«Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии IV Международная научная Интернет-конференция Казань, 16-17 октября 2013 года Материалы конференции В двух томах Том 1 Казань ИП Синяев Д. Н. 2013 УДК 577/579(082) ББК ...»

Типовую принадлежности вирусов определяли в реакции нейтрализации (РН) в культуре клеток при использовании 100 ТЦД вируса и 10 нейтрализующих доз гипериммунный кроличьих сывороток крови к эталонным штаммов PTV, PSV и EV-G.

Молекулярно-генетическую идентификацию вирусов проводили в полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ ПЦР) с использованием разработанных нами новых искусственных синтезированных, оригинальных видоспецифических олигонуклеотидных праймеров к PTV, PSV и EV-G [1].

Результаты исследований. Все исследуемые штаммы вирусов, выделенные в Украине по физико-химическим и биологическим свойствам не отличались от эталонных штаммов PTV, EV-G и PSV.

Вирусы имели сферическую форму диаметром 28-30 нм. В культурах клеток СПЭВ и ВНК-21 различных типов ЦПД мы не наблюдали.

IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

Таблица 1. Реклассификация штаммов энтеровирусов свиней, выделенных на территории Украины Штамм принадлежность по тривиальной классификации

РН Т ПЦР

Примечание: «П» - штамм вируса с полиантигенными свойствами (нейтрализуєтся сыворотками крови к вирусам нескольких серотипов).

В результате проведеной генетической реклассификация 25 штаммов IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

энтеровирусов свиней, выделенных на территории Украины, 23 штамма отнесены к семейству Picornaviridae, рода Teschovirus, вида Porcine teschovirus, 2 штамма вирусов не вступали в полимеразную цепную реакцию с видоспецифичными праймерами к PTV, PSV и EV-G (табл.).

В реакции нейтрализации вируса установлено, что 17 штаммов относятся к Porcine teschovirus 1 серотипа, 2 штамма – к PTV-3, 1 – к PTV-6, 1 штам – к виду Porcine sapelovirus, а 4 штамма – антигенно отличные от эталонных штаммов тешовирусов, сапеловирусов свиней и энтеровирусов G (табл.).

Таким образом, проведена серологическая и генетическая рекласификация энтеровирусов свиней выделеных в Украине в соответствии с требованиями Международного комитета по таксономии вирусов. Приведена в соотвествие с дествующей номенклатурой нориативная документация на производственные штаммы, диагностические системы, вакцины.

Литература 1. Головко А.М., Дерев'янко С.В., Бова Т.О. та інші. Конструювання видоспецифічних праймерів для молекулярно-генетичної ідентифікації тешовірусів та ентеровірусів А і В Сільськогосподарська мікробіологія:

Міжвідомчий тематичний науковий збірник. – Чернігів: ЦНТЕІ, 2009. – Вип. 10. – С.156–165.

2. Романенко В.П., Пiнчук I.М. Генетичнi маркери ентеровiрусiв, видiлених з легень свиней, хворих на пневмонию // Вiсник сiльськогосподарської науки. – 1982. – № 10. – С.47–49.

3. Романенко В.Ф., Полевик Е.И., Прусс О.Г. и другие. Таксономия энтеровирусов свиней // Ветеринария. – 1993. – № 5. – С. 26–29.

4. Pringle C.R. Virus Taxonomy // Archives of Virology. – 1999. – V.144. – P.

421–429.

5. Virus Taxonomy: 2012 Release (current) [Електронный ресурс] :

Официальный сайт Международного комитета по таксономии вирусов.

– Режим доступа: http://ictvonline.org/virusTaxonomy.asp.

IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

МУЛЬТИПЛЕКСНАЯ ИММУНОДИАГНОСТИКА ДЕТСКИХ

ВАКЦИНОУПРАВЛЯЕМЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Ерш А.В., Полтавченко А.Г., Кривенчук Н.А.

Государственный Научный Центр вирусологии и биотехнологии ЗАО «ИмДи» (Кольцово, Новосибирская обл., Россия) Инфекционные болезни занимают важнейшее место в жизни человека. Они служат самой частой причиной обращения за медицинской помощью. От инфекционных и паразитарных болезней ежегодно умирает более 16млн. человек, т.е. столько же, сколько суммарно от заболеваний сердечно-сосудистой системы и злокачественных новообразований. Вирусные инфекционные болезни поражают преимущественно детей и служат главной причиной смертности до 5 летнего возраста[1] Корь, краснуха и эпидемический паротит – являются одними из наиболее распространенных детских вирусных заболеваний, сопровождающихся разнообразными осложнениями. Массовая вакцинопрофилактика привела к значительным успехам в борьбе с перечисленными инфекциями. Несмотря на это, и в России и в других странах, возникают периодические вспышки этих заболеваний [2] Среди больных увеличивается число подростков и взрослых, у которых заболевания протекают тяжелее и длительнее, чем у детей. Сдвиг заболеваемости на старшую возрастную группу является прогностически неблагоприятным в связи с возможностью развития тяжелых последствий (бесплодие после эпидемического паротита, поражение плода при возникновении краснухи у беременных и др.)[3] Вероятнее всего это связано с пробелами в профилактической иммунизации. В России разработаны и осуществляются национальные Программы снижения и элиминации выше упомянутых инфекций. Для устранения пробелов в вакцинопрофилактике эти программы, наряду с массовой вакцинацией, предусматривают серомониторинг поствакцинального иммунитета у населения регионов с целью коррекции профилактических мероприятий [4]. В настоящее время этот мониторинг проводится с использованием моноспецифических наборов для иммуноферментного анализа (ИФА). Внедрение в клиническую IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

';

практику тест-систем, которые способны выявлять антитела различных классов, позволило значительно повысить информативность методов диагностики инфекционных заболеваний [5] Однако ИФА выполняется в специализированных лабораториях, поскольку требует дорогого оборудования и персонала с навыками работы, а результаты разных анализов пациента трудно свести в единую систему для формирования персональных иммунологических профилей.

В последнее время в биологии большое внимание уделяется технологиям белковых чипов, которые позволяют в одном анализе одновременно выявлять целую серию иммунологических маркеров [6] Мы попытались создать автономный и простой в применении мультиплексный тест, позволяющий одновременное выявление в препаратах крови антител к трем возбудителям - вирусам кори, краснухи и паротита с целью комплексной оценки гуморального иммунитета.

Система включает белковые матрицы (иммуночипы) с дискретно нанесенными антигенами вирусов краснухи, кори и паротита(рис.1), а также многоячеечную аналитическую ванну, заполненную готовыми к применению растворами.

В основу теста положен метод дот-иммуноанализа с использованием наночастиц золота и химическим усилением оптического сигнала. Такой анализ предполагает 5 этапов с промежуточными промывками и выполняется в течение 1 часа при комнатной температуре. Учет результатов производится визуально или с помощью специальной компьютерной программы. Предлагаемый набор полностью укомплектован, автономен и может использоваться не только в лабораториях, но и во внелабораторных условиях, как для массового скрининга сывороток, так и для индивидуальных анализов. Комплексный анализ позволит значительно сократить время на обследование пациента. Кроме того, поскольку один анализ с использованием предлагаемого набора эквивалентен нескольким анализам в моноспецифических тест-системах, а по себестоимости эти анализы близки, внедрение предложенной тест-системы в широкую практику возможно даст значительный экономический эффект.

IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

Литература 1. Инфекционные болезни ; под ред. Н.Д. Ющука, Ю.Я. Венгерова. – 2-е изд., перераб. и доп. – М.: ГЭОТАР – Медиа, 2011. – 704 с.

2. Вакциноуправляемые респираторные вирусные инфекции. Грипп, корь, краснуха, эпидемический паротит. / Под ред. И.Г. Дроздова, Новосибирск, 2008.- 210 с.

3. Инфекционные болезни у детей/ Под ред. В.Н.Тимченко.- 4-е изд., испр. и доп.- СПб.: СпецЛит, 2012.- 623с.

4. Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 28 июля 2011 г. № 108 "Об утверждении СП 3.1.2952- "Профилактика кори, краснухи и эпидемического паротита" (зарегистрировано в Минюсте РФ 24.11.2011, регистрационный № 22379).

5. Иммунологические исследования и методы диагностики инфекционных заболеваний в клинической практике/ Под ред.

Кишкун А. А. – М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2009. – 712 с.

6. Pang R. Detection of multiple proteins in an antibody-based protein microarray system.- J. Imm. Meth., 2001, 225, p.1- IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ДЕЙСТВИЯ РАЗЛИЧНЫХ

СОРБЕНТОВ НЕФТИ В ВОДНОЙ СРЕДЕ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ

МИКРОБНОГО ПРЕПАРАТА В УСЛОВИЯХ, ПРИБЛИЖЕННЫХ К

ЕСТЕСТВЕННЫМ

Забелин В.А., Шаршов К.А., Алексеев А.Ю., Адаменко Л.С., Грайфер Е.Д., Научный центр клинической и экспериментальной медицины СО РАМН, Институт неорганической химии им. А.В. Николаева СО РАН В настоящее время преимущества сорбентов открыли перспективную возможность их широкого использования в процессе сбора нефти и нефтепродуктов с грунтовой и водной поверхности. Результаты теоретических и прикладных исследований ликвидации аварийных разливов свидетельствует о преимуществе сорбционных методов, которые позволяют оперативно и экономически выгодно осуществить сбор и переработку поллютантов.

В этой связи перспективно использование комплексного подхода применения новых сорбентов в совокупности с микробными препаратами, удобрениями, специальными агротехническими приемами.

Актуальным является исследование процессов сорбции и биодеградации нефти с использованием новых материалов и технологий в реальных полевых условиях.

На основании частичного решения вышеуказанных научно-технических проблем создан вариант сорбента на базе мультиграфена. Уникальность мультиграфена позволяет развивать новые нанотехнологии в области создания высокотехнологичных сорбентов для различных целей, например, для очистки питьевой воды.

Разрабатываемые в Институте неорганической химии им. А.В.

Николаева СО РАН уникальные графеновые материалы обладают рядом выдающихся свойств, в частности, чрезвычайно высокой поглотительной способностью по отношению к различным органическим веществам и, таким образом, представляют интересную альтернативу традиционным сорбентам нефти и других токсикантов.

Разработка экспериментальных полигонов для исследования сорбции и биодеградации нефти в полевых условиях является приоритетной IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

задачей для многих предприятий, занимающихся добычей нефти и ликвидации последствий аварий.

Настоящая работа была посвящена сравнительной оценке применения сорбентов нефти на основе торфа и мультислойного графита в комплексе с микробиологическим препаратом на экспериментальном полигоне.

Использовали 11 пластиковых контейнеров объемом 400 литров (S поверхности 1300х750 мм) (рис. 1). Они были размещены в грунт, наполнены водой и выдержаны в течение 5 суток. Затем была добавлена сырая нефть в объеме 1 литр/контейнер (толщина нефтяной пленки мм). Выдерживали 5 суток для удаления легких токсичных фракций нефти. Эксперимент проводили течение 60 суток. Использовали следующую схему эксперимента:

Номер контейнера Состав 4, 9 Нефть+торфяной сорбент+микробный препарат 6, 11 нефть+сорбент графен+микробный препарат В качестве микробного препарата был использован коммерческий препарат «Биоойл-АА» (ЗАО «Биоойл»). Микробный препарат и сорбент вносили методом дождевания. Ежедневно проводили измерение температуры и визуальный осмотр контейнеров. На 0, 5, 10, 20, 30, 40 и 60 сутки проводили фотосъемку и отбор образцов воды для учета численности микроорганизмов и оценки содержания продуктов метаболизма на глубине 1, 15, 40 см. На 1 и 20 сутки вносили азотистые удобрения согласно инструкции по применению микробного препарата.

Показано, что в результате эксперимента нефть эффективно полностью сорбировалась при модельном разливе при применении сорбента как на основе графена, так и на основе торфа. Через 30 суток после внесения сорбентов и микробного препарата коэффициент снижения содержания предельных углеводородов на поверхности воды составил 2,76. Для токсичной фракции ( К > Al > Si. Семя в поперечном разрезе имеет несколько другой ряд: К > Al > Р> S.

