WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

Pages:     || 2 | 3 |

«ТЕХНОЛОГИЯ КОРМОВЫХ ДОБАВОК НА ОСНОВЕ БИОМОДИФИКАЦИИ ОТХОДОВ, ПОЛУЧЕННЫХ ПРИ РАЗДЕЛКЕ ГИДРОБИОНТОВ ...»

-- [ Страница 1 ] --

Тихоокеанский научно-исследовательский рыбохозяйственный центр

(ФГУП "ТИНРО-Центр")

На правах рукописи

Баштовой Александр Николаевич

ТЕХНОЛОГИЯ КОРМОВЫХ ДОБАВОК

НА ОСНОВЕ БИОМОДИФИКАЦИИ ОТХОДОВ,

ПОЛУЧЕННЫХ ПРИ РАЗДЕЛКЕ ГИДРОБИОНТОВ

Специальность:

05.18.04 – технология мясных, молочных и рыбных продуктов и холодильных производств Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук

Научный руководитель:

доктор технических наук, профессор Слуцкая Т.Н.

Владивосток –

ОГЛАВЛЕНИЕ

Введение

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Значение вторичных сырьевых ресурсов для получения технической продукции

1.2. Характеристика и состав компонентов, входящих в состав мышечно-хрящевых тканей гидробионтов

1.3. Получение и применение пищевых и кормовых добавок, включая специализированные

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Материалы исследований

2.2. Проведение технологических экспериментов

2.3. Методы исследований

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Характеристика и обоснование выбора сырья для разработки технологии получения кормовых добавок способом биомодификации..... 3.2. Разработка технологии биомодификации отходов, полученных при разделке рыб и кальмара

3.2.1. Исследование процессов ферментолиза мышечно-хрящевой ткани голов командорского кальмара

3.2.2. Исследование процессов ферментолиза мышечно-хрящевой ткани голов лососевых на примере кеты

3.3. Определение параметров сушки для получения кормовой добавки.. 3.4. Технология кормовой добавки из отходов гидробионтов

3.4.1. Технология кормовой добавки из голов кальмара (КДК)............ 3.4.2. Изменение показателей качества кормовой добавки из голов кальмара при хранении

3.5. Определение биологической ценности кормовых добавок с тесткультурой Tetrahymena pyriformis

3.6. Технология кормовой добавки из голов лососевых (КДР).................. 3.7. Характеристика отходов, образующихся при производстве БАД из голов рыб и кальмара

3.7.1. Разработка технологии кормовой добавки из отходов при получении БАД из голов кальмара и лососевых

3.7.2. Определение биологической ценности кормовых добавок........ 3.8. Сравнительная оценка аминокислотного состава кормовых добавок КДК и КДР с «идеальным» белком корма для птиц и свиней................. 3.9. Исследование эффективности кормовых добавок на рыбах.............. 3.10. Расчет экономической эффективности производства кормовой добавки из голов кальмара

Выводы

Список литературы

Приложения

Введение Актуальность темы исследований В настоящее время в мировой практике животноводства и рыбоводства широко применяются кормовые добавки, которые позволяют регулировать не только массовые и ростовые, но и качественные показатели (Дюкарев и др., 1985; Привезенцев, 1991; Лукьянов, 2005; Перегудов, 2005).

Как правило, такие кормовые добавки имеют определенную функциональную направленность с выраженным действием одного или нескольких компонентов: полисахаридов, белков, липидов, минеральных веществ (Березов, Коровкин, 1998; Комова, Шведова, 2004; Северин, 2004). Большая часть таких добавок производится из отходов, накапливающихся при переработке гидробионтов (Куцакова и др., 2002; Киричко, 2003; Клычкова, 2004; Андриенко, 2008).

Несмотря на существенный вклад многих ученых в развитие технологии кормовых продуктов из отходов при обработке гидробионтов (Л.С.Абрамова, Н.П. Боева, Е.Н. Харенко, Н.П. Быкова, В.П. Зайцев, Л.Л. Лагунов, В.М. Дацун, А.Ю. Звягинцев, Н.Н. Ковалев, Г.В. Ковров, В.В. Ошурков, Т.М. Сафронова, А.В. Перебейнос, А.П. Ярочкин, G.M. Berge, S. Manop, R.A.A. Muzzarelli, M.

Falk, K.M. Rudall, C.P. Savage, L. Sittiwat и др.), разработка технологий кормовых добавок, содержащих как пищевые, так и биологически активные компоненты, остается востребованной.

Аргументом в пользу привлечения отходов гидробионтов для получения кормовых добавок является их недоиспользование и значительный объем (Дацун, 1995; Петрулевич, 2005; Приморские рыбаки..., 2006; Мартынов, 2007;

Дроздова и др., 2008; Рассадников, 2008; Рыбные ресурсы, 2008), а также повышенный спрос в России и за рубежом (особенно в странах АТР) на кормовые продукты из сырья морского происхождения (Maslennikov, Tretenichenko, 2006).

В то же время известны работы по технологии биологически активных веществ и добавок определенного действия из хрящевой и костной ткани, получаемых при разделке лососевых и других рыб (Мухин, Новиков, 2001; Пивненко, 2010; Сорокоумов, 2010), а также кальмаров (Суховерхова, 2006). При этом остается значительная масса отходов, потенциально пригодных для получения кормовых добавок (Андрусенко, 1988; Новикова, 2003).

Исходя из объемов возможного изъятия лососевых и кальмара (Руководство по…, 1998; Дударев и др., 2004; Мартынов, 2007; Рассадников, 2008; Обзор промысловой обстановки, 2012; Состояние промысловых ресурсов, 2011, 2013), рассчитано, что количество костно-мышечно-хрящевых компонентов (головы лососевых и кальмара) в Дальневосточном регионе может составлять 50–60 тыс. т в год для лососевых и 5–6 тыс. т для кальмара.



Биомодификация1 отходов от разделки гидробионтов позволяет перевести компоненты хрящевой и мышечной ткани в растворимое и легкоусвояемое состояние и тем самым повысить эффективность использования не только отходов как сырья, но и содержащихся в них биологически активных веществ.

Биологически активные вещества, содержащиеся в тканях голов кальмара и лососевых, способны регулировать обменные процессы в хрящевой ткани, участвовать в формировании тканей организма, оказывать профилактическое действие, выступать в качестве общеукрепляющих средств (Пат. РФ 2161002;

Пат. РФ 2250047).

Потребителями кормовых добавок с подобными свойствами могут быть животные (птицы, свиньи, лошади, собаки, крупный рогатый скот и др.) и гидробионты (рыбы).

Анализ литературы показал, что многие частные технологии кормовых добавок основаны на ферментной модификации сырья с целью повышения растворимости определенных компонентов (Roberfroid, 1996; Shargel, Yu, 1999;

Мухин, Новиков, 2001; Кузнецов, 2003; Шашкина и др., 2004; Ших и др., 2011), что заслуживает внимания и может являться отправной точкой для проведения дальнейших исследований.

Биомодификация – воздействие на органическую ткань различными методами с целью получения продукта, характеризующегося новыми свойствами.

Таким образом, учитывая наличие в составе отходов при переработке объектов морского промысла биологически активных веществ и опыт исследователей, показавших их функциональное действие, с одной стороны, а также значительный объем и необходимость рационального использования морского сырья – с другой, разработка технологии использования отходов, получаемых при разделке лососевых и кальмаров, для кормовых продуктов, является актуальной.

Целью работы является разработка технологии кормовых добавок из мышечно-хрящевых отходов, полученных от разделки рыбы и кальмаров, на основе ферментации, повышающей содержание растворимых питательных и биологически активных компонентов в готовом продукте, а также – обоснование использования отходов после производства БАД.

Задачи исследований:

– исследовать химический состав отходов, полученных при разделке гидробионтов (головы кальмара и лососевых), в том числе – после получения из них биологически активных добавок (БАД);

– обосновать выбор ферментных препаратов для биомодификации мышечнохрящевой ткани головоногих моллюсков и рыб;

– разработать рациональные параметры гидролиза сырья, способствующие повышению содержания растворимых нутриентов в готовом продукте, а также условия сушки.

– обосновать целесообразность получения кормовых добавок из отходов после выделения БАД;

– исследовать показатели безопасности, химический состав, пищевую и биологическую ценность кормовых добавок, установить сроки хранения готового продукта, провести оценку эффективности кормовых добавок на живых объектах;

– рассчитать экономическую эффективность производства кормовой добавки;

– разработать проекты технической документации (ТУ и ТИ) на кормовые добавки, полученные на основе биомодификации мышечно-хрящевых отходов от разделки и переработки рыб и головоногих моллюсков.

Научная новизна работы Научно обоснована технология получения кормовых добавок, отличающихся высоким содержанием легкодоступных нутриентов, из отходов, полученных при разделке рыб и головоногих моллюсков, в том числе и после получения БАД (из голов кальмара и лососевых).

Научно обоснованы выбор ферментных препаратов в зависимости от их специфичности и состава сырья, рациональная продолжительность ферментолиза, для обеспечения максимальной пищевой доступности нутриентов белкового и полисахаридного происхождения.

На основании установленной зависимости степени удаления воды от толщины слоя продукта обоснованы режимы ИК-сушки ферментолизатов из голов кальмара и лососевых.

Показана высокая биологическая ценность кормовых добавок из голов кальмара и лососевых, в том числе в смеси со стандартным кормом.

Показано, что отличительной чертой разработанных кормовых добавок является высокое содержание легкодоступных и обладающих биологической активностью аминосахаров и аминокислот, а также полиненасыщенных жирных кислот и минеральных веществ.

Установлена эффективность использования кормовых добавок, определенная по увеличению массовых показателей при кормлении молоди кеты, симы и карася серебряного.

На основании результатов регламентированных показателей безопасности кормовых добавок, в том числе микробиологических, обоснованы условия и определены сроки их хранения.

Положения, выносимые на защиту:

- Мышечно-хрящевые отходы, получаемые при разделке лососевых и кальмаров, в том числе и после производства из них БАД, являются перспективным сырьем для изготовления кормовых добавок с высоким содержанием биологически активных нутриентов;

- Ферментативная модификация мышечно-хрящевой ткани голов кальмара и лососевых обеспечивает образование легкодоступных веществ белкового и полисахаридного происхождения.

- Обоснованные условия ферментолиза, последующей термообработки и хранения позволяют получить кормовые добавки с высокой биологической ценностью за счет аминокислот, аминосахаров и полиненасыщенных жирных кислот.

Практическая значимость работы Разработана технология получения кормовых добавок из отходов после разделки гидробионтов с использованием рациональных условий биомодификации мышечно-хрящевых тканей.

Установлены основные параметры ИК-сушки ферментолизата, заключающиеся в определении рациональной температуры и толщины слоя продукта.

На основании регламентированных показателей безопасности и качества готового продукта обоснованы условия и сроки хранения кормовых добавок.

Доказана эффективность кормовых добавок из голов кальмара (КДК) и из отходов после получения БАД на примере кормления молоди кеты и карася серебряного. Кормовую добавку из голов кальмара рекомендовано использовать, как стартовый корм для молоди кеты и карповых рыб.

Кормовую добавку из голов лососевых (КДР) с высоким содержанием белков и минеральных веществ рекомендовано использовать для сельскохозяйственных животных и продукционных рыбных кормов.

Рассчитана экономическая эффективность производства кормовой добавки из мышечно-хрящевой ткани гидробионтов.

Разработан проект технических условий ТУ 9283-345-00472012-2014 «Добавка кормовая из отходов водных биоресурсов» и ТИ 347-2014.

Новизна технического решения подтверждена патентом № 2460313 «Способ производства кормовой добавки хондропротекторной направленности из отходов морских гидробионтов».

Апробация работы Основные результаты диссертационной работы были представлены на Международной конференции, посвященной 70-летию С.М. Коновалова «Современное состояние водных биоресурсов» (Владивосток, 2008); Международной научно-технической конференции «Актуальные проблемы освоения биологических ресурсов Мирового океана» (Владивосток, 2010); IV Научнопрактической конференции, «Пищевая и морская биотехнология – для здорового питания и решения медико-социальных проблем» (Светлогорск, 2011); Международной научно-технической конференции «Инновационные технологии переработки продовольственного сырья» (Владивосток, 2011).

Объектом исследования являются отходы от разделки гидробионтов и технология кормовых добавок из них.

Предметом исследований является способ биомодификации отходов, показатели качества и безопасности сырья и кормовых добавок.

Публикации Основные результаты диссертации изложены в 9 печатных работах: 4 статьи в журнале из перечня ВАК Министерства образования и науки РФ и 4 печатных работы в материалах конференций, получен 1 патент.

Структура и объем работы Диссертация включает введение, обзор литературы, методическую часть, экспериментальную часть, выводы, список литературы, содержащий 434 источников (из них 366 отечественных, 68 зарубежных).

