств не достаточно эффективны, а с нейропротективным действием часто направленны только на локализацию драматических последствий и имеют ряд отрицательных побочных эффектов, в том числе на мнестические функции.

Поэтому фармакологическая коррекция нейродегенеративных расстройств, сопровождающихся развитием неврологического и когнитивного дефицитов, относится к одной из наиболее важных проблем фармакологии и неврологии.

Нейропротекторы трудно классифицировать: сотни препаратов имеют различное строение и неодинаковый механизм действия. Выделяют истинные ноотропы, ведущее свойство которых - улучшение когнитивных функций: внимания, памяти, способности к анализу ситуации, принятию решений, ориентации в пространстве и ноотропоподобные средства - препараты поливалентного комплексного нейропротективного действия (Воронина Т.А. и Середенин С.Б., 2007). Эффект ряда ноотропных средств опосредуется через нейромедиаторные системы мозга, среди которых наибольшее значение имеют моноаминергическая - пирацетам вызывает увеличение содержания в мозге дофамина и норадреналина, нооглютил облегчает секрецию дофамина при микродиализе стриатума крыс (Ковалев Г.И., 1993); холинергическая — нефирацитам и анирацетам потенцируют подтипы 42 субтипы никотиновых рецепторов (Shors T.J., 2001); оксироцетам ускоряет высвобождение ацетилхолина из срезов гиппокампа крыс (Marchi, 1992);

глутаматергическая — пирацетам способен проявлять свойства агониста ауторецепторов квисквалового подтипа (Ковалев Г.И., 1993; Григорьев В.В., 2003), пирацетам увеличивает места связывания для 3Н-глютамата и 3Н-AMPA (Copani, 1992), пирацетам, арирацетам, нооглютил увеличивают количество NMDA-рецепторов (Фирстова, 2008).

Эффекты нейропротективных средств могут реализоваться за счет церебральной вазодилатации (ницерголин), антагонизма кальциевых каналов (нимодипин), антиоксидантного действия (мексидол), влияния на ГАМК-систему (пантогам), активации метаболизма (ацетил-L-карнитин), ингибирования микроглии (НПВС), активации нейрогенеза (ростовые факторы) и др. Эффективны подходы поиска нейропротекторов и когнитивных стимуляторов основанных на представлениях о важнейшей роли NMDA и АМРА типов глутаматных рецепторов в механизмах памяти и выживании нейрона. В настоящее время активно разрабатываются препараты для лечения когнитивных расстройств и нейродегенеративных процессов с глутаматергическим механизмом действия: мемантин, церестат, талампанел, Ro 25-6981, Ro 8-4304, ампалекс, LY379268, LY404187, LY503430, CX614, S18986 (O'Neill M.J. et al., 2004; Yurkewicz L. et al., 2005;

Yitao Liu et al., 2007; Erik B. Bloss, 2008; Jourdia H., et al., 2009). Вместе с тем, у ряда имеющихся лекарственных препаратов нейропротективные свойства выражены довольно слабо, и, кроме того, они обладают различными побочными эффектами (в частности, аллергенность, иммунотоксичность), ограничивающими возможности их длительного и широкого применения. А терапевтический эффект ноотропов наступает только через продолжительный срок применения и требует достаточно высоких доз. Данная работа посвящена исследованию препарата, по спектру фармакологической активности и эффективности в экспериментах на животных не уступающего известным ноотропным, противоишемическим и противоинсультным препаратам. А по ряду свойств имеющего преимущества. В частности, установлено, что препарат исследования не вызывает анафилактического шока, не проявляет аллергизирующего действия в реакции гиперчувствительности III типа, не влияет на гуморальный и клеточный иммунитет и, следовательно, не проявляет иммунотоксичности (Киселёв А.В. и др., 2012).

Очевидно, что оптимизация поиска и разработка новых лекарственных средств требуют накопления и систематизации знаний о физиологических основах адаптации, нейропластичности и нейропротекции. Фармакологическое усиление нейрогенеза и стимуляция нейрональной пластичности являются стратегией направленной на уменьшение когнитивного дефицита.

Цель и задачи Целью работы является изучение нейропсихотропных свойств кальциевой соли N-(гидроксиникотиноил)-L-глутаминовой кислоты (ампассе) в качестве потенциального лекарственного средства.

Задачи исследования:

1. Изучение нейропротективных эффектов ампассе на модели массивной кортикальной ишемии на крысах.

посттравматической интрацеребральной гематомы (геморрагический инсульт) 4. Изучение эффектов ампассе на модели болезни Альцгеймера у крыс.

5. Изучение антиалкогольных свойств ампассе в условиях острого алкогольного отравления на крысах.

6. Изучение антиамнестического действия ампассе на моделях амнезии условного рефлекса пассивного избегания, вызванной скополамином и максимальным электрошоком.

условнорефлекторного обучения крыс питьевому рефлексу в Т-образном 8. Изучение процессов толерантности при хроническом применении ампассе и синдрома отмены при отмене его длительного введения.

Научная новизна работы антиалкогольные свойства нового оригинального соединения кальциевой соли N-(-5гидроксиникотиноил)-L-глутаминовой кислоты. Показано, что ампассе при однократном и длительном введении способен корректировать когнитивные и неврологические нарушения, возникающие при различных моделях патологии (инсульты, ишемия мозга, экспериментальная болезнь Альцгеймера, изменения сопряженные с процессами естественного старения). Антиамнестические эффекты препарата исследования сопоставимы или превышают таковые у препарата сравнения пирацетама. При длительном применении ампассе не возникает толерантности и синдром отмены после прекращения применения.

Научно-практическая значимость.

Экспериментальные результаты, полученные в настоящем исследовании, позволяют рассматривать кальциевую соль N-(-5-гидроксиникотиноил)-L-глутаминовой кислоты в качестве перспективного соединения для создания безопасного эффективного лекарственного средства, обладающего нейропротекторными и ноотропными свойствами.

Ампассе может быть использован для лечения ряда заболеваний и состояний (инсульты, абстинентный синдром, дисциркуляторная энцефалопатия, болезнь Альцгеймера и другие). Материалы диссертационной работы вошли в досье для регистрации препарата ампассе в Минздрав РФ.

Апробация работы Результаты диссертационной работы были представлены на теоретическом семинаре Института Химической Физики им. Н.Н.Семенова Российской академии наук. Отдельные аспекты работы представлялись на 11-ом Региональном съезде ECNP (Санкт-Петербург, 2011); 14ом биеннале EBPS (Amsterdam, 2011); XXIII симпозиуме «Современная Химическая Физика» (Туапсе, 2011); Международном конгрессе «28th World CINP Congress of Neuropsychopharmacology» (Stockholm, 2012).

Публикации Основные положения диссертации опубликованы в 7 печатных работах. Статей в рецензируемых журналах – 4; публикаций в трудах конференций и съездов – 3.

Объем и структура диссертации Диссертация содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты и обсуждение, заключение, выводы, приложение и список литературы.

Работа изложена на 126 страницах машинописного текста, содержит 27 таблиц и 3 рисунка. Библиографический указатель включает отечественных и иностранных источников.

Факторы, участвующие в процессах памяти Структурный процесс синаптической пластичности связан с процессом формирования новых нейронов, нейрогенезом (Leuner and Gould, 2010). Нейрогенез – (греч. (нерв) + лат. genesis (рождение, возникновение, происхождение) — комплексный процесс, который начинается с пролиферации клеток-предшественниц, миграции, дифференцировки новообразованных клеток и кончается образованием нового функционирующего и интегрированного в нейрональную сеть нейрона. По теории С. Мак Гира и Р. Девиса следует различать формирование нейронов долговременной памяти височной коры и нейронов гиппокампа, которые являются более короткоживущими, но также участвуют в формировании долговременной памяти. Авторы постулируют о том, что нейрогенез в зубчатой фасции гиппокампа (SGZ) призван служить «очищению»

гиппокампа от более ранних следов памяти после консолидации ее в коре. Работая на мутантных мышах, у которых отсутствует влияние «обогащенной среды» на гиппокампальный нейрогенез, они обнаружили у этих животных устойчивую память на выработанную реакцию страха (McGuire S.E., Davis R.L. 2001). В эксперименте на животных сообщается, что повреждение гиппокампа не коррелирует с относительно сохраненным приобретенным опытом, так как для реконсолидации памяти требуется реактивация связей цингулярной коры. Это находит подтверждение в исследованиях, где рядом авторов показано, что в консолидации памяти основная роль отводится коре, а реактивация гиппокамп-зависимой памяти требует ремоделирование кортикальных связей цингулярной коры (Gisella Veterea et al., 2011). Сразу после обучения происходит увеличение плотности (количество) дендритных шипиков в пирамидных нейронах цингулярной коры. Об этом говорит тот факт, что если подавить синаптогенез транскрипционным фактором миоцитов2 (MEF2) в первую неделю после обучения в тесте fear-conditioning, то нарушается консолидация памяти. Транскрипционный фактор миоцитов2 (MEF2) негативно регулирует синаптогенез в дозозависимой манере.

Увеличение этого фактора уменьшает число дендритовых шипиков и количество возбуждающих синапсов in vitro (Flavell SW, et al. 2006). Таким образом, ингибирование синаптогенеза нарушает консолидацию памяти.

В здоровом мозге нейрогенез ограничивается несколькими анатомическими местами, в которых стволовые клетки пролиферируются и дифференцируются в нейроны и мигрируют к месту назначения: субвентрикулярная зона боковых желудочков (SVZ), вновь образованные нейроны которых мигрируют в обонятельные луковицы и субгранулярная зона гиппокампа (SGZ), новые нейроны которой мигрируют во всю зубчатую фасцию. Хотя, есть работы подтверждающие наличие собственного пула стволовых и прогениторных клеток в сердцевине обонятельной луковицы (olfactory bulb core) (Liu Z et al., 2003).

Обсуждается роль микроглии в нейрогенезе. Так, если в эксперименте не внести клетки микроглии в культуру клеток SVZ, то клетки через некоторое время теряют способность к пролиферации и дифференциации (Walton et al., 2006). Еще одно подтверждение связи микроглии и нейрогенеза показывает работа, где ингибиторы ЦОГсупрессируют на 40 - 90 % число пролиферирующих нейрональных клеток в SGZ и SVZ (Goncalves et al., 2010). Кроме того, ингибиторы ЦОГ нарушают пространственную память. Так, например, повышение эндогенного BDNF, индуцированное моторными упражнениями у грызунов, обращает вспять ибупрофен индуцированное повреждение пространственной памяти. (Raz Yirmiya, Inbal Goshen, 2011).

провоспалительных цитокинов на нейрогенез, есть данные, что фактор некроза опухоли (TNFa) в дозо-зависимой манере усиливает пролиферацию предшественников нейрональных клеток, но не влияет на их дифференциацию (Wu et al., 2000). В клинических испытаниях ингибирование TNFa при рассеянном склерозе привело к ухудшению течения заболевания (The Lenercept, 1999).

Вектор трансформации стволовых клеток зависит от специфических сигнальных трансформирующий ростовой фактор (TGF-beta1) и костный морфогенный белок. (BMP);

2 – тромбоцитарный и эпидермальный ростовой фактор (PDGF/EGF); 3 – интерлейкин-6, ингибирующий фактор лейкемии, реснитчатый нейротрофический фактор (IL-6, LIF, CNTF); 4 – экстрацеллюлярные лиганды Notch-delta. Обработка клеток костного мозга фактором роста фибробластов основного (bFGF) и реснитчатым нейротрофическим фактором (CNTF) ведет к пролиферации клеток, экспрессирующих маркеры нейрональных клеток. Дифференцировка прогениторных клеток гиппокампа в возбуждающие и тормозные нейроны активизируется нейтрофинами и ростовыми факторами BDNF и NT-3 и прекращается при внесении в культуру клеток митогенного фактора (FGF2- фактор роста фибробластов 2).