Анализируя элементный состав семян остальных видов L. succulentus IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

Douglas, L. argenteus Pursh, L. polyphyllus Lindl. выявляются следующие особенности: Для исследуемых семян данных видов характерно преобладание алюминия, на втором месте находится калий, как в спермодерме, так и в разрезе семени. Соотношение элементов в процентном виде относительно алюминия и калия показывает, что содержания других макроэлементов значительно ниже.

В семенах представленных пяти видов соотношение фосфора и серы закономерно увеличивается в разрезе семени по сравнению с содержанием данных элементов в семенной кожуре. По соотношению элементов в зародыше семени в сравнении с семенной кожурой наблюдалось увеличение Р и S у L. albus в 2.5 и 3.5 раз; у L. angustifolium – в 3.5 и 5 раз; у L. succulentus – в 10 и 15 раз; у L. argenteus – в 10 и 5 раз, у L. polyphyllus– в 4.5 и 3.5 раз соответственно, что наглядно демонстрирует важную роль этих элементов в обмене веществ.

Наличие натрия в зародыше у данных видов составляет минимальное количество и не превышает 0.01%, при этом у вида L. argenteus данный элемент вовсе не обнаружен наряду с кальцием. У исследуемых семян L.

albus, L. polyphyllus географического происхождения наблюдается общее снижение процентного содержания некоторых макро- и микроэлементов (Na, Mg, Al, Si, Cl, Ca, Fe, Cu) в зародыше семени по сравнению с семенной кожурой. У L. succulentus, L. argenteus, наоборот, соотношение этих элементов внутри семени по сравнению со спермодермой увеличивается.

Исследование семян по содержанию химических элементов позволило выделить идентичный набор у изученных видов различного происхождения 11 химических элементов (Na, Mg, Al, Si, P, S, Cl, K, Ca, Fe, Cu), входящих в состав спермодермы и разреза семени, соотношение которых отличается у исследованных видов. Для представителей средиземноморской группы (L. albus, L angustifolius) характерно максимальное содержание C по отношению к O в семенной кожуре, накопления Са, K, Al в семенах в порядке снижения их доли. У американских видов (L. polyphyllus, L. argenteus, L. succulentus) соотношение элементов отличается – Al >K > Са – как в спермодерме, так и в разрезе семени. По соотношению химических элементов изученные виды имеют больше сходств в пределах эколого-географических групп (средиземноморской, американской).

IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

Литература 1. Курлович Б.С., Репьева С.И. Генофонд и селекция зерновых бобовых культур – СПб., 1995. – 324 с.

2. Купцов Н.С., Такунов И.П. Люпин – генетика, селекция, гетерогенные посевы. – Брянск.: Клинцы, 2006. – 576 с.

3. Мироненко А.В. Биохимия люпина. – Минск, Наука и техника, 1975. – 4. Санаев Н.Ф. Индуцированная изменчивость в интродукции растений (на примере видов рода Lupinus) – Саранск.: изд-во Мордов. Ун-т, 1992.

IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

СВОЙСТВА РАСТВОРИМОЙ ТИАМИНМОНОФОСФАТАЗЫ ИЗ

ПЕЧЕНИ КУРИЦЫ

УО «Гродненский государственный аграрный университет», г. Гродно, Тиаминмонофосфат (ТМФ) является одним из метаболитов системы обмена витамина В1 в клетках различных видов организмов. У бактерий, растений и дрожжей ТМФ образуется на пути биосинтеза тиаминдифосфата (ТДФ); в тканях животных образование ТМФ связано исключительно с катаболизмом ТДФ. Ферменты, осуществляющие гидролиз ТМФ в клетках животных, в настоящее время не идентифицированы; известно лишь, что ТМФ может служить субстратом фторид-резистентной кислой фосфатазы – эктонуклеотидазы, экспрессируемой в некоторых типах нейронов млекопитающих. Цель данной работы состояла в исследовании свойств ТМФазной активности экстракта из печени курицы (Gallus gallus).

ТМФазная активность гомогената печени проявляла два выраженных рН-оптимума – 6,0 и 9,0. При центрифугировании гомогената 88 % «щелочной» ТМФазы осаждалось с мембранами, тогда как 83 % активности, регистрируемой при рН 6,0, оставалось в экстракте. По данным гель-фильтрации на колонке с тойоперлом HW-55 молекулярная масса растворимой «кислой» ТМФазы равна 18 кДа;

р-нитрофенилфосфатазная активность разделялась на два пика – основной (М r = 83 кДа) и минорный (М r = 18 кДа). Кинетические исследования показали, что растворимая ТМФаза – металл-независимый фермент; константа Михаэлиса ТМФазы для ТМФ составляет 0,73 ± 0, мМ.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что в печени курицы экспрессируется растворимый фермент с ТМФазной активностью, отличающийся от кислой фосфатазы.

IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ УСЛОВИЙ ЗАМОРАЖИВАНИЯ НА

АКТИВНОСТЬ ЗАКВАСОК, СОДЕРЖАЩИХ L.BULGARICUS

ФГБОУ ВПО «Кемеровский технологический институт пищевой Изучение биохимических свойств и активности микроорганизмов, входящих в состав заквасок, позволяет интенсифицировать технологический процесс, повысить биологическую ценность и качество кисломолочных продуктов. Существующие на сегодняшний день методы консервации микроорганизмов (высушивание, лиофилизация, замораживание) заключаются в переводе их вегетативных клеток в анабиотическое состояние. В сравнении с высушиванием и лиофилизацией при замораживании культуры микроорганизмов оказываются менее поврежденными, имеют более высокий уровень жизнеспособности, к тому же при замораживании довольно редки генетические изменения [1-4].

Для приготовления бактериальных заквасок использовали штаммы L.

bulgaricus (В-3964, В-6516) из коллекции ВКПМ. Свежеприготовленные закваски разливали в стерильные пробирки объемом 10 мл и далее замораживали при температурах -45, -25 и -10° С на воздухе и в хладоносителе (этанол). Пробирки с заквасками оставляли на хранение в термоизолированных контейнерах при температурах, соответствующих температурам замораживания и хранили в течение 6 месяцев.

Температура и скорость замораживания способны в значительной степени повлиять на выживаемость микроорганизмов. На протяжении всего периода хранения наилучшая выживаемость микроорганизмов отмечена в заквасках, замороженных в хладоносителе при -45° C. Через 6 мес. хранения она составила в среднем 17%, от исходного количества микроорганизмов.

Высокая выживаемость молочнокислых микроорганизмов после замораживания не является гарантией сохранения полноты их свойств и жизнеспособности. О функциональной активности бактерий изучаемых заквасок судили по их биохимической активности.

Активность кислотообразования определяли по времени достижения pH = 4,5 при культивировании микроорганизмов в сухом обезжиренном IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

восстановленном молоке (табл. 1). Анализ полученных данных показывает, что через 6 мес. хранения закваски сохранили высокую активность кислотообразования, продолжительность сквашивания увеличилась в среднем на 1 час.

Таблица 1. Активность кислотообразования L. bulgaricus Положительное действие L.bulgaricus связано с подавлением патогенных и условно-патогенных микроорганизмов за счет продуцирования антимикробных веществ. Определение антагонистической активности L.bulgaricus проводили при совместном культивировании методом перпендикулярных штрихов [5]. Штамм В-3964 отличался более высокой антагонистической активностью. После размораживания наиболее высокая антагонистическая активность L.

bulgaricus отмечена в заквасках, замороженных при температуре -45° С в среде хладоносителя. Зона задержки роста тест-микробов изменилась в среднем на 1 2 мм (табл. 2).

Таблица 2. Антагонистическая активность L.bulgaricus до/после замораживания № штамма в Анализ полученных данных позволяет сделать вывод, что температурный режим от -25° С до -45° С является наиболее оптимальным для замораживания и хранения исследованных заквасок термофильных молочнокислых бактерий L.bulgaricus. После размораживания закваски, хранившиеся в таких условиях, позволяют получить кисломолочные продукты с достаточно плотным сгустком, хорошими органолептическими показателями и высоким содержанием жизнеспособных микроорганизмов.

IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

Литература 1. Рахуба Д.В., Новик Г.И. // Криоконсервация пробиотических микроор-ганизмов: научные основы практического использования.

Микробные био-технологии: фундаментальные и прикладные аспекты:

сб. науч. работ Инсти-тут микробиологии НАН Беларуси. Вып.1.

Минск: Изд. И.П. Логинов, 2007. С. 268-276.

2. Сотченко О.Г., Сафроненко Л.В. // Пищевая промышленность: наука и технологии. 2009. № 1(3). С. 14-18.

3. Fonseca F, Passot S, Cunin O, Marin M. // Biotechnol Prog. 2004. Jan-Feb;

20(1). P. 229-238.

4. Хамагаева И.С., Качанина Л.М., Тумурова С.М. Биотехнология заква-сок пропионовокислых бактерий / Улан-Уде: Изд-во ВСГТУ, 2006.

5. Нетрусов А.И., Егорова М.А., Захарчук Л.М. Практикум по микробио-логии. М.: Издательский центр «Академия», 2005. 608 с.

IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

ЛЕЧЕНИЕ СТЕНОЗОВ И РЕСТЕНОЗОВ ВНУТРЕННЕЙ СОННОЙ

АРТЕРИИ С ПОМОЩЬЮ ПЕРИФЕРИЧЕСКОГО БАЛЛОННОГО

КАТЕТЕРА ПОКРЫТОГО ПАКЛИТАКСЕЛОМ

Дальневосточный Государственный Медицинский Университет, Федеральный Центр Сердечнососудистой Хирургии г. Хабаровск Для лечения стенозов внутренней сонной артерии на сегодняшний день предложено несколько методик, которые активно используются во всем мире: методы открытой сосудистой хирургии – классическая и эверсионная эндартеркэктомия, методы рентгенэндоваскулярной хирургии – баллонная ангиопластика и стентирование. С появлением современных конструкций стентов, стентов с лекарственным покрытием, систем защиты от дистальной эмболии баллонная ангиопластика стала мало актуальной как в бассейне прецеребральных артерий, так и в других сосудистых бассейнах. Однако, в связи с появлением в последнем десятилетии баллонов с лекарственным покрытием (drug eluting balloon – DEB) были проведены рандомизированные исследования, которые доказали их эффективности при лечении стенозов и особенно рестенозов в различных сосудистых бассейнах (Valentines trials II для коронарных артерий, Freeride для артерий нижних конечностей и др.). В качестве наносимого лекарства используется препарат паклитаксел.

Паклитаксел представляет собой липофильное вещество, выделенное из тихоокеанского дерева Taxus brevifolia, способное подавлять процессы деления, пролиферация и миграция клеток. В используемых дозировках не проявляет цитотоксического действия, а является цитостатиком, замедляя деление гладкомышечных клеток и секрецию экстрацеллюлярного матрикса, не угнетая при этом деление клеток эндотелия.

Мной предлагается использование баллона покрытого паклитакселем в лечении стенозов и в особенности рестенозов внутренней сонной артерии.

Преимущества DED в сравнении с повторным стентированием in stent:

короткий период местной доставки лекарства: не недели или месяцы;

более равномерная доставка лекарства к сосудистой стенке; более быстрая эндотелизация и, следовательно, уменьшение времени двойной IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

дезагрегантной терапии; не появляется двойной слой металла; более легкая доставляемость.

Преимущества DEB в сравнении с простой баллонной ангиопластикой: уменьшение частоты рестенозов; нет увеличения сложности устройства или процедуры.

Литература 1. «Стентирование внутренних сонных артерий», Л. А. Бокерия, Б. Г.

Алекян, А. В. Тер-Акопян, Н. Б. Тагаев, М. В. Шумилина, 2004;

2. «Стенозы сонных артерий: взгляд интервенционного кардиолога», А.Г.Осиев, Д.А.Редькин; 2006;

3. «Непосредственные и отдаленные результаты стентирования внутренних сонных артерий у больных высокого риска», Л. А. Бокерия Б. Г. Алекян Ю. И. Бузиашвили Е. З. Голухова А. В. Тер-Акопян Н. Б.