Работа изложена на 186 страницах, содержит 54 таблицы, 25 рисунков и 10 приложений на 14 страницах.

Благодарности Автор благодарит за руководство д.т.н., профессора Слуцкую Т.Н., за помощь сотрудников ФГУП «ТИНРО-Центр»: д.т.н. Ярочкина А.П., к.т.н. Купину Н.М., к.т.н. Давлетшину Т.А., к.т.н. Кузнецова Ю.Н., к.х.н. Павеля К.Г., Самойлову Н.С., Спицына И.А., Самойленко Г.В., д.б.н. Ковековдову Л.Т., Попкова А.А., а также сотрудника ФГБОУ ВПО «Дальрыбвтуз», Институт пищевых производств, доцента кафедры технологии пищевых производств Сахарову О.В.

Список сокращений:

А/К – аминокислоты БАВ – биологически активные вещества БАД – биологически активная добавка ВСР – вторичные сырьевые ресурсы ГЖХ – газо-жидкостная хроматография ЕСТ – единые санитарно-эпидемиологические требования ЕВТ – единые ветеринарно-санитарные требования ЖК – жирные кислоты КДК – кормовая добавка из кальмара КДР – кормовая добавка из рыбы КК – кормовой коэффициент НАК – незаменимые аминокислоты ОБЦ – относительная биологическая ценность ПНЖК – полиненасыщенные жирные кислоты САК – свободные аминокислоты 1.1. Значение вторичных сырьевых ресурсов для получения технической продукции В рамках федеральной целевой программы «Развитие промышленной биотехнологии на период до 2020 года» разработано несколько проектов, направленных на использование гидробионтов и отходов от их переработки в целях производства биологически активных веществ (БАВ), пищевых и кормовых продуктов (Комплексная программа…, 2012).

Под отходами производства понимают остатки сырья и материалов, образующиеся в процессе изготовления основной продукции, которые неполностью утратили потребительскую ценность и могут быть использованы в качестве сырья при производстве новой продукции или непосредственно как вторичная продукция другого назначения (Дацун, 1995).

Недостаточный объем производства, и высокая стоимость кормовых продуктов являются препятствием для развития отечественного животноводства и аквакультуры. Использование рыбной муки ограничивается высокой ценой, а мясной и мясокостной – предупредительными мерами ветеринарного характера; традиционный для стран СНГ растительный белок в виде подсолнечного жмыха и шрота характеризуется недостаточным уровнем содержания незаменимых аминокислот (Пенионжкевич, 1969; Агеев и др., 1986; Игнатова, Колодяжная, 1989; Ибрагимов, 1990; Baeza, Leclerq, 1998; Кожарова, 2000).

Кроме того, недостаточное использование научного потенциала, кустарное производство кормов приводят к их низкому качеству, несбалансированности, недостатку белка и высоким издержкам производства (Тен, 1982;

Пошли своим путем, 2005; Васько, 2006; Развитие рыбохозяйственного комплекса..., 2008).

При этом требуется увеличение ресурсов сырья для производства кормов – расширение посевных площадей, выращивание новых более продуктивных культур, что также связано со значительными затратами средств, трудовых ресурсов и длительного времени.

По данным ФАО, мировая потребность в рыбной муке составляет 8– млн т в год (Поздняковский и др., 2005). Некоторые специалисты оценивают мировой дефицит белка кормов в начале 21-го века в 30–35 млн т в год (Сергеев, Кокаев, 2001).

Основным источником белка для животноводства в наше время и на перспективу являются корма растительного происхождения. Удельный вес этого источника в общей массе кормового белка составляет 94–95 %, из которых приблизительно 65–70 % приходится на зернофуражные и кормовые культуры (Борисов, 2009).

Применяемый в настоящее время в хозяйствах ассортимент кормовых продуктов не позволяет в полной мере сбалансировать рационы по важнейшим показателям: энергии, протеину, минералам и витаминам, вследствие чего генетически заложенный потенциал продуктивности животных используется только на 50–60 %. Несбалансированность рационов приводит к значительному (на 25–50 %) перерасходу кормов и росту удельного веса зернофуража в рационах (Семенчук, 1970). На отечественных предприятиях удельный вес зерна в комбикормах составляет 75 %, в частных хозяйствах – до 82 %, в то время как в других странах около 45 % (Ленкова, 2005).

Дефицит белка может пополняться за счет использования белковых кормовых добавок, шротов, кормовых дрожжей, но объемы их производства в России ограничены, поэтому в значительных количествах эти компоненты импортируются.

В нашей стране потребность в белковых компонентах частично покрывается за счет импорта соевого шрота (330 тыс. т/год) и рыбной муки (85 тыс.

т/год) (Рынок кормов…, 2008; Производство комбикормов…, 2010; Исследования рынка..., 2012). Однако в последнее время ужесточились требования к соевому шроту (муке) в связи с выращиванием сои с использованием генномодифицированных организмов (ГМО). Из-за участившихся случаев заболеваний животных в странах ЕС запрещено использование мясокостной муки (Розенберг, 2001). Невозможность с помощью современных методов контроля достаточно точно различать подобные продукты, получаемые в условиях новых технологий производства, привела к тому, что этот богатый источник животного белка запрещен в ряде стран к применению.

В то же время видится реальная возможность организовать производство кормовых продуктов, используя имеющийся потенциал в виде вторичных сырьевых ресурсов и отходов производства в перерабатывающих отраслях промышленности: рыбной, спиртовой, пивоваренной, крахмальной, мукомольной и др. Предприятия этих отраслей промышленности стабильно работают, а выработка из их отходов и вторичных сырьевых ресурсов дополнительной товарной продукции может повысить эффективность использования сырья в основном производстве, улучшить инфраструктуру производства и одновременно решить экологические проблемы (Антипова и др., 2002;

Кабдулшарипова, 2008; Федоренко и др., 2008).

Следует остановиться на организационных аспектах проблемы неудовлетворительного использования вторичных сырьевых ресурсов (ВСР). Организация производства из вторичных сырьевых ресурсов дополнительной продукции требует капитальных и эксплуатационных затрат, трудовых ресурсов, отвлечения на эти производства основных руководящих и инженернотехнических кадров, организации систем маркетинга и сбыта продукции и выполнения других несвойственных основному производству функций.

И хотя это побочное производство способствует снижению затрат на основное производство, этих преимуществ часто недостаточно по сравнению с возникающими дополнительными усилиями (Касьянов, 1998).

Считается, что проблема переработки вторичных сырьевых ресурсов и создание сквозных технологий, т.е. высокотехнологичного комплекса полного цикла по переработке сырья с более эффективной выработкой целевого продукта, производством кормового продукта из отходов производства и использованием его в животноводстве для производства продукции сельского хозяйства – мяса, молока, яиц и др., является актуальной (Актуальность альтернативного кормопроизводства, 2010).

Повышение уровня использования вторичных сырьевых ресурсов (ВСР) в рыбном хозяйстве позволит экономно расходовать сырьё, материалы, топливо, расширит сырьевую базу рыбной промышленности, уменьшит вредное воздействие отходов на окружающую природную среду (Дацун, 1995).

При организации новых безотходных технологий большое значение имеют ресурсосберегающие мероприятия.

Опыт по внедрению безотходных технологий в рыбоперерабатывающую отрасль имеется в Краснодарском крае.

Часть рыбы и морепродуктов разделываются в судовых условиях, часть – на береговых предприятиях. Основными отходами при переработке рыбы и морепродуктов являются голова, внутренности, кровь, плавники, кожа, чешуя (Степанцова и др., 1999).

Ряд предприятий располагает на своей территории жиромучные заводы, другие рыбообработчики направляют к ним рыбные отходы на переработку.

Получаемая на жиромучных заводах кормовая мука содержит 60–70 % полноценного белка, имеющего набор незаменимых аминокислот, значительное количество макро- и микроэлементов, ряд витаминов. Кроме муки также из отходов получают технический рыбный жир (Лебедев, 1992) В настоящее время отходы и вторичные ресурсы рыбоперерабатывающей отрасли промышленности используются лишь частично и недостаточно эффективно (Бохан и др., 1976; Пат. JP 3303949; Filinere marine…, 1992; Ярочкин и др., 1997; Дубровская, 2000; Боева, 2002, 2004; Атлантис-Пак, 2007; Девяткин, 2007; Служба защиты животных, 2009).

В то же время известно, что использование отходов переработки для изготовления кормовой продукции повышает рентабельность добычи гидробионтов в 1,5–2,5 раза (Комплексная целевая программа..., 2008).

Весьма перспективным является получение биологически активных пищевых и лекарственных препаратов из морских гидробионтов и отходов их переработки (Касьянов, 1998; Степанцова, Дмитриенко, 1998; Лебская, 2000а, б;

Палагина и др., 2005; Петрулевич, 2005; Сорокоумов и др., 2007; Новикова и др., 2008; Пащенко, Сторублевцев, 2011), однако при этом используется лишь незначительная часть такого сырья.

Одним из массовых объектов морского промысла на Дальнем Востоке являются лососевые (среднегодовой вылов лососевых 350–500 тыс. т, в том числе кеты 20–40 тыс. т) и кальмары (среднегодовой ОДУ тихоокеанского кальмара в Приморской подзоне составляет от 70 до 100 тыс. т, в то время как вылов – до 3–7 тыс. т (Снытко, 2007; Состояние промысловых ресурсов…, 2011). Среднегодовой ОДУ командорского кальмара составляет тыс. т. Общий вылов кальмаров в России – 50–80 тыс. т (Животный мир..., 1998; Лаптиховский, 1999; Дударев, 2004; Приморские рыбаки…, 2006; Мартынов, 2007; Дальневосточный капитал, 2008; Развитие рыбохозяйственного комплекса..., 2008; Рыбаки Приморья..., 2008; Рыбные ресурсы, 2008; Рынок рыбных продуктов, 2008; Государственный океанографический институт…, 2010; Обзор промысловой обстановки..., 2012; Состояние промысловых ресурсов…, 2011, 2013).

Запасы тихоокеанского кальмара в российской экономической зоне Японского моря оцениваются в 115–210 тыс. т (Мокрин, 1986; Руководство по.., 1998; Дударев и др., 2004; Состояние промысловых ресурсов..., 2005, 2011).

Основная часть голов лососевых (в среднем 50–60 тыс. т) и кальмара (в среднем до 5–6 тыс. т) (Дегтярев, 2008; Состояние промысловых ресурсов…, 2011, 2013) либо выбрасывается, либо в незначительных количествах перерабатывается на кормовую муку (Петрулевич, 2005; информация Центра системы мониторинга рыболовства и связи2). При этом теряется немалая часть полезных веществ содержащихся в этом сырье (Комаров, Мануйлова, 2001; Дегтярев, 2008; Утилизация отходов переработки, 2008; Технологическое оборудование, 2010).

В настоящее время отходы от разделки промысловых видов кальмара:

ганглии, хрящевая капсула (Новые технологии..., 1992) – частично используются при производстве биологически активных добавок, таких как «Тинростим», в Центр системы мониторинга рыболовства и связи (ФГБУ ЦСМС).

которых используется нервная ткань (ТУ 9283-316-00472012-07), и «Артротин», которую получают из хрящевой ткани (ТУ 9283-243-00472012-04).

1.2. Характеристика и свойства компонентов, входящих в состав мышечно-хрящевых тканей гидробионтов Исследования сырья водного происхождения показали, что в соединительных тканях морских беспозвоночных (в мышцах, коже, слизях на поверхности кожи) находится около 1 % кислых гликозаминогликанов, имеющих сходство с хондроитинсульфатами хрящей позвоночных (Hunt, 1970).

Состав гликозаминогликанов и места их локализации в мышцах, коже и костях рыб подробно исследованы методами гистохимии (Сафронова, 1976, 1980).

Имеются сведения о содержании гексозаминов (аминосахаров) в хрящевой ткани китов (Киселев, Мрочков, 1975; Иванкин и др., 1984), акулы Squalus acanthias (Doyle, 1968), скатов, осетров, кальмаров (Сафронова, Дацун, 2004;

Суховерхова, 2006).

Известны достоверные данные о содержании аминосахаров и их качественный состав у наземных животных, человека и рыб (Стейси, Баркер, 1965;

Balazs, 1965; Rosenberg et al., 1965; Prodi, 1966; Слуцкий, 1969; Masumura, 1971).

Характерным для хрящевой ткани рыб и других живых организмов, имеющих суставы, в том числе и человека, является присутствие специфичного компонента – хондроитина, содержащего природные аминосахара. Биологический кальций в хрящевой ткани находится в связанном с коллагеном и хондроитином состоянии. В целом этот природный биокомплекс и есть тот компонент, который делает продукты, содержащие лососевые хрящи, уникальным молекулярным питанием (Борисов, 2009).