Нейротрофины и факторы роста, такие как BDNF, NGF, VEGF, IGF-1 и GDNF, и их рецепторы на нейронах, астроцитах, микроглии, имунных клетках (Т-клетки, макрофаги) принимают участие в нейрогенезе необходимом для процессов памяти. Например, BDNF, секретируемый активированной микроглией, промотирует пролиферацию микроглии. Секреция BDNF астроцитами заметно увеличивает концентрацию цитокина IL-4, необходимого для обучения и памяти. В эксперименте, у животных с дефицитом IL-4 не наблюдается возрастание содержания BDNF после водного лабиринта Морриса, что коррелирует с нарушением обучения.

прогениторных нейронах гиппокампа, мотонейронах коры и мозжечка, как и его синтезированные аналоги, стимулирует нейротрофию и нейрогенез, способствуя выживанию и созреванию новых нейронов. Известно, что CNTF регулирует экспрессию мRNA белка c-fos и белка FOS. Изменение экспрессии белка c-fos используется как индикатор нейрональной активности.

При взаимодействии моноаминергических нейротрансмиттеров (особенно серотонина) с нервной клеткой и активации ее генома вторичными мессенджерами активируются ген фактора роста нервов (англ. nerve growth factor – NGF), а также при нейротрофического фактора (англ. brain derived neurotrophic factor – BDNF). В исследованиях было установлено, что влияние BDNF на формирование долговременной памяти сопряжено с запуском ERK1/2 сигнального пути и фосфорилирования цАМФзависимого белка CREB (Alonso et al., 2002).

Активация BDNF и NGF ведет к реорганизации и образованию новых синапсов, удлинению и разрастанию (sprouting) дендритов и аксонов и даже к образованию новых нервных элементов из так называемых стволовых клеток. Кроме того, BDNF усиливает экспрессию гена основного цитопротективного белка bcl-2, подавляющего апоптоз в гиппокампе и височной коре, что также способствует восстановлению и выживанию нейронов. Фактор роста нервов NGF регулирует исследовательскую активность у старых мышей, а инъекция его в гиппокамп значительно улучшает консолидацию памяти.

Эти эффекты сопровождались снижением уровня Са2+ в синаптосомах и увеличением синтеза белка в нейронах. Препараты, потенцирующие эндогенный синтез NGF, например PG-9 и введение NGF в энториальную кору улучшают показатели долговременной памяти, облегчая запоминание. Но, высокие дозы NGF в гиппокампе блокируют кратковременную память (Walz et al., 2005).

Нейротрофический фактор мозга BDNF влияет на регуляцию стабилизации взаимодействия нейронов, синаптической пластичности и консолидации долговременной памяти. Экспрессия мРНК этого фактора в клетках гиппокампа в условиях обучения крыс сопряжено с активностью NMDA глутаматных рецепторов. Эффект BDNF блокируется антагонистом NMDA рецепторов, препаратом Мk-801, что свидетельствует о синергизме нейротрофических и ионотропных механизмов синаптической пластичности в глутаматергических синапсах (Yin Y et al., 2002). Снижение способности к обучению у старых животных коррелирует с изменениями уровней BDNF и NGF во фронтальной коре и гиппокампе. Так, однократная инъекция в гиппокапм BDNF вызывала значительное улучшение реакций пространственной ориентации и памяти в тесте Морриса (Cirulli et al., 2004).

BDNF-индуцированный сигнальный каскад, активируемый в течении обучения.

После связывания со специфическими рецепторами TrkB, BDNF инициирует комплекс сигнальных путей, которые изменяют синаптическую структуру и функции.

Активация CREB приводит к экспрессии генов, способствующих формированию и удлинению дендритовых шипиков, что имеет центральное значение для BDNFопосредованных эффектов. BDNF связавшись с TrkB рецепторами индуцирует высвобождение кальция через инозитол 1, 4, 5-трифосфатные рецепторы (InsP3R) и стимулирует кальций-зависимую протеинкиназу в гиппокампальных нейронах, которые ответственны за формирование долговременной памяти. BDNF- индуцированное ремодулирование в гиппокампе требует функциональных рианодиновых рецепторов RyR, которые регулируют кальциевые каналы. Существенная роль кальциевых сигналов в формировании памяти хорошо известна. Высвобождение кальция, регулируемое через RyR и InsP3R, приводит к повышению кальциевой активности и синаптической активности гиппокампа. Внутригиппокампальная инъекция увеличивает экспрессию RyR2 и RyR3 белков и протеинкиназы М (РКМ) в гиппокампальных клетках.

Кроме BDNF в формировании памяти участвуют и другие сигнальные молекулы, такие как протеинкиназа М (РКМ), атипичная протеинкиназа С (РКС) (Tatiana Adasmea et al., 2011).

У пациентов с болезнью Хантингтона (на бессимптомных носителях), так же как и на модельных мышах этой мутации наблюдается дефицит обучения и памяти, что соотносится с низким уровнем BDNF в мозге, как у пациентов, так и у животных.

Использование самого BDNF сопряжено с трудностями его прохождения через ГЭБ и побочными эффектами при увеличении концентрации. Альтернативным подходом служит увеличение накопления эндогенного нейротрофина BDNF. С развитием исследований позитивных аллостерических модуляторов AMPA рецепторов (ампакинов) стало экспериментальном исследовании при 4-х дневном введении ампакина обнаруживается 50-100% увеличение содержание BDNF в неокортексе и гиппокампе. (Gary Lynch, 2008).

Нейрональная пластичность взаимодействует с гипоталамо-гипофизарным путем (НРА), особенно в когнитивных задачах тесно связанных с эмоциональными нагрузками, например публичные выступления у людей или поведенческие парадигмы у грызунов, что ассоциированно с продуцированием нейромедиаторов NE (норадреналин), DA (дофамин) and 5-HT (серотонин), цитокинов (особенно IL-1) и глюкокортикоидов. (Labrousse et al., 2009; Steptoe et al., 2007) Выделение NE in vivo приводит к микроглиальной активации и, как следствие, к секреции цитокина IL-1. (McNamee et al., 2010a,b) Цитокины способствуют секреции глюкокортикоидов — кортикостерона. В эксперименте, если ввести i.v.c. IL-1b у животных улучшается выработка УРПИ, но этот эффект можно кортикостерона на обучение и память зависит от его концентрации в мозге, с чрезмерным повышением уровня которого можно получить нарушение когнитивных процессов и нейрогенеза. Например, при возрастании концентрации кортикостерона в гиппокампе в раза от базального (физиологического) уровня усиливается нейрогенез, тогда как введение LPS (липополисахарид-токсин бактериальной клеточной стенки), вызывающий увеличение уровня кортикостерона в 5 раз, угнетает нейрогенез (Wolf et al., 2009b). LPS вызывает чрезмерное продуцирование IL-1 микроглией и гиппокампом и, как следствие, повреждение обучения и памяти. Это нарушение памяти реверсируется ингибитором каспазы-1.

пластичности. Накоплено множество данных, где интерлейкины принимают участие в формировании памяти. В физиологических условиях уровень IL-1b в мозге остается очень низким и индуцируется только в течение обучения и консолидации памяти. В тесте contextual fear conditioning экспрессия мRNA IL-1b запускается только через 24 часа после обучения, но не через 1,5 или 4 часа. Это нашло подтверждение в другом исследовании, когда при выработки УРПИ отмечалась экспрессия генов IL-1а в гиппокампе через 4 часа после обучения УРПИ, а экспрессия генов IL-1b и IL-1ra в этой временной точке не обнаруживалась. У мышей с генетической делецией P2X7 ATP рецепторов отсутствие эксперссии IL-1b клетками глии гиппокампа коррелирует с нарушением памяти и уменьшением нейрональной активации в пространственных задачах на обучение (Song et al., 2003). А у мышей, нокаутных по гену IL-1beta, наблюдаются нарушения пострецепторных сигнальных процессов в тестах обучения, (Yirmiya et al., 2002) и не происходит ремиелинизации на модели рассеянного склероза, при этом, у таких животных значительно снижена экспрессия инсулиноподобного ростового фактора 1 (IGF 1) в нервной ткани (Mason J., et al., 2001). При введении IL-1beta в желудочки мозга (i.v.c.) значительно улучшаются показатели поведенческой и когнитивной активности крыс при выработки пассивного (УРПИ) и активного (УРАИ) избегания, облегчая формирование навыка. Кроме того, цитокин IL-1 способствует обратному захвату глюкозы астроцитами, нарушение которого коррелирует с когнитивными расстройствами при обучении в пространственных задачах.

У цитокина IL-6 также найдена взаимосвязь между его уровнем содержания и когнитивными способностями у пациентов с системной красной волчанкой и после хирургического вмешательства. В исследование стресса, вызванного хирургическим вмешательством, на иммунитет и когнитивные способности пациентов обнаружили, что высокий уровень IL-6 обратно пропорционально влияет на когнитивные расстройства.

Аналогичным образом коррелирует уровень IL-6 и когнитивные расстройства у пациентов с красной волчанкой. (Shapira-Lichter et al., 2008) В исследованиях, в культуре клеток и на срезах гиппокампа, фактор некроза опухоли (TNFa), селективно секретированный астроцитами, улучшал синаптическую активность за счет увеличения экспрессии AMPA рецепторов. Но, следует отметить, что вновь секретируемые АМРА рецепторы имеют мутантную стехиометрию, не содержат субъединицы GluR2. Из-за чего эти рецепторы становятся проницаемы для ионов Са, что может способствовать развитию нейротоксичных эффектов et al., 2005).

Несмотря на противоречивые данные в литературе, было установлено, что TNFa, продуцированный исключительно астроцитами, необходим для синаптогенеза в нейрональной пластичности (Stellwagen и Malenka, 2006). TNFa, веденный внутрибрюшинно мышам за 24 часа до обучения УРАИ (условной реакции активного избегания), увеличивает число реакций избеганий (до подачи тока на условный сигнал) и реакций избавлений (на ток), таким образом, ускоряя процесс обучения (Brennan et al., 2004). Также, инъекция TNFa увеличила пролифферацию нейрональных прогениторных клеток в субвентрикулярной зоне желудочков (SVZ) (Wu et al., 2000).

Каспаза-3, сигнальный протеолитический белок, регулирующий не только апоптотическую гибель клетки, но и длительную NMDA -зависимую потенциацию клетки (ДП). Так как, каспаза-3 расщепляет калпастатин, ингибитора Са2+ -зависимой протеазы, калпаина, необходимого для реализации ДП, то можно предположить, что каспаза- регулирует каскад молекулярных событий для ДП. Кроме того, каспаза-3 активирует Са2+ -зависимую фосфолипазу А, ингибирование которой делает невозможным развитие ДП. Это подтверждается в эксперименте инкубирования срезов гиппокапма с ингибитором активности каспазы-3, Z-DEVD FMK, при котором снижается ДП, вплоть до полного блокирования потенциации. (Кудряшов И.Е. и др., 2003) О не-апоптотической роли каспазы-3 говорят исследования гибернационного цикла сусликов. Активность каспазы-3 в мозге сусликов закономерно изменяется в течение гибернационного цикла. В большинстве исследованных отделов мозга максимальная активность каспазы- наблюдается в период гибернации или при вхождении в спячку. Поскольку не описано апоптотической гибели нейронов в мозге сусликов в период гибернации, предполагается, что каспаза-3 выполняет не-апоптотическую функцию, связанную с пластическими перестройками клеток мозга при гибернации. В частности, показано что интрацеребровентрикулярное введение необратимого ингибитора каспазы-3, Z-DEVD FMK, вызывает ухудшение выработки УРАИ у крыс, не оказывая влияние на рабочую память. (Юрасов В.В., 2007) Кроме влияния на пластические перестройки клеток мозга, каспаза-3 регулирует клеточный цикл, пролиферацию и дифференциацию клеток.

Важное значение в нейрональной пластичности имеет базальный уровень простагландинов (PGs). Синтез простагландинов в организме осуществляется главным образом из арахидоновой кислоты при участии фермента циклооксигеназы (ЦОГ) (D.