Тагаев М. В. Шумилина, 2004;

4. «Стентирование внутренней сонной артерии с церебральной протекцией», В.А. Лазарев, С.Б. Волков, В.А. Иванов, Г.И. Антонов, 2005;

5. «Новый подход в решении проблемы рестенозов - баллоны с лекарственным покрытием», 2010;

6. «Restenosis after carotid artery stenting and endarterectomy: a secondary analysis of CREST, a randomised controlled trial», Brajesh K Lal, Kirk W Beach, Gary S Roubin, 2012;

7. «Single-center experience with carotid stent restenosis», Willfort-Ehringer A, Ahmadi R, Gschwandtner ME, 2002;

8. «In-stent recurrent stenosis after carotid artery tenting: Life table analysis and clinical relevance», Brajesh K. Lal, MD, Robert W. Hobson II, MD,, 2003.

IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

ВЛИЯНИЕ ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЙ ОБРАБОТКИ

ЛИГНОЦЕЛЛЮЛОЗНОГО СЫРЬЯ КУЛЬТУРОЙ LENTINUS

TIGRINUS НА ВЫХОД БИОЭТАНОЛА

ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет В современном мире человечество ведет поиски дешевого и легко возобновляемого источника энергии. Различные целлюлозосодержащие промышленные отходы, такие как опилки, зерновые остатки, солодовая дробина, отходы целлюлозно–бумажного производства представляют потенциальный интерес. Одним из перспективных направлений считается переработка лигноцеллюлозного сырья в биоэтанол. Для возможного применения древесины в целях получения биопродуктов (в частности биоэтанола) в настоящее время интенсивно разрабатываются различные технологии деструкции лигноцеллюлоз. На сегодняшний день самым эффективным является ферментативный гидролиз целлюлозы.

Преимущество этого способа заключается в отсутствии необходимости применения высоких температур и давления, следовательно, снижении энергоемкости. Наибольшее препятствие для ферментативного гидролиза целлюлозы представляет лигнин, поэтому для эффективного гидролиза лигноцеллюлозных материалов необходимо проведение их предварительной делигнификации.

Целью настоящей работы было изучение влияния делигнификации лигноцеллюлозного сырья на степень осахаривания целлюлозы и выход биоэтанола.

В работе в качестве лигноцеллюлозных субстратов использовались ультрадисперсные сосновые опилки, которые подвергали обработке культурой Lentinus tigrinus для делигнификации субстратов.

Предварительную обработку лигноцеллюлозных субстратов культурой Lentinus tigrinus проводили при глубинном культивировании в течение 3-х (образец 1), 6 суток (образец 2), 9 суток (образец 3) и 12 суток (образец 4). Контролем выступали ультрадисперсные опилки без предварительной обработки. По окончании культивирования в лигноцеллюлозных субстратах определяли содержание доли лигнина и целлюлозы. Ферментативный гидролиз обработанных субстратов IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

осуществляли с помощью препарата «Ламинекс БГ». В дальнейшем образовавшиеся моносахариды в результате осахаривания подвергали сбраживанию дрожжами рода Saccharomyces cerevisiae раса «Ангел».

В ходе анализа экспериментальных данных, установлено, что наибольшее накопление редуцирующих сахаров и наибольшая убыль целлюлозы наблюдаются в варианте с предобработанными опилками.

Оптимальным вариантом предварительной делигнификации является образец 3, что соотвествует 9 суткам обработки. Степень делигнификациии в данном варианте составляет более 30%. Данный вариант характеризуется максимальным выходом спирта (1,26 % об).

IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ ДОМЕНОВ ТИТИНА И МИОМЕЗИНА,

ОБЛАДАЮЩИХ СПОСОБНОСТЬЮ СТИМУЛИРОВАТЬ СИНТЕЗ

МЕХАНО-РОСТОВОГО ФАКТОРА

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биохимии им. А.Н.Баха Российской академии наук Механо-ростовой фактор (МРФ) является продуктом альтернативного сплайсинга гена инсулино-подобного фактора роста 1. МРФ стимулирует пролиферацию миобластов и влияет на их дифференцировку. Экспрессия МРФ резко возрастает при механических нагрузках скелетных мышц, а также при их повреждении.

Ранее нами было показано, что миофибриллярные белки титин и миомезин, освобождающиеся из поврежденной мышцы, стимулируют синтез МРФ в миобластах и дифференцированных миотубах. Однако структурные мотивы белков-индукторов, ответственные за активацию синтеза МРФ, не были исследованы.

Целью данной работы является исследование способности индуцировать синтез МРФ у рекомбинантных белков, содержащих различные домены титина и миомезина, а также комбинации этих доменов. Была исследована активация экспрессии мРНК и белка МРФ в культурах первичных миобластов и дифференцированных миотуб человека рекомбинантными белками, содержащими в своём составе различные домены белков-индукторов синтеза МРФ титина и миомезина.

Были исследованы рекомбинантные белки, содержащие следующие домены:

1) слитые миомезиновые домены 1-7 (My 1-7);

2) слитые миомезиновые домены 7-13 (My 7-13);

3) слитые титиновые домены А164-А170 (Ti A164-A170);

4) слитые миомезиновые домены 4-5 (My 4-5);

5) слитые миомезиновые домены 7-8 (My 7-8);

6) слитые миомезиновые домены 9-13 (My 9-13);

7) слитые миомезиновые домены 9-11 (My 9-11);

8) слитые миомезиновые домены 11-13 (My 11-13);

9) миомезиновый домен 4 (My 4);

IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

10) миомезиновый домен 5 (My 5);

11) титиновый домен М4 (Ti M4);

12) титиновый домен М10 (Ti M10).

Для анализа экспрессии мРНК МРФ методом ПЦР-РВ использовали следующие праймеры: МРФ прямой 5`-ACCAACAAGAACACGAAGTC-3`, обратный -5`- CAAGGTGCAAATCACTCCTA-3` [1]; бета-актин прямой 5`-AGGGGCCGGACTCGTCATACT-3` [2]. Для определения концентрации белка МРФ использовали иммуноферментную сэндвич-тест-систему на основе моноклональных антител с усилением сигнала [3].

Рекомбинантные белки были предоставлены профессором Маттиасом Вильманнсом (Matthias Wilmanns), Европейская Лаборатория Молекулярной Биологии (EMBL), Гамбург. 2х105 миобластов человека рассевали на 35-мм чашки Петри в среде F12 с 10%-й фетальной сывороткой теленка. Миотубы получали путём инкубации миобластов в среде F12 с 2%-й сывороткой лошади в течение 7 дней. Все белки добавляли до концентрации 5 мкг/мл. На первом этапе была исследована способность индуцировать экспрессию МРФ у рекомбинантных белков, содержащих в своем составе одновременно фибронектиновые домены типа III и иммуноглобулино-подобные домены (слитые миомезиновые домены 1-7, слитые миомезиновые домены 7-13, слитые титиновые домены А164-А170).

Было установлено, что все три рекомбинантных белка активируют синтез МРФ в культурах человеческих миобластов и миотуб, причём эффект стимуляции наблюдался как на уровне экспрессии мРНК, так и на уровне экспрессии белка. Так, рекомбинантный белок My 1- повышал уровень мРНК МРФ в миобластах в 18,4 раза; белок My 7-13 – в 9,1 раза; белок Ti А164-А170 - в 11,2 раза. Сходные результаты были получены и в экспериментах на дифференцированных миотубах: белок My 1-7 стимулировал экспрессию мРНК МРФ в 16,7 раза; белок My 7-13 – в 9,9 раза; белок Ti А164-А170 - в 10,5 раза. Аналогичная картина наблюдалась при исследовании стимуляции синтеза белка МРФ.

Рекомбинантный белок My 1-7 активировал синтез белка МРФ в миобластах до 108 пикограмм на миллиграмм общего белка; белок My 7-13 – до 82 пкг/мг общего белка; белок Ti А164-А170 – до 95 пкг/мг общего белка. В контрольных клетках, инкубировавшихся без добавления рекомбинантных белков, содержание МРФ было ниже порога чувствительности использованной тест-системы. Так же, как и в случае изучения экспрессии мРНК, эксперименты на миотубах подтвердили результаты, полученные в экспериментах на миобластах. Так, белок My IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

1-7 поднял содержание белка МРФ в дифференцированных миотубах до 99 пикограмм на миллиграмм общего белка; белок My 7-13 – до 78 пкг/мг общего белка; белок Ti А164-А170 – до 90 пкг/мг общего белка. В контрольных миотубах, инкубировавшихся без добавления рекомбинантных белков, содержание МРФ также было ниже порога чувствительности использованной тест-системы. Таким образом, было показано, что для индукции синтеза МРФ в мышечных клетках не обязательно сохранение полноразмерной молекулы белка-индуктора.

Отдельные фрагменты титина и миомезина, содержащие в своём составе одновременно фибронектиновые домены типа III и иммуноглобулино-подобные домены, обладали способностью стимулировать экспрессию данного ростового фактора. На следующем этапе работы была исследована способность индуцировать экспрессию МРФ у рекомбинантных белков, содержащих в своем составе только несколько фибронектиновых доменов типа III (слитые миомезиновые домены 4-5 и слитые миомезиновые домены 7-8). Было установлено, что из двух данных белков только белок My 4-5 стимулирует экспрессию мРНК МРФ в миобластах и дифференцированных миотубах: её уровень возрастал в 16,7 раза и в 14,3 раза, соответственно. Белок My 7-8 не активировал синтез данной мРНК: её содержание в миобластах и миотубах не отличалось от контроля статистически достоверно.

Эксперименты на миотубах продемонстрировали аналогичные результаты.

Рекомбинантный белок My 4-5 активировал синтез белка МРФ в миобластах до 102 пкг/мг общего белка, а в миотубах – до 101 пкг/мг общего белка. Обработка культур мышечных клеток рекомбинантным белком My 7-8 не индуцировала экспрессию белка МРФ до уровня, достаточного для детекции использованной тест-системой. Таким образом, было показано, что наличие иммуноглобулино-подобных доменов в составе белка не является необходимым условием для проявления МРФ-индуцирующей активности: некоторые рекомбинантные белки, состоящие из одних фибронектиновые домены типа III, обладают способностью активировать экспрессию МРФ.

Параллельно с этими исследованиями была изучена способность индуцировать экспрессию МРФ у рекомбинантных белков, содержащих в своем составе только несколько иммуноглобулино-подобных доменов (слитые миомезиновые домены 9-13, слитые миомезиновые домены 9- и слитые миомезиновые домены 11-13). Было установлено, что из этих белков только два индуцировали экспрессию мРНК МРФ: My 9-13 и My 11-13. Первый из них повышал уровень данной мРНК в миобластах в IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

раз, а в миотубах – в 9,2 раза, а второй – в 8,6 раз и в 8,1 раз, соответственно. Белок My 9-11 не активировал синтез данной мРНК: её содержание в миобластах и миотубах не отличалось от контроля статистически достоверно. Эксперименты на миотубах показали сходные результаты. Рекомбинантный белок My 9-13 повысил содержание белка МРФ в миобластах до 73 пкг/мг общего белка, а в миотубах – до 69 пкг/мг общего белка; белок My 11-13 повысил содержание данного ростового фактора до 61 пкг/мг общего белка и 54 пкг/мг общего белка, соответственно. Обработка культур мышечных клеток рекомбинантным белком My 9-11 не индуцировала экспрессию белка МРФ до уровня, достаточного для детекции использованной тест-системой. Таким образом, было показано, что наличие фибронектиновых доменов типа III в составе белка также не является необходимым условием для проявления МРФ-индуцирующей активности: некоторые рекомбинантные белки, состоящие из одних иммуноглобулино-подобных доменов, обладают способностью активировать экспрессию МРФ. На следующем этапе работы была исследована способность индуцировать экспрессию МРФ у рекомбинантных белков, содержащих в своем составе только один фибронектиновый домен типа III (миомезиновый домен 4 и миомезиновый домен 5). Было установлено, что из этих белков только My 5 стимулирует экспрессию мРНК МРФ в миобластах и дифференцированных миотубах: её уровень возрастал в 13 раз и в 12, раза, соответственно. Белок My 4 не активировал синтез данной мРНК:

её содержание в миобластах и миотубах не отличалось от контроля статистически достоверно. Эксперименты на миотубах продемонстрировали аналогичные результаты. Рекомбинантный белок My 5 активировал синтез белка МРФ в миобластах до 84 пкг/мг общего белка, а в миотубах – до 88 пкг/мг общего белка.

