Таблица 12 Изучение влияния ЭС-42 вакцины на иммунологические показатели сывороток крови морских свинок при экспериментальном Примечание - *Ло – нулевые лимфоциты.

Так, нами зарегистрировано у морских свинок повышение соотношения Тх/Тс в основном за счет увеличения Тх, что характерно для острой фазы различных воспалительных заболеваний (Байд, 1951; Лебедев, Понякина, 1990). Также отмечалось почти двукратное повышение процентного соотношения В-лимфоцитов, которое сопровождалось определенным изменением их абсолютного количества. Мы регистрировали некоторое повышение, как общего числа лимфоцитов, так и количества Ло («нулевых лимфоцитов») при снижении процентного соотношения в группе животных после введения ЭС-42 вакцины.

При изучении тех же показателей иммунного статуса морских свинок, инфицированных A. bovis NV-01 с последующей обработкой ЭС-42 вакцины наблюдалась тенденция к повышению В-лимфоцитов и общего числа лимфоцитов с восстановлением их процентного соотношения до нормальных значений равно как и дальнейшее увеличение Тх/Тс. Вместе с тем количество и процентное соотношение Ло в группе обработанных животных снизилось почти до нормальных значений.

Таким образом, после исследования иммунологического статуса у морских свинок в модельных экспериментах нами получены убедительные доказательства выраженного воздействия ЭС-42 вакцины на иммунную систему организма биомоделей.

6.4. Изучение влияния ЭС-42 на иммунологические показатели сывороток крови крупного рогатого скота На данном этапе проводили исследование иммунологических параметров сывороток крови нетелей с актиномикозными поражениями до и после введения ЭС-42 вакцины. Животным (14 голов) трехкратно вводили ЭС- внутримышечно в область средней трети шеи по 5 мл/гол., на 1, 3 и 7 день от начала эксперимента. Забор крови у животных проводили за один день до и через 21 день после последней инъекции вакцины. Исследования выполняли в СПК колхоз «Красавский» Лысогорского района Саратовской области.

Как видно из таблицы 13, у больных актиномикозом нетелей наблюдалось изменение всех исследуемых нами иммунологических параметров сывороток крови.

Таблица 13 Изучение влияния ЭС-42 вакцины на иммунологические показатели сывороток крови нетелей, больных актиномикозом Так, у больных актиномикозом нетелей, обработанных ЭС-42, нами зарегистрировано некоторое повышение соотношения Тх/Тс в основном за счет увеличения Тх и Тс, что характерно для острой фазы различных воспалительных заболеваний (Лебедев, Понякина, 1990; Вершигора, 1990;

Федоров, 2005).

В той же группе также отмечалось заметное снижение абсолютного количества В-лимфоцитов, которое сопровождалось несущественным снижением их процентного соотношения, по сравнению с показателями у необработанных животных. Как видно из таблицы 13, у больных нетелей после их обработки ЭС - 42 вакцины регистрировалось почти двукратное повышение их абсолютного количества относительно контрольных животных.

Мы регистрировали некоторое повышение относительного процентного соотношения и абсолютного количества Ло у больных животных, и снижение их количества к норме после введения ЭС-42 вакцины аналогично исследованиям Лебедева и Понякиной (1990).

Также мы исследовали наличие взаимосвязи между выявленными у ЭС вакцины выраженными профилактическими свойствами и изменениями иммунологических параметров сывороток крови КРС. В этом случае животные также были разделены на две группы – контрольную (10 голов) и экспериментальную (10 голов). В первую из них объединяли клинически здоровых особей, которые были изолированы от основного стада на время проведения эксперимента. Животным экспериментальной группы вводили ЭС-42 двукратно внутримышечно в область средней трети шеи по 5 мл/гол., на 1 и 7 день. Забор крови у животных проводили за один день до и через дней после последней инъекции препарата. Животных содержали совместно актиномикозными поражениями различной степени.