Хрящ – полупрозрачная, бессосудистая соединительная ткань, выполняющая опорно-механическую функцию. Считается, что истинный хрящ имеется только у позвоночных. Но многие беспозвоночные, например кольчатые черви, членистоногие, моллюски также имеют хрящеподобную ткань, построенную из аналогичных исходных макромолекул (Хелминен и др., 1991).

По гистологическому строению хрящ головоногих моллюсков близок к хрящу позвоночных животных (Павлова и др., 1988).

У некоторых видов костистых рыб (тихоокеанские лососи) многие части черепа образованы хрящевой тканью. У большинства костистых рыб количество хрящевой ткани в межпозвоночных дисках, плавниках, черепной коробке незначительное.

У головоногих моллюсков хрящевым скелетом является головная капсула сложной формы, состоящая из трех обособленных отделов, в которых находятся нервные ганглии (Несис, 1982).

Высокое содержание в головах кальмара и лососевых хрящевой ткани предопределило поиск в ее составе биологически активных компонентов – аминосахаров (Степаненко, 1968), являющихся постоянным компонентом хрящей и функциональным пищевым ингредиентом.

К наиболее богатым аминосахарами и их массовым источникам относятся кожа многих видов рыб и различные ткани беспозвоночных (100–200 мг/100 г сырой ткани). В то же время наиболее высокое содержание аминосахаров (до 480 мг/100 г сырой ткани) характерно для ограниченного круга тканей (хрящи, кожа, плавники и др.) и органов морских биообъектов (Вахрушев и др., 2008).

Хрящевая ткань образована хондробластами и хондроцитами, расположенными группами или поодиночке в окружающем их межклеточном веществе, состоящем из коллагеновых волокон и основного (аморфного) вещества.

Хондроциты составляют 1–10 % объема хряща и отвечают за биосинтез и поддержание матрикса. Волокна состоят из молекул коллагена II типа, специфичного для хрящевой ткани, и образуют сеть, плотность которой возрастает вокруг клеток. Основное вещество содержит высокомолекулярные полимеры – гликозаминогликаны, содержащие значительное количество аминосахаров – гексозаминов, которые в тканях присоединены к белкам ковалентной связью (Павлова и др., 1988). В хрящевой ткани гликозаминогликаны вместе с коллагеном II типа образуют сложный протеогликановый комплекс, молекулярная структура которого обусловливает упругость хряща. Подобное сочетание структурных элементов придает уникальные эластические свойства хрящу и позволяет противостоять механическим воздействиям (Слуцкий, 1985;

Tryggvason et al., 1987).

Гликозаминогликаны представляют собой длинные неразветвлённые цепи гетерополисахаридов. Они построены из повторяющихся дисахаридных единиц. Одним мономером этого дисахарида является гексуроновая кислота (Dглюкуроновая кислота или L-идуроновая), вторым мономером – производное аминосахара (глюкоз- или галактозамина). NH2-группа аминосахаров обычно ацетилирована, что приводит к исчезновению присущего им положительного заряда. Кроме гиалуроновой кислоты, все гликозаминогликаны содержат сульфатные группы в виде О-эфиров или N-сульфата (Бочков, и др., 1984; Bucci, 1988; Северин, 2004; Foot, Mulholland, 2005).

Молекулы гиалуроновой кислоты состоят из чередующихся остатков глюкуроновой кислоты и N-ацетилглюкозамина. Эти дисахаридные фрагменты связаны в молекуле -1,4-связями (Пивненко, Суховерхова, 2010).

В зависимости от наличия сульфатных групп гликозаминогликаны подразделяют на несульфатированные (гиалуроновая кислота и хондроитин) и сульфатированные (хондроитинсульфаты). Благодаря обилию сульфатных, а также карбоксильных групп уроновой кислоты, они являются полианионами и имеют отрицательный заряд, что позволяет им связываться с белками и липидами (Видершайн, 1980).

Гликозаминогликаны входят в состав различных тканей и участвуют в реализации большого числа жизненно важных процессов. Кроме выполнения структурно-механических функций, они участвуют в процессах биологического узнавания, межклеточного взаимодействия, где важную роль играют специфические углеводные последовательности гликозаминогликановых цепей, степень их сульфатирования и размер (Слуцкий, 1969; Poole, 1986; Ruoslahti, 1989; Plaas et al., (1998)1999).

Коллагены кожи в больших концентрациях содержат пролин и оксипролин, глицин и аланин (около 50 % от содержания других аминокислотных остатков), ароматические и серосодержащие аминокислоты практически отсутствуют или содержатся в незначительных количествах (Неклюдов, 2003; Васильев, 2004). Высокая концентрация оксилизина способствует увеличению количества связанных с ним углеводов (Слуцкий, 1985).

Белки коллагена составляют около половины массы сухого вещества суставного хряща теплокровных; вблизи суставной поверхности их концентрация приближается к 90 %. В некоторых видах хрящевой ткани коллагены количественно преобладают над другими белками, обеспечивая прочность на растяжение и разрыв (Мазуров, 1974; Слуцкий, 1985).

У костистых рыб коллагеновые белки преобладают в коже, сухожилиях, плавательном пузыре; у моллюсков – в кожных покровах и опорных хрящевых элементах; у кольчатых червей и иглокожих – в кожно-мускульном мешке.

В табл. 1 приведены данные о содержании коллагена и аминосахаров в соединительных тканях различных видов гидробионтов.

Содержание аминосахаров и коллагена в соединительной ткани гидробионтов, Хрящевые рыбы (хрящевой скелет) Костистые рыбы (хрящевая ткань) Дальневосточные лососи 0,52 ± 0,02 16 ± 0,03 Суховерхова, Голотурии Трепанг (мускульный мешок) 7,2 ± 0,05 51 ± 0,5 Слуцкая, 1972, Кукумария (мускульный меСлуцкая, 1972, шок) Из данных табл. 1 следует, что содержание коллагена у хрящевых рыб находится примерно на одном уровне, у костистых рыб, в частности лососей, этот показатель несколько ниже.

Наибольшее количество аминосахаров содержится в скелете хрящевых рыб и хрящевой капсуле кальмара.

В мышечной ткани голотурий (трепанг и кукумария) содержание гексозаминов (аминосахаров) находится в пределах 5,0–7,5 %, а количество коллагена в 2 раза выше, чем у хрящевых рыб.

Наименьшее количество аминосахаров и коллагена в костистых рыбах, но, учитывая объемы их вылова и количество отходов от них, эти цифры не кажутся столь малыми.

Имеются многочисленные сведения о биологической активности гликозаминогликанов и препаратов, содержащих гексозамины (аминосахара) (Игнатова, Гуров, 1990; Шитов, 1992; Алексеева и др., 1995, 2004; Timothy, Michael, 2000; Abdel Fattah, Hammad, 2001; Данилевская, Николаев, 2002; Mazieres et al., 2007; Пат. РФ 2077328; Пат. WO 69444). Активность гликозаминогликанов, обусловленная полианионной структурой, зависит от наличия в каждой дисахаридной единице хотя бы одной отрицательно заряженной карбоксильной или сульфатной группы, обеспечивающей высокую гидрофильность и поверхностно-активные свойства. Гиалуронат, по сравнению с другими гликозаминогликанами, имеет наименьший заряд, тем самым проявляя наименьшие хондропротекторные свойства.

Гликозаминогликаны являются предшественниками макромолекул суставного хряща, и введение их в организм вызывает определенное стимулирующее действие на процесс регенерации хрящевой ткани за счет использования "готового строительного материала" и способности накапливаться в очагах воспаления (Шитов, 1992; Руденко, 2005). Стабильное поступление в организм гликозаминогликанов, в первую очередь глюкозамина и хондроитина сульфата, оказывает стимулирующее воздействие на хондроциты и фибробласты, создавая более комфортный режим для продуцирования гликозаминогликанов, протеогликанов и коллагена. При этом создаются благоприятные метаболические условия для восстановления поврежденных клеток (Konador, Kawiak, 1977;

Панасюк, Ларионов, 2000; Omata et al., 2000). Это имеет существенное значение для растущих (молодых) животных, когда идет интенсивный процесс формирования хрящевых тканей, а также при патологиях, когда образование компонентов хрящей снижается (Palmieri еt al., 1990; Setnikar et al., 1991; Алексеева и др., 1995; Timothy, Michael, 2000).

Установлено, что при пероральном введении глюкозамина моносульфата и хондроитин-сульфата наблюдается быстрое и практически полное всасывание, что свидетельствует об их высокой биодоступности (Palmieri et al., 1990;

Volpi, 2002). При изучении фармакокинетики глюкозамина моносульфата на собаках с помощью радиоизотопного метода было установлено, что после однократного орального введения препарат быстро обнаруживается в плазме и исчезает из нее (Setnikar et al., 1986). При изучении распределения препарата в организме отмечался быстрый переход его из крови в соединительную ткань с избирательным накоплением глюкозамина моносульфата в суставном хряще (Postmen et al., 1988).

Фармакологическое воздействие глюкозамина на человека изучали методом хроматографии (Murata, Yokoyama, 1985; Volpi, Bolognan, 1993). Полученные результаты имели сходство с результатами, зафиксированными при изучении этого процесса на кроликах и собаках. При изучении биодоступности хондроитина сульфата у собаки радиоизотопным методом (Palmieri еt al., 1990) было установлено, что при пероральном применении она превышала 70 %. Уровень препарата быстро нарастал в плазме крови и достигал максимума через ч. При изучении распределения хондроитинсульфата было выявлено, что в основном он концентрируется в хондроитинсодержащих тканях, в первую очередь в суставном хряще (Van der Kraan et al., 1990).

Таким образом, гликозаминогликаны имеют высокую биодоступность при пероральном введении и способны избирательно накапливаться в синовиальной жидкости.

Глюкозамин и хондроитинсульфат обладают широким спектром терапевтического действия и высокой степенью безопасности. Многочисленные исследования по изучению токсичности и побочных эффектов доказали их безопасность (Carreno et al., 1986; Deal, Moskowitz, 1999; Omata et al., 1999; Timothy, Michael, 2000; Abdel Fattah, Hammad, 2001; Wilkens et al., 2010).

Кроме того, что гликозаминогликаны являются активными стимуляторами восстановления костной ткани (Серов, Шехтер, 1981; Kelly, 1998; Sandya, Sudhakaran, 2007), отмечено ингибирующее действие глюкозамина на образование различных опухолей. Воздействие глюкозамина на рост карциносаркомы проверено in vivo на крысах: при введении глюкозамина внутривенно и подкожно у испытуемых животных (в 56 % случаев) отмечена регрессия опухолей и значительное удлинение срока жизни. Ингибирование роста опухолей наблюдалось при использовании глюкозамина, для иных сахаров подобного эффекта не выявлено (Bekesi et al., 1969; Bekesi, Winzler, 1970; Michel et al., 2005; Reichenbach et al., 2007).

Первоначально существовало мнение о том, что коллаген выполняет только механические функции и имеет очень медленный метаболический оборот. Однако эти сведения касаются только его нерастворимой фракции, тогда как фракции проколлагена имеют очень короткий биологический период полураспада, составляющий несколько десятков часов (Васильев, 2004). В 1950-е гг.

было установлено, что коллаген играет очень важную роль в дифференциации и пролиферации клеток. Из этих представлений исходит применение диеты, богатой коллагеновым гидролизатом, в медицине (А.с. № 192437; Пат. US 4216204; Пат. № 233785), в частности при остеопорозе (Пат. WO 9605851; Пат.

US 6025327), ревматоидном артрите (Пат. US 5856446; Заявка WO № 98/44929).

Кроме того, коллаген предлагается использовать в качестве полноценных пищевых волокон как средство профилактики заболеваний желудочно-кишечного тракта (Неклюдов, 2003). Широко известно использование коллагена в пищевой промышленности (Джафаров, 1990; Антипова, Глотова, 2000; Пат. РФ 2096966).

1.3. Получение и применение пищевых и кормовых добавок, включая специализированные Рыбная мука является высокоценным кормовым продуктом и широко используется в виде добавки в рационы сельскохозяйственных животных, птиц, рыб, а также в пушном звероводстве.

Рыбная мука высокого качества обеспечивает сбалансированное количество незаменимых аминокислот и жирных кислот (например, докозагексаеновой и эйкозапентаеновой кислот) для оптимального развития, роста и размножения, особенно рыб начальных стадий развития (Miles, Chapman, 2006).

Важными резервами увеличения объемов выпуска рыбной муки являются глубокая переработка сырья, совершенствование технологии производства, увеличение коэффициента использования мощности рыбомучного производства.

Кости рыб вместе с отходами преимущественно направляют на получение кормовой муки (ГОСТ 2116-2000; Боева, 2002, 2004), рыбных белковых концентратов и гидролизатов (Бохан, Карпов, 1976; Ярочкин, 2001; Кузнецов, 2002).

По данным Центра системы мониторинга рыболовства и связи (ФГБУ ЦСМС), головы кальмара для производства кормовой муки не используются, так как технологичекие параметры обработки сырья (ГОСТ 2116-2000) приводят к свариванию сырья, т.е образованию монолитной массы, вследствие высокого содержания в тканях коллагеновых белков и высоких температур обработки.