Обработка культур мышечных клеток рекомбинантным белком My не индуцировала экспрессию белка МРФ до уровня, достаточного для детекции использованной тест-системой. Таким образом, было показано, что наличия одного фибронектинового домена типа III достаточно для проявления рекомбинантным белком МРФ-индуцирующей активности, но в то же время не любой домен данного типа обладает способностью активировать экспрессию данного ростового фактора. Параллельно с этими исследованиями была изучена способность индуцировать экспрессию МРФ у рекомбинантных белков, содержащих в своем составе только один иммуноглобулино-подобный домен (титиновый домен М4 и титиновый домен М10). Было установлено, что из этих белков только Ti M4 стимулирует экспрессию мРНК МРФ в миобластах и IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

дифференцированных миотубах: её уровень возрастал в 7 раз и в 6,1 раза, соответственно. Белок Ti M10 не активировал синтез данной мРНК: её содержание в миобластах и миотубах не отличалось от контроля статистически достоверно. Эксперименты на миотубах продемонстрировали аналогичные результаты. Рекомбинантный белок Ti M4 активировал синтез белка МРФ в миобластах до 54 пкг/мг общего белка, а в миотубах – до 58 пкг/мг общего белка. Обработка культур мышечных клеток рекомбинантным белком Ti M10 не индуцировала экспрессию белка МРФ до уровня, достаточного для детекции использованной тест-системой. Таким образом, было показано, что наличия одного иммуноглобулино-подобного домена достаточно для проявления рекомбинантным белком МРФ-индуцирующей активности, но в то же время не любой домен данного типа обладает способностью активировать экспрессию данного ростового фактора. В результате выполнения данной работы было установлено, что для проявления белком МРФ-индуцирующей активности достаточно одного определённого фибронектинового домена типа III или же одного определённого иммуноглобулино-подобного домена. Также было установлено, что отнюдь не любые фибронектиновые домены типа III и иммуноглобулино-подобные домены стимулируют экспрессию МРФ.

Остаётся открытым вопрос, существует ли для этих двух разных типов доменов единый рецептор на мембране мышечных клеток, или же каждый из них связывается со своим отдельным рецептором. Для решения этой проблемы необходимы дальнейшие исследования.

Работа поддержана грантом РФФИ 12-04-01090-а.

Литература 1. Kim JS et al., 2005, Am J Physiol Endocrinol Metab., 288, E1110-1119.

2. Abrahamsen HN et al., 2003, J Mol Diagn., 5, p.34–41.

3. Kravchenko I et al., 2006, Hybridoma, 25, p.300-305.

IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

ВЛИЯНИЕ АЛКИЛРЕЗОРЦИНОВ НА ИЗМЕНЕНИЕ АКТИВНОСТИ

И СТАБИЛЬНОСТИ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ

Краснова М.А., Лойко Н.Г., Эль-Регистан Г.И., Иванова Л.А.

ФГБОУ ВПО «Московский Государственный Университет Пищевых ФГБУ науки Институт микробиологии имени С.Н. Виноградского Российской академии наук, Москва, Россия Повышение и сохранение активности ферментных препаратов в технологических процессах производства продуктов питания и биотоплива является важной биотехнологической задачей.

Направленная модификация структуры ферментов с помощью низкомолекулярных лигандов, таких как микробные и растительные ауторегуляторы – алкилрезорцины (АР) [1], позволяет повысить их активность и стабильность к воздействию неоптимальных значений температуры и рН.

Целью исследования стало повышение амилолитической активности и рН-стабильности ферментного препарата «Полифермент» (ООО «Сиббиофарм», Россия).

В результате проведенных экспериментов было показано, что три специально синтезированных алкилрезорцина с различной степенью окисленности, обозначенные АР1, АР2 и АР3, в исследуемом диапазоне концентраций (0.1-5.0 мг/мл) увеличивают амилолитическую активность ФП на 20-350 % от контроля (рис. 1).

Другой эффект от воздействия АР заключался в повышении операционной стабильности, о чем судили по сохранению высокой гидролитической активности при рН, отличных от оптимальных: < 6 и > 8 (рис. 2). Амилазная активность «Полифермента», модифицированного АР, в широком диапазоне рН имела активность такую же или выше, как при оптимальном рН для нативного фермента.

Таким образом, окисленные АР способны направленно изменять активность ФП и повышать их операционную стабильность.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (гранты № 13-04-01145 А и № 13-04-40231- Н).

IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

Рис. 1. Влияние окисленных АР на амилолитическую активность ФП "Полифермент" Рис. 2. Операционная рН-стабильность амилазы ФП «Полифермент», модифицированной АР1, АР2 и АР Литература 1. Эль-Регистан Г.И., Мулюкин А.Л., Николаев Ю.А., Сузина Н.Е., Гальченко В.Ф., Дуда В.И. Адаптогенные функции внеклеточных ауторегуляторов микроорганизмов // Микробиология. 2006.Т.75. №4. С.

446-456.

IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

ВЛИЯНИЕ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА

ЭТАНОЛ-МЕТАБОЛИЗИРУЮЩЕГО ФЕРМЕНТА СУР2Е1 НА

РАЗВИТИЕ АЛКОГОЛИЗМА В МОРДОВСКОЙ ПОПУЛЯЦИИ.

Кудряшова В.И., Трофимов В.А., Акесенова О.Н., Гудошникова Т.Н., ФГБОУ ВПО Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева, Введение В связи с резко возросшей заболеваемостью алкоголизмом в России особую актуальность приобретают исследования механизмов развития данного заболевания с целью разработки эффективных методов профилактики и патогенетической терапии.

Распространение алкоголизма представляет серьезную медико-социальную проблему. Способствуя развитию соматических и психических заболеваний, злоупотребление алкоголем остается одной из причин заболеваемости и смертности населения. Систематическое употребление алкоголя, в отличие от других психоактивных веществ, с высокой долей вероятности приводит к развитию патологических процессов практически во всех органах и тканях [3,7,9].

В настоящее время установлена общность биологических механизмов формирования зависимости от алкоголя. Проведенные молекулярно-генетические исследования показали, индивидуальная предрасположенность к зависимости от алкоголя проявляется в особенностях функционирования «системы подкрепления» мозга. Кроме того, важную роль играют ферменты, участвующие в метаболизме алкоголя (алкогольдегидрогеназа, альдегиддегидрогеназа).

Наряду с социальными факторами, в основе формирования алкоголизма, важную роль играют и генетические, которые отражают индивидуальные особенности деятельности нейромедиаторных систем и ферментов метаболизма этанола. Особая роль наследственности в формирование ХА состоит в возникновении компенсаторных механизмов, обеспечивающих нормальное функционирование нейромедиаторных систем, при длительном влияние алкоголя на организм [3,5].

Несмотря на большое количество работ в области генетики алкоголизма, их результаты не редко противоречивы, что может быть IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

обусловлено этническими аспектами в реакциях на алкоголь. Поэтому наилучшим подходом к исследованию наследственной предрасположенности к алкоголизму является изучение ассоциаций между полиморфными локусами генов-кандидатов и заболеваниями с учетом этнической принадлежности исследованных индивидов.

Всё это диктует необходимость комплексного исследования механизмов развития алкоголизма в контексте межгенных и ген-средовых взаимодействий для разработки адекватных лечебно-профилактических мероприятий, учитывающих этническую принадлежность и генетические особенности исследуемых индивидов [1,3,5].

Материалы и методы Обследованы 60 пациентов мужского пола в возрасте от 28до 58 лет, страдающих хроническим алкоголизмом с проявлениями АБП и проходивших курс стационарной терапии в республиканском наркологическом диспансере г. Саранска. Критерии отбора в группу включал длительный алкогольный анамнез и отсутствие маркеров вирусного гепатита и других поражений печени. Клиническое обследование состояло из сбора жалоб и анамнез, физикальных, лабораторных и инструментальных методов диагностики. Контрольную группу составляли 54 здоровых мужчин, не злоупотребляющих алкоголем, подобранные по возрасту и этнической принадлежности.

ДНК выделяли из периферической крови стандартным методом по Boodram. Молекулярно-генетический анализ полиморфизма генов проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). ПЦР проводилась на амплификаторе производства компании «ДНК-технология» с использованием ДНК-полимеразы производства фирмы «Литех». Реакция выполнялась в 30 мкл общего объема смеси. К смеси добавлялся специфический олигонуклеотидный праймер СУР2Е (по 10 пМ каждого праймера). Выявления полиморфизма гена проводили методом электрофореза в 3% агарозном геле.

Результаты амплификации и рестрикции оценивались путем проведения вертикального электрофореза в 3% агарозном геле. По окончании электорофореза гель окрашивали раствором бромистого этидия (0,1 мкг/мл) в течение 15 мин и анализировали в проходящем ультрофиолетовом свете на трансиллюминаторе.

Математическую обработку результатов исследования проводили на ПЭВМ IBM PENTIUM с использованием статистической программы Statistica v. 5.0. В случае попарного сравнения выборок по частоте одного генотипа использовали точный критерий Фишера. Достоверность IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

различий в частотах встречаемости изучаемых признаков между группой больных и соответствующей контрольной группой определяли по критерию x2.

Результаты и обсуждения Известно, что длительное употребление алкоголя стимулирует продукцию цитохромов Р-450, в частности СУР2Е1, избирательно локализованного в гепатоцитах. Активация МЭОС, приводящая к ускорению элиминации этанола у больных алкоголизмом, формирует большое количество его токсических метаболитов, вызывающих окислительный стресс и повреждение печени. У лиц, злоупотребляющих алкоголем, основное значение в метаболизме этанола имеет именно этот путь [1,3,4,5.6].

Необходимо помнить о том, что цитохром Р-450- зависимая МЭОС, наряду с метаболизмом алкоголя, участвует в детоксикации лекарственных препаратов [1,2,3].

Цитохром СУР2Е1относится к группе генов суперсемейства цитохромов Р-450, ответственных за I фазу детоксикации ксенобиотиков.

Цитохром СУР2Е1 метаболизирует этанол и многие известные проканцирогены, такие как нитрозамины, находящиеся в табачном дыме [1,2,3].

В гене СУР2Е1,на сегодняшний день индентифицировано несколько полиморфных локусов. Полиморфизмы, выявленные с помощью эндонуклеаз рестрикции RsaI: G/C(-1259), PstI: C/T(-1019), локализованы в 5, - области гена и находятся в неравновесном сцеплении друг с другом [8,9].

Показано, что мутация гена СУР2Е1, обусловленная транзицией C/T в -1019 позиции нуклеотидной последовательности промоторной области гена, способствует синтезу фермента с повышенной активностью [9.10].

Таблица 1. Распределение частоты встречаемости генотипов и аллелей изучаемого полиморфизма в группе больных алкоголизмом и в группе контроля контроля (n=54) (PstI-1293 G>C) В результате молекулярно-генетического анализа определено соотношение частоты встречаемости генотипов среди групп контроля и IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

больных алкоголизмом. Анализ частоты встречаемости генотипов гена CYP2E1 среди групп контроля и больных алкоголизмом, показал, что генотип G/G (дикий тип) в группе больных встречается с частотой 11,67%, гетерозиготный G/C – с частотой 33,33% и гомозиготный мутантный С/С – 55%. В контрольной выборке частоты генотипов G/G, G/C и C/C – 11,11%, 38,89% и 50% соответственно (табл.1, рис.1). Анализ частот генотипов в исследуемых этнических группах также не несет существенных различий (эрзя G/G 9,38%, G/C 37,5%, C/C 53,12%; мокша 14,29%, 28,57%, 57,14% соответственно). (Табл.2, рис.2).