Так (Таблица 14), у обработанных с профилактической целью животных, нами зарегистрировано повышение, т.е. восстановление значений соотношения Тх/Тс по сравнению с группой животных до введения препарата. Поскольку наблюдалась сходная с предыдущим экспериментом тенденция, на наш взгляд, и в данном случае эти изменения могли происходить в основном за счет увеличения Тх и Тс, что характерно для формирования адаптивного специфического иммунитета (Лебедев, Понякина, 1990).

Таблица 14 Изучение влияния ЭС-42 вакцины на иммунологические показатели сывороток крови нетелей, обработанных с целью профилактики В экспериментальной группе до введения ЭС-42 вакцины отмечалось почти двукратное повышение абсолютного количества В-лимфоцитов. После обработки тех же животных указанным препаратом мы регистрировали некоторое снижение этого показателя, хотя это заметно не влияло на % соотношение данной субпопуляции.

Также мы регистрировали повышение, как общего числа Ло ( почти в два раза), так и их процентное соотношения (в 1,5 раза). После введения ЭС вакцины наблюдалось их снижение к нормальным значениям.

Таким образом, введение ЭС-42 вакцины для лечения и профилактики актиномикоза у КРС сопровождалось нормализацией биохимических и иммунологических показателей до стандартных значений.

ГЛАВА 7. ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ СЕРИИ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ ВАКЦИНЫ

Для экономического анализа эффективности ветеринарных мероприятий было предложено (Шатохин и др., 1997; Никитин, Воскобойник, 1999;

Никитин, Апалькин, 2006) использовать систему следующих показателей:

1. фактический экономический ущерб от заболевания.

2. затраты на проведение ветеринарных мероприятий.

3. предотвращенный экономический ущерб.

4. экономическая эффективность ветеринарных мероприятий на рубль В настоящем исследовании проводили расчет экономической эффективности применения ЭС-42 вакцины для профилактики актиномикоза в СПК колхоз «Красавский» Лысогорского района Саратовской области. С этой целью проводили обработку молодняка КРС в количестве 736 голов.

При расчете общего количества вакцины для введения указанному поголовью мы руководствовались следующим:

- одной голове КРС для создания иммунитета против актиномикоза с применением ЭС-42 вакцины необходима двукратная инъекция препарата по 5 мл/гол (10 мл);

- тогда для обработки всего поголовья молодняка (736 голов) требовалось 73610=7360 мл вакцины.

1) Расчет фактического экономического ущерба, причиненного заболеванием Фактический ущерб представляет собой денежное выражение потерь продукции, обусловленных болезнями животных. В данном хозяйстве указанный параметр, согласно формуле, включал в себя ущерб от падежа животных и ущерб от уменьшения живой массы.

А. Экономический ущерб от падежа и вынужденного убоя.

Где У1 – величина ущерба, руб.;

Мп – количество павших или подлежащих убою животных, гол.;

Ж – средняя живая масса одного животного, кг.;

Ц – закупочная цена 1 кг мясной продукции, руб.;

Сф – денежная выручка от реализации трупного сырья.

По данным исследовательской работы, проводимой нами в Саратовской области на поголовье крупного рогатого скота за 2007-2008 годы, выявлено, что средний процент заболеваемости составил 11,41 % (из 736 голов всего в настоящем исследовании зарегистрировано 84 больных животных). В целом, это соотносится с доступными данными о числе больных людей актиномикозом, которые в Российской Федерации составляют до 2,5-10 % хронических гнойных процессов различной локализации (Сутеев, 1951;

Петровский, 1974; Бакулов, 1987). По результатам информационноаналитического центра Россельхознадзора при содействии ФГУ «Центр ветеринарии» и «Роспотребнадзора» в РФ заболеваемость актиномикозом КРС за 2010 год составила до 0,35 % от общего числа инфекционных заболеваний, а за 2011 год - до 0,24 % (Дудников с сост., 2010). По отчету Федерального государственного учреждения «Саратовская межобластная ветеринарная лаборатория» (ФГУ «Саратовская МВЛ») находящаяся в ведении Федеральной службы по ветеринарному и фитосанитарному надзору (Россельхознадзор) за 2010 год на актиномикоз проведена – 1 экспертиза, из них положительных - 1 результат: Советский р-он ОП «Советское» - 1.