Hamish Wright et al., 2001) Концентрация ЦОГ-2 (циклооксигеназа-2) аномально повышается во время развития патологических состояний головного мозга, например инсульта, и обуславливает нейротоксичность. Хотя ингибиторы ЦОГ-2 могут оказывать определённое терапевтическое воздействие при патологии мозга, они также имеют выраженные побочные эффекты со стороны нейрональной пластичности. Простагландины продуцируемые ЦОГ-2 могут встречаться в постсинаптических дендритовых шипиках.

(Kaufmann et al., 1996) Ингибирование ЦОГ ибупрофеном приводит к повреждению гиппокампального LTP. Ингибирование ЦОГ-2 (но не ЦОГ-1) снижает возбудимость постсинаптической мембраны и индукцию LTP в зубчатой фасции гиппокампа. Это, в дальнейшем, нарушает запуск сигнальных механизмов нейрональной пластичности - ERK фосфориляцию и экспрессию c-FOS, и может быть устранено экзогенным введением PGE2 (простогландин Е2) (Chen et al., 2002; Cowley et al., 2008) Эти данные показывают, что базальный уровень PGE2 зависящий от ингибирование ЦОГ-2, но не от ЦОГ- является критичным в осуществлении гиппокампальной нейропластичности.

транскрипционный фактор (NF-kB. ядерный фактор каппа), который участвует в обучении и памяти и индукции LTP.

Участие нейрогенеза в процессах долговременной памяти. CREB-опосредованный путь Каскад памяти начинается с активации синаптических рецепторов, далее включается активация систем вторичных месенжеров и протеинкиназ, фосфолирование белков, экспрессия немедленных ранних генов и наконец, поздних генов, кодирующих структуры белка, которые необходимы для модификации синапсов.

Консолидация долговременной памяти основана на синтезе белков в нейроне и экспрессии генов. В работах многих авторов показано увеличение экспрессии раннего гена c-fos уже через 1,5 часа после напоминания, полученного опыта при обучении животного, в нейронах ряда структур, таких как, базолатеральное ядро миндалины, цингулярная кора. Эти данные свидетельствуют об участии синтеза ДНК в нейронах ряда структур головного мозга в консолидации долговременной памяти. Об участии этих структур в формировании памятного следа свидетельствуют опыты с нуклеозидными аналогами – 3-азидо -3-дезокситимидин (AZT), 5-йодо-2-дезоксиуридин (IdU), 5-бромодезоксиуридин (BrdU), включения которых обнаруживается IdU и BrdU в клетках зубчатой фасции гиппокампа, базолатерального ядра миндалины и цингулярной коры при обучении мышей условному рефлексу на модели выработки УРПИ. При обучении моторного навыка в формировании памяти участвует и дорсальный стриатум. Маркер долговременной памяти – ERK активизируется в мозжечке, передней коре и гиппокампе в течение ранней фазы обучения моторного навыка. Активация ERK пути в более поздние стадии происходит в стриатуме. Этот факт подтверждается, если ввести ингибитор ERK – PD98059 внутристриатально, при этом нарушается формирование памяти в позднюю фазу, но не в раннюю.

В эксперименте на животных на 8 день обучения в роторойде увеличивается экспрессия уровня CamKK2 гена. Кальций/кальмодулиновый каскад приводит к активированию транскрипционного фактора CREB. Этот фактор участвует в формировании долговременной памяти, активируя другой транскрипционный белок c-fos.

Во многих исследованиях было замечено, что cAMP (циклический монофосфат протеинкиназа) – транскрипционный белок и связывающий сигнальный белок (CREB), не только облегчают гиппокампальный нейрогенез, но и позитивно влияет на нейрональную пластичность, облегчая обучение и память. Позже было замечено, что фосфолированный CREB, присутствующий в нейробластах взрослого гиппокампа, регулирует этапы нейрогенеза, включая пролиферацию, дифференциацию и выживание.

Путь нейрогенеза, опосредованный CREB - сигнальным путем, причастен к облегчению обучения и памяти крыс. (Monti B, et al., 2006) Среди генов, связанных с CREB – сигнальным путем особое внимание уделяется регулирующему цитоскелет-связанный гену (Arc). Его экспрессия изменяет обучение задач, связанных с участием гиппокампа, а ингибирование экспрессии приводит к повреждению синаптической пластичности и памяти. Множество работ подтверждают, что активация CREB требует индукции Arc в зубчатой фасции гиппокампа, предполагая, что это потенциальный механизм влияния нейрогенеза на поведенческие проявления. (Ying SW, et al., 2002) Так, например, в тесте fear-conditioning сенсомоторная депривация ведет к нарушению обучения и памяти через ингибирование нейрогенеза. Для того чтобы исследовать молекулярный механизм, лежащий в основе повреждения памяти в тесте fear-conditioning, посчитали количество Arc – позитивных клеток в зубчатой фасции гиппокампа. Найдено, что число активных Arc клеток, так же, как и экспрессия мРNА Arc было уменьшено в зубчатой фасции дорсального гиппокампа в тестируемой группе крыс 25-35 дней жизни, что коррелировало с дефицитом памяти. Таким образом, постулируется гипотеза, что супрессия нейрогенеза вызывает дефицит памяти, ассоциированной с сенсомоторной депривацией, и это может быть связано с CREB – зависимой активацией Arc клеток в зубчатой фасции гиппокампа (Fei Li et al., 2010).

CREB, также активируется сигнальным кальциевым каскадом через митогенактивированный протеинкиназный путь - MAPK/ERK. Значительная роль в индукции LTP отводится NMDA рецепторам, которые являются стимуляторами экспрессии ранних генов и синтеза новых белков, что приводит к синаптической пластичности и долговременной памяти. NMDA - сигнальный путь опосредуется через cAMP/PKA/CREB сигнальные пути. cAMP активирует протеинкиназу А (PKA), что в свою очередь активирует CREB, где кальмодулинкиназа (CaMKII), фосфотидилинозитол-3-киназа (PIК), протеинкиназа A (PKA) вовлекаются в сигнализацию от NMDAрецепторов до MAPK/ERK.

Недавние исследования показывают, что CREB принимает участие в изменение структуры хроматина путем ацетилирования гистонов, которое необходимо в осуществлении консолидации памяти. В опытах ингибирования ферментов гистондеацетилаз (HDAC) бутиратом натрия / валпроатом натрия повышается уровень ацетилироования ядерных гистонов, что переводит хроматин в транскрипцию более активного состояния. Ингибирование HDAC потенцирует консолидацию, но не реконсолидацию памяти. (Daniel P. Stefankoa, et al., 2009) Кроме влияния на память, ингибиторы HDAC уменьшают зону инфаркта у грызунов с моделированным инсультом мозга. Доктор Чуанг совместно с коллегами показал влияние ингибитора HDAC – бутирата натрия, вальпроевой кислоты – на нейрогенез в ишемизированном мозге. Полученные результаты указывают на то, что нейропротекция, вызванная ингибиторами гистоновых деацетилаз, вовлекает BDNFтирозинкиназный путь и может способствовать длительному благоприятному эффекту на выживаемость клеток. Ингибиторы HDAC разрушают ДНК клеток микроглии, индуцируя апоптоз и аутофагию, что способствует уменьшению воспалительных реакций при повреждении мозга (травмы, геморрагический, ишемический инсульты) (Kim HJ et al., 2007; Chen PS et al., 2007). Противовоспалительные защитные эффекты ингибиторов HDAС в экспериментальных моделях ишемического инсульта были связаны с повышенной экспрессией нейропротекторных факторов, включая белок теплового шока 70 (HSP70), антиапоптотических белков (Bcl-2, Bcl-2 extra long (Bcl-xl)), фосфорилированию Akt, уменьшение активности каспазы -3 (Kim HJ et al., 2007).

Ацетилирование гистонов играет важную роль в нейрогенезе (Lee S and Lee SK, 2010). Лечение ингибиторами HDAC снижает нейронную клеточную пролиферацию и способствует дифференцировке нейронов (Hao Y, 2004 ; Umka J, 2010). С одной стороны, из-за снижения пролиферации, ингибиторы HDAC могут привести к сокращению нейрогенеза, несмотря на потенциальную активность этих соединений способствовать дифференциации нейронов. С другой стороны, дефицит HDAC2 (фермент гистоновая деацетилаза) приводит к клеточным дефектам и к дефектам нейронной дифференциации ацетилированием гистонов / деацетилированием играет важную роль в правильной активации и / или инактивации нейрогенной программы.

Включение синтеза новых белков может осуществляться путем фосфорилирования или дефосфорилирования белков хроматина, РНК-полимеразы или рибосомы. Значение синтеза белков для протекающих процессов консолидации и формирования долговременной памяти общепризнано. Доказательством этого служит то, что эти процессы нарушаются ингибиторами белкового синтеза, и в период следующим за обучением, наблюдается интенсификация процессов, связанных с синтезом белков.

Так, например, ингибитор синтеза белка, анизомицин вызывает апоптоз клетки через активацию митоген активированной киназы (МАРК). МАРК преобразует внеклеточные сигналы от тирозинкиназных рецепторов и гуанин нуклеотид-связанных регуляторных белков (G-белки) рецепторов в цитоплазматические и ядерные эффекты.

Активирование МАРК запускает три связанных между собой сигнальных пути:

внеклеточная сигнал- регулируемая киназа (ЕRK), c-Jun терминальная киназа (JNK) и p киназа. ERK-сигнальный каскад регулирует клеточное развитие, выживание и пластичность, тогда как p38 и JNK, активированные анизомицином, отвечают за клеточный стресс, промотируя гибель клетки. Тем не менее, роль этих киназ варьируются в зависимости от типа клеток и условий культивирования и состояния дифференцировки.

Например, активация JNK в дифференцированных клетках приводит к апоптозу, тогда как в недеференцированных клетках это приводит к дифференцировке без каких–либо негативных влияний на жизнеспособность клеток. В отношении р38 исследования показывают, что ингибирование сигнализации р38 может вызвать как летальные, так и протективные эффекты. Xia и соавт. сообщают, что существует баланс между ERK и р38, который определяет, выживет или погибнет клетка (Xia et al., 1995). Lopez-Mascaraque и соавт. сообщили, что анизомицин препятствует апоптозу в культуре клеток коры в дозах вызывающих амнезию у крыс (Lopez-Mascaraque & Price, 1997). Остается неясным как необходимая для нейрональной пластичности активация ERK сигнального пути может коррелировать с анизомицином, особенно в условиях существующего баланса ERK/р сигнальных путей. Однако можно предположить, что апоптоз не является ключевым при амнезии, вызванной ингибиторами синтеза белков и возможно эффекты ингибиторов синтеза белка в культуре клеток ничего общего не имеют с реальным воздействием на мозг.

Нейрональная пластичность, роль дендритных шипиков Синаптическая пластичность – фундаментальное свойство нервных систем и является существенной для выживания. Обучение или искусственные формы синаптической пластичности, известные как долговременное потенцирование (long-term potentiation – ДП), приводят к морфологическим изменениям дендритных шипиков (dendritic spines) в возбуждающих синапсах. Такие изменения в морфологии шипиков могут изменять постсинаптические реакции на внеклеточную стимуляцию, такие как приток кальция и хранение кальция, изменения в синаптической трансмиссии и индукции локального белкового синтеза. Считают, что эти клеточные события вносят определенный вклад в изменения синаптической эффективности, лежащие в основе обучения.