Для производства кормовой муки используют различные способы: прямой сушки, прессово-сушильный, центрифужно-сушильный, комбинированный, экстракционный. Первые три способа являются основными, остальные – их модификациями (Артюхова и др., 2001).

Производство рыбной муки состоит из ряда операций, основными из которых являются варка и упаривание при 85–100 °С и сушка рыбного сырья при 75–80 °С (Исаев, 1985).

Способ прямой сушки. Способ прямой сушки заключается в одновременном разваривании и сушке сырья без промежуточного уменьшения содержания воды в нем путем его прессования. Этим способом рекомендуется обрабатывать рыбное сырье с содержанием липидов до 5 % (например, отходы от филетирования минтая и т.д.), выход муки составляет до 24 %.

К недостаткам способа прямой сушки можно отнести невозможность обработки сырья жирностью более 5 %, так как при действии высоких температур происходят значительные изменения липидов, что ускоряет протекание окислительных процессов при хранении. Кроме того, этим способом невозможна обработка сырья с большим содержанием коллагена. Так, коллаген при длительной тепловой обработке меняет свои свойства (Гиляров и др., 1986; Ковалев и др., 2001), образуя при высушивании монолитную массу, которую невозможно выгрузить из аппарата. Нагревание при температуре 95 °С в течение 6 ч приводит к желатинизации 74 % коллагена (Артюхова и др., 2001).

Преимущества способа:

- простота конструкции установок, их обслуживания и регулирования параметров технологического процесса;

- небольшие размеры установок, незначительные энергоемкость и потребление пара;

- наибольший выход кормовой муки по сравнению с другими способами.

Прессово-сушильный способ. Этот способ наиболее распространен при производстве кормовой муки.

Сырье (рыбные отходы) после измельчения с помощью шнека и пара подается в варильник. Разваренная масса поступает в винтовой пресс, где частично происходит удаление жидкой части (подпрессового бульона). Твердый остаток (жом), содержащий 50–55 % воды, поступает в сушилки для уменьшения содержания воды в продукте до 8–10 %.

Преимущества способа: относительно простое оборудование, возможность переработки сырья различного химического состава, более высокая степень уменьшения содержания воды в массе перед сушкой.

К недостаткам можно отнести: сложность подбора режимов обработки сырья, трудности при переработке сырья с высоким содержанием жира, высокие энергозатраты (применяются выпарные установки), невозможность обработки всего объема подпрессовых бульонов (около 45 % их объема не используется).

Центрифужно-сушильный способ. Этот способ является модификацией прессово-сушильной схемы производства кормовой рыбной муки.

Сырье в измельченном виде подают в варильник, затем перекачивают насосом в центрифугу. В ней происходит разделение проваренной массы на жом и бульон. На трехфазных центрифугах разваренную массу разделяют на плотную часть, бульон и жир. Плотная часть после центрифугирования, содержит 60–63 % воды, т.е. больше, чем после прессования массы, что требует дополнительного расхода энергии при сушке.

Отцентрифугированную плотную часть высушивают, а бульон обрабатывают по схеме, используемой в прессово-сушильном способе. Выход муки составляет до 20 %. Содержание жира по сравнению с прессово-сушильным способом уменьшается на 25–30 %.

К преимуществам способа можно отнести: большой выбор режимов обработки сырья, возможность автоматизации процесса, обработка сырья любой жирности.

Недостатки способа: сложность оборудования; большие площади, занимаемые установкой; необходимость установки выпарных аппаратов; значительный расход энергии.

Производство рыбной муки с использованием добавок. Согласно ГОСТу 17536-82 содержание липидов в костной кормовой муке не должно превышать 10 %. Такого показателя при использовании традиционных способов получения кормовой муки достичь очень трудно без использования дополнительных приемов, в частности применения добавок – поверхностно-активных веществ (ПАВ), которые вносятся на стадии разваривания сырья.

В основе способа уменьшения содержания липидов лежит процесс образования эмульсии – жир : вода, в системе плотные вещества – липиды – вода (рыбное сырье). Таким образом, часть липидов переходит из плотной части в жидкую, что и улучшает условия высушивания плотной части.

Преимущества данного способа:

- регулирование степени выделения жира из сырья независимо от количества липидов;

- улучшение состава жирных кислот рыбной муки;

- получение продукта длительного хранения.

К недостаткам способа следует отнести увеличение стоимости затрат за счет необходимости использования НПАВ (неионогенных поверхностноактивных веществ).

Кормовая ценность. Кормовая ценность рыбной муки определяется ее составом. Промышленность производит рыбную муку с содержанием протеина не менее 50 %, воды – не более 12 % и жира – обычно не более 10 %. По содержанию перевариваемого протеина она занимает основное место среди животных и растительных кормов, являясь источником животных белков.

При воздействии высоких температур в процессе получения кормовой муки наиболее важны изменения аминокислотного состава белков. Особенно не стойки к высоким температурам гистидин, цистеин и триптофан (в случае упаривания бульона при температуре более 90 °С).

При высушивании жома уменьшается содержание лизина, лейцина, изолейцина, треонина.

Липиды, содержащиеся в сырье, также оказывают влияние на изменение содержания лизина, особенно на стадии сушки жома.

В белках муки при нагревании и в процессе ее хранения между аминокислотами и сахарами возможно образование дополнительных связей, что делает аминокислоты не доступными для животного организма (Исаев, 1985; Артюхова и др., 2001).

Таким образом, традиционные методы получения рыбной муки не позволяют сохранить в должной мере необходимые для развития организма животных питательные и биологически активные вещества.

Как известно, биологическая ценность кормовых продуктов во многом определяется содержанием незаменимых аминокислот, их сбалансированностью, соотношением, обеспечивающим синтез протеинов в организме и необходимые процессы обмена (Исаев, 1985).

Рыбные белковые концентраты известны в пищевой промышленности как источники ценных животных белков. Наиболее крупными производителями этих продуктов являются Япония, Норвегия, Германия, Польша, США. Производство рыбных белковых концентратов осуществляется главным образом из мелких видов рыб и рыб с пониженной товарной ценностью.

На современном рынке помимо рыбной муки представлен целый ряд товаров на ее основе. В большинстве случаев это смеси рыбной муки с животными и/или растительными компонентами, иногда с добавлением синтетических аминокислот, витаминов, микроэлементов. Состав такой смеси искусственно приближен к натуральной рыбной муке и проходит под названием «аналог рыбной муки». Реже встречаются так называемые «протеиновые (белковые) концентраты на основе рыбной муки» и «комбинированные продукты на основе рыбной муки», в состав которых входит около 50 % рыбной муки и смесь растительных и животных белков. В отличие от аналогов рыбной муки, здесь обычно не применяют добавок аминокислот или микроэлементов, так как не стремятся повторить компонентный состав натуральной рыбной муки.

Рыбная мука бывает условно двух видов. Промысловая мука вырабатывается на судне в процессе лова рыбы. Чаще всего для изготовления такой муки используются рыба, которую не успели заморозить, и прилов (рыба, которая попадает в сети вместе с основной, на которую идет добыча) и отходы после разделки рыбы, если такая ведется на судне.

Второй вид муки – это береговая, которая производится на рыбомучных установках, находящихся на берегу.

При промысле рыбы особенность лова такова, что вместе с рыбой на судно поднимается и песок, который переходит в рыбную муку, где может составлять до 2 % (Бабенко, 2012).

Обзор литературы показывает (Исаев, 1985; Подобеда и др., 1996; Рыбная кормовая мука, 2011), что рыбная мука по сути является не кормом, а кормовой добавкой, ее количество в зависимости от назначения корма варьируется от до 50 %, и она является источником белка и минеральных веществ (Miles, Chapman, 2006).

Кормовые добавки – вещества, которые в небольшом количестве добавляют к рациону и благодаря этому либо устраняют дефицит жизненно необходимых веществ (например, аминокислот, микроэлементов, витаминов), либо оказывают положительное влияние на животных, преобразование кормов, качество продукции (Flachowsky, 2006).

В современном животноводстве большое значение приобретают высокие технологии, необходимые для улучшения, ускорения, увеличения роста и развития, продукционности птицы, скота и рыб. Особая роль в этих важных процессах отводится кормовым добавкам.

Несбалансированные корма приводят к уменьшению удоев и снижению жирности молока, к ухудшению качества мяса, снижению яйценоскости и других важных показателей, как следствие – не только количественная, но и качественная потеря продукции (Кормовые добавки для…, 2011).

Значение кормов и кормовых добавок в получении высококачественной продукции трудно переоценить. Свиньи переводят в пищевую продукцию (мясо, сало) 20 % питательности кормов, козы – 15 %, птицы – 7 % на яйцо и 5 % на мясо) (Пат. РФ 2041647).

Правильно подобранные рационы питания животных с использованием эффективных кормовых добавок и биологически активных веществ в составе различных кормовых смесей являются основой повышения рентабельности животноводческих хозяйств, значительно удешевляя себестоимость рационов, сохраняя при этом высокие продуктивные качества животных.

Рационы кормления рыб могут значительно различаться в зависимости от пищевых потребностей разных видов рыб, а также в зависимости от способа выращивания – в открытых водоемах, прудах или специальных бассейнах. Программы кормления рыб включают в себя весь диапазон кормов для полного цикла выращивания: стартовые корма, корма для молоди и сеголеток, продукционные корма, корма для производителей, лечебно-профилактические корма (Александров, 2005).

Многие производители кормов и кормовых продуктов предлагают своим потребителям программу кормления, которая соответствует условиям и задачам определенного хозяйства.

В последние годы наметилась тенденция к получению кормовых продуктов методом ферментирования, как за счет собственных ферментов, так и с добавлением ферментных препаратов определенной направленности.

Применение ферментных препаратов позволяет более полно разрушить структуру сырья (Глотова и др., 2012), высвободить находящиеся в нем вещества и, как следствие, сделать их более усвояемыми.

В аквакультуре, как и в других отраслях сельского хозяйства, проводятся исследования по поиску дополнительных и альтернативных источников высококачественного животного и растительного белка и других необходимых для здорового развития организма животных биологически активных веществ (Miles, Chapman, 2006).

Одним из наиболее современных направлений использования отходов рыбной промышленности является получение:

- биологически активных веществ;

- специализированных кормовых добавок, содержащих БАВ и имеющих широкое применение, а также кормов на их основе (Головачев, 2007; Пат. РФ 2189762).

Так, еще в 50-х гг. XX века были проведены работы по поиску, выделению и испытанию биологически активных компонентов хрящевых тканей некоторых видов животных, главным образом крупного рогатого скота и некоторых акул (Prudden, 1957).

Впервые было установлено, что водные экстракты из бычьего и акульего хряща содержат ингибиторы ангиогенеза, т.е. замедляют процесс образования новых кровеносных сосудов в органах или тканях (Folkman, 1963; Strydom et al., 1985). Немного позже ученые Сорджент и его коллеги (Sorgente et al., 1976) показали, что 1 М гуанидиновый экстракт хрящей акул содержит фракцию с молекулярной массой 16 кДа, которая обладает антипротеиназной активностью.

Лэйн и его коллеги (Lane, 1992) разработали технологию получения препарата из акульего хряща. Продукт представлял собой сублимированную хрящевую ткань, и его клиническое исследование показало положительные результаты при лечении опухолей.

В настоящее время известны десятки препаратов, полученные из хрящевой и костной ткани сельскохозяйственных животных (Пат. РФ 2082416), хрящевой ткани рыб (Пат. РФ 2161002; Пат. РФ 2241473; Пат. US 6149946; Пат.

РФ 2181292; Пат. US 20030162744), костей рыб (Волошина и др., 2005; Фатыхов и др., 2010), предназначенные для употребления в качестве БАД к пище и проявляющие хондропротекторное действие.

У различных животных (крупный рогатый скот, лошади, собаки, свиньи) нередко имеются проблемы с опорно-двигательным аппаратом, вызванные недостатком в организме аминосахаров. Для решения этих проблем применяются различные препараты с высоким содержанием глюкозамина и хондроитинсульфата (Животноводство и ветеринария, 2010; Профессиональное питание и уход, 2010; Заболевания опорно-двигательного аппарата, 2012).

На территории Российской Федерации зарегистрировано более 65 наименований препаратов на основе хондроитинсульфата натрия (Шкарина, 2009).

Существует способ получения препарата хондропротекторного действия из хрящевой ткани хрящевых рыб – акулы-катрана, ската звездчатого, русского осетра, включающий измельчение хрящевой ткани, обезжиривание, обработку ткани ферментами протеолитического действия из гепатопанкреаса камчатского краба, инактивацию ферментов, отделение продуктов ферментации с последующей их сушкой (Пат. RU 2355240). Ферментативный гидролиз проводят в течение 24 ч с использованием коллагеназы с активностью 773 ед/мг при концентрации фермента в суспензии 0,1 %, температуре 42 °С. Осаждение липидов проводят 1 %-ным раствором хитозана в соляной кислоте, далее гидролизат может быть дополнительно очищен от солей диализом при температуре 20–22 °С в течение 48 ч против дистиллированной воды, полученный раствор высушивают (Сорокоумов и др., 2007; Пат. RU 2355240).