Очевидно, это связано с высокими затратами на ветэкспертизу, проведение соответствующего лабораторного обследования, включающего транспортировку или ветперсонала в хозяйство для забора материала, или непосредственно материала в лицензированную лабораторию, а также отсутствие нормативных документов, предписывающих обязательную подачу данных о заболеваемости хозяйствами в органы ветнадзора.

По данным АР Крым поражение крупного рогатого скота актиномикозом по отдельным хозяйствам в период с 2004 по 2008 гг. составило от 29,7 до 41,4% от всего заболевшего поголовья.

По данным исследовательской работы (Ильченко, 2009), проводимой в Ростовской области на поголовье КРС выявлено, что средний процент заболеваемости актиномикозом за 2003-2009 годы составил 10,27 %.

По результатам наших исследований в аналогичный период наблюдения смертность от указанного заболевания составила 10 голов (подлежали убою) из 84 больных актиномикозом животных, т.е. 11,9 % от всех заболевших животных; по данным СПК колхоз «Красавский», средняя живая масса голштинизированный красно-пестрый скот в хозяйстве осуществлялась однократно в 18-21 месяц), а убойный выход составляет 60 % (300 кг);

закупочная цена 1 кг мясной продукции в данном хозяйстве составляла - руб. (на 2010-2011 г.); если учитывать, что денежная выручка от реализации трупного сырья отсутствует, то расчет будет следующий:

У1=10 гол.300 кг(150-0 руб.)=450 000 (руб) Следовательно, ущерб от падежа больных актиномикозом КРС в хозяйстве СПК колхоз «Красавский» составил 450000 (руб).

В. Экономический ущерб от уменьшения живой массы.

В этом случае расчет проводился по следующей формуле:

У3=Мб(Пз-Пб) ТЦ, Где У3 – величина ущерба, руб.;

Мб – количество заболевших животных, гол;

Пз – среднесуточная продуктивность здоровых животных;

Пб – среднесуточная продуктивность больных животных за период их болезни;

Т – продолжительность болезни, дни;

Ц – закупочная цена 1 кг продукции, руб.

Как было показано выше, количество заболевших животных в СПК колхоз «Красавский» составило 11,41 % от всего поголовья; среднесуточный прирост массы здоровых животных 500 г (0,5 кг); среднесуточная продуктивность больных животных за период их болезни в зависимости от стадии актиномикоза 100-200 г (0,1-0,2 кг), т.о. в среднем 150 г (0,15 кг);

продолжительность болезни до 150 дней; закупочная цена 1 кг мясной продукции 150 руб., тогда:

Уз=84 гол.(0,5 кг-0,15 кг) 150 дней150 руб=661500 (руб.) С. Сумма фактического ущерба равна сумме отдельных видов ущерба, поэтому ее в настоящем исследовании вычисляли по следующей формуле:

Уф=У1+У Уф=450 000+661500=1111500 (руб.) Коэффициент ущерба (Ку), т.е. денежное выражение ущерба на одно животное рассчитывали как отношение суммы фактического ущерба (Уф) к количеству заболевших животных (Мб):

Ку=1111500:84=13232,14 руб. (25% от стоимости одного нетеля) 2) Учет затрат на проведение ветеринарных мероприятий Затраты на ветеринарные мероприятия (противоэпизоотические, ветеринарно-санитарные, лечебно-профилактические и др.) принято складывать из показателя стоимости материальных и трудовых ресурсов.

К материальным затратам относят такие параметры, как стоимость использованных биопрепаратов, медикаментов, дезсредств, инструментов, лабораторных исследований, сооружение дезбарьеров и т.д.

К трудовым затратам следует относить основную и дополнительную зарплату ветспециалистов, подсобных рабочих и т.д.

А. Нами рассчитаны расходы на биопрепарат (ЭС-42 вакцины), которые приведены в таблице 15.

Таблица 15 Примерные затраты на проведение профилактических мероприятий против актиномикоза КРС с помощью ЭС-42 вакцины в СПК вакцины для профилактики актиномикоза у КРС Итого: 147200 руб.