Согласно современной концепции, дендритный шипик представляет высоко упорядоченную структуру и имеет микродоменную организацию. Структура шипика представляет собой определенную горизонтальную и вертикальную организацию на всех уровнях – мембранном (синаптическая, перисинаптическая и экстрасинаптические зоны), подмембранном (цитоплазматические участки рецепторов и подмембранные белки, образующие зону постсинаптического уплотнения (ПСУ)) и цитоплазматическом уровне (сеть актиновых филаментов, наличие внутриклеточных депо рецепторов и других белков) (Calabrese B., 2006). Размером и стабильностью ПСУ управляют скэфолдные белки, такие как, PSD-95, GKAP/SAPAP, SAP97 и т.д. Эти протеины собирают и удерживают ПСУ, образуя ортогональную решетку из вертикальных и горизонтальных филаментов, обеспечивающих закрепление глутаматных рецепторов в активной зоне шипика.

Архитектура шипиков и, следовательно, их способность к изменению формы, зависит от специализации подлежащей структуры цитоскелетных филаментов. Показано, что ДП индуцирует изменения в полимеризации актина, локализованного в шипиках.

Известно, что подавление полимеризации актина супрессирует ДП. Так, например, недавно Fukazawa с соавторами показали, что ингибирование полимеризации актина латрункулином-A, нарушающим реорганизацию актина, купирует позднюю фазу ДП in vivo (Fukazawa et al., 2003). Глутамат участвует в инициации актин-зависимой подвижности шипика, а также в процессах, ведущих к стабильности шипиков. Доказано, что AMPA (-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole propionic acid) рецепторы также участвуют в актин-зависимой стабилизации шипиков. Увеличение AMPA рецепторов в области синапса (наблюдаемое после стимулирования, ведущего к долгосрочной пластичности) может вносить определенный вклад в стабилизацию морфологии дендритных шипиков.

Недавние исследования показали, что Rho GTPase путь играет центральную роль в формировании памяти и синаптической пластичности. Молекулы адгезии также модулируют морфологию шипиков посредством регуляции актинового цитоскелета.

Такие структурные изменения опосредуются и стабилизируются Rho GTPases и актиновым цитоскелетом. Полагают, что изменения в морфологии синапсов и стабилизация таких изменений участвуют в консолидации и персистировании памяти.

(Raphael Lamprecht, 2004).

Дендритное дерево нейронов гиппокампа и зубчатой фасции обычно плотно усеяно шипиками; исключение могут составлять безшипиковые дендриты интернейронов (Buckmaster P.S., 2002; Lubke J., Frotscher 1998). Дендритные шипики образуют постсинаптические точки контакта для большинства возбудительных синапсов. Регуляция морфологии шипиковой сети осуществляется белками, регулирующими длину нитей Fактина, главными из которых являются профилин, кофилин, дребрин (Ivanov A., 2009).

Профилин – белок, регулирующий полимеризацию основного цитоскелетного элемента Fактина, распределяется в зависимости от синаптической активности и в зависимости от подвижности шипиков.

Активирование глутаматом в культуре клеток гиппокампа постсинаптических Nmethyl-D-aspartate (NMDA) рецепторов приводит к накоплению профилина в дендритных шипиках, которое блокировалось, если клетки обрабатывали антагонистами NMDA рецепторов. Электрическая стимуляция нейронов также может вести к накоплению профилина в шипиках. Однако эффективными оказались лишь определенные паттерны электрической активности. Интересно то, что они оказались теми же паттернами, которые вызывают долгосрочные изменения в синаптической эффективности (synaptic efficacy).

Стабилизация шипиков зависит от перераспределения профилина. Если заблокировать накопление профилина в шипиках, то меняется их форма, вместо грибовидной на неправильно-продолговатую. Эти опыты дают возможность моделировать стабилизацию шипиков. В работе Рогачевского В.Ю. из института биофизики РАН продемонстрировано, что в поздней фазе ДП, через 6 ч после индукции путем тетанической стимуляции перфорантного пути гиппокампа, в среднем молекулярном слое зубчатой фасции не выявляется изменения плотности синапсов (количества синапсов в 100мкмЗ ткани), но изменяется их соотношение и структура. Значительно, с 62% до 75% увеличивается доля синапсов на тонких шипиках, при этом доля стволовых синапсов уменьшается с 9% до 5%, а доля синапсов на пенковых шипиках уменьшается с 17% до 9%. Доля самых крупных, грибовидных шипиков, не меняется (12%). Существенно увеличиваются объемы шипиков (грибовидных на 75%, тонких на 95%), а также объемы постсинаптического уплотнения (ПСУ) у грибовидных на 62%, у тонких на 84%.

Совокупность выявленных ультраструкгурных изменений позволяет говорить о наличии корреляции между поддержанием повышенной эффективности синаптической передачи и увеличением размеров структур, ответственных за ее осуществление. По всей вероятности, именно увеличение размеров постсинаптического уплотнения, соответственно и содержания в них глутаматных рецепторов, обеспечивает высокую эффективность синаптической передачи в поздней фазе ДП в системе перфорантный путь - гранулярнные нейроны зубчатой фасции (Рогачевский В.Ю. 2007). Кроме того, сохранение высокой эффективности синаптической передачи в поздней фазе ДП in vivo не связано с увеличением общего числа синапсов, но сопровождается изменением соотношений их типов, прежде всего увеличением доли синапсов на тонких дендритовых шипиках. Однако синапс, как правило, представлен как минимум еще двумя компонентами, пресинаптическим аксоном и глиальным окружением. Ранее было убедительно показано наличие синапсов между глиальными клетками и нейронами и долговременная потенциация глиальных клеток (Ge et al., 2006), и их участие в гетеросинаптической депрессии в СА1 области гиппокампа (Zhang et al., 2003).

Пресинаптические механизмы потенциации исследованы также главным образом в ранней фазе ДП. Поэтому нельзя исключать, что все три компонента синапса вносят равноценный вклад в модуляцию эффективности синаптической передачи, и это открывает широкие горизонты для дальнейших исследований.

Синаптогенез. Роль AMPA рецепторов в ДП Во время обучения моторных задач индуцируется синаптогенез. Синаптогенез происходит в пирамидных нейронах после обучения навыку, но не в момент его приобретения. В дендритах наблюдается увеличение mRNA МАР2 (мРНК microtubuleassociated protein 2), маркера, ответственного за разветвление дендритов, а также увеличение экспрессии синаптофисина (SYN), маркера синаптогенеза и GAP-43 белка, ответственного за аксональный рост. Большая часть нейробиологических исследований посвящена анализу процессов, происходящих при обучении и запоминании в синапсах.

Одной из наиболее охарактеризованных форм синаптической пластичности является гипокампальная долговременная потенциация (ДП).

Начальным событием в фазе ДП является индуцируемый внешним сигналом вход ионов Са2+. Ответ постсинаптического нейрона на высокочастотную стимуляцию высокочастотная стимуляция инициирует выброс нейромедиатора из пресинаптической терминали. В мембранном компартменте взаимодействие нейромедиатора с ионотронными АМРА рецепторами приводит к входу ионов натрия, деполяризации синаптической мембраны, что в свою очередь приводит к активации NMDA рецепторов (N-метил-D-аспарагин чувствительные рецепторы) и входу ионов кальция в клетку.

Входящий кальций в цитоплазматическом компартменте запускает каскады регуляторных событий, обеспечивающих перемещение AMPA рецепторов (2-амино-3-гидрокси-5метилизоксазол-4- пропион чувствительные рецепторы) и сопутствующих белков в активную зону синапса. Активация метаботропных рецепторов инициирует ремоделирование отдельных микрофиламентов и сети актинового цитоскелета.

В синапсах пирамидных нейронов поля СА1 гиппокампа возбуждающий нейромедиатор глютамат, взаимодействует с метаботропными и ионотропными рецепторами. Два типа ионотропных рецепторов – AMPA и NMDA имеют разное физиологическое значение. AMPA являются в некотором смысле "рабочими" рецепторами синапса, ответственными за передачу сигнала. Открытие каналов этих рецепторов происходит при любых потенциалах постсинаптической мембраны и они проницаемы преимущественно для ионов Na+. Каналы NMDA являются селективными Ca2+-каналами;

их открытие происходит только при деполяризации постсинаптической мембраны; при потенциалах, близких к потенциалу покоя, NMDA-каналы заблокированы ионами Mg2+ внеклеточной среды.

Число разных типов рецепторов в активной зоне синапса различается. АМРА рецепторы – в диапазоне 5-200. Число NMDA рецепторов менее вариабельно (1–5) (Racca C., Stephenson F.A., 2000). Высокочастотная стимуляция инициирует быстрое (30–60 сек) встраивание в мембрану из депо глутаматных рецепторов при участии транспортных белков (миозины 5 и 6). На этом этапе важна сложившаяся организация цитоскелета и его стабильность (Krucker T., 2000). Итогом перемещения эндосом к мембране является встраивание дополнительных рецепторов, что приводит к увеличению синаптической эффективности, площади активной зоны и объема шипика (за счет мембран встраивающихся эндосом).

Активация метаботропных AMPA инициирует ремоделирование актинового цитоскелета. В настоящее время на роль главных регуляторов сигнальных путей от рецепторов мембраны к цитоскелету выдвигаются белки семейства малых GTPase. В ходе ранней фазы ДП запускается два независимых регуляторных пути, связанных с работой малых GTPase. Один из них способствует процессам полимеризации актина (RhoAROCK-LIMK-Cofilin), второй же путь – стабилизации образуемой цитоархитектуры шипика (Rac1/Cdc42-PAK). Эти сигнальные пути работают параллельно, что обеспечивает не только параллельность регуляторных путей, но и временное разделение процессов, происходящих при активации синапса. Комбинация работы этих путей необходима для полного завершения фазы консолидации ДП.

В первом регуляторном пути происходит активация ROCK (Rho-associated, coiledcoil-containing protein kinase 1), активирующей LIM-киназу. которая фосфорилирует кофилин, переводя его в неактивное состояние и стабилизируя F-актин. Этот каскад сопряжен с работой G-белков (через метаботропные AMPA) и активируется входящим через ионотропные глутаматные рецепторы током ионов кальция (Rex C.S., 2009).

Образование и ветвление новых нитей происходит через активирование Arp2/3 комплекса (Racz B., 2008). Этот процесс также вносит вклад в регуляцию эндоцитоза АМРА, опосредуемую активацией NMDA (Rocca D.L., 2008).

Как было сказано выше, Rho GTPases (Rho) регулирует актин, необходимый для морфогенеза дендритов. Мутации Rho GTPases вызывают различные неврологические нарушения. В рост дендритов вовлекются сигнальные пути RhoА, МАК-2, PI-3-киназа, Jun-киназа, и нейротрофические факторы, BDNF, который регулирует рост кортикальных и гиппокампальных дендритов через TrkB-рецепторы. Нейрональная функция требует нормального регулирования активности чрезмерная активация которого препятствует стабилизации дендритов. Замечено, что у экспериментальных крыс с БА уровень активности Rho чрезмерно высокий. Таким образом, Rho-киназа (ROCK) является потенциальной мишенью для стабилизации синаптогенеза, а ингибиторы ROCK потенциальными терапевтическими агентами. Так, фазудил, ингибитор ROCK уменьшает когнитивный дефицит у старых крыс и у крыс после инсульта, увеличивая экспрессию синаптофисина (SYP), p-LIMK2, кофилин. (Huentelman et al., 2009; Huang et al., 2008) Увеличение уровня кофилина помогает сохранить F-актин, что способствует росту аксонов. Белок SYP играет важную роль в передаче и в высвобождении нейромедиатора глутамата. У пациентов с БА степень повреждения коррелирует с изменениями SYP в гиппокампе и ассоциативной коре. У крыс, которым i.c.v. ввели SZT (стрептозотоцин), модель БА, обнаруживалось значительно меньшее содержание SYP и количество синапсов, что коррелировало с когнитивными нарушениями в тесте Морриса. Но когнитивные нарушения у таких крыс обнаруживались еще до потери синапсов и были обусловлены увеличением синаптической щели, детектируемой иммунохимическим методом, что замедляет передачу сигнала (Y. Hou et al., 2011).