В результате проведения популяционного исследования, частота аллелей для полиморфизма PstI-1293 G/C не позволят выявить достоверных различий, так как встречаемость аллелей G и C в обеих группах находится практически в равных соотношениях (эрзя G 28,13%, С 71,87%; мокша 28,57%, 71,43% соответственно). (Табл.2, рис.2).

Таблица 2. Популяционное распределение частоты встречаемости генотипов и аллелей изучаемого полиморфизма в группе больных алкоголизмом Проанализировав экспериментальные данные, полученные при исследовании полиморфизма PstI (-1293 G/C) гена CYP2E1 в мордовской популяции, мы можем сделать вывод, что наибольший процент встречаемости полиморфизма PstI (-1293 G/C) встречается у эрзян – он составляет 92%, мокшан – 74% (рисунок – 3).

Выводы Изучение полиморфизма гена CYP2E1 (PstI -1293 (G/C)) в целях возможного его применения как маркёра принадлежности к алкоголизму показало, что:

– полиморфизм гена CYP2E1 (PstI -1293 (G/C)) не может служить маркёром алкоголизма, так как его встречаемость в группе здоровых людей также высока, как и в группе больных алкоголизмом (разной этнической принадлежности);

– частота встречаемости людей (эрзя, мокша) с генотипом, содержащим производный от предкового аллель С2 также высока в группе здоровых людей, как и в группе больных алкоголизмом.

Полученные нами данные согласуются с выводами ряда авторов [8,9] IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

о том, что связь полиморфизма PstI (-1293 G>C) гена CYP2E1 и алкоголизма неоднозначна. Вероятнее всего, полиморфизм связан не с развитием заболевания, а с тяжестью его течения.

Рис. 1. Соотношение частоты встречаемости аллелей и генотипов гена CYP2E1 (PstI-1293 G/C) среди групп контроля и больных алкоголизмом, Рис. 2. Частота встречаемости аллелей и генотипов гена CYP2E (PstI-1293 G/C) среди групп эрзя и мокша, % IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

Рис. 3. Частота встречаемости полиморфизма PstI (-1293 G/C) генаCYP2E1 в этнических группах Литература 1. Баранов В.С., Баранова Е.В., Иващенко Т.Э., Асеев М.В. Геном человека и гены «предрасположенности» (введение в предиктивную медицину).- СПб.: Интермедика, 2000. - 272 с.

2. Владимиров Ю.А., Азисова О.А., Деев А.И., Козлов АК.В., Осипов А.Н.. Рощупкин Д.И. Свободные радикалы в живых системах. Итоги науки и техники. Серия биофизика. - М., 1991. - 251 с.

3. Кулинский В.И. Обезвреживание ксенобиотиков // Соровский Образовательный журнал.- 1999.- №1. - С. 8-12.

4. Маевская М.В. Алкогольная болезнь печени // Consilium – medikum. – 2001.- №6. - С. 14-17.

5. Огурцов П.П. Генетический фактор риска развития алкогольной патологии в московском регионе // Протокол собрания рабочей комиссии Консультационно-экспертного совета по вопросам производства и оборота этилового спирта, алкогольных и спиртосодержащих продуктов при Федеральном собрании РФ 1.07.1999. Москва.

6. Подымова С.Д. Механизмы алкогольного повреждения печени // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. - 1998. - №5. - С. 21-25.

7. Шангареева З.А., Викторова Т.В., Насыров Х.М., Сагидулин А.Ф., IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

Байков И.Р. Генетический полиморфизм ферментов метаболизма этанола // Клиническая наркология. – 2004. - № 3. - С 36-40.

8. Bartsch H, Nair U, Risch A et al. Genetic polymorphism of CYP genes, alone or in combination, as a risk modifier of tobacco-related cancers // Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. – 2000. – Vol.9, № 1. - P. 3-28.

9. Hayashi S., Watanabe J., Kawajiri K. Genetic polymorphism in 5, flanking region change transcriptional regulation of the human cytochrome P 450 IIE! Gene // J. Biochem. – 1991. – Vol. 110. – P.

559-565.

10. Huang C-Y., Huang K-L., Cheng T-J et al. The GSTT1 and CYP2E genotypes are possible factiors causing vinyl chloride induced abnormal liver function // Arch. Tojcjl. – 1997. – Vol.71 –P. 482-488.

IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

АКТИВНОСТЬ АДЕНОЗИН-ТИАМИНТРИФОСФАТ-ГИДРОЛАЗЫ В

ОРГАНАХ И ТКАНЯХ КРЫСЫ

Кудырко Т.Г., Макарчиков А.Ф., Лучко Т.А., Русина И.М.

УО «Гродненский государственный аграрный университет», ГП «Институт биохимии биологически активных соединений НАН Беларуси», г. Гродно, Республика Беларусь Сравнительно недавно в биологических объектах обнаружено новое производное витамина В1 – аденозин-тиаминтрифосфат (АТТФ), роль которого в жизнедеятельности клетки неизвестна [1]. В клетках E. coli усиленный синтез АТТФ наблюдается при углеродном голоде, что позволяет формально рассматривать это соединение в качестве алармона – индикатора тревожного состояния. До настоящего времени исследования, касающиеся метаболизма АТТФ у животных, не проводились.

Цель данной работы состояла в изучении распределения активности фермента, катализирующего гидролиз АТТФ, в органах и тканях крысы.

В эксперименте использовались образцы тканей 3-х крыс-самцов линии Вистар 3-х месячного возраста. Активность АТТФ-гидролазы в гомогенатах определяли по количеству образующегося в реакции тиаминдифосфата при рН 8,0 в присутствии 5 мМ MgCl2.

В результате проведенного нами исследования установлено, что скорость гидролиза АТТФ в органах и тканях крысы составляет (мкмоль/мин/г сырой ткани): печень – 0,27 ± 0,03, почки – 0,14 ± 0,06, сердце – 0,12 ± 0,01, головной мозг – 0,09 ± 0,01, легкие – 0,13 ± 0,02, селезенка – 0,12 ± 0,02, скелетные мышцы – 0,05 ± 0,01, кишечник ( duodenum) – 0,14 ± 0,03.

Таким образом, для органов и тканей крысы характерны существенные различия в содержании АТТФ-гидролазной активности.

IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

БИОХИМИЧЕСКАЯ АДАПТАЦИЯ ОРГАНИЗМА СТУДЕНТОВ К

ОБРАЗОВАТЕЛЬНОМУ ПРОЦЕССУ

ФГБОУ ВПО "Забайкальский государственный университет" Целью исследования было раскрытие закономерностей изменения биохимических и психофизиологических показателей при адаптации в процессе обучения у студентов младших курсов и обоснование применения природных адаптогенов для коррекции выявленных нарушений.

Для достижения цели экспериментально определили наиболее эффективные препараты растительного происхождения, обладающие антиоксидантным действием; исследовали динамику некоторых параметров стресс-реализующих и стресс-лимитирующих систем под влиянием растительных препаратов; изучили влияние растительных адаптогенов на психофизиологический статус в условиях стресса;

оценили характер корреляционных взаимоотношений между биохимическими и психофизиологическими показателями при стрессорном воздействии у студентов, принимавших различные растительные препараты.

Впервые установлено, что у студентов в процессе адаптации к факторам образовательной среды в стрессовой ситуации возникает гормональный дисбаланс, характеризующийся преимущественной активацией адренергических механизмов, при этом деградация дофамина происходит, главным образом, окислительным путем. Данные сдвиги протекали на фоне выраженного ответа со стороны серотонинергической стресс-лимитирующей системы, накопления в крови свободных жирных кислот и ненасыщенных липидов, начальных и промежуточных продуктов пероксидного окисления липидов. Последнее сопровождалось адекватным ответом со стороны антирадикальной защиты, а к концу учебного года синдром гиперлипопероксидации приводил к дефициту антиоксидантных факторов. Параллельно с этим нарастали нервно-психическое напряжение, уровень тревожности, фрустрации, агрессивности, ригидности, депрессии и снижались показатели «адаптация», «самоприятие», «эмоциональный комфорт».

Применение препаратов пятилистника и подорожника, обладающих IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

выраженным антиоксидантным эффектом, или их сочетание с -токоферолом нивелировало изменения в нейрогуморальном и перекисном статусе за счет активации стресс-лимитирующих систем (серотонинергической и антиоксидантной), а также нормализовало психофизиологический статус в стрессогенных ситуациях. При этом успеваемость студентов, использующих данные адаптогены, была значительно лучше, чем в группе с плацебо. Оценка характера корреляционных зависимостей между биохимическими и психофизиологическими показателями у студентов обследуемых групп свидетельствует о позитивном влиянии изучаемых препаратов на эти взаимоотношения.

IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ПОЛИМЕРОВ И АГРЕГАТОВ В

ПРЕПАРАТЕ«АЛЬБУМИН РАСТВОР ДЛЯ ИНФУЗИЙ 10%»

Кукунина Т.В., Константинов К.Н., Исрафилов А.Г., Загидуллин Н.В.

Филиал ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России в г. Уфа Контроль содержания полимеров и агрегатов в препарате «Альбумин раствор для инфузий 10 %» проводится методом эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии, которая обеспечивает распределение молекул альбумина в соответствии с их размером и молекулярными массами за счет разной способности проникать в поры неподвижной фазы [1].

Согласно требованиям Европейской Фармакопейной Статьи (ЕФС) [2], Фармакопейной Статьи Предприятия (ФСП) филиала «Иммунопрепарат» [3] критерием оценки молекулярных параметров альбумина служит только процентное содержание полимеров и агрегатов в препарате. Однако, аттестованный образец полимеров и агрегатов альбумина, а также стандарт альбумина Европейской Фармакопеи на молекулярные параметры пока отсутствуют. Видимо, по этой причине в нормативной документации Российской Федерации на препарат альбумина не указана точная область выхода фракции полимеров и агрегатов. Поэтому проведение идентификации пиков молекулярных фракций альбумина с выделением области выхода полимеров и агрегатов на хроматограмме молекулярно-массового распределения является актуальной задачей.

Материалы и методы Контроль молекулярных параметров альбумина проводился согласно требованиям ЕФС на альбумин [2].

Хроматографирование осуществлялось с использованием аналитической системы ВЭЖХ YL9100 («Young Lin Instrument Co., Ltd», Корея) состоящей из следующих модулей: вакуумный дегазатор YL9101, четырехканальный градиентный насос YL9110, термостат колонок YL9130, спектрофотометрический детектор YL9120-UV/VIS, при длине волны 280 нм.

Была использована хроматографическая колонка BioSep-SEC-s3000, 300 х 7,8 мм («Phenomenex», США) с коэф разделения 10-500 кДа, в IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

качестве подвижной фазы применялся фосфатный буферный раствор (гидрофосфат натрия 4,873 г, дигидрофосфат натрия моногидрат 1,741 г, хлорид натрия 11,688 г, азид натрия 0,05 г на 1 л воды очищенной) со значением рН 6,9, скорость потока составляла 0,5 мл/мин, время анализа 35 мин.

Для количественного анализа молекулярных параметров использовалось программное обеспечение YL-Clarity, version 3.0.2. («Young Lin Instrument Co., Ltd», Корея).

Все пробы перед хроматографированием разводились раствором хлорида натрия 0,9 % до концентрации белка 0,01 г/мл. Объем наносимой пробы составлял 20 мкл. Каждую пробу анализировали в трех повторностях.

Проведение калибровки хроматографической колонки осуществлялось с помощью белков-калибрантов MWGF («Sigma-Aldrich», США). Альбумин бычий, молекулярная масса (м. м.) кДа; Алкоголь дегидрогеназа, м. м. 150 кДа; -Амилаза, м. м. 200 кДа;

Апоферритин м. м. 443 кДа; Тироглобулин, м. м. 669 кДа. Для определения свободного объема колонки использовался голубой декстран («Sigma-Aldrich», США), м. м. 2000 кДа в концентрации 0, мг/мл.

Для характеристики удерживания молекулярных фракций альбумина и белков-калибрантов рассчитывался объем удерживания/элюирования, равный произведению скорости потока подвижной фазы на время удерживания.