Следовательно, как видно из таблицы 15, на одно животное потребовалось 2 дозы стоимостью 100 руб. каждая, т.е. 200 руб. на одно животное.

Расходы на 736 голов составят: 736200 руб. =147200 руб.

Б. Затраты на оплату труда, рассчитанные нами по данным настоящего исследования, представлены в таблице 16.

Таблица 16 Затраты на оплату труда ветработникам колхоза СПК колхоз «Красавский» для профилактики актиномикоза КРС с помощью ЭСвакцины Категория Количество, Дневная Продолжительность Затраты на оплату рабочие Итого: 600 руб.

Такой показатель, как общая сумма затрат определяли сложением всех видов расходов и обозначили как Зв:

Где Зв – сумма затрат на все ветеринарные мероприятия, руб.;

Зв1 – затраты на приобретение биопрепаратов и медикаментов, руб.;

Зв2 – затраты на оплату труда ветспециалистов и подсобных рабочих, руб.

Зв=147200 руб. + 600 руб.=147800 (руб.) 3) Определение предотвращенного экономического ущерба Предотвращенный ущерб представляет собой стоимостное выражение потерь продукции животноводства, не допущенных в результате проведения комплекса ветеринарных мероприятий, обеспечивающих предупреждение возникновения болезни, ограничения их распространения и сокращение заболеваемости и падежа животных.

ликвидации болезней животных определяли по следующей формуле:

Где Пу – величина предотвращенного ущерба, руб.;

Мо – количество восприимчивых животных, гол.;

Кз – коэффициент заболеваемости, %;

Ку – коэффициент ущерба руб., т.е. денежное выражение ущерба на одно заболевшее животное в данном хозяйстве;

Уф – фактический ущерб в хозяйстве, руб.

В настоящем исследовании при расчете Пу мы руководствовались следующими цифрами (параметрами): из них кол-во восприимчивых животных (Мо) составило 84 гол.; коэффициент заболеваемости животных (Кз) –0,11% (Кз = Мз : М = 10 : 84 = 0,11; Мз - количество заболевших животных (переболевших, павших)); Ку и Уф были рассчитаны нами на предыдущем этапе и составили 13232,14 руб. и 1111500 руб., соответственно.

В результате при расчете Пу нами получены следующие данные:

Пу=1111500 руб. – 13232,14руб.0,11 84гол.=989235,03 (руб.) 4) Определение экономического эффекта и эффективности ветеринарных мероприятий на рубль затрат Экономический эффект от проведения ветеринарных мероприятий выражают разностью между предотвращенным экономическим ущербом и затратами на их проведение (Шатохин и др., 1997). Поэтому этот показатель как экономический эффект от проведенных в СПК «Красавский»

профилактических и лечебных мероприятий рассчитывали по формуле:

Где Эв – величина экономического эффекта от проведенных мероприятий, руб.;

Пу – предотвращенный экономический ущерб в результате проведения ветеринарных мероприятий, руб. (в настоящем исследовании – 989235, руб.);

Зв – затраты на ветеринарные мероприятия, руб. (в данной работе составил 147800 руб.).

Экономический эффект в данном случае был равен:

Эв= 989235,03 руб. – 147800 руб.= 841435,03руб.

Эффективность ветеринарных мероприятий на рубль затрат (Эр) определяли по формуле:

Эр=841435,03руб. : 147800 руб.=5,7 руб.

Таким образом, в целом экономическая эффективность проведенных нами ветеринарных мероприятий в СПК колхоз «Красавский» представлена в таблице 17.

Таблица 17 Экономическая эффективность ветеринарных мероприятий в СПК колхоз «Красавский» после введения КРС ЭС- Экономическая эффективность на рубль 5, затрат Итак, можно сделать вывод, что проводимые в СПК колхоз «Красавский»

профилактические мероприятия оказались весьма эффективными. Денежные средства, сохраненные на каждый рубль ветеринарных затрат, составили 5, рубля.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В дальнейшем были разработаны профилактические препараты против таких особо опасных болезней как сибирская язва, чума крупного рогатого скота, бешенство, ящур, сап, которые вызывали повальные эпидемии и наносили значительный ущерб животноводству (Коляков, 1952; Коленько, 1963). Так, более чем за вековую историю практического применения, данные вакцины используются в животноводстве для профилактики опасных заразных заболеваний как в нашей стране, так и за рубежом (Bud, 1991; Глик, Пастернак, 2002; Poland et al., 2002).