Известен способ и продукт с использованием хорды осетровых рыб (Пат. US № 6162787), который представляет собой экстракт из высушенной в жидком азоте хорды осетровых рыб, которую обработали 0,01 М раствором уксусной кислоты. Продукт предназначен для облегчения симптомов и лечения артрита, в частности ревматоидного артрита у млекопитающих, в том числе человека.

Согласно Методическим рекомендациям 2.3.1.2432-08 суточная величина адекватного уровня потребления гексозаминов (аминосахаров) в составе пищевых и биологически активных веществ, входящих в продукты питания и БАД, для взрослого человека составляет 0,70 г/сут (Методические рекомендации..., 2008). Для животных эта величина составляет 0,25–1,50 г/сут.

Препарат, стимулирующий хондрогенез, «Стимбон-3» (Заявка РФ № содержащий костный коллаген, продукты гидролиза гликозаминогликанов костной ткани, получают из трубчатых костей сельскохозяйственных животных. В одном литре препарата содержится: костный коллаген – 7,0–8,0 г; аминосахара – 1,5–2,0 г; гексозы – 3,0–4,0 г; уроновые кислоты – 5,0– 7,0 г; костный неколлагеновый белок с гипогликемическим действием – 45– мг. Способ получения препарата заключается в том, что из декальцинированного матрикса костной ткани получают коллаген и продукты кислотного гидролиза гликозаминогликанов. Из экстракта кости выделяют фракцию пептидов с относительной молекулярной массой 5–10 кДа нейтральной и основной природы, добавляют коллаген, ампулируют и стерилизуют.

«Хондрамин» – биорегулятор хрящевой ткани, разработанный СанктПетербургским институтом биорегуляции и геронтологии (ТУ 9358-022представляет собой кислотный экстракт хрящевой ткани крупного рогатого скота и содержит комплекс низкомолекулярных пептидов с молекулярной массой до 15 кДа. Препарат рекомендован для ускорения восстановления функций хрящей при воспалительных и обменно-дистрофических поражениях суставов.

Известен способ получения комплексного продукта (Пат. РФ 2082416), содержащего мукополисахариды и коллаген из животного сырья. Способ включает измельчение сырья, гидролиз 2,0–8,8 %-ным водным раствором гидроокиси натрия в течение 8–70 ч в зависимости от вида исходной ткани, гомогенизацию, экстракцию кислотой, выделение и сушку целевого продукта. Экстракцию проводят хлорной кислотой при рН 1,5–2,5, а целевой продукт выделяют из экстракта диализом против дистиллированной воды через полупроницаемую мембрану.

Также известен способ получения продукта, представляющего собой белковый рыбный концентрат (ТУ 9283-130-02067936-2004), получаемый из хребтов лососевых рыб (род Oncorhynchus) с прирезями мяса, которые предварительно подвергали термической обработке (Волошина и др., 2005). Предлагается добавлять рыбный концентрат из костей рыб в комплексе с витамином Д в кисломолочную продукцию с целью получения функционального продукта питания (Палагина и др., 2005).

Способы получения хондропротекторных препаратов из хрящевой ткани рыб предусматривают использование нативной хрящевой ткани и их экстрактов. Наиболее часто используемым сырьем являются хрящи акул.

Доказано, что препараты из хрящей акул обладают позитивным эффектом и оказывают влияние на регрессию опухоли. Эти лечебнопрофилактические продукты (Пат. РФ 2156132; Пат. РФ 2181292; Пат. WO 96/23512) представляют собой водные экстракты акульего хряща.

В пищевой и кормовой промышленности последнее время широко применяются гидролизаты и ферментолизаты, полученные различными методами.

Так, предложен способ получения гидролизатов из рыбы (Заявка № 1755417), преимущественно из рыбных продуктов или отходов от их переработки, путем ферментирования неизмельченного сырья.

Известен способ получения гидролизатов, предусматривающий измельчение рыбных продуктов или отходов их переработки, смешивание с водой, нагревание смеси, внесение протеолитического ФП, ферментацию, фильтрацию и сушку, отличающийся тем, что с целью повышения выхода продукта, улучшения его качества и удешевления процесса смешивание сырья с водой ведут в соотношении 2 : 1 – 1 : 1, нагрев осуществляют до температуры 40–45 °С, а ферментацию проводят в течение 0,5–2,5 ч, используя протосубтилин ГЗх (Заявка № 1559466).

Запатентован продукт (Пат. РФ 2093040) из белок- и углеводсодержащего сырья водного происхождения, представляющий собой гидролизат, содержащий меланоидины в количестве > 8 % к содержанию сухих веществ, в качестве сырья использованы гонады кальмара, в продукте содержатся меланоидины с молекулярной массой до 5000 Да в количестве 38–50 мг/мл. рН продукта составляет 5,0–6,0; он содержит аминного азота 1,2–1,5 %, соли 15–16 % от общей массы продукта и сухих веществ 30–36 %. Полученный продукт обладает хорошим вкусом, необходимой гемостимулирующей активностью и проявляет антистрессовые свойства.

Разработан способ получения гидролизата из кукумарии (Пат. РФ 2095000), включающий промывку сырья, его измельчение, смешивание с водой, введение фермента, проведение ферментативного гидролиза с последующим отделением гидролизата. В качестве сырья используют кукумарию, которую разделывают, вводят фермент, полученный из внутренностей краба, в количестве 1000–3500 протеолитических единиц (ПЕ) на 1 кг кукумарии. Ферментативный гидролиз проводят при 30–45 °С в течение 14–24 ч.

Получен кормовой концентрат, содержащий (мас.%): аминокислоты 0,2– 25,0, липиды 3,0–71,0 и наполнитель – остальное. Для получения корма кормовые смеси обогащают вышеуказанным концентратом при следующем соотношении сухих веществ компонентов (мас.%): кормовой концентрат – 2,0–45,0, кормовая смесь – остальное. С помощью разработанного продукта эффективно обогащают корма свободными незаменимыми аминокислотами, протеинами, ненасыщенными жирными кислотами и минеральными элементами. Повышение качества корма позволяет экономить до 16,4 % протеина и до 20,0 % зерна (Зубец и др., 2003).

Отечественный производитель ООО «Полидекс» выпускает кормовые добавки хондропротекторного действия «Polidex Гелабон» и «Polidex Глюкогекстрон плюс» для собак и кошек, состоящие из гидролизата коллагена сухожилий, хрящей, связок, костей, кожи, и витаминно-минеральные комплексы, применяемые в профилактических целях в течение 2–3 мес до трех раз в год (Матвеева, 2010).

Известен препарат «Страйд Плюс», относящийся к новому поколению хондропротекторов, предназначенных для профилактики и лечения воспалительных и дегенеративных заболеваний суставов у собак. Многие собаки страдают от дегенеративных заболеваний суставов конечностей и позвоночного столба, при которых поражаются суставные хрящи, за счёт чего суставы становятся менее эластичными, болезненными и возникает хромота. Ранее считалось, что ткань суставного хряща не может регенерировать, но современные многочисленные исследования подтвердили, что суставной хрящ может при определённых условиях восстанавливаться. Этому способствуют входящие в «Страйд плюс» действующие вещества: гиалуроновая кислота 745 мг, глюкозамина гидрохлорид 16900 мг, хондроитина сульфат 3300 мг и др. Содержащаяся в препарате гиалуроновая кислота – главный компонент суставной (синовиальной) жидкости – придаёт хрящевой ткани вязко-эластичные свойства, а также обеспечивает снижение воспаления. Глюкозамин способствует восстановления ткани хряща, обеспечивает его прочность. Также глюкозамин увеличивает уровень гиалуроната и обладает противовоспалительными свойствами. Хондроитина сульфат способствует гидратации хряща и повышает его амортизирующие возможности, способствует восстановлению суставной сумки и хрящевой поверхности суставов. Хондроитин обладает противовоспалительным и анальгезирующим действием, препятствуя разрушению хряща ферментами, вырабатывающимися при воспалительных процессах в суставах. Хондроитин также участвует в построении основного вещества костной ткани. Метилсульфанилметан – источник биодоступной серы, которая необходима для синтеза соединительной ткани, в том числе основного белка соединительной ткани – коллагена. Марганец принимает активное участие в углеводном и липидном обмене, в процессах остеогенеза, нормализует рост (Ветеринарная энциклопедия, 2009; Препарат для лечения..., 2009; Препараты для лечения опорно-двигательного аппарата..., 2009; Страйд Плюс..., 2010).

Разработана чешская кормовая добавка «Гелакан–Дарлинг», состоящая из высушенных гидролизатов коллагена, которая представляет собой смесь коллагеновых пептидов, олигопептидов и аминокислот, оказывающую положительное действие на клетки тканей опорно-двигательной системы собак, так как восстанавливает ткани суставов, укрепляет кости, связки и сухожилия (Gelacan Darling, 2009; Профессиональное питание и уход, 2010).

Препарат фирмы Сanina «Petvival Gag Forte» создан на основе новейших разработок в сфере физиологии питания домашних животных. «Petvival Gag»

содержит гликозаминогликаны, комплекс натуральных компонентов, разработан с учетом потребностей растущего организма собак и необходим для нормального формирования скелета, зубов добавки..., Одним из примеров практического использования гликозаминогликанов морского сырья является получение лечебно-профилактического продукта на основе хрящевой ткани скатов (Пат. РФ № 2399332). Наряду с растительными компонентами, препарат содержит фарш из плавников щитоносных скатов и других рыб. Его употребление обеспечивает улучшение состояния хрящевой ткани и суставной жидкости за счет глюкозаминов, содержащихся в хрящевой ткани скатов.

Для обеспечения лучшего усвоения хрящевой ткани считается целесообразной разработка приемов, способствующих разрушению таких тканей (Иванкин и др., 1984).

Существующий рынок кормовой продукции представлен либо кормами (многокомпонентная питательная смесь), которые предназначены для определенного организма-потребителя, либо кормовыми добавками, представляющими собой группу соединений узконаправленного действия (витаминные, минеральные (по элементам), липидные). Зачастую под кормовыми добавками реализуются соединения, которые по сути являются лекарственными веществами (препаратами).

Для обеспечения лучшего усвоения хрящевой (соединительной) ткани считается целесообразным разработка приемов, способствующих разрушению таких тканей (Иванкин, Васюков, Панов, 1985).

Как видно из анализа литературы, описанные способы получения препаратов и кормовых продуктов из хрящевой, мышечно-хрящевой и костнохрящевой ткани животных, рыб и моллюсков различны, это может быть экстрагирование водой, ферментативный, щелочной или кислотный гидролиз ткани, измельчение сырья с последующей сушкой.

Питательная ценность белковых гидролизатов зависит от технологии их производства. Наиболее щадящим и менее затратным можно признать ферментативный гидролиз, позволяющий в большей степени сохранить ценные компоненты без нарушения их структуры и модификации (Давидович, 2005; Максимюк, Марьяновская, 2009; Сторублевцев, 2009; Пивненко, 2010).

В целом к недостаткам известных способов следует отнести: длительность процесса, жесткие условия гидролиза щелочью или кислотой, приводящие к разрушению биологически активных веществ и их потере, характерной для хрящевой и белковой ткани (Murphy et al., 1989; Ponton et al., 1991; Docherty et al., 1992), вследствие чего появляется необходимость внесения в конечный продукт дополнительных (синтетических) компонентов.

Ферментативный гидролиз лишён этих недостатков и имеет ряд преимуществ, что позволяет значительно повысить питательную ценность получаемых продуктов, При его применении исключается жесткое воздействие на белковые компоненты, распад аминокислот, возможен подбор системы ферментов и условий процесса, что позволяет создать оптимальную технологию переработки разных видов белкового сырья.

Например, по данным Невельниченко (1989) (Антипова, Глотова, 1997) применение протосубтилина Г20х как самостоятельного фермента, так и в комплексе, приводит к значительным деструктивным изменениям, в первую очередь, мышечной ткани, например, односортной говядины, но не оказывает заметного влияния на соединительную ткань.

В рыбной отрасли применение ферментных препаратов позволяет рационально перерабатывать сырье (Борисочкина, 1988; Кузнецов, 2003), не имеющее пищевого использования (рыбу и моллюски с механическими повреждениями либо нестандартного размера) и отходы от их разделки для производства кормовых продуктов (Заявка РФ № 1559466; Тимофеев и др., 1990; Пивненко, 1995). При этом основное биологическое действие ферментов состоит в следующем:

- улучшение усвоения белков и углеводов корма за счет частичного разрушения их структуры;

- повышение активности собственных пищеварительных ферментов и процессов всасывания;

- компенсация дефицита пищеварительных ферментов (Диксон, Уэбб, 1982).