Использовались серии препарата «Альбумин раствор для инфузий %» № У1111008, У891110, У901011, У131012, У310113 филиала ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России в г. Уфа «Иммунопрепарат».

Результаты и обсуждение Для установления последовательности выхода молекулярных фракций альбумина, а также области выхода пиков полимеров и агрегатов альбумина была изучена разделяющая способность хроматографической колонки BioSep-SEC-s3000 путем нанесения белков-калибрантов (маркеров) с известным значением м. м. и расчета объема элюирования (Ve, мл). Свободный объем колонки определяли по объему элюирования голубого декстрана (Vo, мл) (Табл. 1).

IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

Таблица 1. Характеристики удерживания белков-калибрантов MWGF1000 «Sigma-Aldrich» на колонке BioSep-SEC-s3000, 300 х 7,8 мм «Phenomenex»

Примечание: свободный объем колонки по пику голубого декстрана (м. м. около 2000 кДа) составляет 5,009 мл, время удерживания голубого декстрана 10,017 мин.

Согласно полученным данным построена зависимость молекулярной массы белка-калибранта от отношения объема элюирования белка-калибранта к свободному объему колонки (Ve/Vo) (Рис. 1).

Из представленных данных видно (Табл. 1), что времена удерживания всех белков-калибрантов соотносятся с величинами их молекулярных масс. Однако, белки-калибранты, соответствующие полимерам и агрегатам альбумина с м. м. от 150 до 669 кДа, выходят после голубого декстрана, что свидетельствует о том, что полимеры и агрегаты альбумина могут выходить не только в свободном объеме колонки BioSep-SEC-s3000, но и в области между свободным объемом колонки и пиком димеров.

По калибровочному графику установлено, что основной пик на хроматограммах молекулярно-массового распределения в препаратах «Альбумин раствор для инфузий 10 %» серий № У1111008, У891110, У901011, У131012, У310113 филиала «Иммунопрепарат» (Рис. 2) с временем удерживания около 17,7 мин. относится к мономерам альбумина и совпадает с временем удерживания стандартного белка-калибранта альбумина с м. м. 66 кДа и составляет от 98,5 до 99, %, а второй пик с временем удерживания около 16,1 мин. по м. м.

наиболее близок к его тетрамерам с м. м. 272 кДа и составляет от 0,2 до 1,5 %. Пик димеров с м. м. 132 кДа и временем удерживания около 16, мин. на хроматограмме отсутствует. В области свободного объема колонки пики молекулярных фракций альбумина также не обнаруживаются.

Следовательно, не все полимеры и агрегаты альбумина могут IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

выходить в свободном объеме колонки, поэтому считаем необходимым учитывать все пики, выходящие до димеров, и относить их к полимерам и агрегатам альбумина. Время удерживания димеров можно определить по соответствующему белку калибранту с м. м. приближенной к м. м.

димеров, например, алкоголь дегидрогеназа или -глобулин бычий с м.м.

150 кДа.

В ЕФС на альбумин [2] и ЕФС на иммуноглобулин [4, 5] для определения молекулярно-массового распределения рекомендована хроматографическая колонка для разделения глобулярных белков с одинаковым интервалом разделения от 10 до 500 кДа без учета двукратной разницы в м. м. мономеров альбумина и иммуноглобулина.

На границе свободного объема колонки BioSep-SEC-s3000 будут выходить тримеры иммуноглобулина и гептамеры альбумина с м. м. около 480 кДа.

Таким образом, при подходе к оценке содержания полимеров и агрегатов в альбумине согласно требованиям ЕФC на альбумин (учитываются только пики, выходящие в свободном объеме колонки) [2] может произойти существенное занижение содержания потенциально опасных полимеров и агрегатов альбумина, что может нести угрозу для жизни пациента. Поэтому необходимо либо проводить калибровку колонки по молекулярным весам для определения области выхода полимеров и агрегатов, либо выбирать колонку с более низким верхним пределом разделения до 150 кДа, чтобы полимеры и агрегаты альбумина выходили в свободном объеме колонки. Этому критерию соответствует колонка TSK-GEL G2000SWXL («Tosoh Bioscience», США) с интервалом разделения глобулярных белков от 5 до 150 кДа [6].

Рис. 1. Хроматограмма молекулярно-массового распределения препарата «Альбумин раствор для инфузий 10 %, серия № У IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

Рис. 2. Калибровочная кривая по белками-калибрантам на колонке BioSep-SEC-s3000, 300 х 7,8 мм «Phenomenex»

Литература 1. Проект Государственной Фармакопеи Российской Федерации XII.

Часть 2. 1.4. «Высокоэффективная жидкостная хроматография» (ОФС 42-0097-09). – 2009.

2. Human Albumin solution № 0255. European pharmacopoeia 7.0. Council of Europe European (COE) – European Directorate for the Quality of Medicines (EDQM). France, Strasbourg. – 01/2010. – 2165 – 2166.

3. Фармакопейная статья предприятия № 42-0504-7574-06 «Альбумин раствор для инфузий 5, 10, 20 %». ФГУП «НПО «Микроген»

Минздрава России. – Введ. 08.12.06 до 08.12.11. – 1–25.

4. Human normal immunoglobulin № 0338. European pharmacopoeia 7.0.

Council of Europe European (COE) – European Directorate for the Quality of Medicines (EDQM). France, Strasbourg. – 01/2011. – 2177 – 2179.

5. Human normal immunoglobulin for intravenous administration № 0918.

European pharmacopoeia 7.0. Council of Europe European (COE) – European Directorate for the Quality of Medicines (EDQM). France, Strasbourg. – 01/2010. – 2179 – 2178.

6. Suhita Gayen-Betal, Atis Chakrabarti. Separation of BSA monomer from its dimmer and aggregates using a 125 pore size diol coated 7,8 mm ID x 30 cm, 5 m gel filtration column. Presented at HPLC 2012, Anaheim, CA. – 1 – 27. http://www.separations.asia.tosohbioscience.com/ NR/rdonlyres/C85D7DDC-09E2-4DAD-B601-572150A7D5AD/0/TP171.pdf IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

ПОЛУЧЕНИЕ АКТИВНОЙ РЕКОМБИНАНТНОЙ ДЕСТАБИЛАЗЫ

HIRUDO MEDICINALIS

Согласно официальным материалам министерства здравоохранения России за последние годы, смертность от болезней системы кровообращения занимает первое место и при этом продолжает неуклонно расти. В 2002 году вследствие болезней системы кровообращения погибло 56,1 % от общего числа умерших. Заболевания, вызванные тромбозом сосудов, являются одними из первых по распространённости не только в России, но и во всём мире. Применение лекарственных средств в ряде случаев ограничивается развитием толерантности к ним, непереносимостью, аллергическими реакциями, побочными действиями, противопоказаниями в связи с другими соматическими заболеваниями, наиболее выраженными у лиц пожилого и старческого возраста. В связи с этим, в последние годы все больше внимания уделяется альтернативным методам лечения, изучению их влияния на механизмы саногенеза, эффективности, возможности самостоятельного и комплексного использования в лечении и профилактике. Одним из таких методов является гирудотерапия. Было доказано антитромботическое действие гирудотерапии у больных с хроническими ишемическими нарушениями мозгового кровообращения, обусловленными атеросклерозом и гипертонической болезнью. Одним из компонентов секрета слюнных желёз медицинской пиявки является фермент дестабилаза. Весьма перспективным направлением дальнейшего использования дестабилазы, является получение лекарственного препарата на её основе.

Дестабилаза медицинской пиявки – полифункциональный фермент беспозвоночных. Во-первых, её действие направлено на растворение стабилизированного D-димера до мономеров путём изопептидолиза связей -(-Glu)-Lys, что приводит к медленному разрушению старых, предобразованных тромбов. Во-вторых, была выявлена лизоцимная активность при разрушении клеточных стенок Micrococcus lysodeikticus.

В-третьих, фермент, лишённый мурамидазной активности, блокирует рост многих микроорганизмов, и эта способность сравнима с IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

активностью многих известных антибиотиков.

Цель работы – получение активной рекомбинантной дестабилазы (Dst) и изучение её свойств. Активную рекомбинантную дестабилазу получали и ранее, однако предложенная методика характеризовалась низким выходом конечного продукта и высокой трудоёмкостью. Свойства данного фермента были изучены не в полной мере. Поэтому была поставлена задача оптимизировать процесс получения рекомбинантной Dst и более полно определить характеристики её ферментативной активности.

Для получения рекомбинантного белка, были получены конструкции на основе коммерческих плазмид серии рЕТ (Novagen, США), несущие структурную часть гена дестабилазы. Имеются варианты, кодирующие Dst c С- или N-концевыми гексагистидовыми мотивами (С- и N-Dest соответственно), а также Dst без дополнительных участков (min-Dest).

Данными плазмидами были трансформированы клетки E. coli штамма BL21(DE3)-gold. Для полученных штаммов-продуцентов были подобраны условия культивирования, обеспечивающие максимальный выход белка, который накапливался в виде телец включения (рис. 1). Дестабилазу с полигистидиновыми последовательностями выделяли с помощью металл-хелатной аффинной хроматографии и затем ренатурировали диализом (рис. 2). Дестабилазу без данной последовательности сначала ренатурировали диализом, потом выделяли с помощью ионообменной хроматографии. Также для дестабилазы был отработан метод ренатурации на сорбенте с последующим выделением. Для определения лизоцимной активности был разработан метод, основанный на определении концентрации выделивщегося белка из клеток E. coli штамма BL21(DE3)-gold после обработки исследуемыми ферментами.

Определены оптимальные условия работы дестабилазы (pH = 8.75-9; I = 0.3-0.4М) (рис. 3, 4). Лизоцимная активность полученных ферментов составляет 70% от активности лизоцима яичного белка (HEWL). Также была определена лизоцимная активность дестабилазы на специфическом субстрате - по просветлению суспензии клеточных стенок Microccocus lysodeikticus. Лизоцимная активность, определённая таким методом, составляла до 90% активности лизоцима яичного белка (рис. 5).

Показана изопептидазная активность дестабилазы, которая заключается в разрушении - цепей в D-димере до цепей (рис. 6) IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

Рис. 1. Электрофореграмма SDS-PAGE (15% AA) различных фракций клеток штамма BL21(DE3)-gold/рЕТ15/N-Dest. Инкубация с лак-тозой в течение 18 часов при 370С. 1 - маркёр молекулярных масс (кДа); 2,3 цитоплазматические фракции культуры при концентрации индуктора и 0мМ соответственно, 4,5 – нерастворимые фракции культуры при концентрации индуктора 1 и 0мМ соответственно. Окраска геля Кумасси G-250.

IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

Рис. 2. Электрофореграмма SDS-PAGE (15% AA) локализации N-Dest в растворе и осадке после проведения одностадийного диализа против 20мМ натрий-фосфатного буфера, pH 5 в зависимости от концентрации N-Dest в исходном препарате. Дорожки 1 – концентрация N-Dest мг/мл; дорожки 2 – 0,3 мг/мл; дорожки 3 – 30 мкг/мл; а – раствор; б – осадок; М - маркёр молекулярных масс. Окрашивание гелей проводили Кумасси G-250.

Рис. 3. Зависимость активность N-Dest в зависимости от рН буфера.

(n=5, p lactis) и -казеинов (K3III24> 100аш>NK1; № 1 > МС-42), а также k-казеинов (NK1 > 100аш > K3III24). «Разрыхление» всех блоков (уширение интервала pI блоков на фоне урежения частоты полос в блоках) в треках (особенно в случае K 3 III 2 4 ) и каждого блока в отдельности (блок I: K3III24 > 100аш; блок II: 100аш > NK1) указывало на варьирующую выраженность ограниченного протеолиза в КЖ, зависимого от штамма. В этих условиях в случае Ацилакта дополнительное действие пептидаз (действие единой протеиназной и пептидазной системы) приводило к наиболее выраженному нарушению блочного распределения белков в треке. При этом в случае Ацилакта достигалась также наибольшая ацидификация КЖ по сравнению с ингредиентными штаммами, которая усиливалась при хранении [7]. На вклад гидролаз в процесс ацидификации культуры указывает тот факт, IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

что гидролизу подвергается доминирующий массив отрицательно заряженных белков, характерный для лактобацилл и бифидобактерий.