Вакцины радикально преобразили ветеринарную медицину в ХХ веке и позволили существенно снизить потери от опасных инфекционных заболеваний, а также контролировать их распространение, как среди животных, так и среди людей. Так, по оценкам специалистов, на сегодняшний день мировой рынок средств и препаратов в данной сфере составляет почти 8 млрд. долларов. Всего 5 лет назад на нашем биотехнологических продуктов для ветеринарной медицины. Российский рынок ветеринарных биотехнологических препаратов также показывает положительную динамику, что является следствием эпизоотической ситуации в стране, а также ростом основных отраслей-потребителей – птицеводства и животноводства (скотоводство, свиноводство). Объем российского рынка ветеринарных биотехнологических препаратов оценивается около 4 млрд. руб. Средние темпы роста за последние четыре года были на уровне 8-9%. За период 20102015 гг, по прогнозам Research.Techart, объем рынка ветеринарных биотехнологических препаратов увеличится более, чем на 20% (Глик, Пастернак, 2002).

Наличие прорывных инновационных технологий создания лечебнопрофилактических препаратов в области современной ветеринарной медицины позволяет ожидать в ближайшие 515 лет кардинальных изменений в области вакцинологии и, прежде всего, это связано с таким новейшим направлением исследования, как создание терапевтических вакцин.

одновременная возможность индуцировать протективный иммунный ответ у больных животных, а также осуществлять лечебный эффект путем подавления или эрадикации уже существующего в организме инфекционного агента. Поэтому особую перспективу прогнозируют терапевтическим вакцинам при лечении хронических заболеваний, вызванных бактериями или вирусами. Вместе с тем, в настоящее время в ветеринарии используются в основном профилактические препараты, не обладающие терапевтическим эффектом (Глик, Пастернак, 2002; Нижегородцев, 2003; Ульянов, 2011).

В то же время для некоторых хронических инфекционных заболеваний, таких, как, например, актиномикоз сельскохозяйственных животных, отсутствуют и средства специфической профилактики. Поэтому основное место в ликвидации данного заболевания занимает лечение (Маминов, Колесникова, 1970; Пирогова, 1970; Мещеряков, Ромм, 1978; Солодовников, 1981; Розанов, Лапшин, 1982; Баринов, 1986; Панько, Черкез, 1986;

Маминов). Однако применяемые для этого в настоящее время лекарственные препараты являются малоэффективными и имеют ограниченный срок хранения, что может оказаться неудобным в условиях хозяйств. Такая терапия является дорогостоящей, не всегда дает желаемого результата и требует довольно продолжительного периода лечения. Так, например, применение антибиотиков приводит к определенным ограничениям при убое скота на мясо. В существующих наставлениях больное животное, подвергшееся лечению антибиотиками (стрептомицин и др.), не подлежит убою на мясо в течение месяца после применения препарата, а это необходимо учитывать при терапии больных животных. В связи с этим возникла необходимость в применении новых биотехнологических подходов к лечению и профилактике этого заболевания. (Голиков, 1963; Спесивцева, 1964; Колычев, Ощепков, 2001).

сельскохозяйственных животных ЭС терапевтической вакцины для лечения и профилактики актиномикоза крупного рогатого скота и оценка ее экономической эффективности.

Для реализации поставленной задачи настоящее исследование мы начали с подбора штамма-продуцента для приготовления ЭС терапевтической вакцины. С этой целью проводили выделение культуры из патологического материала (из актиномикомы в области нижней челюсти КРС) с последующей идентификацией возбудителя, изолированного из актиномикомы нетеля № 2 из СПК колхоз «Красавский» Лысогорского района. В процессе культивирования и изучения морфологических, культуральных, тинкториальных свойств выделенной культуры нами идентифицированный нами штамм был обозначен как A. bovis NV-01.

