«Антигенные свойства средств специфической профилактики ортомиксо- и парамиксовирусных инфекций у голубей ...»

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение

высшего профессионального образования

«Московская государственная академия ветеринарной медицины

и биотехнологии имени К.И. Скрябина»

На правах рукописи

Зотова Зоя Витальевна

Антигенные свойства средств специфической

профилактики ортомиксо- и парамиксовирусных инфекций у голубей 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научный руководитель:

кандидат биологических наук, доцент Пименов Н.В.

Москва,

СОДЕРЖАНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ,

СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ…………………………….. ВВЕДЕНИЕ…………………………………………………………. 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ………………………………………… 1.1. Этиологические особенности ортомиксовирусной инфекции у голубей ……………………………………………………………… 1.1.1. Характеристика возбудителя………………………………. 1.1.2. Эпизоотологические данные………………………………. 1.1.3. Патогенез и сведения о болезни у голубей……………….. 1.2. Этиологические особенности парамиксовирусной инфекции у голубей……………………………………………………………….. 1.2.1. Характеристика возбудителя……………………………….. 1.2.2. Эпизоотологические данные……………………………….. 1.2.3. Патогенез…………………………………………………….. 1.2.4. Клинические признаки и патологоанатомические изменения при парамиксвирусной инфекции у голубей…………… 2. Аспекты диагностики…………………………………………… 3. Принципы противоэпизоотической борьбы при ортомиксовирусной и парамиксовирусной инфекциях птиц……….. 4. Специфическая профилактика ортомиксовирусной инфекции – гриппа птиц………………………………………………. 5. Специфическая профилактика парамиксовирусной инфекции – ньюкаслской болезни у голубей……………………….. 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ…………………………. 2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ……………………………..…… 2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ………..….……………… 2.2.1. Особенности эпизоотического процесса и клинической картины гриппа птиц в период эпизоотии 2007 года в г. Москве и Московской области…………………………………… 2.2.2. Патологоанатомические признаки при гриппе птиц в период эпизоотии 2007 года в г. Москве и Московской области… 2.2.3. Совершенствование мер общей профилактики гриппа птиц и ньюкаслской болезни в Москве и Московской области…………... 2.2.4. Специфическая профилактика гриппа птиц………………… 2.2.5. Факторы риска распространения эпизоотии ортомиксовирусной и парамиксовирусной инфекции птиц в Московской области…………………………………………………. 2.2.6. Антигенные свойства вакцин против гриппа птиц, используемые для вакцинации голубей………………………………. 2.2.7. Эпизоотическая ситуация по парамиксовирусной инфекции у голубей в Москве и Московской области………………. 2.2.8. Характеристика вакцины «Виросальм»……………………. 2.2.9. Антигенные свойства средств специфической профилактики парамиксовирусной инфекции у голубей…………… 2.2.10. Антигенные свойства вакцины «Виросальм» при ньюкаслской болезни голубей в сравнении с аналоговой вакциной «Salmavir»………………………………………………………………. 2.2.11. Изучение антигенных свойств вакцины «Виросальм» на основе парамиксовируса типа 1 голубиного варианта «PN-T» …….

2.2.12. Применение вакцины «Виросальм» на неблагополучных голубятнях ……………………………………………………………… 3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ..……...

4. ВЫВОДЫ……………………………………………..……….…

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ

НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ………...……………………………….

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ

НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ……………………………………………… 7. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ…….……… ПРИЛОЖЕНИЯ……………………………………………….……

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ,

СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ

АОЗТ – акционерное общество закрытого типа;

АПК – агропромышленный комплекс;

ВНИВИП – Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства;

ВНИИЗЖ – Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных;

ВОЗ – Всемирная организация здравоохранения;

ВОЗЖ – Всемирная организация здоровья животных;

ГАЕ – гемагглютинирующие единицы;

ГНУ – государственное научное учреждение;

ГУП – государственное унитарное предприятие;

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота;

ЗАО – Западный административный округ;

МПА – мясо-пептонный агар;

МПБ – мясо-пептонный бульон;

МСХ – Министерство сельского хозяйства;

МЭБ – Международное эпизоотическое бюро;

ОНО – организация научного обеспечения;

ПЦР – полимеразная цепная реакция;

ПЭГ – полиэтиленгликоль;

РНК – рибонуклеиновая кислота;

РТГА – реакция торможения гемагглютиации;

САО – Северный административный округ;

СПФ – свободные от патогенной флоры;

ФБГОУ ВПО МГАВМиБ – федеральное бюджетное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина»;

ФГУ – федеральное государственное учреждение;

ФГУП – федеральное государственное унитарное предприятие;

ФГУН – федеральное государственное учреждение науки;

ФГУСП – федеральное государственное унитарное сельскохозяйственное предприятие;

ЦАО – Центральный административный округ;

ЦНИИ – центральный научно-исследовательский институт;

ЦНИИЭ – Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии;

ЦНМВЛ – Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория;

ЦФО – Центральный Федеральный округ;

ЭЛД – эмбриональная летальная доза;

ЮВАО – Юго-Восточный административный округ;

ЮЗАО – Юго-Западный административный округ.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Ортомиксо- и парамиксовирусные инфекции у голубей недостаточно изучены. Грипп птиц, возбудитель которого относится к ортомиксовирусам, и болезнь Ньюкасла, ньюкаслская болезнь, возбудитель которой относится к парамиксовирусам, классифицированы МЭБ, ВОЗЖ (OIE) в группу А наиболее контагиозных инфекционных болезней животных, приводящих к значительным ущербам.

Из статистических данных следует, что в Европе, Азии, Америке регистрируются пандемические штаммы вируса гриппа (6,47,52,56,70,162,169).

Реассорция вирусов свидетельствует о возможном проявлении в природных условиях новых штаммов (10,27,36,56,98,108,109,117,126,167,168).

Обоснован риск болезней голубей, которые представляют собой угрозу распространения инфекта среди сельскохозяйственных птиц. Деева Э.Г. указывает на эпизоотию гриппа голубей как на манифестацию пандемии. Есть данные о субклинической инфекции гриппа птиц у голубей и ее предупреждении применением вакцины (59,96,134,146). Противоэпизоотические мероприятия по ликвидации и предупреждению распространения гриппа птиц в нашей стране требовали вакцинообработки голубей, однако применение вакцин против гриппа птиц на голубях не было научно обоснованно. Использование биопрепаратов на голубях имеет свои особенности, связанные с видовыми, породными и индивидуальными анатомо-физиологическими, иммунологическими, генетическими и другими особенностями семейства Columbidae – собственно голуби.

Болезнь Ньюкасла является одной из основных проблем современного голубеводства. Участились эпизоотические вспышки «вертячки» голубей.

При этом системы специфической профилактики ньюкаслской болезни в голубеводстве не предложено, применения вакцин носят спонтанный характер (67,69). Таким образом, изучение иммунобиологических свойств средств специфической профилактики ортомиксовирусных и парамиксовирусных инфекций у голубей является необходимостью для совершенствования и систематизации профилактических мероприятий в голубеводстве.

Цель и задачи исследований. Цель работы – изучить особенности проявления ортомиксо- и парамиксовирусных инфекций у голубей и определить антигенные свойства вакцинных препаратов против гриппа птиц и ньюкаслской болезни голубей.

Для реализации данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить факторы риска распространения ортомиксо- и парамиксовирусной инфекций птиц в Москве и Московской области.

2. Изучить особенности эпизоотического процесса и клинического проявления гриппа птиц и болезни Ньюкасла у голубей в условиях г. Москвы и Московской области.

3. Изучить реактогенные и антигенные свойства аттенуированных и инактивированных вакцин против гриппа и болезни Ньюкасла птиц на голубях в сравнительном аспекте.

4. Изучить на голубях безвредность и антигенность ассоциированной инактивированной вакцины «Виросальм» против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц в сравнительном аспекте с аналоговой вакциной «Salmavir» и при введении в антигенный состав вакцины «Виросальм» нового штамма вируса ньюкаслской болезни «PN-T».

5. Провести исследования протективных и антигенных свойств вакцины «Виросальм» в условиях неблагополучных голубятен.

6. Разработать методические рекомендации по специфической профилактике ортомиксо- и парамиксовирусной инфекций у голубей.

Научная новизна. Впервые установлены особенности эпизоотического процесса и факторы риска распространения ортомиксовирусных и парамиксовирусных инфекций у голубей в г. Москве и Московской обл.