Ферментативный гидролиз приводит к дезинтеграции структуры мышечно-хрящевой ткани гидробионтов за счет разрушения белково-углеводных связей. Поскольку основным белком хрящевой ткани является коллаген (Павлова и др., 1988; Сорокоумов, 2010), целесообразнее для ферментолиза выбирать ферменты класса гидролаз (протеолитического, амилолитического и цитолитического (целлюлолитического)) действия, которые катализируют расщепление различных сложных органических соединений на более простые с присоединением воды. Это основные группы ферментов, применяемые в кормах (Кислухина, 2002).

Анализ литературы показал, что в гидробионтах и наземных животных содержится значительное количество полезных для организма биологически активных веществ. Для получения продуктов, содержащих БАВ, или выделения определенного вещества используют не только рыбное сырье, но и его отходы, применяя для выделения широкий спектр методов обработки, при этом наиболее распространенным методом обработки сырья является ферментирование.

Учитывая вышеизложенное, можно отметить, что большой объем отходов, получаемых при разделке морских гидробионтов, в том числе кальмаров и лососевых, содержащих много белков, полисахаридов, липидов и минеральных веществ, позволяет разрабатывать технологии не только биологически активных веществ – БАД к пище или лечебно-профилактического действия, но и кормовых добавок для животных разнонаправленного действия, используя, в том числе сырье после производства БАД.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.1. Материалы исследований Материалом исследований служили:

- отходы от разделки дальневосточных гидробионтов: головы рыб семейства лососевых Oncorhynchus keta (кета), Oncorhynchus gorbuscha (горбуша), Oncorhynchus kisutch (кижуч), соответствующие требованиям ОСТ 15-414-2004;

и головы головоногих моллюсков Todarodes pacificus (тихоокеанского кальмара) и Berryteuthis magister (командорского кальмара), соответствующие требованиям ГОСТа 20414-93, а также Единым санитарно-эпидемиологическим и гигиеническим требованиям Таможенного союза (п.3.1, п. 3.7).

Головы рыб и кальмаров заготовлены в районе промысла и в замороженном виде доставлены в ТИНРО-Центр.

Материалом исследований также служили вторичные отходы, полученные при переработке голов рыб и кальмара на БАД.

Отходы от переработки голов рыб: липидсодержащая фракция (хитозанлипидный комплекс), костный остаток (осадок после гидролиза тканей голов лососевых).

Отходы от переработки голов кальмара: осадок после отделения гидролизата и осадок после дополнительного удаления гидролизата сепарацией.

Для гидролиза сырья использовали ферментные препараты.

- ЦеллоЛюкс-F (Целловиридин Г20х) получен путем микробного синтеза (экзогенные ферменты), состоит из целлюлазы, ксиланазы, -глюканазы и глюкоамилазы и проявляет целлюлолитическую активность 2000 ± 200 ЦлА/г. Ксиланазная активность составляет до 8000 Кл/г, глюканазная (-глюканаза) – до 1500 Гл/г, глюкоамилазная – 20 Гла/г, рабочая зона действия рН = 3,5–6,0, температура 35–60 °С (Р СТО 13684916-2005, ТУ 9291-010-00479563-99; Сиббиофарм, 2008).

Известно, что присутствующие в целлолюксе ферменты способны катализировать разрыв -1,4-связей в полисахаридах до отдельных сахаров (дисахаридов). Фермент целлюлазы способствует разрыву -1,4-связей с образованием дисахарида. Присутствующие в целлолюксе ксиланаза и глюканаза также катализируют разрыв -1,4-связи (Грачева, 1975). Такие же связи имеются в гликозаминогликанах, которые являются неотъемлемой составной частью хрящевой ткани. По этой причине целлолюкс был выбран для исследований.

- Протомегатерин Г20х – продуцент Bacillus megaterium, протеолитическая активность (ПЕ) 800 ± 50 ед./г, коллагенолитическая активность (Кл) – 1,33 ед./г, рабочая зона действия рН = 6,5–8,0, температура 30–60 °С (ТУ 00479942-002-94). Протомегатерин Г20х проявляет протеолитическую активность действия и состоит из протеиназ (эндопептидазы). Протеиназы гидролизуют преимущественно внутренние пептидные связи в белках и пептидах (Франк, 1966; Мосолов, 1971; Пономарев, 2002).

- Амилопротооризин Г10х (ТУ 9291-078-00334586-2007) получен путем глубинного или твердотельного культивирования микромицета и последующего высушивания культуры гриба Aspergillus oryzae, содержит -амилазу, мальтазу, глюкоамилазу и протеиназу (Кислухина, 2002; Полякова, Римарева, 2006; Римарева, 2010). Фермент в основном проявляет протеолитическую активность, но некоторые его компоненты способны катализировать расщепление и углеводсодержащих компонентов, поэтому его использовали для ферментолиза мышечно-хрящевой ткани голов, как кальмара, так и лососевых. Направленность действия смешанная: протеолитическая активность (ПЕ) – 800 ед./г, амилолитическая активность – 1100 Ае/г, целлюлолитическая – 280 ЦлА/г, рабочая зона действия рН = 4,5–6,5, температура 40–55 °С.

Входящая в состав этого фермента -амилаза (декстриногенамилаза) беспорядочно действует на молекулу субстрата изнутри, что приводит к быстрому снижению вязкости раствора, т.е гидролизует -1,4-гликозидную связь в полисахаридах с образованием олиго- и моносахаридов (Гликозаминогликаны и гликопротеины, 2009). Активность -амилазы оптимальна при pH 6,7–7,0 (Пермякова, Киселева, 2004).

полисахаридах, последовательно отщепляя по одному остатку сахара с нередуцирующих концов цепей. Оптимальные условия для гидролиза рН 4,5–4,6, температура 55–60 °С (Киселева, 2008).

Общая схема проведенных исследований представлена на рис. 1.

Анализ источников литературы, формулирование цели и задач исследования Исследование химического состава отходов от Исследование химического состава голов производства БАД (вода, белок, липиды, ми- полученных при разделке гидробионтов неральные вещества, аминосахара) (вода, белок, липиды, минеральные вещества, аминосахара), а также соотношения Обоснование сушки (время, темферментного препарата пература, способ сушки) безопасности Обоснование и определение сроков жирные кислоты, амиОпределение относительной 2.2. Проведение технологических экспериментов У тихоокеанских лососей многие части головы (черепа) образованы хрящевой тканью. При исследовании мышечно-хрящевой ткани лососевых головы рыб рубили на куски, удаляя жаберные крышки и жабры.

У головоногих моллюсков хрящевым скелетом является головная капсула сложной формы, состоящая из трех обособленных отделов, в которых находятся ганглии. При заготовке мышечно-хрящевой ткани кальмаров использовали сырье, полученное при разделке в соответствии с ГОСТом 20414-93, с отделением щупалец и клюва. Также использовались разделанные головы без ганглиев и глаз (стекловидного тела).

Для получения и исследования кормовых продуктов из голов кальмара и лососевых нами разработаны технологические схемы (Пат. РФ № 2460313), согласно которым мышечно-хрящевую ткань (Крисюк, 1982; Гурьев, 1984; Боль в спине, 2007; Голошубина и др., 2009) размораживали в воде, предварительно упаковав сырье в водонепроницаемую упаковку; размороженное сырье разделывали, удаляя жабры и жаберные крышки у голов лососевых и клюв и глаза из голов кальмара. Сырье промывали водой, и после стекания воды измельчали головы до размера частиц 0,5–3,0 мм2. Фарш смешивали с нагретой до температуры 45–50 °С водой в соотношении 1,0 :

0,5 (сырье : вода). Предварительно в воду вносили ферментный препарат, концентрация которого устанавливалась опытным путем. Активация ферментного препарата и регулирование уровня рН среды в сторону оптимума действия ферментного препарата осуществлялись путем добавления пищевой уксусной кислоты. В водный раствор также добавляли хлорид натрия в количестве 1,0 % и бензойнокислый натрий – 0,1 % для замедления микробиологических процессов. Гидролиз осуществлялся при температуре 45 ± °С в течение времени, установленного как рациональное по величине прироста содержания небелкового азота и аминосахаров в гидролизате. Инактивация ферментных препаратов проходила при температуре 80 °С в течении 15 мин. Ферментолизат из голов лососевых центрифугировали в течение 10 мин при 3000 об/мин с целью удаления липидной эмульсии. Полученные гидролизаты высушивали при 45–105 °С с применением инфракрасного излучения в течение 2,5–16,0 ч, с конвекцией воздуха (0,7 м/с) и без нее. Кормовые добавки измельчали до 1–2 мм, фасовали и упаковывали в бумажные мешки с полиэтиленовым вкладышем и направляли на хранение, при температуре 25 ± 5 С. Сроки хранения установлены опытным путем.

2.3. Методы исследований В работе использовали стандартные и общепринятые химические, физико-химические, биохимические, микробиологические и математические методы исследований.

Исследование химического состава сырья и полученных продуктов проводили согласно современным методам (ГОСТ 7636-85).

Первым этапом явилось определение химического состава отходов. В образцах сырья (головы рыб и кальмара) и отходах от производства БАД определяли массовую долю воды по ГОСТу 7636-85. Содержание общего и небелкового азота (после осаждения белков трихлоруксусной кислотой) – по методу Кьельдаля на приборе «Kjeltec 2300» (Foss, Швеция). Массовую долю липидов определяли по методу Блайя и Дайэра (Bligh, Dayer, 1959). Экстракцию липидов проводили по методу Фолча (Folch et al., 1957).

Жирные кислоты определяли в виде их метиловых эфиров (Carreau, Dubacq, 1978) на капиллярном газо-жидкостном хроматографе «Shimadzu GC– 16A» (Supelcowax–10) с пламенно-ионизационным детектором, снабженны капиллярной колонкой (30,0 м 0,3 мм), при температуре 190 oC. Идентификация сигналов проводилась по относительному времени удержания, углеродным числам в соответствии со стандартной смесью жирных кислот и базой обработки данных «C-R4A».

Содержание минеральных веществ определяли методом взвешивания после сжигания пробы в муфельной печи (ГОСТ 7636-85).

Остаточное содержание сухих веществ в отходах голов лососевых и кальмара определяли основываясь на общем количестве сухих веществ в сырье, количестве сухих веществ в полученных образцах и количестве сухого макронутриента.

Сушку образцов осуществляли на электросушилке инфракрасного излучения «ЭСБИК-1,25/220» «Икар» с конвекцией воздуха, при температуре 45–65 °С, и в сушильном шкафу без конвекции ШС-3 (0,575/220), при 105 °С.

Дозировку ферментов устанавливали исходя из литературных данных (Грачева, 1975; Крестьянова и др., 1985; Неклюдов, Навашин, 1985; Калиниченко, Купина, 1987; Пивненко, 1995; Крюков, 1996; Козырева, Слуцкая, 1999;

Кислухина, 2002; Кузнецов 2002; Фаритов, 2002; Ильина, 2006; Суховерхова, 2006; Белоусова, Запорожский, 2007; Калинина и др., 2008; Белоусова, 2009;

Михеев, 2009; Кузнецова, 2012). Далее экспериментально определяли необходимую и достаточную дозировку ферментов. Испытанные количества ферментов находились в пределах для Протомегатерина Г20х – 1800 Пе/кг, ЦеллоЛюкса-F – 630 ЦлА/кг, Амилопротооризина – 1800 и 3500 Пе/кг.

Ферментолиз проводили при температуре 45 ± 5 °С, что обусловлено рекомендациями относительно температурных оптимумов (Шредер, Любке, 1969;

Лхотский, 1975; Хрипкова и др., 1980; Пат. US № 4087563).

Рациональное время гидролиза белков субстрата под действием ферментов определяли по накоплению небелкового азота и аминосахаров (гексозаминов) в гидролизате.

Полученные после ферментолиза суспензии разделяли на фракции (плотную и жидкую) путем центрифугирования при 4000 об/мин в течение 15– мин, для исследований брали жидкую часть.

Содержание аминосахаров, перешедших в результате гидролиза в раствор определяли спектрофотометрически согласно методике фармакопейной статьи (Гос. фарм, 1990, 2008), по методу Элсона и Моргана (Dubois et al., 1956; Хорлин, 1967, 1975; Руководство. Р 4.1.1672-2003).

Содержание аминосахаров в гидролизате в процентах (X) вычисляли по формуле:

где V – объем нейтрализованного гидролизата, мл; а – навеска препарата, мг; С – количество аминосахаров в 1 мл, найденное по калибровочному графику по галактозамину и глюкозамину, мг; 0,5 – объем нейтрализованного гидролизата, взятого для реакции, мл.