Аналогичным образом проводили выделение других культур от больных животных из колхоза «Победа» Красноармейского района Саратовской области. В этом случае использовали сходный патматериал (головы КРС) от нетелей № 3 и 4. Затем после выращивания бактерий в аэробных условиях при температуре 37 °С в течение 3-42 сут., аналогично штамму NV-01, нами проводилось их исследование. В результате было выделено еще две культуры, которые по морфологическим, культуральным и тинкториальным свойствам были идентифицированы как A. bovis. Данные штаммы мы обозначили A. bovis NV-02 и A. bovis NV-03.

Для подтверждения принадлежности трех выделенных нами штаммов к роду A. bovis на следующем этапе мы проводили исследование их биохимических свойств по «Определителю бактерий Берджи» (1980, 1997).

Согласно полученным данным, у всех трех изолированных в настоящем исследовании штаммов были выявлены идентичные биохимические свойства, типичные для A. bovis. Нами был выбран штамм A. bovis NV-01, который был использован для приготовления экспериментальной серии терапевтической вакцины.

Следующим этапом в биотехнологии разрабатываемой терапевтической вакцины был разработан способ получения антигенной композиции ЭС препарата методом замораживания-оттаивания. Для накопления биомассы, выделенную от больных животных культуру штамма A. bovis NV-01 засевали на МПБ с 1% глюкозы, выдерживали в термостате при температуре 37 °С в течение 42 суток. Полученную в результате экспериментальную серию A.

bovis NV-01 мы обозначили ЭС-42.

На следующем этапе для разрушения внешней мембраны и клеточной стенки бактерий надосадочную жидкость из колбы с выращенной культурой сливали, а полученный осадок подвергали 20-кратному замораживанию и оттаиванию путем воздействия низкой температуры (18 °С и ниже) в соответствии с рекомендациями (Шах Махмуд, Филимонова, 2010).

Для полного обеззараживания нами в каждую ЭС был добавлен раствор формальдегида до конечной концентрации 0,4 % в соответствии с рекомендациями (Уокер,1957; Walker, 1964).

После экспозиции в течение 21 дня, производили контрольный высев ЭС вакцины на стерильность. Характерного роста актиномицетов не наблюдалось.

Для изучения состава антигенной композиции ЭС терапевтической вакцины проводили исследования препарата, которые позволили выявить в соответствующих по составу цитоплазматической фракции бактерий (Шах Махмуд, Филимонова, 2010). По результатам электрофореза в 20 % ПААГSDS ЭС-42 вакцины обнаружена доминантная полипептидная полоса с молекулярной массой 20 кДа, а также несколько минорных белков с молекулярной массой от 60 до 90 кДа.

На следующем этапе разрабатывали способ получения антигенной композиции ЭС вакцины методом ультразвуковой дезинтеграции. В качестве штамма-продуцента использовали культуру того же штамма. Аналогично предыдущим экспериментам, мы делали высев штамма A. bovis NV-01 на МПБ с 1% глюкозы и выдерживали в термостате при температуре 37 °С в течение 42 суток. Затем, с 7 по 42 день роста, брали образцы культуры через соответственно, в зависимости от сроков выращивания штамма-продуцента как ЭС-7, ЭС-10, ЭС-13, ЭС-16, ЭС-19, ЭС-22, ЭС-25, ЭС-28, ЭС-31, ЭС-34, ЭС-37, ЭС-40 и ЭС-42 (УЗ). Каждую ЭС подвергали ультразвуковой дезинтеграции для разрушения структуры клеточной стенки бактерии A.

bovis по методу, разработанному ранее (Ласкавый и др., 2005).

В настоящем исследовании нами был выбран режим воздействия ультразвуковых волн на ЭС вакцины в пределах 20 кГц и длительностью воздействия (экспозиции) в течение 60 мин. Для освобождения ЭС от поврежденных стенок и целых клеток штамма-продуцента A. bovis NV- Фильтрацию каждой ЭС проводили под вакуумом - аппаратом.