АМРА рецептор - как мишень в процессах памяти и нейропротекции аллостерической модуляции со стороны внеклеточного пространства, что согласуется с представлениями об их роли в быстрой синаптической передаче, которая не должна быть чувствительна к внешнему влиянию. На АМРА рецепторы оказывает положительное моделирующее влияние внеклеточный Zn2+ (Dreixler and Leonard, 1997). При pH среды около 6.0 происходит блокирование АМРА рецепторов (Traynelis SF, et al., 1995), а также AMPA рецепторы тонически блокируются эндоплазматическими полиаминовыми ионами (Bowie D. et al., 1998). Активация нейрональных АМРА рецепторов может быть потенциирована фосфокиназой А, фосфокиназой С, кальций-кальмодулин-киназой II (CAMK II), и другими неспецифическими киназами (Tan SE. et al., 1994; Nakazawa K. et al., 1995).

Основные свойства AMPA- рецептора зависят от того, какие субъединицы его формируют. Если он состоит из пар, представленных субъединицами первого, третьего или четвертого типов, тогда этот открытый канал будет проницаем для ионов кальция.

Если же в этот тетрамер входит пара субъединиц второго типа, то канал становится непроницаемым для кальция. Кальций-проницаемая форма способна обеспечить дополнительный, не опосредованный предшествующей деполяризацией нейрона вход кальция во время его активации. Соотношение той или иной формы AMPA рецепторов меняется достаточно оперативно и зависит от длительности стимуляции синаптического входа. При длительной стимуляции синаптического входа убывает количество AMPAрецепторов, лишенных субъединиц второго типа, и открытый канал перестает проводить кальций. Таким образом, перестройка субъединичного состава рецептора может лежать в основе одной из форм синаптической пластичности. Помимо своего постсинаптического действия, AMPA рецепторы обладают и пресинаптическим. Пресинаптические АМРА рецепторы модулируют синаптическую передачу, уменьшая выброс тормозных медиаторов во взрослом мозжечке. Далее, глутамат при воздействии на AMPA рецепторы в процессе синаптогенеза, регулирует формирование синапса (Chang and De Camilli, 2001).

Не обладая ни агонистическими, ни антагонистическими свойствами, ампакины модулируют константы связывания рецептора с лигандом, открытия канала и десенситизации (Arai et al., 1996).

Среди ампакинов выделяют группы пирролидонов - анироцетам (Ito et al., 1990), бензотиодиазидов (циклотиазид, IDRA21), бензоксазинов (СХ–614 [он же Lid–37 и BDP– 37]) и бензоилпиперидинов (BDP, BDP5, BDP12 [он же СХ–516] и BDP–17, [он же CХ– 546 и GR–87] (Arai et al., 1996, 2000). В настоящее время последнюю группу разделяют на две подгруппы по их эффективности и относительному влиянию на различные параметры синаптических ответов (Arai et al., 2002). Так, CХ–546 десятикратно замедляет деактивацию excised-patch токов в ответ на короткие (1мсек) импульсы глутамата, значительно увеличивает длительность синаптических ответов, а также вызывает двукратное увеличение аффинности радиоактивных лигандов АМРА рецепторов. В то время, как СХ–516 более эффективен в увеличении амплитуды синаптических ответов.

Таким образом, СХ–516 преимущественно усиливает открытие каналов, а СХ– замедляет их закрытие. Предполагается, что вещества этих подгрупп взаимодействуют с различными сайтами АМРА рецепторов (Arai et al., 2002).

Связавшись с рецептором, бензамиды увеличивают среднее время пребывания канала в открытом состоянии, таким образом, увеличивая ток, опосредуемый постсинаптическими АМРА рецепторами, при неизменном уровне пресинаптической стимуляции/высвобождения глутамата. Поскольку активация NMDA рецепторов зависит от степени деполяризации постсинапса, опосредуемой АМРА рецепторами, облегчение синаптических ответов через АМРА рецепторы эффективно снижает пороговый уровень пресинаптической стимуляции, требуемой для активации NMDA рецепторов. Одним из последствий этого является снижение количества афферентной стимуляции, необходимой для индукции максимального уровня долговременной потенциации (ДП) в гиппокампе.

Было продемонстрировано, что ампакины улучшают воспроизведение приобретенного навыка в нескольких задачах с обучением, включая многолучевой радиальный лабиринт (Grander et al., 1993; Staubli et al., 1994, 1996), водный лабиринт Морриса (Staubli et al., 1994) и обонятельную дискриминацию (olfactory delayed math to sample) (Staubli et al., 1994, 1996). В настоящее время ведутся активные исследования влияния ампакинов на различные компоненты процессов обучения и памяти как на поведенческом, так на электрофизиологическом и молекулярном уровнях. Особое внимание уделяется возможной коррекции нарушений кратковременной памяти при помощи модуляторов функций АМРА рецепторов (Hampson et al., 1998).

Механизм действия и эффективность LY404187, как аллостерического модулятора АМРА-рецепторов, позволяет полагать, что это соединение имеет перспективы использования в качестве средства терапии при шизофрении, так как усиливает синаптическую активность (LTP), уменьшенную при этом заболевании. Кроме того, в поведенческих экспериментах LY404187 демонстрирует антидепрессантную активность (Quirk JC, et al., 2002). Дальнейшее исследование этого соединения на моделях развития нейротоксичности у грызунов, индуцированное введением 6-OHDA или МРТР в черную субстанцию выявило его нейропротективный эффект. Обнаруженный нейротрофический механизм и способность увеличивать экспрессию GAP-43 в стриатуме позволило авторам рекомендовать его как противопаркинсонический препарат (O'Neill MJ, 2004).

2,3-бензодиазипины - AMPA антагонисты, такие как GYKI-52466 (Tarnawa, I., Vizi, E.S., 1998; Donevan and Rogawski, 1993), GYKI-53405, GYKI-53655 (Bleakman, D., et al., 1996) и Талампанел (Erdo, F., et al., 2005), EGIS-8332 (Vegh et al., 2007), блокируя АМРА рецепторы, проявляют нейропротективные свойства. Фталазиновые дериваты, (такие как SYM 2206; Pelletier et al., 1996), aryl-quinazoline-4-one дериваты (такие как CP- 465,022;

Menniti et al., 2003) и phenyl-1,2,4-oxadiazolyl- phenoxy-ethylamine дериваты (BIIR 561 CL;

Weiser et al., 1999) блокируют ионный канал AMPA рецепторов. Талампанел способствует выживанию нейронов на моделях церебральной ишемии мозга, вызванной окклюзией сонных артерий, фототрамбозом, уменьшая количество TUNEL-позитивных клеток (апоптотический фактор) в зоне пенумбры, таким образом, уменьшая зону инфаркта. Другие антагонисты GYKI-52466, GYKI-53405, GYKI-53655, также, дозозависимо уменьшают зону инфаркта на моделях фокальной и глобальной церебральной ишемии, уменьшая потерю нейронов коры и гиппокампа. А также проявляют нейропротективные свойства на моделях травмы головного мозга, рассеянного склероза, уменьшают леводопа-индуцированную дискинезию. Клинические испытания талампанела на пациентах с эпилепсией были прекращены на 3 стадии. Сейчас он успешно испытывается на пациентах с глиомой и глиобластомой, а также на пациентах с болезнью Паркинсона. Неконкурентные антагонисты АМРА рецепторов, называемые негативными аллостерическими модуляторами, не оказывают эффекта, а иногда и ухудшают формирование долговременной памяти на различных моделях обучения. (Gabor Szenasi et al.,, 2008) Тогда, как позитивные аллостерические модуляторы АМРА рецепторов, напротив, облегчают формирование памяти на различных когнитивных моделях. (Derkach, V.A., et al., 2007) Кроме того, эти вещества могут выступать как нейропротективные агенты на моделях нейродегенерации. Например, аллостерический модулятор AMPA рецепторов - S18986 защищает дофаминергические нейроны черной нейротрофического фактора BDNF. Известно множество работ с исследованием других модуляторов АМРА рецепторов — LY404187, LY503430, CX614 подтверждающих их нейропротективные свойства на модели MPTP-индуцированной токсичности посредством повышения экспрессии мRNA BDNF. (H. Jourdi a, et al., 2009) провоспалительных цитокинов, которые изменяют экспрессию и морфологию микроглии, что может нарушить долговременную потенциацию. Хроническое применение алостерического модулятора AMPA рецепторов - S18986 уменьшает уровень пространственной памяти в Y-образном лабиринте связывают с увеличением высвобождения ацетилхолина в гиппокампе, допамин-позитивной модуляции, увеличением экспрессии BDNF (Erik B. Bloss et al., 2008). Таким образом, потенциация AMPA рецепторов по средством фосфорилирования GluR-1 модулирует экспрессию нейротрофина BDNF, что обуславливает нейропротективные и нейропластические эффекты ампакинов, такие как обучение и память. По мнению других авторов, модуляция экспрессии BDNF ампакином S18986 происходит за счет активации ERK и Akt пути. Так как, нейропротективные эффекты S18986 на модели иботенатной токсичности блокируются, если ввести ингибитор ERK пути — PD98059, также как и эффекты самого BDNF. Введение PD98059 (ингибитор ERK пути) в отсутствии S18986 и BDNF не усиливает повреждение нейронов, вызванное иботенатом. По другим данным ампакин CX614 модулирует BDNF через активацию TrkB рецепторов, где при введении ингибитора TrkB рецепторов - K252a исчезает нейропротективный эффект CX614 на модели МРТР- индуцированной гибели нейронов.

Ампакины переводят «слабую» память в устойчивую консолидацию и потенцирует реконсолидацию памяти, например, димебон, препарат, сочетающий позитивную модуляцию АМРА рецепторов и антагонизм NMDA рецепторов. «Слабое» обучение поддерживается одним периодом синтеза белка и угасает через 24 - 48 часов. При «сильном» обучении формирование памяти поддерживается двумя периодами синтеза белка. Таким образом, ампакины усиливают и в начале ее консолидации и в начале второго периода синтеза белка. Ампакин RU32 (дериват димебона), введенный перед «слабым» обучением, индуцировал экспрессию гена c-fos в базолатеральном ядре миндалины и в центральном ядре миндалины. В работе картирования топографии c-fos в мозге мышей различных экспериментальных групп на модели нарушения и последующего восстановления памяти в задаче выработки условного рефлекса показано, что экспрессия c-fos в поле СА3 гиппокампа не связана с процессами восстановления памяти, запущенных процедурой запоминанием у амнестических животных, и, вероятно, отражает процесс извлечения нормально сохранённой памяти. Так как, в поле СА3 гиппокампа и в прелимбической коре мышей максимальная индукция c-fos обнаружена при реактивации нормальной памяти. В поле СА1 и зубчатой фасции гиппокампа мышей обнаружено достоверно большее количество c-fos-позитивных нейронов в группе восстановления предварительно нарушенной памяти. Таким образом, экспрессия трофического фактора c-fos в СА1 и зубчатой фасции гиппокампа, по-видимому, связана с процессами восстановления памяти, которые были запущены реинтегрирующим стимулом. В базолатеральном ядре миндалины и цингулярной коре высокий уровень экспрессии c-fos наблюдается у групп, получивших напоминание, независимо от их предварительного опыта.

В НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН, создан ноотропный препарат нооглютил - N-5-оксиникотиноил-L-глутаминовая кислота позитивный модулятор АМРА рецепторов нооглютил, который обладает выраженным ноотропным действием и значительно превосходит по активности рацетамы. В эксперименте на животных нооглютил в диапазоне доз 10 – 100 мг/кг оказывает выраженное антиамнестическое действие в условиях амнезий вызванных максимальным электрошоком, скополамином, депривацией парадоксальной фазы сна. Он ускоряет процесс обучения различным условно - рефлекторным навыкам, улучшает фиксацию, консолидацию и воспроизведение, памятного следа. Нооглютил обладает способностью восстанавливать нарушенные при различных состояниях функции ЦНС, улучшая память и неврологические показатели у старых крыс, у животных реанимированных после клинической смерти. Нооглютил оказывает выраженное противогипоксическое действие, обладает способностью значительно уменьшать выраженность метаболических изменений в мозге и компонентах крови в острый и посттравматический период черепно-мозговой травмы. Препарат оказывает выраженное нейропротективное действие при ишемии мозга, улучшает состояние микроциркуляторного русла коры головного мозга при ишемии, вызывает снижение агрегации эритроцитов, улучшает снабжение мозговой ткани кислородом (Смирнов Л.Д., 1987; Воронина Т.А., 1990; Воронина Т.А., 1991).