От больных голубей разных пород в голубятнях г. Москвы и Московской области выделен возбудитель ньюкаслской болезни типа 1, вызывающий поражение головного мозга и желудочно-кишечного тракта у голубей при сверхостром и остром течении болезни.

Впервые в сравнительном аспекте изучены антигенные свойства и безвредность применения для голубей 8 вакцин: против гриппа птиц - инактивированная эмульгированная на основе штамма Н5N1, инактивированная эмульгированная ФЛУ ПРОТЕКТ Н5, инактивированная бивалентная против гриппа птиц подтипов Н5+Н7; против ньюкаслской болезни птиц - ассоциированные инактивированные вакцины «Виросальм» и «Salmavir», живая лиофилизированная вирусвакцина из штамма «La Sota», вирусвакцина сухая против ньюкаслской болезни из штамма «Бор-74 ВГНКИ», вирусвакцина из штамма «ГАМ-61».

Доказано, что введение в состав вакцины «Виросальм» штамма вируса ньюкаслской болезни голубиного варианта – «PN-T» вместо штамма «Н», достоверно повышает антигенность вакцины в 1,6 раза и поддерживает напряженность иммунитета у голубей в течение не менее 10 мес.

Практическая значимость. Результаты исследований по особенностям течения эпизоотических процессов ортомиксо- и парамиксовирусной инфекций у голубей, изучение факторов риска возникновения гриппа птиц и ньюкаслской болезни, а также эффективности вакцинных препаратов включены в комплекс противоэпизоотических мероприятий в голубеводстве и птицеводстве в Москве и Московской области.

Разработаны методические рекомендации по специфической профилактике ортомиксо- и парамиксовирусной инфекций у голубей.

Для повышения антигенности вакцины «Виросальм» предприятиюизготовителю ООО «Торговый дом «БиАгро» даны рекомендации о замене вакцинного штамма «Н» на новый штамм вируса болезни Ньюкасла голубиного варианта – «PN-T».

Результаты исследований антигенных и реактогенных свойств вакцины «Виросальм» были использованы при составлении нормативной документации с целью регистрации модифицированной вакцины «Виросальм»

для применения на территории РФ (инструкция по применению, СТО), а также в регламенте производства вакцины и в 2 отчетах по испытанию вакцины на голубях.

Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе в ФГБОУ ВПО МГАВМиБ при изучении студентами дисциплин «Эпизоотология» и «Болезни птиц».

Личный вклад соискателя. Автору принадлежит непосредственное осуществление исследований по мониторингу за гриппом птиц и ньюкаслской болезнью у голубей, изучение антигенных и реактогенных свойств вакцин против ортомиксо- и парамиксовирусных инфекций у голубей, а также анализ и обобщение полученных результатов.

Апробация результатов диссертации. Основные результаты исследований доложены на научно-практической конференции, посвященной памяти академика Коровина Р.Н. (Санкт-Петербург – Ломоносов, 2008), на Международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Молодежь. Наука. Будущее: технологии и проекты» (Казань, 2011), на научной конференции молодых ученых «Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии» (Москва, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликованы 6 научных работ, в т.ч. 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на 173 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, данные о практическом использовании результатов, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы, включающий 173 источника, в т.ч. 71 иностранных авторов.

Работа содержит таблицы, 5 рисунков, 20 страниц приложений.

На защиту выносятся следующие положения и результаты:

1. Результаты эпизоотологического анализа, клинических и патологоанатомических исследований ортомиксо- и парамиксовирусных инфекций у птиц, в т.ч. голубей в условиях Москвы и Московской области.

2. Факторы риска возникновения и распространения ортомиксо- и парамиксовирусной инфекций голубей в Москве и Московской области.

3. Антигенные и реактогенные свойства живых и инактивированных вакцин против гриппа птиц и ньюкаслской болезни у голубей.

4. Безвредность, антигенные и протективные свойства вакцины «Виросальм» при профилактике ньюкаслской болезни у голубей.

1.1. Этиологические особенности ортомиксовирусной инфекции Ортомиксовирусная инфекция у птиц представлена наиболее контагиозной болезнью – гриппом. Грипп птиц (высокопатогенный грипп птиц, европейская, классическая чума птиц, грипп кур А, экссудативный тиф, голландская чума кур, брауншвейгская болезнь) – это острая высококонтагиозная болезнь домашних, диких и синантропных птиц, характеризующаяся угнетением, отеками, поражением органов дыхания, пищеварения, протекающая с различной степенью тяжести (от бессимптомной инфекции до тяжелых генерализованных форм) (2,4,12,13,22,23,37,99). Болезнь встречается в двух формах: вызываемой низкопатогенными типами вируса (классическая чума) и высокопатогенными типами (высокопатогенный птичий грипп) (37).

В связи с уникальной изменчивостью возбудителя – вируса гриппа А, на совместном заседании комиссии по Международному ветеринарному кодексу и ЕС (2002), принято официальное определение болезни «инфекционное заболевание, вызванное любым вариантом антигенного комплекса вируса гриппа А с индексом внутривенной патогенности более 1,2 для цыплят 6тинедельного возраста или любая форма инфекции, вызванная вирусом гриппа А серотинов Н5 и N7» (169).

РНК-содержащий вирус гриппа птиц принадлежит к семейству Orthomyxoviridaе, роду Influenza virus A (6,11). Впервые он был изолирован в 1933 г. (167). Различные штаммы могут существенно различаться по вирулентоности, высокопатогенный грипп птиц включен в перечень карантинных и особо опасных болезней животных (87,159,169). Horimoto T., Kawaoka Y.

(2005) отслеживают изменения генной структуры и развития вируса после пандемии в 20-ом столетии (126).

Грипп кур установлен во Франции, ФРГ, США, Шотландии и СССР;

грипп уток – в СССР, США, Великобритании, Чехословакии, Италии, Венгрии; грипп перепелов и фазанов – в Италии; грипп крачек – в странах Сев.

Африки; грипп буревестника – в Австралии (5,7,13,144). Зоонозный грипп, прогнозы пандемии, по мнению Бессарабова Б.Ф. (2001), Дорошенко Е.М.

(2007), Белова А.Б. и Огаркова П.И. (2008) стали реальностью (10,27,98).

Вирус гриппа птиц относится к семейству Orthornixoviridae, рода инфлюэнца. Исходя из классификации ортомиксовирусов Международного комитета по таксономии вирусов (1980), семейство включает четыре рода – Influenza virus типа А, В, С, а также Thogotovirus (19,20,119,135,165,172).

Вирусы типа А вызывают заболевания у животных и человека. Внутри этого вида различают субтипы вируса гриппа А, которые сохраняют общие наследственные признаки и при смешанном заражении ортомиксовирусы способны обмениваться сегментами генома. Этот процесс получил название реассортации сегментов или рекомбинации (19,172).

Основной характерной особенностью структуры вируса рода Influenza virus типа А является гетерогенность – неоднородность размеров и формы вирионов. Свежевыделенные штаммы, как правило, имеют нитевидную форму; диаметр частиц 70-80 нм, длина 200-300 нм. В процессе пассажирования вирус приобретает, в основном, сферическую и овальную форму, диаметр частиц составляет 80-120 нм (151). При электронном микроскопическом исследовании они бывают двух типов. Вирусы первого типа образованы трансмембранными гликопротеинами вириона, второго – построены из молекул гликопротеина тетрамера и обладают ферментативной активностью – нейраминидазы (NA) (171).

Расположение белков в вирионе, их доступность для воздействия факторов внутренней и внешней среды тесно связаны с высокой степенью изменчивости структуры этих белков. Именно изменчивость структуры белков является причиной антигенной вариабельности вируса, существенно затрудняющей разработку средств специфической профилактики против гриппа птиц (30,129).

В настоящее время показано, что геном ортомиксовирусов состоит из сегментов одноцепочечной негативной рибонуклеиновой кислоты (20,30,129). Репродукция вируса происходит в ядре и цитоплазме клеток инфицированного хозяина (153).

Структурными компонентами вируса гриппа птиц являются: РНК 0,8белки 70-75%; липиды 20-24%; углеводы 5-8% (172).

При разработке средств специфической профилактики против гриппа птиц основополагающей является антигенная структура (135). Известно, что вирус типа А содержит несколько типов белков. С клетками иммунной системы организма наиболее активно контактируют поверхностные белки вириона, выступающие над мембраной в виде шипов. Основную роль в иммуногенезе играют два вида белков – гемагглютинин (НА) и нейраминидаза (NA) (125,135).