При этом в результате протеолиза увеличивается буферная емкость КЖ [7].

Остаточные белковые полосы/следы в блоке I соответствовали присутствовали альбуминам, гидролизованных альбуминазами (расщепление лактальбуминов) и казеинам, расщепляемым казеиназами различных типов (смотри табл. 1). Следы этих белков могут служить внутренними маркерами протеолиза, идеально соответствующими всем условиям разделения белкового массива, частью которого они являются.

Это важно для дополнительного мониторинга распределения градиента рН в треках. Следует отметить, что исходно расщепляемые протеиназами формы S1 - и -казеинов в случае Ацилакта все еще наблюдались на фоне полного исчезновения полос k-казеинов в блоке II (следы последних не видны, возможно, из-за гликозилирования белка и снижения сродства гликопротеинов к мембране). Эти результаты указывают на образование максимального пула антимикробных пептидов в КЖ Ацилакта по сравнению с ингредиентными штаммами.

В результате протеолиза казеина лактобациллярными протеиназами образуются наборы катионных антимикробных пептидов: казеицины А (IKHQGLPQE), B (VLNENLLR) и C (SDIPNPIGSENSEK) (против грамотрицательных патогенов Cronobacter [Enterobacter] sakazaki, Salmonella enteric серовар Typhimurium, E. coli, Klebsiella pneumonia, Pseudomonas fluorescens; против Staphylococcus aureus) [10, 11], исрацидин (PKHPIKHQGLPQEVLNENLLRF 23 - 23-аминокислотный N-концевой фрагмент S1 -казеина B) как стимулятор фагоцитоза и иммунного ответа против S. aureus, Listeria monocytogenes Candida albicans [10].

Литературные данные указывают на участие в лимитированном/специфичном казеинолизе (с образованием досточно протяженных антимикробных пептидов с повышенной избирательностью антипатогенного действия) лактобациллярных поверхностноклеточных/ клеточнооболочечных/ клеточностеночных системных протеиназ типа L.

helveticus, L. paracasei, L. delbrueckii bulgaricus или lactis, L. acidophilus и других [10-14], которые легко десорбируются [9, 14] и присутствуют в супернатантах КЖ. При этом различают следующие соотношения казеиназных активностей по способности расщеплять типы казеинов: (S и ) >> k (слабо или не расщепляют) (промежуточный между Р I и РIII [расщепление S1, и k] типами тип протеиназы, L. delbrueckii lactis CRL 581, L. helveticus CRL 1062 и CP 790 [8, 9, 11]), >> (S1 и k) (-казеиназа IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

= протеиназа РI-типа, L. delbrueckii lactis ACA-DC 178 [13]). Система протеаз Ацилакта, по нашим данным, расщепляет все типы казеинов, то есть проявляет свойства протеиназной системы типа РIII.

В случае штаммов L. helveticus, продуцирующих 2 протеиназы, достигалось, наряду с хорошим гидролизом -казеина, улучшение ограниченного протеолиза S 1 -казеина [15]. Однако желаемого синергизма эффекторов удается достичь и смешением штаммов в составе рационально подобранных поликомпонентных пробиотиков [16].

Результаты настоящей работы обосновывают дальнейшие перспективы комбинирования ингредиентных штаммов Ацилакта в составе поликомпонентных пробиотиков (например, в сочетании с бифидобактериальными штаммами), указывают на перспективность Ацилакта в качестве источника расширенного и направленного набора физиологически активных пептидов. К таким пептидам, продуцируемым в КЖ с участием лактобацилл, относятся понижающие артериальное давление ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента, которые, как оказалось, способны также регулировать каскады матриксных металлопротеиназ и обеспечивать надзор против появления в кишечнике карциномных клеток (показано на примере избирательного ингибирования пептидами пролилэндопептидаз линий клеток НТ-29 и SW480 канциномы толстой кишки человека) [17]. Еще одним примером перспективности казеиновых пептидов является открытие способности пептидов S 1 -казеина индуцировать продукцию бактериоцинов (лантибиотиков) [18].

Заключение. Представленные данные одновременного сравнительного выявления в КЖ систем протеиназ, направленных на гидролиз различных типов казеина – источников антимикробных пептидов, имеют широкие перспективы использования (в том числе и для конструирования питательных сред). Предложенный нами подход позволяет проводить блочный, групповой и индивидуальный функциональный анализ белков штаммов грамположительных бактерий вообще, пробиотических бактерий и их пробиотических консорциумов.

Метод позволяет проводить скрининг протеиназных систем грамположительных бактерий и прогноз типов систем, выявлять тонкие различия таких систем у близкородственных штаммов и изолятов (важно для оценки факторов патогенности в образцах пациентов), устанавливать устойчивость (неподверженность белков изменениям, что может быть важным для отбора резистентных антимикробных веществ) или максимальную чувствительность (биодеградируемость, что может быть важно для конструирования доставочных лекарств) белков к IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

протеиназам – факторам продуцирования антимикробных, противоопухолевых, иммуномодуляторных, антигипертензивных и других важных для медицины пептидов.

Литература 1. Лахтин В.М., Афанасьев С.С., Алешкин В.А., Несвижский Ю.В., Поспелова В.В., Лахтин М.В., Воропаева Е.А., Черепанова Ю.В., Агапова Ю.В. Стратегические аспекты конструирования пробиотиков будущего // Вестник РАМН. - 2008. - № 2.- С. 33-44.

2. Лахтин М.В., Лахтин В.М., Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Алешкин А.В. Лектины и ферменты в биологии и медицине. - Москва: Изд-тво «Династия», 2010. – 496 с.

3. Лахтин М.В., Черепанова Ю.В., Лахтин В.М., Алешкин А.В., Криворучко Е.В., Агапова Ю.В., Поспелова В.В., Афанасьев С.С., Алешкин В.А. Карты протеома культуральных жидкостей производственных штаммов пробиотических бактерий человека // Сборник материалов научно-практической школы-конференции молодых ученых и специалистов НИО Роспотребнадзора «Современные технологии обеспечения биологической безопасности»

(31 мая-2 июня 2011, ФГУН ГНЦ ПМБ, п.Оболенск, Моск.обл.). – 2011.

4. Ботина С.Г. Молекулярно-биологические подходы к отбору бактериальных культур при создании заквасок для биотехнологии.

Автореф. дис… д.б.н. М., 2011.

бифидобактерий на основе двухлокусного секвенирования с целью видовой идентификации штаммов // Автореф. дис… к.б.н. М., 2009.

6. Lasne F., De Cearritz J. Recombinant erythropoietins in urine // Nature. – 2000. – Vol. 405. – P. 635-639.

7. Лахтин М.В., Лахтин В.М., Криворучко Е.В., Черепанова Ю.В., Агапова Ю.В., Алешкин А.В., Поспелова В.В., Афанасьев С.С. Оценка деградации бактериальных препаратов с помощью двухпараметровой рН-метрии и электрофореза на примере пробиотических бифидобактерий и лактобацилл человека // Сб. материалов международной научно-технической конференции «Современные достижения биотехнологии». (г. Ставрополь, 21-23 июня, 2011). Часть 2. Раздел «Биологически активные добавки». – М.: НОУ «Образовательный научно-технический центр молочной промышленности», 2011. - С. 51 – 52.

IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

Абдуллаев В.Р. БЕЛКОВАЯ ФЛУОРЕСЦЕНЦИЯ ПЛАЗМЫ КРОВИ

ГОМОЙОТЕРМНЫЙ И ГЕТЕРОТЕРМЫХ ЖИВОТНЫХ

Алексеев Н.В.,Желонкин А.И. СИСТЕМА СРАВНИТЕЛЬНОЙ ОЦЕНКИ

ЭЛЕКТРОКАРДИОГРАММЫ

Алиева З.М., Гасангусенова Б.М., Зубаирова Ш.М. МЕТОДЫ

БИОТЕХНОЛОГИИ В СОХРАНЕНИИ И ВОСПРОИЗВЕДЕНИИ

HEDYSARUM DAGHESTANICUM RUPR. ЕX BOISS.

Андрюков К.В., Коркодинова Л.М. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ РАССЧИТАННЫХ...............

КОНСТАНТ ИОНИЗАЦИИ И ЛИПОФИЛЬНОСТИ В ПОСТРОЕНИИ МОДЕЛИ

СТРУКТУРА-АКТИВНОСТЬ ДЛЯ АМИДОВ И ГИДРАЗИДОВ NАРОИЛЗАМЕЩЕННЫХ АНТРАНИЛОВЫХ КИСЛОТ

Аюпов Р.Х., Акберова Н.И., Тарасов Д.С. ОБЩИЙ МЕХАНИЗМ

ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ПРОИЗВОДНОГО ПИРИДОКСИНА С

АКТИВНЫМ ЦЕНТРОМ АЦЕТИЛХОЛИНЭСТЕРАЗЫ

Барон А.В., Ольховский И.А., Осипов Н.В., Бондарь В.С. ФЕНОМЕН

АДСОРБЦИИ ИМУНОГЛОБУЛИНОВ МОДИФИЦИРОВАННЫМИ

НАНОАЛМАЗАМИ

Беликов Н.Е.,Ходонов А.А.,Демина О.В.,Яковлева М.А.,Фельдман

Т.Б.,Lindstrm M.,Donner K.,Островский М.А. РАЗРАБОТКА МЕТОДА

РАЗДЕЛЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ РЕТИНОИДОВ ПРИРОДНОГО И

3,4-ДИДЕГИДРОРЯДОВ Белогорохов И.А., Котова М.С., Дронов М.А., Иваньшина О.Ю., Сиротина............. А.П., Пушкарев В.Е. ПОЛЯРОННЫЙ МЕХАНИЗМ ПЕРЕНОСА НОСИТЕЛЕЙ

ЗАРЯДА В МЕТАЛЛООРГАНИЧЕСКОЙ ГЕТЕРОСИСТЕМЕ НА ОСНОВЕ МОЛЕКУЛ

ФТАЛОЦИАНИНА

Белогорохов И.А., Котова М.С., Дронов М.А., Иваньшина О.Ю., Сиротина............. А.П., Пушкарев В.Е. ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ОПИСАНИЕ ФИЗИЧЕСКИХ СВОЙСТВ

ФТАЛОЦИАНИНОВЫХ ПОЛУПРОВОДНИКОВ

Богословская О.А., Рахметова А.А., Ольховская И.П., Глущенко Н.Н.

ИССЛЕДОВАНИЕ ДЕЙСТВИЯ НАНОЧАСТИЦ ЖЕЛЕЗА НА УРОВЕНЬ

ГЕМОГЛОБИНА В КРОВИ ПРИ РАЗВИТИИ ГЕМОЛИТИЧЕСКОЙ АНЕМИИ

Боков Т.Ю., Сучалкина А.Ф., Якушева Е.В., Якушев А.Г.

СТАТИСТИЧЕСКАЯ МОДЕЛЬ ВЕСТИБУЛЯРНОГО НИСТАГМА

Браилко В.А., Губанова Т.Б., Кузьмина Т.Н. ВЛИЯНИЕ НАНОПРЕПАРАТОВ..........

ДИОКСИДА ЦЕРИЯ НА РОСТОВЫЕ ПРОЦЕССЫ ВИДОВ РОДА LONICERA L.

Бусловский В.А. ИННОВАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ПРЕПОДАВАНИИ...............

ХИМИЧЕСКИХ ДИСЦИПЛИН

Василенко М.А., Фаттахов Н.С., Куликов Д.А., Мазунин И.О., Кириенкова............. IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

Е.В., Затолокин П.А., Литвинова Л.С. ТКАНЕСПЕЦИФИЧЕСКАЯ ЭКСПРЕССИЯ

ОСНОВНЫХ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ГЕНОВ В ФОРМИРОВАНИИ

ХРОНИЧЕСКОГО ВОСПАЛЕНИЯ ЖИРОВОЙ ТКАНИ ПРИ МЕТАБОЛИЧЕСКОМ

СИНДРОМЕ

Веселова К.М., Жогина Ю.А., Глазкова Д.В., Богословская Е.В. ПОИСК................