Нооглютил обладает способностью корректировать нарушения функций ЦНС, вызванные пренатальной алкоголизацией у крыс. Воздействие этанола (5 г/кг в сутки, перорально) на крыс в течение всей беременности вызывало нарушение обучаемости и памяти у их взрослого потомства, увеличение медленноволновых диапазонов спектров мощности ЭЭГ. У 20 - дневных крысят в коре возрастала концентрация серотонина и скорость его кругооборота, а в гиппокампе снижалось содержание дофамина. Нооглютил при введении в раннем постнатальном периоде (с 8-го по 20-й день) в дозе 25 мг/кг снижал выраженность нарушений мнестических процессов у алкоголизированного потомства, нормализовал обучаемость алкоголизированных крыс. Нормализовал спектр мощности биоэлектрической активности этих животных, и оборот серотонина в коре и дофамина в гиппокампе также возвращались к норме (Трофимов С.С., 1992). Нооглютил обладал способностью предотвращать нарушения обучаемости и памяти, двигательную внутриутробного развития 2-х часовой гипобарической гипоксии. Нооглютил восстанавливал также нормальный рост крысят в первые месяцы жизни (Алиев М.А., взаимодействием с глутаматергической системой на уровне модуляции АМРА рецепторов (Комиссаров, 1991).

Пути нейропротекции при патологических состояниях мозга В условиях нормы нейробласты, генерируемые SVZ, мигрируют ростральным миграционным потоком в обонятельные луковица, где они продолжают мигрировать радиально до своих конечных пунктов, затем далее дифференцируются в ГАМКергические нейроны (Ghashghaei et al., 2007; Khodosevich et al., 2009). Нейрогенез в SGZ дает в основном глутаматергические гранулярные клетки в зубчатой фасции (Abrous et al., 2005).

Ишемия мозга провоцирует нейрогенез в обеих зонах, а также миграцию нейробластов в кору и стриатум. В SVZ боковых желудочков в первые сутки после ишемического инсульта (окклюзия средней мозговой артерии) детектируются новые BrdU контрлатеральном полушарии. В зубчатой фасции гиппокампа обнаруживается иммунохимическим методом значительное увеличение BrdU-позитивных клеток уже на день после ишемии мозга (Luo et al., 2005). Новые нейробласты/нейроны мигрируют в кору, в зону повреждения, и определяются уже на 35 день после ишемии мозга, причем новые клетки не экспрессируют маркеры апоптоза, как и все SVZ-производные новые нейроны, в отличие от нейронов SGZ. В коре нейробласты дифференцируются в зрелые дифференцируются в ГАМК-ергические нейроны и калретинин-ГАМК-позитивные интернейроны. Однако, в стриатуме до 80% пост-ишемических новых нейронов умирают в период от 2 до 6 недель после инсульта. Эта гибель, как полагают авторы исследования, связана с активацией каспазы-3 (маркер апоптоза), так как ингибирование каспазы- увеличивает число выживших нейронов в стриатуме (Thored et al., 2007). Как отмечалось выше, SVZ-производные новые нейроны не экспрессируют маркеры апоптоза, но в стриатуме детектировано только несколько нейробластов производных SVZ боковых желудочков (Maria Kreuzberg et al., 2010). Таким образом, большинство постишемических новых нейронов, погибающих в течение первых недель жизни, являются производными SGV. Подтверждением этому служит тот факт, что 100 % клеток SGZ взрослого мозга экспрессируют маркер апоптоза каспазу-3. 90 % этих апоптотических клеток локализуются строго в SGZ гиппокампа. Апоптотические клетки редко встречаются в хилусе, в гранулярном или молекулярных слоях. (Biebl et al., 2000) Большинство новорожденных клеток из SGZ зоны подвергаются апоптозу в течение 1- новорожденных клеток из нейрогенных ниш, как полагают, являются первые дни и 3-я неделя жизни клетки. NMDA рецепторы экспрессируются недозрелыми клетками лишь тогда, когда сформируется синаптический вход, это совпадает с 3-й неделей созревания клетки (Amanda Sierra et al., 2010).

Фармакологическая коррекция ишемия-индуцированного нейрогенеза в зубчатой фасции гиппокампа (SGZ) опосредована экспрессией факторов роста BDNF, FGF, NGF и протекает через активацию фосфотидил инозитод 3-киназы (PI3K)/Akt и внеклеточной сигнально-регулирующей киназы ERK- путей (Shioda N., 2008). Также, PI3K/Akt путь промотирует нейропротекцию через фосфориляцию антиапоптотических белков, таких как GSK3, Bcl-2/Bcl-xL, каспазы-9. Антиапоптотическая молекула Bcl-2 уменьшает иммунореактивность каспазы-3, что уменьшает зону пенумбры в коре при ишемическом инсульте (MCAO) (Liu C et al., 2010). Таким образом, модуляция нейрогенеза в SVZ боковых желудочков является перспективным подходом терапии инсультов, направленным на восстановление погибших нейронов. Ингибиторы PI-3K пути вортманнин, и ингибитор митоген-активированной протеинкиназы / LY294002, внеклеточной сигнально-регулирующей киназы МАРК/ERK - PD98059 подавляют синтез ДНК в прогениторных клетках и блокируют аутофогию, необходимую для процессов выживания в экстремальных условиях (Li et al., 2001). Нейрогенез в гиппокампе, кроме нейропротективной функции, также требуется для решения гиппокамп-зависимых задач, таких как навигация в тесте Мориса.

(PI-3K)/Akt и ERK пути также участвуют в секреции металопротеаз ММР-2 и ММР-9, которые усиливают миграцию нейрональных прогениторных клеток. Тогда как, ингибиторы ММР ослабляют миграцию нейробластов (Wang et al., 2006). Матриксная металлопротеаза-9 участвует в протеолизе молекул А (Nalivaeva et al., 2008). Была выявлена связь уровней MMP-9 в крови с ростом ишемического очага у пациентов с ишемическим инсультом (Castellanos M et al., 2007). Suehiro и соовт. обнаружили повышенный уровень MMP-9 в плазме пациентов с ЧМТ, коррелировавший с концентрацией интерлейкина-6 (IL-6), при этом в яремной вене концентрация MMP- была выше, чем в артериальной крови, что указывает на церебральное происхождение фермента в крови при ЧМТ (Suehiro E. et al., 2004).

Изменение внеклеточной концентрации глутамата является исходным моментом патогенеза церебральной ишемии. Помимо глутамата, в начальный период церебральной ишемии важную роль играет ГАМК. Исследования соотношения глутамат/ГАМК в зоне инфаркта, подвергнутого фокальной ишемии показало, что это соотношение в первые минут в пользу глутамата оказывается триггерным механизмом повреждения только в зоне инфаркта (Wang et al., 2001). В исследовании Bogaert и соавторы (2000) изучили релизинг глутамата, ГАМК и дофамина в стриатуме мозга крыс в условиях кратковременной ишемии, вызванной введением эндотелина-1 (вазоконстрикторный пептид), где уровень этих медиаторов увеличился в сотни раз. Авторы сделали вывод, что резкое увеличение внеклеточного дофамина является, в большей мере, чем релизинг глутамата, триггерным фактором в развитии каскадных явлений, ведущих к неврологическому дефициту.

Как чрезмерно низкий уровень провоспалительных цитокинов в физиологических условиях, так и чрезмерно высокий в условиях патологии у животных (из-за чрезмерной активации микроглии), например, после введение LPS, A25-35, нарушают процессы обучения и памяти. В условиях нейровоспаления (инсульт, ЧМТ, введение LPS, A25-35) высокий уровень провоспалительных цитокинов, таких как IL-1, IL-6, TNFa, вызывает угнетение нейрогенеза, что коррелирует с большей зоной некроза и тяжестью когнитивных расстройств. В эксперименте на животных на модели нейровоспаления, вызванного LPS (липополисахаридом), гиппокампальное введение трансформирующего фактора роста (TGFb1) восстанавливает нарушенный нейрогенез и устраняет дефицит обучения и памяти, возникший после введения нейротоксина. (Mariana Graciarena et al., 2010) Известно, что ишемические поражения мозга сопровождаются развитием воспалительных реакций в поврежденной ткани и изменениями микроглии и активности лейкоцитов. В клинике была установлена увеличенная продукция цитокинов типа IL-1 и IL-6, способствующих инфильтрации лейкоцитов в первые часы после возникновения инсульта, уровень которых коррелировал с тяжестью поражения (Tasci et al., 2003). Эти данные подтверждаются в эксперименте на модели окклюзионной ишемии мозга мышей, где введение антагониста рецепторов IL-1 уменьшило зону инфаркта (Boutin et al., 2001).

Кроме перечисленного, в ишемизированных участках мозга экспрессируется нуклеарный фактор транскрипции (NF-kB), как правило, в нейронах «предназначенных» к гибели.

Активация NF-kB может быть спровоцирована многими факторами, причастными к патогенезу ишемии — глутаматом, IL-1, TNF-alfa. Считается, что активация этого фактора перманентной ишемией или низкими дозами каината (сублетальная ишемия) вырабатывает толерантность мозга к повреждению, делая мозг более устойчивым к сильной ишемии или судорожной активности (Blondeau et al., 2001). Транслокация NF-kB в ядро сопряжено с отделением его от ингибирующего белка kappaB-alfa, содержание которого заметно снижено в ишемизированной зоне мозга, и, напротив, повышено в пенумбральной зоне.

Эндогенный противовоспалительный цитокин fractalkine (FKN), действуя через CX3CR1 рецепторы, уменьшает активацию микроглии, регулируя уровень IL-1. Низкий уровень FKN белка коррелирует с когнитивным дефицитом у пациентов с болезью Альцгеймера. (Adam D.Bachstetter, et al., 2011) Таким образом, цитокины реализуют одну из ключевых функций нейровоспаления – репарацию и функциональное восстановление ткани мозга.

Окклюзионная церебральная ишемия вызывает активацию каспазы-3 и апоптотического фактора Bad. Нейропротективные свойства на модели ишемии ростовых факторов, таких как, IGF-1 (инсулиновый фактор роста), VEGF (эндотелиальный фактор роста сосудов), GDNF (фактор роста глии), NGF (фактор роста нервов) осуществляются во многом за счет снижения экспрессий каспазы-1, 3, проапоптотических белков Bax и Bad и активации антиапоптотических белков bcl-xL и bcl-2. Вводимый внутривенно фактор роста фибробластов (bFGF) снижал фрагментацию ДНК и предупреждал подавления экспрессии bcl-2 при ишемии, при этом, его протективное действие выражено, главным образом, в пенумбре. Одновременно с этим, фактор роста фибробластов 2 (FGF2) ингибирует формирование дендритов в гиппокампальных прогениторных клетках, нарушая консолидацию памяти.

Инсулиноподобный ростовой фактор защищает проолигодендробласты от глутаматной эксайтотоксичности, блокируя апоптотический каскад (каспазу-9 и каспазуНа пилокарпиновой модели тонико-клонических судорог в первые 24 часов обнаруживается увеличение BrdU-позитивных клеток. Этим изменениям предшествовала экспрессия NGF, BDNF, HB-EGF, FGF-2, но не экспрессия NT-3. На модели электроконвульсивных судорог выявлена повышенная экспрессия VEGF, bFGF, BDNFв структурах хороидного сплетения.