Анализ работ отечественных и зарубежных авторов свидетельствует о ведущем значении НА, который обеспечивает контакт вируса с клетками организма хозяина (5,135). В настоящее время достоверно установлено, что поверхностный «шип» – часть белка, выступающего над мембраной вириона, представляет собой НА с молекулярным весом 215 кДА (135).

Вторым поверхностным белком вируса гриппа, участвующим в формировании иммунитета, является нейраминидаза (NA). Без участия данного фермента вирус не способен осуществить процесс репродукции (5,33,49,135).

Изучение антигенной структуры вируса гриппа А способствовало развитию молекулярной иммунологии, в частности, моноклональных антител, увеличивающих чувствительность анализа до отдельных детерминант, включающих менее 10 аминокислотных остатков (66).

В условиях продолжительного изучения изменчивости штаммов вируса гриппа установлено, что в результате антигенного дрейфа, он приобретает качественно новые белковые компоненты, способствующие возникновению новых вариантов вируса. Как правило, это совпадает с частотой эпизоотических и эпидемических волн (40,42,49,66).

Важное научное и практическое значение принадлежит таксономической классификации, тесно связанной с антигенными подтипами НА и NA.

Известны 16 подтипов НА (Н1-Н16) и 9 нейраминидазы (N1-N9). Кроме того за последние 20 лет удалось обнаружить два новых подтипа НА вируса гриппа А – Н14 и Н15, несмотря на регулярный скрининг вирусов птиц, млекопитающих и человека (52,53,54,55,76,101,115,135,148).

Первоначально следует отметить, что грипп птиц, наряду с болезнью Ньюкасла, входит в список А МЭБ. Для указанных болезней характерно стремительное распространение и огромные экономические потери (119,169).

Первое описание гриппа (чума птиц) встречается в 1878 г. в Италии (37,41). Продолжительное время болезнь считалась безопасной для человека.

Лишь в 70-х годах ХХ в. было доказано носительство высокопатогенных штаммов вируса гриппа А мигрирующей водоплавающей птицей. Установлена общность вируса гриппа птиц с возбудителем гриппа человека, эпидемия которого в 1918 г. вызвала гибель 20 млн. человек (13,37,41).

Проблема вновь приобрела важное значение, когда массовое заражение птиц произошло на территории Ирландии и США, миллионы домашних пернатых были уничтожены (7). С этого времени интерес исследователей к этой инфекции не прекращается (72).

В связи с высокой контагиозностью вируса гриппа, эпизоотии наблюдались в Европе, Азии, Америке. В России они зарегистрированы в Алтайском крае, Новосибирской, Омской областях, затем в Тюменской, Курганской, Тульской, Калмыкии и Крыму, а также на Украине (27,100).

Вирусы гриппа типа А могут инфицировать несколько видов животных, включая птиц, свиней, лошадей, тюленей и китов. Вирусы гриппа, которые инфицируют птиц, называют "вирусами птичьего гриппа". Вирус птичьего гриппа обычно не передается человеку напрямую от птиц и не циркулирует среди людей. Вирус гриппа А может быть разделен на субтипы на основании их поверхностных протеинов – гемагглютинина и нейраминидазы. Всего известно 15 субтипов геамагглютинина и 9 субтипов нейраминидазы. Однако из 135 пар комбинаций в природе встречаются только 46 (158), и только 22из них найдены среди вирусов гриппа, идентифицированных в популяции птиц, а именно: Н1N1 - h4N2 - h4N3 - H3N2 - H3N8 - H4N2 - H4N4 - H4N6 H4N8 - H5N1 - H5N2 - H5N9 - H6N1 - H6N2 - H6N5 - H6N9 - H7N1 - H7N2 - H7N3 - H7N7 - H9N2 - H9N8 - H10N7 - H11N9 (157,158).

Дальнейшие наблюдения показали, что подтипы вируса гриппа H1N1, H3N2, H1N2, H1N7, H5N1 чаще поражают свиней, H3N8 и H7N7 – лошадей, H4N5, H3N3 и H7N7 – тюленей, H10N4 – норок, H13N7 – чаек. Все подтипы, кроме Н13, циркулируют в популяции уток, некоторые из них наблюдаются у уток постоянно (Н3, Н4, Н6). У домашней птицы циркулируют Н 4,5,7,9,10;

N 1,2,4,7; у индейки – Н 1-10; N 1-9; у гусей – Н1-12; N 1-9. Другие подтипы встречаются периодически (6,78,158).

Значение генетической изменчивости вируса гриппа типа А, циркулирующего у людей заслуживает серьезного внимания, в связи с тем, что по распространению болезнь занимает третье место в инфекционной патологии птиц (31,124).

Проблема приобрела особую актуальность после эпизоотии 1957 года, когда был впервые доказан случай преодоления вирусом межвидового барьера и передача его от зараженной птицы человеку (124). Изолированный штамм отличался высокой летальностью и отсутствием к нему иммунитета в человеческой популяции (31,124).

Вопросы генетической вариабельности и угрозы заболевания оказались взаимосвязанными (13,27,124).

Подтипы НА (Н2, Н4-Н15) не представлены в популяции человека. Однако зафиксированы эпидемии, обусловленные штаммами Н2N2, Н2N8, Н8N8, H5N1, H7N3, H7N7 (38,166).

Предполагается, что человек не имеет иммунной защиты к вирусу Н4Н15. К подтипу Н2 специфическая невосприимчивость установлена только у лиц старшего возраста, так как подтип Н2 циркулировал в некоторых странах с 1957 по 1968 гг. (36,98,166).

Учитывая высокую степень изменчивости возбудителя и возможность преодоления межвидовых барьеров, можно предположить, что вирус гриппа А любого подтипа, отсутствующего в популяции человека, может стать источником будущей пандемии (166).

Чрезвычайное внимание исследователей вызывают гемагглютинин Н5 и Н9 после того, как в 1997 г. вирус гриппа А, подтипа Н5N1 (штамм A / Hong Kong / 156 / 97) вызвал в Гонконге эпизоотию кур и ограниченную вспышку заболевания человека с высокой летальностью: зарегистрирована гибель каждого третьего из 18 заболевших (144). После этой эпидемии в 1999 г. в Гонконге от двух детей с признаками респираторных расстройств выделен вирус подтипа Н9N2. Таким образом, следует предположить, что штаммы Н5N1 и Н9N2 обладают высоким потенциалом пандемической опасности (98,114).

Многочисленные исследователи сообщают о выраженной способности вируса изменять антигенную структуру и биологическую активность поверхностных гликопротеидов (33,141).

Характерной особенностью современных эпизоотий гриппа является возможность одновременной циркуляции на протяжении одного отрезка времени, в одном ареале нескольких вариантов вируса гриппа, различающихся по антигенной специфичности. В результате качественных изменений гемагглютинина и нейраминидазы возникают новые подтипы вируса гриппа, обусловливающие возникновение пандемии и панзоотии (13,33,122,141).

Каждую новую вспышку болезни объясняют появлением штамма, антигенная структура которого отличается от предыдущих изолятов (6,141). Изменчивость вируса гриппа является его отличительной особенностью, характеризующейся антигенным дрейфом и шифтом. Этот процесс приводит к реассортации геномных сегментов двух различных штаммов, которые одновременно инфицируют организм. Доказано, что вариабельность НА и NА различается при циркуляции вируса среди птиц, млекопитающих и людей, что связано с особенностями жизнедеятельности различных видов восприимчивых особей (41,42).

Если антигенный дрейф приводит к последовательному вытеснению из популяции человека ранее циркулировавших штаммов вируса гриппа А, то антигенный шифт обеспечивает внезапное появление новых подтипов, к которым организм весьма восприимчив (42,86,98).

При сравнительном исследовании последовательностей нуклеотидов, различия в пределах подтипа штамма вируса гриппа человека и птиц составляют около 10%, при том, что 13 известных на момент исследования (1970гг.) подтипов НА происходят от общего прародителя (138).

Среди исследований последних лет следует отметить результаты изучения 154 штаммов вируса гриппа Н3N2, изолированных в России и странах СНГ в 1989-1999 гг. В процессе работы Ивановой В.Т. и соавт. был установлен антигенный дрейф НА и NА. Удалось выяснить гетерогенность антигенных свойств штаммов каждого нового эпидемического сезона (36,136).