Уравнения кривых калибровочных графиков:

Y (GalNH2*HCl) = 2,8333х – 0,004, R2 = 0,9978; Y (GlcNH2*HCl) = 3,24 – 0,009, R2 = 0,9992.

Содержание свободных аминосахаров, определяли спектрофотометрически согласно методике фармакопейной статьи (Гос. фарм, 1990, 2008; Руководство. Р 4.1.1672-2003), без предварительного гидролиза пробы.

Хранение сухого продукта, упакованного в бумажные мешки с полиэтиленовым вкладышем, осуществляли при температуре окружающей среды 25 ± 5 °С и относительной влажности не выше 75 %.

Подготовку образцов и микробиологические испытания проводили в соответствии с ГОСТами 26668–26670, 10444.2, 10444.12, 10444.15, 28805, 29185, Р 50474, Р 50480, а также Инструкцией по санитарно-микробиологическому контролю производства пищевой продукции из рыбы и морских гидробионтов (1991).

Безопасность сырья и кормовых продуктов исследовали согласно Единым санитарно-эпидемиологическим (ЕСТ) и Единым ветеринарно-санитарным требованиям (ЕВТ) Таможенного союза, требованиям СанПиН 2.3.2.1078-01, ВетПиН 13-5-01/0101.

Относительную биологическую ценность (ОБЦ) определяли, используя в качестве тест-организма простейшую Tetrahymena pyriformis, методом культивирования в растворе 0,1 %-ной пептонной среды и исследуемых компонентов по Инструкции по санитарно-микробиологическому контролю производства пищевой продукции из рыбы и морских беспозвоночных (Игнатьева, Шаблий, 1978;

Игнатьева и др., 1980; Методические рекомендации…, 1987; Инструкция..., 1991).

В основе определения содержания гистамина колориметрическим методом лежит измерение величины абсорбции окрашенного производного, полученного при взаимодействии гистамина с диазореактивом (СанПиН 4274-87).

Определение перекисного числа жира осуществляли по методике, основанной на взаимодействии перекисей, содержащихся в жире, с йодидом калия в присутствии уксусной кислоты с выделением йода, с последующим титрованием раствором тиосульфата натрия (Лазаревский, 1955; ГОСТ 7636-85; ГОСТ Р 53024).

Кислотное число жира определяли после нейтрализации свободных кислот, содержащихся в навеске выделенного жира, путем его растворения в спирто-эфирной смеси и последующего титрования раствором едкого натра (Лазаревский, 1955; ГОСТ 7636-85).

Содержание хлорида натрия определяли методом титрования водного экстракта продукта азотнокислым серебром в присутствии хромовокислого калия (Лазаревский, 1955; ГОСТ 7636-85).

Определение содержания макро- и микроэлементов и токсичных металлов в образцах осуществляли в соответствии с ГОСТами 26927, 26929, 26930, 26932, 26933, 30178, 30538, Р 51301 на атомно-абсорбционном спектрофотометре фирмы «Nippon Jarell Ach» модель АА-885. В качестве атомизатора использовали однощелочную горелку и пламя ацетилен-воздух.

Аминокислотный состав белков определяли после кислотного гидролиза 6 N раствором соляной кислоты в течение 24 ч (Остерман, 1985), затем методом ионно-обменной хроматографии на высокоскоростном анализаторе Hitachi LСвободные аминокислоты определяли после экстракции этиловым спиртом и упаривания (Баратова, Белянова, 1974; Остерман, 1985).

Определение небелкового азота проводили после водной экстракции и осаждения белков 20 %-ным раствором ТХУ (Лазаревский, 1955).

Эффективность кормовых добавок проверяли в экспериментах на молоди кеты, симы, карася серебряного, путем ежедневного кормления добавками в количестве до 3 % от массы рыбы (Щербина и др., 1987).

Рыбам скармливались различные варианты кормовых смесей на основе разработанных нами добавок и стандартного корма (ТУ 9296-059-00472012-02) (ЛСНТ – лососевый стартовый низкотемпературный). Общая продолжительность кормления с учетом смены кормов составила 17 мес.

Каждая группа рыб содержалась в отдельных акватронах объемом 200 л, с постоянным кругооборотом воды и ее очисткой, в условиях, приближенных к реальной среде обитания данного вида рыб. Под наблюдением сотрудников океанариума ТИНРО-Центра регулярно проводилась очистка акватронов и смена воды в них, контроль содержания кислорода в воде и температуры среды обитания рыб.

В ходе опытов визуально фиксировали поедаемость образцов кормовых добавок рыбами, поведение рыб, а также определяли динамику изменения средней массы по показателям еженедельного прироста методом 3-кратного взвешивания. Также фиксировали смертность объектов исследования (Фисинин, 2003).

Средненедельный прирост весовых размеров (Сср, %) рыб определяли по формуле Винберга (по отношению к начальной массе):

где Wn – конечная масса, г; Wо – начальная масса, г; n – количество суток (недель) в периоде между измерениями (Винберг, 1956; Скляров и др., 1984).

Полноценность кормления оценивали по величине кормового коэффициента (КК), который показывает количество корма, необходимое для получения единицы прироста рыбы, т.е. отношение съеденного корма к приросту. Величину КК определяли по формуле:

где С – количество съеденного корма, г; Р – величина прироста массы рыбы по отношению к начальной массе, г (Винберг, 1956; Скляров и др., 1984).

Результаты исследований обрабатывали статистическими методами (Урбах, 1963, 1975; Кенуй, 1979). Достоверность данных достигали планированием экспериментов, необходимых и достаточных для достижения точности результатов (Р = 0,9–0,95), при доверительном интервале ± 3–10 % среднеарифметических значений из результатов трех-восьми параллельных определений. Математическую и графическую обработку результатов проводили с использованием прикладных программ Microsoft Office Pro-2003 (Microsoft Word и Excel 2007), Statistica 8, TableCurve 3D.

3.1. Характеристика и обоснование выбора сырья для разработки технологии получения кормовых добавок способом биомодификации Выбор сырья обосновывается тем, что при разделке рыбы и моллюсков для пищевых целей остается значительное количество недоиспользуемых отходов, содержащих костно-хрящевую и мышечно-хрящевую ткань (головы, плечевые и грудные плавники, позвоночные кости с хвостовым плавником), которая содержит биологически активные вещества и используется для получения полезных для здоровья компонентов и препаратов на их основе (Бохан и др., 1976; Ярочкин и др. 1997; Касьянов, 1998; Боева, 2002, 2004).

Учитывая запасы и количество вылавливаемых объектов (Состояние промысла…, 2011, 2013; Обзор промысловой обстановки..., 2012), можно отметить, что одними из наиболее перспективных видов по содержанию мышечнокостно-хрящевой ткани являются кальмар и лососевые, отходы от разделки которых используются неполностью (Дроздова, 2008).

Анализ данных, имеющихся в справочной литературе (Кизеветтер, 1971;

Справочник по химическому составу..., 1998, 1999), позволяет сделать вывод, что наибольшее содержание хрящевой ткани находится в осетровых (6–13 %) и скатах (4–9 %), в лососевых (кета, кижуч, горбуша, чавыча) содержание костнохрящевой ткани составляет 5–8 %. У головоногих моллюсков количество хрящевой ткани – до 2,0 % для командорского кальмара и 1,0–1,2 % – для тихоокеанского.

Масса голов лососевых по отношению к массе тела выше, чем тот же показатель для кальмара (табл. 2).

Колебания относительной массы головы у рыб одного и того же вида объясняется разным биологическим состоянием в периоды увеличения общей массы содержимого брюшной полости (гонад и других внутренностей) (Зайцев и др., 1965).

Наши исследования показали, что массовое отношение (%) хрящевой ткани к мышечной в головах кальмара составляет 22–24 : 76–78, а в головах лососевых – 16–18 : 82–84 (Баштовой, 2008а, б, 2011а, б).

Масса голов промысловых гидробионтов, % от общей массы объекта Головоногие моллюски3:

Справочник по химическому составу… (1998, 1999). 2 И.В. Кизеветтер (1971). 3 Т.Н.

Пивненко (2010).

Исследование химического состава голов кальмара и рыб позволило установить (табл. 3), что количество сухих веществ в головах кеты составляет 31,2–38,9 %, в головах горбуши их количество ниже – 18,1–28,4 %, в головах кижуча – 26,4–28,5 %.

Тихоокеанский (со стекловидным Командорский (без стекловидного Командорский (со стекловидным В головах тихоокеанского кальмара (со стекловидным телом) количество сухих веществ составило 17,8–18,6 %, без стекловидного тела – на 3–4 % больше, в головах командорского кальмара – 13,1–15,6 %.

Исследования химического состава голов рыб и кальмаров показали, что в головах кеты содержится около 15,1–15,9 % белка, много липидов – до 8,1 %, минеральных веществ – до 5,5 %, количество аминосахаров – 0,045 %.

В головах горбуши количество белка составляло 13,9–18,5 %, липидов – 1,7–4,4 %, минеральных веществ – в 2,5 раза меньше, чем в головах кеты, – 1,1– 1,7 %, аминосахаров – 0,03 %.

Химический анализ голов кижуча установил, что количество белков составляет 17,6–18,1 %, липидов – в 2,8 раза меньше, чем в головах кеты, – 4,5– 5,4 %, количество минеральных веществ – 4,1–4,6 %, содержание аминосахаров – 0,045 %.

В головах тихоокеанского кальмара много белка – 15,5 %, незначительное количество липидов – 0,55 %, минеральных веществ – до 1,7 %, много аминосахаров – до 0,48 % (Методические рекомендации…, 2008).

В головах командорского кальмара (со стекловидным телом и без него) количество белка составляет 11,2–11,5 %, липидов – 0,75 %, минеральных веществ – до 1,75 %. Количество аминосахаров – 0,335–0,490 %.

При определении критериев оценки сырья для получения кормовых добавок одним из главных было содержание аминосахаров (гексозаминов).

Исследования показали (табл. 3), что при некоторых отличиях по содержанию пищевых макронутриентов головы лососевых также отличаются по концентрации аминосахаров. Наименьшее их количество содержится в голове горбуши. Это объясняется тем, что количество собственно хрящевой ткани по отношению к массе головы у этой рыбы наименьшее: так, если у кеты и кижуча, по нашим данным, оно составляет 4,5–5,0 %, то у горбуши – 4,0–4,5 %.

Полученные данные по содержанию хрящевой ткани в исследуемых объектах не противоречат ранее известным результатам исследований (Суховерхова, 2006; Пивненко, 2010; Сорокоумов, 2010).

Что касается голов кальмаров, то в этом случае влияние на количество аминосахаров оказало наличие или отсутствие стекловидного тела. Тем не менее можно заключить, что в целом количество аминосахаров в исследуемых объектах существенно и составляет от 0,03 до 0,47 % к массе сырой ткани, причем в головах моллюсков оно на порядок выше, чем в головах рыб.

Известно, что в организме аминополисахариды локализуются в основном веществе соединительной и хрящевой ткани и никогда не встречаются в свободном виде, а содержатся в составе гликозаминогликанов – линейных неразветвленных полимеров, состоящих из дисахаридных единиц, каждая из которых содержит гексозамин (аминосахар). В свою очередь гликозаминогликаны, как известно, входят в состав углеводно-белковых компонентов ткани (Слуцкий, 1985). Одним из путей разрушения этого комплекса и повышения биодоступности аминосахаров из мышечно-хрящевой ткани являются процессы гидролиза – особенно, судя по современным данным, ферментативного (Сорокоумов, 2010).

3.2. Разработка технологии биомодификации отходов, полученных при разделке рыб и кальмаров Выбирая способ гидролиза мышечно-хрящевой ткани, мы руководствовались тем, что ферментный гидролиз менее трудоемок и не требует восстановления рН среды до нейтрального, как это происходит при кислотном или щелочном гидролизе. Также учитывались специфичность ферментов, контролируемость процесса и мягкие условия гидролиза.

Нашей задачей была биомодификация сырья с целью перевода основных веществ, содержащихся в сырье, в более доступную для усвоения форму.

Учитывая состав исходного сырья, использованы следующие ферментные препараты: ЦеллоЛюкс-F Г20х, Протомегатерин Г20х, Амилопротооризин Г10х.

Имеющиеся в составе ферментных препаратов ферменты способны катализировать процессы деструкции различных соединений. Так, протомегатерин обладает протеолитической и коллагенолитической активностью. Присутствующие в целлолюксе ферменты способны катализировать разрыв -связей в полисахаридах до отдельных сахаров (дисахаридов). Такие же связи имеются в гликозаминогликанах, которые являются неотъемлемой составной частью хрящевой ткани. Амилопротооризин способен катализировать процессы деструкции как белковой, так и углеводной составляющей.