Иммуногенность полученных дезинтегрантов указанных тринадцати серий предварительно оценивали в РАЛ, согласно рекомендациям (Агольцов, 1999, 2001, 2003, 2006; Ласкавый, 2000, 2005; Ласкавый и др., 2001).

Судя по результатам РАЛ, для изготовления ЭС вакцины наиболее подходящими следовало считать серии ЭС-13, ЭС-28, ЭС-34, ЭС-37, ЭС-40 и ЭС-42 (УЗ), поскольку у этих образцов отмечалась средняя агломеративная активность с соответствующим индексом агломерации в диапазоне 6 - 15%.

Поэтому указанные серии ЭС предположительно могли обладать относительно высокой иммуногенностью. Вместе с тем, для получения препаративного количества штамма-продуцента вакцины более подходящим, на наш взгляд, следовало считать ЭС-42 (УЗ), которая была нами выбрана для дальнейших исследований.

Для полного обеззараживания нами в каждую ЭС был добавлен раствор формальдегида до конечной концентрации 0,4 % в соответствии с рекомендациями (Уокер,1957; Walkeг, 1964).

После экспозиции в течение 21 дня, производили контрольный высев ЭСУЗ) на стерильность. Характерного роста актиномицетов не наблюдалось.

Таким образом, применение ультразвуковой дезинтеграции биомассы A.

bovis NV-01 в качестве потенциального штамма-продуцента ЭС вакцины иммуногенностью.

Затем мы перешли к изучению лечебного действия ЭС вакцины на КРС.

Для выявления лечебных свойств у полученных нами ЭС-42 и ЭС-42 (УЗ) проводили проверку соответствующей активности на телятах, нетелях и коровах. С этой целью по разработанной нами методике были приготовлены соответствующие ЭС в ограниченных объемах (15 литров) с применением штамма-продуцента A. bovis NV-01.

Проверку лечебных свойств ЭС вакцины мы начали с исследований в колхозе «Победа» Красноармейского района. Для этого была сформирована группа КРС - телят 6-8 месячного возраста (12 голов), телок случного возраста (10 голов) и коров (8 голов), с характерными признаками актиномикоза и различной степенью выраженности актиномикомы.

Всем животным вводили ЭС-42 (УЗ) внутримышечно в область средней трети шеи независимо от возраста и веса животных по 5 мл/гол., трехкратно на 1, 7 и 14 день. После введения препарата наблюдения за больными животными осуществляли в течение года.

Введение препарата больным актиномикозом телятам (12 голов) с размером актиномиком до 7 см привело к полной редукции очагов и полному выздоровлению животных (100% эффективность). Из 10 нетелей с актиномикомой до 12 см, обработанных препаратом, полное выздоровление зарегистрировано у 7 (70%), а введение препарата 8 больным коровам с актиномикомой более 25 см не обеспечило лечебного эффекта (100%), что может быть объяснено длительным течением болезни и необратимостью происшедших в организме коров патологических изменений.

Таким образом, ЭС-42 (УЗ) обладала выраженным терапевтическим эффектом в отношении животных на начальной стадии болезни и была менее эффективной при лечении КРС в более поздний период заболевания.

ЭС-42 была также проверена на КРС в СПК колхоз «Красавский»

Лысогорского района Саратовской области. Хозяйство считалось неблагополучным по актиномикозу предыдущие 2 года. С апреля по октябрь 2008 года в нем было выявлено 84 головы (нетели, первотелки, коровы) с актиномикозными поражениями разной степени в области нижней и верхней челюсти. Для контроля было взято 10 голов (заведомо здоровые животные).

Данный препарат вводили животным внутримышечно в область средней трети шеи по той же схеме.

В целом введение препарата больным актиномикозом нетелям привело к выздоровлению большинства (72 головы) животных на первой и второй стадиях развития заболевания с актиномикомой в диаметре до 5 см и 10- см, соответственно. Однако сроки редукции актиномикомы варьировали. В дальнейшем выздоровление наблюдалось (в течение двух месяцев после проведенного лечения) у всех подвергавшихся лечению животных (100%).