В ХХ в. были зафиксированы пандемии, вызванные вирусом гриппа А человека (1918, 1957 и 1968 гг.), и одна глобальная эпидемия, близкая к пандемии 1977 года (83).

Особенностью пандемий гриппа является быстрота распространения инфекции по всему миру в течение, примерно, одного года после первоначального установления диагноза. Так, в 1918-1919 впервые выявленный в Испании, так называемый «испанский грипп» («испанка»), (возбудитель – вирус гриппа А, подтип Н1N1), стал причиной смерти от 20 до 50 млн. человек (83,89,169).

Во время вспышки так называемого «азиатского» гриппа в 1957-1958 гг., заболевание впервые зафиксировано в Китае в феврале 1957 г., в США в июне 1957 г. В результате этой пандемии погибли около 70 тыс. человек в США и около 1,5 млн. в различных странах мира (83,86,162).

Вспыхнувшая через 10 лет пандемия (1968-1969 гг.), вызванная вирусом гриппа А типа Н3N2, впервые зафиксирована в Гонконге в начале 1968 г.

(«гонконгский грипп»), болезнь стала причиной смерти около 700 тыс. человек (114).

Многочисленные отечественные и зарубежные авторы подтверждают, что в человеческой популяции вирус гриппа А (Н3N2) циркулирует до настоящего времени (23).

В отличие от штаммов 1997 и 2003 г., штаммы Н5N1, изолированные в 2004-2006 гг., стали более вирулентными, о чем свидетельствует весьма значительное количество погибшей домашней птицы (6,65).

Несмотря на высокую летальность вируса гриппа H5N1, большинство домашних кур в Гонконге не проявляли никаких клинических признаков болезни. В это же самое время в популяции кур циркулировал вирус гриппа H9N2. При изучении роли вируса H9N2 в защите кур от летальной вирусной инфекции H5N1 обнаружилось, что сыворотка от кур, инфицированных вирусом H9N2, не дает перекрестных реакций с вирусом H5N1 в реакции нейтрализации и реакции ингибирования гемагглютинации. Большинство кур, инфицированных вирусом гриппа H9N2 за 3-70 дней до контрольного заражения вирусом H5N1, выживали при контрольном заражении, однако инфицированные птицы выделяли вирус гриппа H5N1 в испражнениях. Адаптивный перенос Т-лимфоцитов или Т-клеток CD81 от инбредных кур (B2/B2), инфицированных вирусом гриппа H9N2, к нативным инбредным курам (B2/B2) защищал их от летального вируса H5N1. In vitro анализ цитотоксичности показал, что Т-лимфоциты или Т-клетки CD81 от кур, инфицированных вирусом гриппа H9N2, распознают клетки-мишени, инфицированные как вирусом птичьего гриппа H5N1, так и H9N2 в зависимости от дозы. Это показывает, что перекрестный клеточный иммунитет, индуцированный вирусом гриппа H9N2, защитил домашних кур от летальной инфекции H5N1 в Гонконге в 1997 году, однако не предотвратил выделение вируса с фекалиями. Кроме того, перекрестный клеточный иммунитет может изменить исход инфекции птичьего гриппа у домашней птицы и создать ситуацию сохранения вируса птичьего гриппа H5N1 (152).

Птичий вирус трудно остановить, поскольку вирус, по-видимому, мутировал со времени последней вспышки в Гонконге в 1997 и 2003 году. Мигрирующие птицы могут распространять его, что подтверждает тот факт, что в Гонконге был найден погибший обыкновенный сокол (сапсан), переносящий этот вирус (86).

Локализация вспышек птичьего гриппа зависит от точности идентификации способов распространения вируса. Необычно то, что он первично распространяется перелетными птицами. Из предыдущего опыта известно, что ответственными за распространение птичьего гриппа между фермами являются люди и оборудование. В 1997 году вспышку в Гонконге удалось локализовать благодаря тому, что было уничтожено все поголовье домашней птицы в стране. В настоящее время вирус распространился среди домашней птицы по всей Азии, поэтому локализовать вспышку гораздо сложнее (98,152).

Грипп птиц в Подмосковье зафиксировали в феврале 2007 г. Санитарные службы констатировали заболевание птиц гриппом в 7 районах Московской области. Для предупреждения распространения болезни за пределы очага подозреваемая в заражении и заболевании птица была уничтожена (32,34,93).

Многочисленные авторы сообщают, что к гриппу птиц восприимчивы различные виды домашней, дикой, синантропной и экзотической птицы (1,4,5,7,11,25,42,47,65,82,87,100,101,116).

Особая роль принадлежит дикой водоплавающей птице, так как водные птицы являются резервуаром всех пятнадцати подтипов вируса гриппа А типа. У диких уток вирус гриппа размножается главным образом в клетках, выстилающих желудочный тракт, при этом никаких видимых признаков заболевания вирус не вызывает и в высоких концентрациях выделяется с фекалиями. Вирус гриппа птиц успешно выделяли из свежих фекальных масс, а также из неконцентрированной озерной воды. Это говорит о том, что водоплавающие птицы переносят вирус гриппа с высокой эффективностью через фекальные массы и водоемы (46,76,82,83,86,124,149,168).

Авирулентная природа инфекции, вызываемой вирусом гриппа птиц у уток и болотных птиц, может являться результатом адаптации к данному хозяину на протяжении нескольких сотен лет. Таким образом, был создан резервуар, обеспечивающий бессмертие вирусу гриппа, и, следовательно, утки и болотные птицы несомненно играют важную роль в естественной истории вирусов гриппа. К настоящему времени зарегистрировано участие вирусов гриппа птичьего происхождения в эпидемиях гриппа у таких млекопитающих как морские котики, киты, свиньи, норки и лошади, равно как и у домашней птицы (113,117,119,123,128,150). Случаи переноса вирусов гриппа в популяцию свиней были отмечены в 1970, 1996 и 2004 гг. (38). Поскольку свиньи могут болеть как птичьим, так и человеческим гриппом, – это еще одна возможность для преодоления межвидового барьера вирусом птичьего гриппа.

Ковалевская А.А. с соавт. (2010) отмечает способность вируса гриппа А (Н5N3), изолированного у птиц, размножаться в организме домашних кошек (43).

Показано, что авирулентный вирус, постоянно циркулирующий в природе среди диких водоплавающих, может стать высокопатогенным для домашней птицы в результате циркуляции среди домашних кур (131).

Изучение родословных вирусов гриппа в различных видах птиц показало, что вирусы гриппа птиц в Евразии и Америке эволюционировали независимы. Таким образом, миграция между этими двумя континентами (широтная миграция) практически не играет роли в трансмиссии вируса гриппа, в то время как птицы, мигрирующие по долготе, по-видимому, вносят решающий вклад в продолжающийся процесс эволюции вируса гриппа (167).

В отечественной литературе последних лет опубликовано значительное количество сообщений, связанных с изучением особенностей гриппа птиц в период эпизоотий 2005-2006 гг., зарегистрированных на территории России (15,21,22,32,42,50,82,140). Согласно приведенным данным, заболевание было вызвано штаммом Н5N1, занесенным в Россию из Юго-Восточной Азии перелетной водоплавающей птицей. Карантинированию подвергнуты 62 населенных пункта, в которых погибли более 22 тыс. и уничтожены 588585 птиц различных видов. Дикие водоплавающие птицы являются переносчиком вирусов гриппа птиц и человека, чаще у них обнаруживают подтипы Н5N1 и H7N7. Инфицирование вирусом гриппа происходит на территории, где восприимчивые животные имеют контакт с водоплавающей птицей (42,82,140).

Важное эпизоотологическое значение имеют перелеты уток, гусей, лебедей. Зоны гнездования многих видов уток занимают обширную площадь, представляющую потенциальную опасность поддержания инфекта. Тем более что у уток заболевание, как правило, имеет бессимптонное течение (15,82,154).

В организме водоплавающих птиц вирус сохраняет биологические свойства, сосуществует, не вызывая признаков заболевания (83).

Все известные 15 подтипов гемагглютинна и 9 – нейраминидазы изолированы от диких водоплавающих птиц (83,86).

Естественным хозяином вируса гриппа являются и другие виды птиц водного и прибрежного ландшафта. Тем не менее, главным источником возбудителя служит больная и павшая птица (13,37,78).

Наиболее опасно вирусоносительство и вирусовыделение при бессимптомной инфекции (145).

Источником вируса также может быть обслуживающий персонал, транспорт, тара и другие предметы, с которыми контактировала подозреваемая в заражении, заболевании или больная птица. Болезнь наблюдается в любых климатических условиях (7,11,13,15,22,25,42,47,50,56,57,62,65,70, 72,82,87,90,94).