Антиишемический протективный механизм BDNF осуществляется за счет торможения активности кальцийнейрина и активации сопряженного с нейротрофином белка CREB в гиппокампальных нейронах поля СА1, подверженных апоптозу. BDNF контролирует баланс глутаматергической и ГАМК-ергической систем. В эксперименте на животных установлено, что содержание BDNF в гиппокампе и фронтальной коре ишемизированной стороны мозга было выше в сравнение с контралатеральной областью.

Уже через 6 часов после окклюзии уровень мРНK BDNF повышался на 80% в гранулярной зоне гиппокампа. (Schmidt-Kastner et al., 2001). Внутривенное введение BDNF конъюгированного с моноклональными антителами к трансферриновому белку гематоэнцефалического барьера защищало мозг от ишемического повреждения на модели окклюзии сонной артерии (Pardridge et al., 2002).

Установлено, что возбуждающие стимулы, действующие через Са- и глутаматные NMDA – рецепторы стимулируют преобразование прогениторных клеток в сторону нейрональной дифференцировки и тормозит глиальную. Некоторые авторы связывают этот механизм с организацией физиологической памяти (Deisseroth Singla S. et al., 2004). В культуре прогениторных клеток гиппокампа блокада мю- и дельта-опиоидных рецепторов снижала пролиферацию, но увеличивала нейрогенез прогенеиторных клеток гиппокампа.

Так, налоксон при длительной инкубации в культуре в три раза стимулировал нейрогенез и значительно уменьшал глиогенез. Глиальный нейротрофический фактор (GDNF) приводит к увеличению BrdU-позитивных клеток в зонах гиппокампа и черной субстанции, которые обнаруживали также тирозингидроксилазную метку (Chen, Ai et all., 2005). Инфузия в желудочки мозга мышей реснитчатого нейротрофичского фактора (CNTF) выявила стимуляцию нейрогенеза преимущественно в зубчатой извилине гиппокампа, но ограничило дифференцировку астроцитов и олигодендроцитов. В субвентрикулярной зоне эффект был выражен минимально.

метилзоксиметанол ацетатом (МАМ), ведет к повреждению обучения в гиппокампопосредованных задачах. (Shors et al., 2001). Гепарин связанный эпидермальный фактор роста HB-EGF улучшает клеточную пролиферацию в культуре нейрональных клеток мозга мышей через фосфорилирование Akt и ERK пути (Jin et al., 2005). В экспериментах на обезьянах с транзиторной ишемией мозга увеличивается число BrdU-позитивных клеток, экспрессирующих маркеры нейронов в первые 2-96 часов вблизи вновь образующихся кровеносных сосудов зубчатой извилины гиппокампа (кроме слоя СА1).

Ультростуктурный анализ показал, что большинство прогениторных клеток и микроглия возникали из перицитов капилляров и/или адвентицилиальных клеток артериол. Такая структурная близость подразумевает общие регуляторные факторы, среди которых эндотелиальный фактор роста сосудов (VEGF). VEGF, инъецированный в латеральный желудочек мозга в дозе, не вызывающий пролиферацию эндотелия и изменения проницаемости сосудов, усиливал нейрогенез в стенке желудочков мозга, гиппокампе и ольфакторной зоне (Schanzer et all., 2004). С помощью метода направленной доставки ген VEGF вводили в гиппокамп взрослых крыс. Были получено двукратное увеличение нейрогенеза, а также улучшение когнитивных функций животных. В противоположность этому стимулированная экспрессия плацентарного ростового фактора (PIGF) обнаруживала обратные эффекты: нейрогенез и физиологические показатели обучения резко снижались. Интрацеребральная инъекция VEGF на фоне окклюзии церебральной артерии на 90 минут увеличивала выживаемость «молодых» нейронов в зубчатой фасции и субвентрикулярной зоне, а также стимулировала ангиогенез в ишемизированной пенумбре стриатума.

Терапевтические стратегии нейропротекции:

Ингибиторы эксайтотоксичности - антагонисты NMDA и AMPA рецепторов, Ингибиторы воспаления – вещества, блокирующие микроглиальную активацию, уменьшающие высвобождение цитокинов TNF-, IL-1 и IL-6, каспазы-1 и каспазы-3, миноциклин.

Ингибиторы клеточной смерти PARP-1 (изоформа полемиразы ядерного фермента Антиоксиданты. Вещества ингибирующие перекисное окисление липидов мексидол, мелатонин. Антиоксиданты блокируют нуклеарный фактор транскрипциим NF-kB, экспрессирующийся в нейронах “предназначенных” к гибели на модели глобальной ишемии мозга.

Факторы роста - ЭПО (эритропоэтин) осуществляет свои нейропротективные свойства через регулирование процессов воспаления и иммунного ответа, а также, модулируя вазогенетические и проангиогенные эффекты, через взаимодействие с VEGF. Кроме того, ЭПО усиливает нейрогенез в субвентрикулярной зоне после инсульта. VEGF уменьшал размер зоны инфаркта мозга у крыс на модели фокальной ишемии. Фактор позитивно влияет на сохранение новых нейронов в зубчатой извилине и стимулирует ангиогенез в стриатальной зоне ишемической пенумбры.

Нейротрофические факторы: BDNF, IGF, NGF, HGF (снижает уровень каспазы-3, увеличивает экспрессии антиапоптотических белков bcl, уменьшает уровень TNFalpha), Нейротрофический фактор CDNF снижает уровень каспазы-3, пролонгирует активность фосфолированного Akt белка.

Антагонисты метаботропных рецепторов mGluR1 и mGluR5. Применение антагонистов этих рецепторов защищает клетки переднего мозга от гибели в условиях кратковременной ишемии.

Агонисты серотониновых 1 (А) рецепторов снижают релизинг глутамата, вызываемый окклюзией мозговых сосудов.

Антагонисты ангиотензиновых АТ (1) рецепторов. У трансгенных мышей с выключенными аденозиновыми АТ (1) рецепторами ишемизация мозга была менее выражена на модели окклюзии среднемозговой артерии.

Антагонисты ноцицептин/орфариновых рецепторов. При глобальной ишемии, обусловленной повышением внутричерепного давления с последующей реперфузией, отмечалось увеличение уровня опиоидного пептида орфарина с 67 до 266 пкг/мл. Блокада этих рецепторов снижает релизинг глутамата.

Полипептид РАСАР, активирует аденилатциклазу гипофиза. При ишемии на модели окклюзии сонных артерий имуннореактивность РАСАР оказалась существенно сниженной в пирамидных клетках поля СА1 и в клетках Пуркинье.

Тахикининовые пептиды (вещество Р, нейрокинина В и группа рецепторов NK1, NK2, NK3). Окклюзия среднемозговой артерии приводит к увеличению вещества Р и активности рецептора NK1 в популяции глутаматергических пирамидных клеток.

Индукция активности этих рецепторов может влиять на отек тканей и диапедез лейкоцитов.

Терапевтические стратегии нейропластичности:

Ингибиторование MEF2 (транскрипционный фактор роста миоцитов 2) – ингибирование этого фактора стимулирует синаптогенез;

Аллостерическая модуляция AMPA-рецепторов замедляет деактивацию или десентизацию АMPA-рецепторов, увеличивает уровень BDNF в мозге;

Активация метаботропных AMPA-рецепторов ведет к ремоделированию актинового цитоскелета;

Активация МАР2 (маркер разветвления дендритов);

Активации экспрессии SYN (маркера синаптогенеза);

Активации экспрессии GAP-43 (маркер аксонального роста);

Ингибирование FGF (фактора роста фибробластов) усиливает формирование дендритов в гиппокампе;

Ингибирование Rho-киназы стабилизирует синаптогенез;

Ингибирование HDAC (гистоновых деацетилаз) переводит хроматин в активное состояние, необходимое для консолидации памяти;

Активация ERK – пути усиливает нейрогенез в прогениторных клетках, что улучшает формирование памяти;

Активаторы PI-3K пути усиливает нейрогенез в прогениторных клетках что улучшает формирование памяти;

Активация экспрессии BDNF улучшают формирование памяти;

Активация TGFb (транскрипционный фактор роста) усиливает нейрогенез и память.

Активация нейротрофического фактора BDNF инициирует комплекс CREBопосредованных сигнальных путей, которые изменяют синаптическую структуру и Заключение Анализ обзора позволяет заключить, что лечение фармакологическими агентами нейродегенеративных расстройств направленное на выживание нейрона и когнитивную стимуляцию не всегда лежит в одном векторе, а иногда и взаимоисключают друг друга.

Например, ингибирование микроглии промотирует выживаемость клеток мозга после ишемии, и опосредованно устраняет когнитивный дефицит. Но, в то же время, уменьшение высвобождения провоспалительных цитокинов, таких как IL-1. IL-6. TNF, ЦОГ2 ведет к нарушению памяти в гиппокампально - опосредованных пространственных задачах. Ингибиторы синтеза белка снижают нейрональную гибель при фокальной и глобальной ишемии и, одновременно, нарушают формирование долговременной памяти.

А антиапоптотические препараты, направленные на уменьшение каспаза-3, одного из основных белков регулирующих апоптотическую гибель клетки, подавляют длительную NMDA - зависимую потенциацию клетки (ДП). Препараты с глутаматергическим механизмом действия также имеют дуальность в проявляемых эффектах. Антагонисты NMDA – рецепторов защищают от ишемия – индуцированной гибели нейронов, но ухудшают формирование памяти, за счет торможения актин зависимого модулирования дендритных шипиков. Но, в тоже время антагонисты NMDA – рецепторов ингибируют высвобождение нейротрофического фактора BDNF, необходимого как для выживания нейрона так, и, для формирования памяти. Еще один общий фактор промотирующий и нейропротективные функции и память, находится в зависимости от глутаматных рецепторов, это нейрогенез. Возбуждающие стимулы, действующие через Са- и глутаматные NMDA – рецепторы стимулируют преобразование прогениторных клеток в сторону нейрональной дифференцировки и тормозит глиальную.

Поскольку активация NMDA рецепторов зависит от степени деполяризации постсинапса, опосредуемой АМРА рецепторами, модуляция АМРА рецепторов эффективно снижает пороговый уровень пресинаптической стимуляции, требуемой для активации NMDA рецепторов. Таким образом, преимуществом применения модуляторов АМРА-рецепторов перед прямыми агонистами NMDA-рецепторов является то, что, увеличивая продолжительность и величину постсинаптического ответа последних, они не вызывают нейротоксических ответов, связанных с гиперактивацией NMDA-рецепторов (Раевский К.С., 2000). Ампакины улучшают как воспроизведение приобретенного навыка в задачах с обучением, так и репаративные процессы при нейродегенеративных расстройствах.

Настоящая работа имела целью исследовать эффекты модулятора АМРА рецепторов ампассе на когнитивные функции экспериментальных животных и изучить спектр нейропротективных и антиамнестических свойств на разных моделях нейродегенерации, а также на моделях с использованием фармакологических и инструментальных амнезий.

В исследовании были использованы самцы белых беспородных крыс (вес 180- г) и мышей (вес 18-22 г), крыс инбредной линии Wistar, самцы и самки (вес 200-230 г), мышей инбредной линии C57Bl/6; линии Balb/c (самцы и самки, вес 18-20 г), мышигибриды F1 (CBAx C57Bl6). Экспериментальные животные содержались с предоставлением свободного доступа к корму (полный рацион экструдированного брикетированного корма, ГОСТ Р 50258-92) и питьевой воде. Содержание животных в виварии соответствовало правилам лабораторной практики (GLP) и Приказу МЗ РФ № от 19.06.2003г. «Об утверждении правил лабораторной практики». При работе с животными соблюдались требования, сформулированные в Директивах Совета экспериментальных исследований.

запатентован группой российских ученых (Патент № 2314293 авторы Якимук П.В.