Выбор температуры при гидролизе – 45 ± 5 °С – обусловлен температурным оптимумом действия ферментов, согласно качественным характеристикам ферментных препаратов, а также данным литературы, по которым температуры выше 45 °С негативно влияют на белки, вызывая коагуляцию (Шредер, Любке, 1969; Хрипкова и др., 1980; Пат. US 4087563; Пермякова, Киселева, 2004; Каленик, Табакаева, 2006).

Таким образом, используя в экспериментальных работах три ферментных препарата, обладающих протеолитической, целлюлолитической и амилолитической активностями, планировали выбрать наиболее эффективный по воздействию на субстраты, различающиеся по количеству хрящевой и соединительной ткани. При этом ожидали, что наиболее высокое количество аминосахаров перейдет в жидкую фазу при воздействии целлолюкса, затем амилопротооризина и протомегатерина.

3.2.1. Исследование процессов ферментолиза мышечно-хрящевой ткани голов командорского кальмара Для получения питательных веществ в более доступном для усвоения их организмом-потребителем виде использовали ферментные препараты Амилопротооризин, Протомегатерин и Целлолюкс (табл. 4).

Концентрация Амилопротооризина Г20х составляла 1800 и 3500 Пе/кг.

Выбор концентрации фермента сделан на основе анализа литературы (табл. 5), в которой имелась информация о применении ферментных препаратов и их концентрациях (Козырева, Слуцкая, 1999; Суховерхова, 2006; Михеев, 2009).

Концентрации ферментных препаратов, взятых для экспериментов, Протеолитическая, Пе Концентрация ферментных препаратов, применявшихся в исследованиях, Гепатопанкреатин Мегатерин Концентрация целлолюкса составляла 630 ЦлА/кг, это соответствовало сопутствующей целлюлолитической активности фермента Амилопротооризин Г20х. Поэтому количество ферментных единиц в трех препаратах соответствовало друг другу: так, если на 1 кг продукта воздействовало 1800 Пе, то количество амилопротооризина подбиралось таким образом, чтобы количество протеолитических единиц было таким же. В отношении целлолюкса соблюдалось равенство количества целлюлолитических единиц на 1 кг субстрата по сравнению с амилопротооризином. Ферментолиз проводили при температуре 45 ± 5 °С и гидромодуле 1,0 (сырье) : 0,5 (вода) (Баштовой, Слуцкая, 2011).

Отдельной серией экспериментов было установлено, что применение гидромодуля 1 : 1 нерационально, так как полученные данные по степени гидролиза существенно не отличаются от таковых с гидромодулем 1,0 : 0,5.

Контрольные образцы готовили при соотношении сырьё : вода 1,0 : 0,5, без добавления фермента, гидролиз проводился при тех же условиях, что и опыт. Каждый час отбиралась проба, в которой определяли содержание аминосахаров, небелкового азота и свободных аминосахаров.

Количество аминосахаров, выраженное как отношение содержащихся в гидролизате аминосахаров к их количеству в исходном сырье, соответствует степени гидролиза по содержанию аминосахаров.

В результате ферментативного гидролиза (рис. 2) голов кальмара в раствор перешло значительное количество аминосахаров.



Pages:     || 2 | 3 |


Похожие работы:

«ИЗ ФОНДОВ РОССИЙСКОЙ ГОСУДАРСТВЕННОЙ БИБЛИОТЕКИ Андреев, Юрий Александрович Влияние антропогенных и природных факторов на возникновение пожаров в лесах и населенных пунктах Москва Российская государственная библиотека diss.rsl.ru 2007 Андреев, Юрий Александрович.    Влияние антропогенных и природных факторов на возникновение пожаров в лесах и населенных пунктах [Электронный ресурс] : Дис. . д­ра техн. наук  : 05.26.03. ­ М.: РГБ, 2007. ­ (Из фондов Российской Государственной Библиотеки)....»

«из ФОНДОВ РОССИЙСКОЙ ГОСУДАРСТВЕННОЙ БИБЛИОТЕКИ Максимов, Павел Леонидович 1. Универсальные текнические средства для уБорки корнеклдБнеплодов 1.1. Российская государственная Библиотека diss.rsl.ru 2003 Максимов, Павел Леонидович Универсальные текнические средства для уБорки корнеклуБнеплодов [Электронный ресурс]: Дис.. д-ра теки. наук : 05.20.01.-М.: РГБ, 2003 (Из фондов Российской Государственной Библиотеки) Сельское козяйство — Меканизация и электрификация сельского козяйства — Тракторы,...»

«Бударина Наталья Викторовна Метрическая теория совместных диофантовых приближений в полях действительных, комплексных и p-адических чисел Специальность 01.01.06 – математическая логика, алгебра и теория чисел Диссертация на соискание ученой степени доктора физико-математических наук Научный консультант : профессор,...»

«АШРАФ АХМЕД АЛИ ТРАНСУРЕТРАЛЬНАЯ ЛАЗЕРНАЯ ХИРУРГИЯ ПРИ ДОБР01САЧЕСТВЕННОЙ ГИПЕРПЛАЗИИ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ (14.00.40 - урология) Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских ваук Научный руководитель : доктор медицинских наук профессор С.Х.Аль-Шукри Санкт-Петербург ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ Глава!. COBPEMEIfflblE МЕТОДЫ...»

«УДК 539.172.17+539.173.7 Тищенко Владимир Геннадьевич ИССЛЕДОВАНИЕ ХАРАКТЕРИСТИК МНОГОТЕЛЬНЫХ РАСПАДОВ ТЯЖЕЛЫХ ЯДЕР Специальность: 01.04.16 – физика атомного ядра и элементарных частиц Диссертация на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Научные руководители: доктор физико-математических наук, профессор Ю.Э. Пенионжкевич, доктор физико-математических наук, В.В....»

«БУРДУКОВСКИЙ МАКСИМ ЛЕОНИДОВИЧ ВЛИЯНИЕ ДЛИТЕЛЬНОЙ ХИМИЗАЦИИ ПОЧВ ЮГА ДАЛЬНЕГО ВОСТОКА НА БИОЛОГИЧЕСКИЙ КРУГОВОРОТ И СОДЕРЖАНИЕ МАКРО– И МИКРОЭЛЕМЕНТОВ 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель : доктор биологических наук, старший научный сотрудник Голов Владимир Иванович...»

«ШУЛЬГИНОВ Роман Николаевич КОМПЛЕКСНАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ ГИДРОАККУМУЛИРУЮЩИХ ЭЛЕКТРОСТАНЦИЙ НА ЭНЕРГЕТИЧЕСКОМ РЫНКЕ Специальность 08.00.05 – Экономика и управление народным хозяйством (экономика, организация и управление предприятиями, отраслями, комплексами ) Диссертация на соискание ученой...»

«АШИЕВ АРКАДИЙ РУСЕКОВИЧ ИСХОДНЫЙ МАТЕРИАЛ ГОРОХА (PISUM SATIVUM L.) И ЕГО СЕЛЕКЦИОННОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В УСЛОВИЯХ ПРЕДУРАЛЬСКОЙ СТЕПИ РЕСПУБЛИКИ БАШКОРТОСТАН 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный руководитель : доктор сельскохозяйственных наук...»

«ГАЛИМОВА ЛЕЙСАН ХАЙДАРОВНА Идиоматическое словообразование татарского и английского языков в свете языковой картины мира 10.02.02 – Языки народов Российской Федерации (татарский язык) 10.02.20 – Сравнительно-историческое, типологическое и сопоставительное языкознание ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата филологических...»

«СВИРИДОВ Константин Сергеевич ПРАВОВОЕ РЕГУЛИРОВАНИЕ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ ПО ОКАЗАНИЮ ТУРИСТИЧЕСКИХ УСЛУГ Специальность 12.00.03 Гражданское право; предпринимательское право; семейное право; международное частное право. Диссертация на соискание ученой степени кандидата юридических наук Научный руководитель доктор юридических наук профессор Владимир Федорович ПОПОНДОПУЛО Санкт-Петербург 2003 2 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. ОБЩАЯ...»

«Бузская Ольга Маратовна СОВРЕМЕННЫЕ СОЦИОКУЛЬТУРНЫЕ КОММУНИКАЦИИ: ЭКОЛОГО-АКСИОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗМЕРЕНИЕ 09.00.13 – философская антропология, философия культуры ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата философских наук Научный руководитель – Ивлева Марина Ивановна...»

«БУЛЫЧЁВ Пётр Евгеньевич АЛГОРИТМЫ ВЫЧИСЛЕНИЯ ОТНОШЕНИЙ ПОДОБИЯ В ЗАДАЧАХ ВЕРИФИКАЦИИ И РЕСТРУКТУРИЗАЦИИ ПРОГРАММ 05.13.11 — математическое и программное обеспечение вычислительных машин, комплексов и компьютерных сетей ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Научные руководители: доктор физ.-мат. наук, академик РАЕН, профессор Р. Л. Смелянский; кандидат физ.-мат. наук, доцент В. А....»

«УДК 579.695+579.66’112.3+663.14 КИРИЦА ЕЛЕНА НАПРАВЛЕННЫЙ СИНТЕЗ КАРОТИНОИДОВ У ДРОЖЖЕЙ И ПЕРСПЕКТИВА ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ 03.00.23 - БИОТЕХНОЛОГИЯ Диссертация на соискание ученой степени доктора биологии Научный руководитель : Усатый А. С., Доктор хабилитат биологии, конф. исследователь Автор: Кирица Елена Кишинев СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ.. 1. КАРОТИНОИДНЫЕ ПИГМЕНТЫ – БИОЛОГИЧЕСКИЕ ФУНКЦИИ И ПЕРСПЕКТИВА ИСПОЛЬЗОВАНИЯ. 1.1. Микроорганизмы...»

«Смирнов Илья Александрович МАТЕМАТИЧЕСКОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ ЗАНОСА АВТОМОБИЛЯ Специальность 01.02.01 – теоретическая механика Диссертация на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Научные руководители д.ф.-м.н., проф. Новожилов И.В. к.ф.-м.н., с.н.с. Влахова А.В. Москва 2011 2 Содержание Введение § 1. Анализ подходов к математическому и численному моделированию...»

«КОВАЛЁВ Сергей Протасович ТЕОРЕТИКО-КАТЕГОРНЫЕ МОДЕЛИ И МЕТОДЫ ПРОЕКТИРОВАНИЯ БОЛЬШИХ ИНФОРМАЦИОННО-УПРАВЛЯЮЩИХ СИСТЕМ Специальность: 05.13.17 – Теоретические основы информатики Диссертация на соискание ученой степени доктора физико-математических наук Научный консультант : академик РАН, д.ф.-м.н. Васильев Станислав Николаевич Москва 2013 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ Глава 1....»

«из ФОНДОВ РОССИЙСКОЙ ГОСУДАРСТВЕННОЙ БИБЛИОТЕКИ Корнилова, Ольга Алексеевна 1. Фактор значимый (внутрисемейнык) жизненный ситуаций в структуре и стратегии дезадаптивного поведения подростков 1.1. Российская государственная Библиотека diss.rsl.ru 2003 Корнилова, Ольга Алексеевна Фактор значимы к (в нутрисемейны к) жизненный ситуаций в структуре и стратегии дезадаптивного поведения подростков [Электронный ресурс]: Дис.. канд. псикол наук : 19.00.07.-М.: РГБ, 2003 (Из фондов Российской...»

«Фетисова Евгения Владимировна МЕТОДИКА ДОВУЗОВСКОГО ОБУЧЕНИЯ МАТЕМАТИКЕ ИНОСТРАННЫХ СТУДЕНТОВ, ОБУЧАЮЩИХСЯ НА РУССКОМ ЯЗЫКЕ (МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ ПРОФИЛЬ) 13.00.02 - теория и методика обучения и воспитания (математика) Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научный руководитель доктор физико-математических...»

«Булатов Олег Витальевич Численное моделирование течений в приближении мелкой воды на основе регуляризованных уравнений Специальность 05.13.18 – математическое моделирование, численные методы и комплексы программ Диссертация на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Научный руководитель : доктор физ.-мат. наук, профессор Елизарова Татьяна Геннадьевна Москва – Оглавление Page...»

«ИЗ ФОНДОВ РОССИЙСКОЙ ГОСУДАРСТВЕННОЙ БИБЛИОТЕКИ Рублев, Андрей Геннадьевич Уголовная ответственность за нарушение правил дорожного движения и эксплуатации транспортных средств Москва Российская государственная библиотека diss.rsl.ru 2006 Рублев, Андрей Геннадьевич.    Уголовная ответственность за нарушение правил дорожного движения и эксплуатации транспортных средств  [Электронный ресурс] : Дис. . канд. юрид. наук  : 12.00.08. ­ Екатеринбург: РГБ, 2006. ­ (Из фондов...»

«Чехранова Светлана Викторовна ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРЕМИКСОВ В КОРМЛЕНИИ ДОЙНЫХ КОРОВ 06.02.08 – кормопроизводство, кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный руководитель : доктор сельскохозяйственных наук, профессор...»






 
2014 www.av.disus.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.