Заражение происходит воздушно-капельным, алиментарным, контактным способами и трансоваривально. Представленные данные необходимо учитывать для своевременного разрыва эпизотической цепи (5, 26, 48, 132, 155).

Факторы передачи вируса – инфицированная обменная тара (лотки для тушек и яиц), корма, товарная продукция (тушки птиц, яйца, перо), полученная в инкубационный период или от клинически больной птицы (4, 50, 56, 57, 62, 64,65,,90, 94,100,101,116,148).

Утята болеют чаще в 10-25 дневном возрасте с преобладанием симптомов поражения органов дыхания, выраженным цианозом. Особенностью гриппа утят является поражение глаз; кероконъюнктивит нередко осложняется слепотой. Погибает до 50% молодняка (4).

У индеек, цесарок, фазанов, перепелов грипп протекает с клиническими признаками нарушения деятельности органов дыхания и пищеварения. У индеек заболевание чаще наблюдается в острой форме, при которой смертность достигает 80% (6,94).

Данные о гриппе экзотических птиц немногочисленны. Известно, что болеет как молодняк, так и взрослая птица, у которой основной симптом – катаральное воспаление верхних дыхательных путей (37).

Имеются весьма оригинальные сообщения о заболевании страусов гриппом, к которому более чувствителен молодняк; смертность взрослых особей достигаект 10% (95).

После переболевания птица частично или полностью теряет иммунитет против болезни Ньюкасла – парамиксовирусной инфекции, инфекционного ларинготрахеита, бронхита, оспы (106,156).

Патогенез вируса птичьего гриппа изучался на мышах, поскольку это одна из наиболее широко применяемых и изученных моделей для исследования патогенеза вирусов на млекопитающих, однако в качестве альтернативы предлагается изучать вирус птичьего гриппа на хорьках, для которых он также является патогенным (173).

Вирус гриппа попадает в организм через эпителиальные клетки органов дыхания, активно размножается на слизистой оболочке трахеи, бронхов, бронхиол. Отмечают, что в течение суток он проникает в кровяное русло, обуславливая поражение центральной нервной системы и внутренних органов (20,64,79,135).

Виремия сопровождается образованием токсических продуктов, вызывающих интоксикацию и гибель птиц. Как правило, болезнь протекает в форме генерализованной инфекции, снижающей клеточную и гуморальную иммунологическую реактивность. В связи с этим, летальность составляет 90Одним из факторов, оказывающих влияние на патогенез вируса H5N1, является деструктивное влияние на иммунную систему, которое отличается у летальных и нелетальных изолятов вируса H5N1 (163).

На развитие патологического процесса у восприимчивых птиц влияет подтип вируса (48). Наиболее интенсивные изменения вызывают варианты подтипа Н1. Вследствие нарушения гемодинамики, возникают множественные кровоизменения различной формы и величины на слизистых оболочках, а также в скелетной мускулатуре. Как правило, указанными признаками характеризуется патогенез молниеносной и острой форм инфекции (4,6,22,40,50,125,127).

Наряду с этим, развитие заболевания зависит от вида, возраста, условий содержания (4,5,12,19,22,25,37,40,48,64,65,78,87,113,130,144). Так, один и тот же серотип вызывает у цыплят молниеносную форму инфекции, у взрослой водоплавающей птицы – латентную. Широта распространения вируса гриппа А у различных видов птиц, высокий процент скрытой инфекции у водоплавающих, требуют дифференциации гриппа от других инфекционных болезней, протекающих первоначально с аналогичными симптомами (6,13,64,89,107,110).

Тем не менее, классическим признаком гриппа служит внезапная, без каких либо предвестников, значительная гибель молодняка и взрослых кур, как в специализированных предприятиях промышленного типа, так и в условиях мелкотоварных ферм, а также приусадебных хозяйств (6,37,42, 47,50,56,62,70,82,87,94,100,116,148).

По характеру течения различают сверхострую (молниеносную), острую, подострую, хроническую, субклиническую и латентную формы гриппа птиц (4,5,20,37,79,87,132).

Сверхострое течение характеризуется отсутствием клинических признаков и массовой внезапной гибелью птиц. При острой форме выражено поражение центральной и периферической нервной системы, органов дыхания и желудочно-кишечного тракта (13,37,72,79,132).

Птица в состоянии депрессии малоподвижна. Наблюдается потеря чувствительности, параличи, парезы, отек подкожной клетчатки головы, шеи, цианоз гребня, сережек, слизистых оболочек, а также ринит, хрипы. Происходит потеря аппетита, возникает диарея. С первыми клиническими признаками снижается или прекращается яйценоскость, ухудшается качество скорлупы и племенные качества яйца (4,40,87,130).

Многие авторы отмечают, что патологоанатомические изменения находятся в соответствии с клиническим проявлением заболевания. При сверхострой и острой форме они отсутствуют (4,5,62,64,65,79,87,90,94, 113,123,130,158,173).

Подострое и хроническое течение характеризуется множественными точечными кровоизлияниями на серозных и слизистых оболочках, в скелетной мускулатуре, паренхиматозных органах (25,37,94,158).

Одновременно выражен отек подкожной клетчатки, катаральная пневмония, геморатический энтерит. Указанные признаки также зарегистрировали при энзоотии гриппа птиц в Таиланде. У уток, наряду с этим, типичным является поражение оболочек глаза (145).

Как правило, грипп птиц протекает в острой или сверхострой форме, вызывая гибель 90-100% цыплят и взрослых кур (106). Прервать эпизоотию или эпидемию удается ценой огромных усилий Правительства, ветеринарной, медицинской, правоохранительной служб и населения (35).

При экспериментальном инфицировании вирусом гриппа птиц А/chiken/Primorsky/85/08 H5N1 разных видов водоплавающих птиц вирус вызывал гибель всех 18-суточных серых гусят, 27-суточных крякв и мускусных утят при инкубационном периоде не менее 2 суток. При заражении тем же вирусом годовалых крякв и 37-дневных мускусных утят происходило заболевание всех птиц, но некоторые были способны к выздоровлению к 10 суткам эксперимента (1).

Заражение 30-суточных цыплят высоковирулентным вирусом А/Н7N вызывало острую генерализованную болезнь и гибель всех птиц в течение суток после инфицирования. Титр вируса во внутренних органах цыплят достигал 7,8 lg ЭИД50/см3. Заражение 30-суточных цыплят низковирулентным вирусом А/Н7N1 вызывало незначительную гибель цыплят с признаками истощения, отечности легких и воспаления кишечника. Титр вируса в органах павших цыплят (кишечник, легкие, печень, почки, селезенка, головной мозг, сердце) достигал 4,5 lg ЭИД50/см3. Болезнь регистрировали с 3 по 5 сутки, большинство заболевших выздоравливали (1).

Следует обратить внимание на то, что высокая смертность не всегда сопутствует гриппу. Так, при эпизоотиях, зарегистрированных в России в 70-х годах ХХ в., заболеванию подверглись цыплята в возрасте старше 60 дней и взрослые куры. Полная клиническая картина развивалась в течение 24-72 ч., но летальность не превышала 5-15%. Яйценоскость снижалась на 40-60% (4,40,130).

Подострое течение характеризуется умеренными признаками заболевания, при субклиническом – проявляются отдельные симптомы, гибель составляет 0,2-0,5% (85).

Особый интерес представляет определение патогенных свойств вируса.

На этом основании отечественными исследователями разработана схема изучения изолятов, согласно которой к высокопатогенному гриппу птиц относятся (47,65,85):

а) вирусы, вызывающие гибель в течение 10 дней шести и более из восьми кур 4-6-недельного возраста, зараженных инфекционной аллантоисной жидкостью в дозе 0,2 мл в разведении 1:10;

б) штамы Н5 или Н7, не отвечающие патогенной активности, но имеющие аминокислотную последовательность по месту расщепления гемагглютинина, совместимую с высокопатогенным вирусом гриппа птиц;

в) изолированный вирус, который не принадлежит к подтипам Н5 или Н7, но вызывает гибель одной из 5 кур и способен размножаться в культуре клеток при отсутствии трипсина.

Важное значение авторы придают обнаружению в организме птиц специфических антител к гемагглютининам подтипов Н5 и Н7, если достоверно исключена их поствакцинальная природа (46,47,65,85).