Стовбун С.В. Литвин А.А. от 10.01.2008г) относится к группе ноотропов, как и ранее созданный нооглютил. Вещество вводили внутривенно (в/в) или внутрибрюшинно (в/б) в водном растворе или 0,9% физиологическом растворе. В качестве препаратов сравнения были использованы пирацетам (Шрея Лайф Саенсиз Пвт. Лтд., Индия), мексидол (Фармасофт, Россия), которые вводили аналогично препарату исследования. Дизайн экспериментов – сравнительные исследования с использованием контрольных групп и препаратов сравнения. Животные контрольных групп получали дистиллированную воду или физиологический раствор.

Фармакологические свойства веществ изучены согласно Методическим рекомендациям по доклиническому изучению фармакологической активности новых веществ, 2005.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием программы “Biostatistics III” c использованием параметрических и непараметрических методов Стьюдента, Вилкоксона, Манна – Уитни, Крускала-Уолиса, АNOVA.

Pages: |

| 2 |

Главная >> Диссертации - все темы

[ СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТА .pdf ]

Похожие работы:

«КОГАН ЕЛЕНА ВИКТОРОВНА УПРАВЛЕНИЕ РЕПУТАЦИЕЙ В РЕГИОНАЛЬНОМ ПОЛИТИЧЕСКОМ ПРОЦЕССЕ РФ (НА ПРИМЕРЕ ЧЕЛЯБИНСКОЙ ОБЛАСТИ) 23.00.02 – Политические институты, процессы и технологии ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата политических наук Научный руководитель – кандидат филологических наук, профессор И.М. Дзялошинский Москва – ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«ИЗ ФОНДОВ РОССИЙСКОЙ ГОСУДАРСТВЕННОЙ БИБЛИОТЕКИ Марьянчик, Виктория Анатольевна Аксиологическая функция неологизмов медиаполитического дискурса Москва Российская государственная библиотека diss.rsl.ru 2006 Марьянчик, Виктория Анатольевна Аксиологическая функция неологизмов медиаполитического дискурса : [Электронный ресурс] : На материале газетных публикаций начала XXI века : Дис.. канд. филол. наук : 10.02.01. Архангельск: РГБ, 2006 (Из фондов Российской Государственной Библиотеки)...»

«БЯРТУЛЙС Пранас Антанович УДК 633.413:631.51.02:661.841 ШОСОШ О Е Н Й И ПРШОСЕВНСЁ СБРАБОТШ П Ч Ы СН Е ОВ ПРИ ВНЕСЕНИИ ШДКОГО А М А А ПОД П Л В Е К Л Т Р М ИК О ЕЫ У ЬУЫ й1ециалъность 06.01.09 - растениеводство.,.Диссертация -. на соискание ученой степени кандидата сельскохо зяйственных наук Научный руководитель доктор сельскохозяйственных...»

«ЛАВРЕНКО СЕРГЕЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ ОБОСНОВАНИЕ ПАРАМЕТРОВ ИСПОЛНИТЕЛЬНЫХ ОРГАНОВ КОМПЛЕКСА ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ ВЫРАБОТОК В УСЛОВИЯХ КЕМБРИЙСКИХ ГЛИН Специальность 05.05.06 – Горные машины ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата технических наук Научный...»

«Землянухин Юрий Петрович ЭЛЕКТРОМАГНИТНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ КОМПОЗИЦИОННЫХ РАДИОМАТЕРИАЛОВ, АКТИВНО ВЗАИМОДЕЙСТВУЮЩИХ С ЭЛЕКТРОМАГНИТНЫМ ИЗЛУЧЕНИЕМ МИЛЛИМЕТРОВОГО ДИАПАЗОНА 01.04.03 – Радиофизика Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук Научный руководитель кандидат физ.мат. наук,...»

«ИЗ ФОНДОВ РОССИЙСКОЙ ГОСУДАРСТВЕННОЙ БИБЛИОТЕКИ Абрамов, Алексей Владимирович Оправдание в уголовном процессе Москва Российская государственная библиотека diss.rsl.ru 2006 Абрамов, Алексей Владимирович Оправдание в уголовном процессе : [Электронный ресурс] : Дис. . канд. юрид. наук : 12.00.09. Н. Новгород: РГБ, 2006 (Из фондов Российской Государственной Библиотеки) Государство и право. Юридические науки Уголовный процесс Российская Федерация Стадии уголовного...»

«Герасименко Анастасия Андреевна ПРОГНОЗИРОВАНИЕ ОСТАТОЧНОГО РЕСУРСА СТАЛЬНЫХ ВЕРТИКАЛЬНЫХ РЕЗЕРВУАРОВ ПО ПАРАМЕТРАМ ЦИКЛИЧЕСКОЙ ТРЕЩИНОСТОЙКОСТИ В УСЛОВИЯХ ДВУХОСНОГО НАГРУЖЕНИЯ Специальность 25.00.19 – Строительство и эксплуатация нефтегазопроводов, баз и хранилищ...»

«ДАНЕЕВ Роман Алексеевич КОМПЬЮТЕРНОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ ЭЛЕКТРОМАГНИТНОЙ СКРЫТНОСТИ ПЭВМ 05.13.18 – Математическое моделирование, численные методы и комплексы программ Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук Научный руководитель : доктор технических наук,...»

«Когут Екатерина Викторовна ПОЛОЖЕНИЕ ЖЕНЩИН В ПАЛЕОЛОГОВСКОЙ ВИЗАНТИИ Специальность 07.00.03 – Всеобщая история (Средние века) Диссертация на соискание ученой степени кандидата исторических наук Научный руководитель Бибиков Михаил Вадимович, доктор исторических наук, профессор Москва — Оглавление Введение 1...»

«Махлаев Александр Викторович Метаморфозы русского национального сознания в условиях острого политического кризиса Специальность 23.00.02 – Политические институты, этнополитическая конфликтология, национальные и политические процессы и технологии Диссертация на соискание ученой степени кандидата политических наук Научный руководитель – кандидат исторических наук, доцент М.Ф. Цветаева Москва 2006 -2Оглавление. стр. Введение.....»

«Еремина Мария Геннадьевна Оценка воздействия иммунозависимых дерматозов на качество жизни лиц трудоспособного возраста 14.02.05 – социология медицины Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель доктор медицинских наук,...»

«ЕРЕМИНА АННА АЛЕКСЕЕВНА ИССЛЕДОВАНИЕ СОСТОЯНИЯ УРАНОВАНАДАТОВ ЩЕЛОЧНЫХ, ЩЕЛОЧНОЗЕМЕЛЬНЫХ, d-ПЕРЕХОДНЫХ И РЕДКОЗЕМЕЛЬНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ В ВОДНЫХ РАСТВОРАХ Специальность 02.00.01 – неорганическая химия Диссертация на соискание ученой степени кандидата химических наук Научный руководитель : доктор химических наук, профессор Н. Г....»

«УДК 519.21 Демичев Вадим Петрович ПРЕДЕЛЬНЫЕ ТЕОРЕМЫ ДЛЯ НЕЛИНЕЙНЫХ ФУНКЦИЙ ОТ СЛАБО ЗАВИСИМЫХ СЛУЧАЙНЫХ ПОЛЕЙ 01.01.05 теория вероятностей и математическая статистика Диссертация на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Научный руководитель доктор физико-математических наук, профессор А. В. Булинский Москва 2013 2 Оглавление Введение Глава 1. Ковариационные и моментные оценки для слабо...»

«ИЗ ФОНДОВ РОССИЙСКОЙ ГОСУДАРСТВЕННОЙ БИБЛИОТЕКИ Скоморощенко, Анна Александровна Оценка эффективности производственного предпринимательства в аграрном секторе экономики Москва Российская государственная библиотека diss.rsl.ru 2006 Скоморощенко, Анна Александровна. Оценка эффективности производственного предпринимательства в аграрном секторе экономики [Электронный ресурс] : На материалах Краснодарского края : Дис. . канд. экон. наук : 08.00.05. Ставрополь: РГБ,...»

«ХОМЯКОВА ДАРЬЯ АЛЕКСАНДРОВНА ФОРМИРОВАНИЕ УНИВЕРСАЛЬНЫХ УЧЕБНЫХ ДЕЙСТВИЙ КАК ОСНОВЫ МЕТАПРЕДМЕТНЫХ ОБРАЗОВАТЕЛЬНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ УЧАЩИХСЯ ОСНОВНОЙ ШКОЛЫ В ПРОЦЕССЕ РЕШЕНИЯ ЗАДАЧ ПО ИНФОРМАТИКЕ 13.00.02 – теория и методика обучения и воспитания (информатика) Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук...»

«Раджкумар Денсинг Самуэл Радж ФАРМАКОТЕРАПИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ОСТЕОПОРОЗА И НАРУШЕНИЙ КОНСОЛИДАЦИИ ПЕРЕЛОМОВ НА ЕГО ФОНЕ L-АРГИНИНОМ И ЕГО КОМБИНАЦИЯМИ С ЭНАЛАПРИЛОМ И ЛОЗАРТАНОМ 14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология Диссертация на соискание ученой степени кандидата...»

«БОЧКОВ ВЛАДИМИР СЕРГЕЕВИЧ ПОВЫШЕНИЕ ИЗНОСОСТОЙКОСТИ НАКЛЕПОМ ФУТЕРОВОК ШАРОВЫХ МЕЛЬНИЦ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ИХ ТЕХНИЧЕСКОГО ОБСЛУЖИВАНИЯ Специальность 05.05.06 – Горные машины ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата технических наук Научный руководитель доктор...»

«Назарова Нигина Саидумаровна СТРУКТУРНО-СЕМАНТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ТЕРМИНОВ МЕЖДУНАРОДНОГО ПРАВА В АНГЛИЙСКОМ И ТАДЖИКСКОМ ЯЗЫКАХ Специальность: 10.02.20 – Сравнительно – историческое, типологическое и сопоставительное языкознание Диссертация на соискание учёной степени кандидата филологических наук ДУШАНБЕ – 2014 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ..4 ГЛАВА I. СТРУКТУРНЫЙ АНАЛИЗ МЕЖДУНАРОДНО-ПРАВОВОЙ ТЕРМИНОЛОГИИ ТАДЖИКСКОГО ЯЗЫКА. 1.1 Общая...»

«ВОРОБЬЕВА Ольга Вадимовна СРАВНИТЕЛЬНЫЙ И ИСТОРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ МЕТОДИЧЕСКОГО ПРОГРЕССА В АЛЛЕРГОЛОГИИ: АЛЛЕРГЕН-СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ИММУНОТЕРАПИЯ 14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель : доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент...»

«Дикарев Александр Васильевич ДВУХУРОВНЕВАЯ СИСТЕМА СТАБИЛИЗАЦИИ ИЗОБРАЖЕНИЯ ДЛЯ МОБИЛЬНЫХ РОБОТИЗИРОВАННЫХ КОМПЛЕКСОВ 05.13.01 – Системный анализ, управление и обработка информации (промышленность) Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук Волгоград – 2014 1 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ 4 1. СИСТЕМЫ ТЕХНИЧЕСКОГО ЗРЕНИЯ, РАСПОЛОЖЕННЫЕ НА ПОДВИЖНОМ ОСНОВАНИИ 1.1 Классификация СТЗ, работающих в составе МРК 1.2 Условия формирования модели изображения в СТЗ МРК...»

наверх

<< ГЛАВНАЯ | КОНТАКТЫ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА (Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

«ИССЛЕДОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ АМПАССЕ, КАЛЬЦИЕВОЙ СОЛИ N-(5ГИДРОКСИНИКОТИНОИЛ)-L-ГЛУТАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ ...»

ИНСТИТУТ ХИМИЧЕСКОЙ ФИЗИКИ ИМЕНИ Н.Н. СЕМЕНОВА

КИСЕЛЕВ АЛЕКСЕЙ ВИТАЛЬЕВИЧ

ИССЛЕДОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ

АМПАССЕ, КАЛЬЦИЕВОЙ СОЛИ N-(5ГИДРОКСИНИКОТИНОИЛ)-L-ГЛУТАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ

ОГЛАВЛЕНИЕ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)