После введения препарата наблюдение за больными животными осуществляли в течение двух месяцев с последующим контролем в течение года.

Обработка ЭС-42 вакцины оказалась менее эффективной для животных с обширными актиномикозными поражениями (с актиномикомой более 25 см) - через два месяца после введения данной ЭС при обследовании больных животных было выявлено видимое отсутствие лечебного эффекта (10 голов не излеченных больных актиномикозом животных из 84 больных - 11,9 %).

Поскольку животные были сданы на мясокомбинат, дальнейшего наблюдения за ними не проводилось по объективным причинам.

Таким образом, разработанный нами экспериментальный препарат обладал выраженным терапевтическим эффектом в отношении животных с актиномикомой, не превышающей в диаметре 12 см (т.е. на начальной стадии болезни) и был менее эффективным при лечении КРС с актиномикомой диаметром более 25 см.

После проверки лечебного эффекта ЭС вакцины приступили к изучению ее профилактического действия на сельскохозяйственных животных.

Всего в ноябре 2009 года было обработано ЭС-42 вакцины 736 голов (первотелки, телки случного возраста, телки старше 6 месячного возраста, бычки). Животным вводили препарат двукратно в тех же дозах на 1 и 7 дни.

После обработки животных ЭС-42 при последующем обследовании в ноябре 2010 г. (через год) ни одной головы с актиномикозным поражением не выявлено. При дальнейшем наблюдении в течение последующих трех лет в указанном хозяйстве также не было выявлено ни одного случая актиномикоза у КРС.

Следовательно, проведенные профилактические мероприятия против актиномикоза КРС, основанные на двукратном введении животным препарата из выделенного нами штамма A. bovis NV-01, привели к их полному выздоровлению (100% эффективность).

Проводили также изучение влияния ЭС-42 вакцины на биохимические и иммунологические показатели животных в экспериментальных и производственных условиях.

На первом этапе исследовали биохимические и иммунологические параметры сывороток крови у лабораторных животных – морских свинок ( головы), после экспериментального моделирования актиномикоза путем введения штамма A. bovis NV-01.

В модельных экспериментах у инфицированных животных наблюдалась тенденция к снижению основных биохимических параметров в сторону физиологической нормы: АЛТ, АСТ – в 1,5 и 2,2 раза, а общего белка - в 1, раз. При этом выявлялось некоторое увеличение ряда показателей: КК - в 1, раза, ЛДГ - в 1,4, глюкозы - в 1,5, а общего холестерина - в 2,2 раза.

При изучении тех же показателей иммунного статуса морских свинок, инфицированных A. bovis NV-01 с последующей обработкой ЭС-42 вакцины, наблюдалась тенденция к повышению В-лимфоцитов и общего числа лимфоцитов с восстановлением их процентного соотношения до нормальных значений равно как и дальнейшее увеличение Тх/Тс. Вместе с тем количество и процентное соотношение Ло в группе обработанных животных снизилось почти до нормальных значений.

Таким образом, нами получены обоснованные данные о способности ЭС оптимизировать биохимические показатели сывороток крови морских свинок при моделировании актиномикозной инфекции у лабораторных животных.

Также после исследования иммунологического статуса у морских свинок в модельных экспериментах нами получены убедительные доказательства выраженного воздействия ЭС-42 вакцины на иммунную систему организма биомоделей.

Поэтому на следующем этапе для оценки лечебных свойств ЭС- вакцины проводили исследование ключевых биохимических и иммунологических параметров сывороток крови нетелей с актиномикозными поражениями до и после введения препарата.

Как и в предыдущих экспериментах на биомоделях, после введения ЭС- вакцины достоверно возрастала активность АСТ. Это указывало на повышение синтеза АТФ (Малинин, 2009). Коэффициент Де Ритиса, представляющий собой отношение АСТ/АЛТ и отражающий состояние аэробных катаболических процессов (De Ritis et al., 2006), у обработанных препаратом животных повышался до контрольных показателей. Видимо, это отражало тенденцию к активизации кислородзависимых процессов у обработанных животных и потенциальное повышение резистентности к инфекции, что подтверждалось также достоверным увеличением