Фактически схема позволяет своевременно выявить форму заболевания и принять соответствующие профилактические меры в очаге инфекции. По рекомендованным критериям она соответствует требованиям Международного ветеринарного кодекса (47,65,85).

Изоляты, не отвечающие ни одному из указанных условий, относятся к низкопатогенным подтипам вируса (4).

Заболеваемости ортомиксовирусной инфекции у голубей, в т.ч. при эпизоотических волнах гриппа птиц в доступных литературных источниках не описано. Многие авторы отмечают отсутствие клинических проявлений болезни у голубей, но возможность персистенции возбудителя через голубиных и субклинической инфекции, что подчеркивает участие голубей в эпизоотическом процессе (10,42,59,72,96,102,103,126,133,146,147).

Маринич И.Г. с соавторами (1998) характеризует смешанные инфекции, возникавшие при эпизоотии гриппа в 1997-1998 гг., часто отмечали орнитобактериоз (6).

При экспериментальном инфицировании голубей высокопатогенным штаммом вируса гриппа птиц Н7N7, проведенным германскими учеными, выявлено, что зараженные голуби как и неинфицированный контрольный оставались здоровыми. У них не было клинических симптомов в течение дней наблюдения. Ни разу не было конъюнктивита, как реакции на закапывание вируса в глаза. На третий и шестой день во внутренних органах вирус не обнаружили, однако до 5 дня вирус обнаруживали в зеве и клоаке, а также в помете.

У находящихся в вольере вместе с голубями кур (6 голов) симптомы болезни не развивались и при убое в конце опыта патологоанатомических изменений не выявляли (133).

Другие иностранные исследователи отмечали в сравнительных исследованиях с голубями и курами, инфицированными высоко- и низкопатогенными штаммами Н5N2 и Н7N1, что голуби не заражались, вирус не выделяли и не образовывали антитела, а куры болели и гибли (96,146). Гонконгским штаммом Н5N1 голуби не заражались и вирус не выделялся (96). А в опыте с высокопатогенным штаммом Н7N1 все зараженные голуби болели и образовывали антитела (59).

Kaleta E.F., Honicke A. в проведенных исследованиях по чувствительности голубей к заражению вирусами гриппа Н5 и Н7 установили, что инфекция Н7 приводит у голубей к конъюнктивиту, дегидратации, трясению головой и парезам крыльев и ног. В организме голубей активно размножается вирус, выделяется и развиваются циркулирующие антитела. В эпидемиологии вирусов Н5 голуби играют второстепенную роль. Только 1 из 19 голубей проявил депрессию однажды перед смертью, только 2 голубя выделяли вирус и только у 1 образовывались антитела (134). Авторы также отмечают, что свободно летающие голуби могут действовать как механические векторы и являться переносчиками инфекции, если были заражены (102,107,110,126, 133,134,140,146).

1.2. Этиологические особенности парамиксовирусной инфекции Парамиксовирусная инфекция представлена наиболее контагиозной болезнью Ньюкасла (парамиксовирусная инфекция типа 1), а также парамиксовирусной инфекцией типов 2 и 3. Болезнь Ньюкасла (ньюкаслская болезнь, болезнь Нью-Касла, псевдочума, атипичная чума птиц, азиатская чума, псевдоэнцефалит, болезнь Дойля, болезнь Филарета, болезнь Ранкхета, брауншвейгская чума) также относится к особо опасным инфекциям птиц (список А OIE (Международное эпизоотическое бюро – Всемирная организация охраны здоровья животных) (169). Вследствие огромного экономического ущерба, наносимого болезнью Ньюкасла, ВОЗ относит ее к группе наиболее опасных болезней продуктивных животных (104,105,121,137,169). Болезнь Ньюкасла – высококонтагиозная, сопровождающаяся поражением нервной системы, высокой летальностью и наносящая большой экономический ущерб инфекция (3,10,12,13,20,28,37,71,74,99).

Парамиксовирусная инфекция типа 2 (ПМВ-2, «Вертячка голубей») – это высоко контагиозная болезнь домашних и свободно живущих голубей, протекает в виде энзоотических вспышек, а так же скрытого носительства (10,67,74).

У голубей также выделен парамиксовирус, относящийся к группе парамиксовирусов типа 7, однако его значение в эпизоотологичеком процессе недостаточно изучено (9,10).

Болезнь Ньюкасла и ПВМ-2 вызываются парамиксовирусом птиц 1-ого и 2-ого типов, которые принадлежат к роду Rubulavirus, подсемейству Paramyxovirinae, семейству Paramyxoviridae, порядку Mononegavirales РНКсодержащим вирусам (2,20).

К ньюкаслской болезни чувствительны более 240 видов птиц из 27 различных отрядов. У голубей чаще всего ньюкаслскую болезнь вызывает голубиный вариант парамиксовируса 1-ого типа (20). Голубиный и птичий варианты очень близки друг к другу по своей структуре, они принадлежат к одному серотипу, однако между ними есть и четкие антигенные различия. Вирус ньюкаслской болезни голубей является антигенным вариантом парамиксовируса птиц серотипа 1 и вызывает особую форму болезни Нью-Касла у голубей (20,88,111,137,161).

Строение вируса ньюкаслской болезни характерно для семейства. Частицы вируса – плеоморфной формы, имеют липосодержащую оболочку – так называемый суперкапсид. На оболочке вируса присутствуют пепломеры (гликопротеиновые шипы) длиной около 8 нм. Размер вирионов 150-300 нм в диаметре (16,20,106).

Спиральный нуклеокапсид на большинстве электронных микрофотографий выглядит в виде «селедочной кости» диаметром около 18 нм и состоит из линейной, несегментированной, односпиральной РНК, связанной с белками: нуклеопротеином (NP), поддерживающим геномную структуру, фосфопротеином (P) и большим полимеразным белком (L), участвующими в транскрипции негативных геномных РНК-матриц. Кроме этих трех белков геном вируса кодирует еще матриксный белок (M), расположенный под оболочкой вириона; белок (HN), ответственный за гемагглютинационную и нейраминидазную активность; белок слияния (F), который вызывает слияние мембран вируса и клетки. Последние два белка являются поверхностными гликопротеинами, формирующими выступы на поверхности вириона (16,87,99,106).

Гликопротеид F у вируса ньюкаслской болезни синтезируется в виде белка-предшественника F0, который затем под действием ферментов расщепляется на две составляющие субъединицы F1 и F2. Только после расщепления белка-предшественника на субъединицы вирус становится инфекционным и может адсорбироваться на поверхности клеток и проникать внутрь путем слияния с клеточной мембраной. Это посттрансляционное расщепление осуществляется клеточными протеазами. Место расщепления F0 у вирулентных вирусов содержит три и более основные аминокислоты и фенилаланин на С-конце, что позволяет вирусу быть расщепленным различными протеазами, содержащимися в большинстве клеток организма. Это, в свою очередь, приводит к летальной системной инфекции (61,87,106). Если расщепления F не происходит, то синтезируются неинфекционные вирусные частицы (106).

Вирус ньюкаслской болезни может проявлять себя по-разному, вызывая заболевания различной степени тяжести даже у одного вида восприимчивого организма от острого течения с тяжелыми клиническими симптомами до незначительного проявления заболевания и бессимптомного течения (67). На разнообразие клинических симптомов у голубей влияет возраст, условия содержания, сопутствующие заболевания, иммунный статус, стрессы, но наибольшее влияние оказывает сам вирус, а точнее к какому патогенному типу он относится (20,67,106).

Основываясь на степени заболеваемости и смертности, а также на способности вируса вызывать различные клинические симптомы и патологические изменения у восприимчивых организмов, было выделено пять патотипов вируса ньюкаслской болезни:

- велогенный висцеротропный характеризуется острым течением инфекционной болезни, высокой смертностью, присутствием геморрагических поражений в желудочно-кишечном тракте погибшей птицы;

- велогенный нейротропный характеризуется высокой смертностью с присутствием респираторных и неврологических симптомов. Поражения желудочно-кишечного тракта при инфекции данным типом возбудителя обычно отсутствуют;

- мезогенный также характеризуется присутствием у больной птицы респираторных и неврологических симптомов, но инфекция сопровождается низкой смертностью;

- лентогенный характеризуется незначительными симптомами, чаще симптомами поражения респираторного тракта;

- бессимптомный кишечный включает штаммы вирусов, вызывающие бессимптомное течение болезни и размножающиеся преимущественно в пищеварительном тракте (67).