МИКРО РНК, ЭФФЕКТИВНО ПОДАВЛЯЮЩИХ ЭКСПРЕССИЮ ГЕНА CCR

РЕЦЕПТОРА ЧЕЛОВЕКА

Вишневская И.Р., Копица Н.П., Петенёва Л.Л. ПРОГНОСТИЧЕСКАЯ

ЗНАЧИМОСТЬ УРОВНЯ GROWTH DIFFERENTIATION FACTOR 15 В

РАЗВИТИИ КАРДИОРЕНАЛЬНОГО СИНДРОМА У БОЛЬНЫХ С ОСТРЫМ

КОРОНАРНЫМ СИНДРОМОМ

Вишнякова Ж.С. АКТИВНОСТЬ АНГИОТЕНЗИНПРЕВРАЩАЮЩЕГО

ФЕРМЕНТА В ПЛАЦЕНТЕ ПРИ ГЕСТОЗЕ ЛЕГКОЙ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ

Глушенко А.В, Юрченко К.С., Шаршов К.А, Шестопалов А.М СКРИНИНГ..............

БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ПРИРОДНЫХ ВАРИАНТОВ ВИРУСА БОЛЕЗНИ

НЬЮКАСЛА ДЛЯ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В БИОТЕХНОЛОГИИ

Грабельных О.И., Константинов Ю.М., Шмаков В.Н., Боровик О.А.,

Лесничая М.В., Александрова Г.П., Сухов Б.Г., Трофимов Б.А.

РАЗОБЩАЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ НА ДЫХАНИЕ МИТОХОНДРИЙ

ЗОЛОТОСОДЕРЖАЩИХ НАНОКОМПОЗИТОВ НА ОСНОВЕ КАРРАГИНАНА

Грабовская Е.В., Пастух А.С. ОСОБЕННОСТИ СТРУКТУРЫ

КАРТОФЕЛЬНОГО ПЕКТИНА

Гришина О.В., Алексахина Е.Л., Фомина Е.А., Гарусова Е.В. ВЛИЯНИЕ

ЖЕВАТЕЛЬНОЙ РЕЗИНКИ НА НЕКОТОРЫЕ СТОРОНЫ МИНЕРАЛЬНОГО

ГОМЕОСТАЗА СЛЮНЫ

Гришина О.В., Лукманов И.Р., Семёнов А.Е. ИССЛЕДОВАНИЕ

СОДЕРЖАНИЯ ВИТАМИНА С В СОКАХ РАЗЛИЧНЫХ ТОРГОВЫХ

Гришина О.В., Шмелёва О.М., Гарусова Е.В. ОБЕСПЕЧЕННОСТЬ

ВИТАМИНОМ С СТУДЕНТОВ ИВАНОВСКОЙ ГОСУДАРСТВЕННОЙ

МЕДИЦИНСКОЙ АКАДЕМИИ

Деревянко С.В. РЕКЛАССИФИКАЦИЯ ЭНТЕРОВИРУСОВ СВИНЕЙ

ВЫДЕЛЕННЫХ В УКРАИНЕ НА ОСНОВЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ И

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

Ерш А.В., Полтавченко А.Г., Кривенчук Н.А. МУЛЬТИПЛЕКСНАЯ

ИММУНОДИАГНОСТИКА ДЕТСКИХ ВАКЦИНОУПРАВЛЯЕМЫХ

ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Забелин В.А., Шаршов К.А., Алексеев А.Ю., Адаменко Л.С., Грайфер Е.Д.,............. IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

Макотченко В.Г., Шестопалов А.М. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ

ДЕЙСТВИЯ РАЗЛИЧНЫХ СОРБЕНТОВ НЕФТИ В ВОДНОЙ СРЕДЕ С

ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МИКРОБНОГО ПРЕПАРАТА В УСЛОВИЯХ,

ПРИБЛИЖЕННЫХ К ЕСТЕСТВЕННЫМ

Зайцев С.Ю. СУПРАМОЛЕКУЛЯРНЫЕ БИОХИМИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ ДЛЯ...........

БИОЛОГИИ И БИОНАНОТЕХНОЛОГИИ

Иомдина Е.Н., Тарутта Е.П., Курылева И.М., Аксенова Ю.М., Сурина Е.А.,............. Смирнова И.В., Богачук А.П., Липкин В.М. ИЗУЧЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ БЕЛКА В

СЛЕЗНОЙ ЖИДКОСТИ ДЕТЕЙ И ПОДРОСТКОВ С ВЫСОКОЙ

ПРОГРЕССИРУЮЩЕЙ МИОПИЕЙ

Исакина М.В., Орлова Н.В., Потняева А.Л., Ревин В.В. ИССЛЕДОВАНИЕ.............

ЛИПИДНОГО СОСТАВА НЕРВА ПРИ МЕХАНИЧЕСКОМ ПОВРЕЖДЕНИИ

Калинкевич О.В., Калинкевич А.Н., Погорелов М.В., Бумейстер В.И.,.................. Бончев С.Д., Кузнецов В.Н., Станиславов А.С., Данильченко С.Н. СИНТЕЗ И

ХАРАКТЕРИСТИКА НАНОКОМПОЗИТОВ МЕДИЦИНСКОГО НАЗНАЧЕНИЯ

НА ОСНОВЕ ХИТОЗАНА И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

Каплун А.П., Степанов А.Е., Безруков Д.А., Гаврилова Л.А., Кубатиев А.А...........

СУБМИКРОЧАСТИЦЫ НА ОСНОВЕ ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА КАК

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ АДЪЮВАНТЫ

Карасёв М.М. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

АВТОТРАНСПОРТЕРНЫХ СИСТЕМ БАКТЕРИАЛЬНОГО

ДИСПЛЕЯ

Киль В.И. ВЛИЯНИЕ УСЛОВИЙ ХРАНЕНИЯ ДНК НА

ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ ПЦР АНАЛИЗА ПОПУЛЯЦИЙ

Князева И.В. ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ................

ПОВЕРХНОСТИ СЕМЕННОЙ КОЖУРЫ НЕКОТОРЫХ ВИДОВ РОДА LUPINUS L.

Колос И.К., Макарчиков А.Ф. СВОЙСТВА РАСТВОРИМОЙ

ТИАМИНМОНОФОСФАТАЗЫ ИЗ ПЕЧЕНИ КУРИЦЫ

Короткая Е.В.,Короткий И.А. ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ УСЛОВИЙ

ЗАМОРАЖИВАНИЯ НА АКТИВНОСТЬ ЗАКВАСОК, СОДЕРЖАЩИХ

L.BULGARICUS

Коротких А.В. ЛЕЧЕНИЕ СТЕНОЗОВ И РЕСТЕНОЗОВ ВНУТРЕННЕЙ

СОННОЙ АРТЕРИИ С ПОМОЩЬЮ ПЕРИФЕРИЧЕСКОГО БАЛЛОННОГО

КАТЕТЕРА ПОКРЫТОГО ПАКЛИТАКСЕЛОМ

Костина Е.Г. ВЛИЯНИЕ ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЙ ОБРАБОТКИ

ЛИГНОЦЕЛЛЮЛОЗНОГО СЫРЬЯ КУЛЬТУРОЙ LENTINUS

TIGRINUS НА ВЫХОД БИОЭТАНОЛА

Кравченко И.В., Фуралёв В.А., Попов В.О. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ДОМЕНОВ........... IV - Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии. Октябрь 2013. Том I.

ТИТИНА И МИОМЕЗИНА, ОБЛАДАЮЩИХ СПОСОБНОСТЬЮ СТИМУЛИРОВАТЬ

СИНТЕЗ МЕХАНО-РОСТОВОГО ФАКТОРА

Краснова М.А., Лойко Н.Г., Эль-Регистан Г.И., Иванова Л.А. ВЛИЯНИЕ...............

АЛКИЛРЕЗОРЦИНОВ НА ИЗМЕНЕНИЕ АКТИВНОСТИ И СТАБИЛЬНОСТИ

ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ

Кудряшова В.И., Трофимов В.А., Акесенова О.Н., Гудошникова Т.Н.,

Ромашкина М.В. ВЛИЯНИЕ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА

ЭТАНОЛ-МЕТАБОЛИЗИРУЮЩЕГО ФЕРМЕНТА СУР2Е1 НА РАЗВИТИЕ

АЛКОГОЛИЗМА В МОРДОВСКОЙ ПОПУЛЯЦИИ.

Кудырко Т.Г., Макарчиков А.Ф., Лучко Т.А., Русина И.М. АКТИВНОСТЬ..............

АДЕНОЗИН-ТИАМИНТРИФОСФАТ-ГИДРОЛАЗЫ В ОРГАНАХ И ТКАНЯХ

Кузнецова Н.C. БИОХИМИЧЕСКАЯ АДАПТАЦИЯ ОРГАНИЗМА

СТУДЕНТОВ К ОБРАЗОВАТЕЛЬНОМУ ПРОЦЕССУ

Кукунина Т.В., Константинов К.Н., Исрафилов А.Г., Загидуллин Н.В.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ПОЛИМЕРОВ И АГРЕГАТОВ В

ПРЕПАРАТЕ«АЛЬБУМИН РАСТВОР ДЛЯ ИНФУЗИЙ 10%»

Курдюмов А.С., Манувера В.А. ПОЛУЧЕНИЕ АКТИВНОЙ

РЕКОМБИНАНТНОЙ ДЕСТАБИЛАЗЫ HIRUDO MEDICINALIS

Курьяков В.Н., Воронов В.П., Муратов А.Р. ИССЛЕДОВАНИЯ ФАЗОВЫХ.............

ПЕРЕХОДОВ В ВОДНОМ РАСТВОРЕ DODAB МЕТОДОМ ДИНАМИЧЕСКОГО И

СТАТИЧЕСКОГО РАССЕЯНИЯ СВЕТА

Ласточкина О.В., Ильясова Е.Ю., Широков А.В., Пусенкова Л.И.

ВЛИЯНИЕ БАКТЕРИЙ BACILLUS SUBTILIS 10-4 И 12-2 НА

СОДЕРЖАНИЕ ПРОЛИНА В ПРОРОСТКАХ ПШЕНИЦЫ В НОРМЕ И

ПРИ СОЛЕВОМ СТРЕССЕ

Лахтин М.В., Лахтин В.М., Алешкин А.В., Афанасьев С.С., Алешкин В.А...............

ВЫСОКОЧУВСТВИТЕЛЬНОЕ ВЫЯВЛЕНИЕ СИСТЕМНЫХ ПРОТЕАЗ В

КУЛЬТУРАЛЬНЫХ ЖИДКОСТЯХ ГРАМПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ БАКТЕРИЙ, В ТОМ

ЧИСЛЕ МУЛЬТИШТАММОВОГО КОНСОРЦИУМА

Сервис виртуальных конференций Pax Grid ИП Синяев Дмитрий Николаевич Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии IV Международная научная Интернет-конференция Казань, 16-17 октября 2013 года Материалы конференции УДК 577/579(082) ББК 28.4:28.72:28.707.2(2) A43 Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии.[Текст] : IV Международная научная Интернет-конференция : материалы конф.

(Казань, 16-17 октября 2013 г.) : в 2 т. / Сервис виртуальных конференций Pax Grid ; сост. Синяев Д. Н. - Казань : ИП Синяев Д.

Н., 2013.- Т. 2. - 178 с.- ISBN 978-5-906217-33-2.

ISBN: 978-5-906217-33- Сборник составлен по материалам, представленным Интернет-конференции: "Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии". Конференция прошла 16-17 октября 2013 года. Издание освещает вопросы медицинской и молекулярной биохимии; вопросы нанотехнологии, применительно к биохимии и бионанотехнологии; вопросы биоинформатики; представлены работы по инновационным образовательным технологиям; отражены темы, относящиеся к биохимии питания и к питанию в целом.

Книга рассчитана на преподавателей, научных работников, аспирантов, учащихся соответствующих специальностей.