Первые вспышки ньюкаслской болезни описаны среди сельскохозяйственной птицы в 1926 году на острове Ява в Индонезии и в городе Ньюкасл в Великобритании. Хотя есть сообщения и о более раннем появлении данного заболевания, а именно в 1926 году была определена специфическая вирусная этиология болезни (13,67).

Возникнув в Восточной Азии в конце 20-х гг. прошлого века, вирус охватил почти все страны планеты за двадцать лет, вызвав первую панзоотию ньюкаслской болезни (87). Вторая панзоотия возникла на Среднем Востоке в конце 1960-х годов и достигла всех уголков Земного шара за четыре года.

Причины в такой разной скорости распространения панзоотий крылись в развитии птицеводческой индустрии во всем мире, развитии торговых отношений, а также – в использовании авиатранспорта для перевозки экзотических птиц (67,87,111).

В 1981-1983 гг. это заболевание поразило многие голубиные питомники Европы, заболевание протекало преимущественно с поражением нервной системы (10).

Вирус ПМВ-2 обладает всеми признаками присущими парамиксовирусной группе. Появление этого заболевания можно объяснить эволюцией вируса на фоне поголовной вакцинации кур против ньюкаслской болезни, в следствии его трансформации в промышленных птицеводческих хозяйствах, вызываемой вирусом ПМВ-1 (10).

Голубиный вариант ньюкаслской болезни вызвал третью по счету панзоотию этого заболевания (134). Данная панзоотия, в основном, поразила голубей и, в меньшей степени, – домашнюю и сельскохозяйственную птицу.

Время и место возникновения этой панзоотии, а также ее первоначальное распространение до конца не выяснены из-за того, что эпизоотический процесс возник среди диких птиц. Вероятно, вспышка инфекции болезни НьюКасла была не выражена в результате повсеместного применения вакцин против ньюкаслской болезни. Потому третья панзоотия определяется с вероятностью возникновения на Среднем Востоке в конце 1970-х годов (99,134).

В 1978 году в Ираке было первое сообщение о контагиозном параличе голубей, как затем было выяснено, вызванным именно голубиным вариантом ньюкаслской болезни (134). Затем вирус распространился на Запад через средиземноморские страны и попал в Европу, где впервые был обнаружен в Италии в 1981 году (58,134). Далее развитие распространения охватило северные широты Евразийского континента, достигнув скандинавских стран в 1984. Во время этой панзоотии коэффициент заболеваемости у домашних голубей составлял от 30% до 70%, а смертность редко превышала 10% (8,134).

Парамиксовирус легко передается чувствительным к нему птицам (5,10,11,13,20,71,84,87,121,125,137,169).

Инкубационный период у подвергшейся инфицированию птицы различен: от нескольких дней до нескольких недель. При экспериментальном заражении инкубационный период варьировал от 4 до 18 дней. Во время вспышек на голубятнях новые случаи болезни могут отмечаться через 5 недель после начала заболевания (10,11,12,67,71,78,87). Инфицированные голуби выделяют вирус на второй день после заражения в течение 10-15 дней.

Через 6 недель после переболевания птицы могут считаться свободными от вирусоносительства (8,71).

Вирус может присутствовать во всех тканях организма, включая мышечную ткань и внутренние органы. Он сохраняется в кишечнике до трех недель, в тканях головного мозга – до пяти недель после инфицирования (13,71,87,99,101,111, 121,125,137).

Возбудитель парамиксовирусной инфекции передается как прямым способом при непосредственном контакте больной и здоровой птицы, так и непрямым способом (67,71). Факторами передачи при этом могут служить подстилка, корм, перо и пух, полученные от больных птиц, тушки вынужденно убитой птицы, инвентарь для ухода и содержания голубей, одежда и обувь обслуживающего персонала. Вирус также может находиться на скорлупе яиц, собранных от больной птицы (3,11,62,71). В голубятнях, где присутствуют зараженные птицы, вирус может циркулировать в воздухе, передаваясь от больной птицы к здоровой аэрогенным путем (4,5,20,29,37,48,55, 58,61,71,81,84,86,111,121).

Так же одним из основных способов передачи является алиментарный путь (71). Так при вспышке ньюкаслской болезни в Англии в 1984 году, вызванной голубиным вариантом этого вируса, основным источником заражения служил корм для птиц, контаминированный фекалиями и тушками больных голубей, имевшими свободный доступ к кормам, хранящимся в открытых доках (161).

Опасность в разносе инфекции представляют покупка, продажа, выставки голубей, так как иногда здоровая по внешнему виду птица может быть источником инфекции (10,11,12,67,71).

У взрослых голубей заболевание может протекать в скрытой форме, однако они активно выделяют вирус в окружающую среду. При выздоровлении голуби также в течение 30 дней могут выделять с пометом вирус ньюкаслской болезни (20,71).

После заражения голубя проходит 4-5 дней, прежде чем проявляются клинические признаки заболевания. За это время вирус активно размножается в организме и начинает выделяться с пометом и трахеальной слизью (71).

Возможность передачи голубиного варианта вируса ньюкаслской болезни сельскохозяйственной птице была доказана, во время вспышки и распространения эпизоотии в Великобритании в 1984 году (106). Тогда было зарегистрировано 20 вспышек заболевания голубиным вариантом ньюкаслской болезни среди домашней и сельскохозяйственной птицы. У птиц наблюдали снижение яйценоскости, неврологические симптомы и повышение смертности. Источником вируса, являлся птичий корм, контаминированный фекалиями и тушками больных голубей (11,99,106).

Распространять вирус болезни Ньюкасла могут водоплавающие птицы, кошки, собаки, крысы, лисицы (через 72 ч. после поедания инфицированных трупов). Возможна передача через некоторых паразитов птиц (кокцидии, аскариды). Исследованиями показано, что голуби, а также водоплавающие птицы являются носителями лентогенных штаммов вируса ньюкаслской болезни (11,12,99).

Парамиксовирусной инфекцией поражаются часто дикие голуби – сизари и разносят ее по окультуренным стаям (9).

Также единым огромным резервуаром гриппа птиц и ньюкаслской болезни являются дикие водоплавающие птицы, что представляет собой большую опасность особенно для домашних птиц, которых выращивают в режиме свободного содержания. Среди диких перелетных водоплавающих птиц переносчиками вируса гриппа, в первую очередь, являются дикие утки и гуси, крачки и ржанки (49).

Прикрепление вируса к клеточным рецепторам опосредованно HNгликопротеинами. Слияние вирусной оболочки с клеточной плазматической мембраной осуществляется под действием белка F и, таким образом, нуклеокапсидный комплекс проникает в клетку без образования эндосом (111).

Вирус может проникать в организм птиц через респираторный тракт, через желудочно-кишечный тракт или через слизистую глаз (4,5,20,29,37,48, 55,58,61,71,81,84,86,111,121).

Репликация парамиксовируса полностью происходит внутри цитоплазмы клетки носителя: РНК-полимераза вносится в клетку с нуклеокапсином вируса. Геном транскрибируется в отдельные матричные РНК для каждого белка и полноценную плюс-матрицу для геномной РНК. Происходит трансляция вирусных белков, новые геномы взаимодействуют с L-, Р- и NPбелками, образуя нуклеокапсиды. На рибосомах синтезируются и гликолизируются гликопротеиновые шипы. Затем вирионы выходят из клетки с помощью их отпочковывания от клеточной поверхности. Участки мембраны оказываются усеянными шипами, состоящими из белков HN и F0. Если в окружающей среде окажутся подходящие протеазы молекулы F0 на поверхности клеток активируются и индуцируют слияние клеточных мембран. Такой тип вирус-индуцированного слияния называется слиянием изнутри, позволяет реплицирующемуся и транскрибирующемуся вирусу распространяться из клетки в клетку, успешно избегая действия циркулирующих противовирусных антител (111).

После размножения вируса в месте проникновения вирус попадает в кровь и с током крови разносится по всему организму. Наступает стадия вирусемии. Во время этой стадии вирус попадает в такие органы как селезенка, печень, почки и легкие. В них парамиксовирус размножается (67).

Некоторые патогенные штаммы вируса могут достигать жизненно важных органов, таких как печень и почки, очень быстро, в результате чего птица может погибнуть в короткие сроки, не проявляя никаких симптомов.

Большинство образовавшихся вирусов достигают центральной нервной системы через кровь до того, как там появится необходимое количество антител (28,45,67,81,84,111,121).

1.2.4. Клинические признаки и патологоанатомические изменения при парамиксвирусной инфекции у голубей Выраженную форму болезни Ньюкасла наблюдают как у ослабленных голубей, молодняка, так и у взрослой упитанной птицы (111).

Тяжесть заболевания определяется в первую очередь вирулентностью возбудителя. В меньшей степени на тяжесть заболевания влияют другие факторы: возраст голубей, порода, состояние иммунитета, сопутствующие инфекции и инвазии, влияние окружающей среды, стрессовая нагрузка на птицу, путь воздействия и доза вируса (8,10,13,29,71,75,88,92,99,104,105, 111,121,137).

Классически клиническая картина ньюкаслской болезни у голубей выглядит следующим образом: вначале появляются слабость и апатия, затем – кишечные симптомы, после которых начинают появляться нервные (9,10,12,29,67,87,111,137). При воздействии вируса ньюкаслской болезни заболевание проявляется, как правило, внезапно (10,111).

Во время заражения голубиным вариантом возбудителя респираторные симптомы и поражения глаз практически не наблюдаются (111).

При экспериментальном инфицировании затруднение дыхания характерно (111).

Частым признаком у инфицированных птиц являются симптомы поражения желудочно-кишечного тракта. Это выражается в виде водянистой, реже – геморрагической диареи, которая впоследствии может приобретать включения зеленоватого цвета. У заболевших голубей вследствие этого увеличивается потребление воды, появляются симптомы дегидратации (8,10,13, 29,67,71,75,88,92,99,104,105, 111,121,137,142).

Если голуби становятся инфицированными во время линьки, у них могут возникать проблемы с ростом маховых и покровных перьев, с развитием стержня пера и бородок первого и второго порядка. Вследствие этого перья становятся непрочными и ломкими (9,67,142).

Доминирующим в клинической картине ньюкаслской болезни является нервный синдром (67). Признаки поражения центральной нервной системы очень выражены. Их проявление характерно выкручиванием головы голубя с потерей координации движений, что послужило тривиальному названию болезни – «вертячка» голубей. Отмечают тремор головы и мышц, искривление шеи, опистотонус, паралич одного или обоих крыльев, паралич конечностей, нарушения ориентации в пространстве, нескоординированные движения, неспособность склевывать зерно. Все эти симптомы связаны с поражением центральной нервной системы и воспалительными явлениями в головном мозге, а также спинном мозге (9,10,13,20,37,67,142).

Иногда отмечаются менее типичные формы течения заболевания. Это, например, появление неврологических симптомов без предшествующей диареи, или, наоборот, наличие диареи без последующих неврологических симптомов. У молодняка голубей, инфицированного сильно вирулентными штаммами вируса, нередко наблюдается быстрая гибель без каких-либо определенных симптомов (67).

Характер патологических изменений при парамиксовирусной инфекции, а также круг поражаемых органов зависит, как и клинические симптомы от штамма и патогенного типа вируса, вида носителя и других факторов влияющих на тяжесть заболевания. При этом отсутствуют патогомоничные поражения, связанные с какими-либо формами болезни (2,3,5,7,8,9,10,11, 67,87,99,111,121,137,142).

Трупы голубей, павших от ньюкаслской болезни, часто обезвожены. Патологические изменения отмечаются в одной или более из четырех систем органов: центральной нервной системе, выделительной системе (почки), желудочно-кишечном тракте и, реже, – в респираторной системе (8,10,13,29,37, 46,58,67,71,75,88,92,99,104,105, 111,121,137). Но, несмотря на это, и в других органах и тканях нередко обнаруживают гиперемию, отеки и кровоизлияния (67).

В желудочно-кишечном тракте наблюдаются поражения тонкого отдела кишечника и, иногда, железистого желудка в виде катаральногеморрагического воспаления с геморрагическо-некротическими поражениями в лимфоидных узелках (9,10,12,37,67,68,111,137).

Поражения в центральной нервной системе включают негнойный энцефалит с дегенерацией нервных клеток, очаги глиальных клеток, периваскулярную инфильтрацию лимфоцитов и пролиферацию эндотелиальных клеток. Такие поражения наблюдаются в мозжечке, костном и среднем мозге, стволе головного и спинного мозга (8,46,58,67,71,75,88,92,99,104,105, 111,121).

В почках могут быть обнаружены мелкие очаги некроза в строме органа (67).

Патологические изменения респираторной системы у голубей встречаются крайне редко, при этом могут наблюдаться застой, отек и сильная клеточная инфильтрация в слизистой оболочке трахеи (7,10,13,67,99,111). Появление признаков катарально-гнойного воспаления бронхов, носовых пазух, крупозной или экссудативной пневмонии, как правило, являются следствием действия бактериального фактора у пораженной вирусом птицы (развиваются осложнения на фоне иммунодепрессии, недостаточности питания, подвижности и прочих патологических явлений, сопровождающих ньюкаслскую болезнь) (67).

Патологические изменения в сердце включают его небольшое увеличение и точечные кровоизлияния на эндокарде. У части голубей картина при патологическом вскрытии характеризуется более светлым цветом печени и небольшими некротическими очагами в ней (10,25,48,125).

В 20% случаев наблюдается увеличение селезенки за счет скопления лейкоцитов вокруг сосудов пульпы и увеличение лимфоидных фолликулов (67).

При постановке диагноза на ортомиксовирусную инфекцию – грипп птиц и парамиксовирусную инфекцию голубей необходимо учитывать эпизоотологические особенности, респираторные признаки болезни при гриппе, нервные и кишечные признаки при болезни Ньюкасла, патологоанатомические изменения, на которых основывается предварительная диагностика. Для постановки окончательного диагноза необходим комплекс лабораторных вирусологических исследований (1,2,6,12,13,19,20,24,28,37,44,57,63,67,71,77, 80,87,112,135,142,158).

При диагностике птичьего гриппа в лабораторию направляют патологический материал (легкие, печень, головной мозг и др.) от павших на острой стадии болезни птиц. Трупный материал должен быть свежим, допускается его замораживание до -60°С с целью консервации вируса или сохранение в 50%-ном растворе глицерина. Для серологических исследований от кур берут парные сыворотки крови в различные периоды развития болезни (37).

Для выделения вируса применяют методы заражения куриных эмбрионов, для идентификации выделенного вируса – реакция гемагглютинации (РГА), реакция торможения гемагглютинации (РТГА) и реакция связывания комплемента (РСК). Биологическую пробу ставят на цыплятах 60-120дневного возраста (37,67).

С целью обнаружения антигенов вируса гриппа птиц рекомендованы иммуноферментный анализ (ИФА), иммунопреципитация (двойная иммунодиффузия по Оухтерлони (РДП), иммуноэлектроосмофорез (ИЭОФ), иммунохроматографические методы (ИХА), радиоиммунный анализ (РИА), непрямая гемагглютинация, непрямая латексагглютинация, реакция связывания комплемента (РСК), реакция гемагглютинации (РГА) с подтверждением специфичности в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) (24,97,125,126,149). Обухов И.Л., Шипулин Г.А. и др. (2006) разработали и зарегистрировали в Российской Федерации полимеразную цепную реакцию, позволяющую выявлять РНК вируса гриппа А и идентифицировать субтины Н5 и Н7, субтин Н5N1 в патологическом материале и кормах. Предложены также ПЦР с последующим секвенированием ее продуктов, Дот-блот и блот гибридизация нуклеиновых кислот (63,126,149).

С помощью иммуноферментного анализа, молекулярно-генетического и молекулярно-биологического методов Прокудиным А.В.. Алексеевым А.Ю.

и др. (2006) при изучении вируса гриппа среди диких птиц на Таймыре установлено наличие вируса гриппа типа А у 7 голубей, который относится к серотипу Н3N2 (70).

О выделении протеина из вируса гриппа А сообщают Rerey N., Barelay W.S. с соавт. (1994) (13). Антитела у человека к птичьему гриппу А (H5N1) комбинацией серологических способов наблюдали Rowe T., Abermathy R.A.

и другие (1999) (149).

В целях ретроспективной диагностики используют РТГА, РДП, ИФА и ПЦР, для которых биологическая промышленность выпускает соответствующие диагностические наборы (67). Антитела появляются у инфицированных птиц с 4-10-го дня, двукратное исследование показывает нарастание антител. Для выявления антител к вирусу гриппа птиц наиболее эффективным в настоящее время считается набор для иммуноферментного анализа (производства научно-производственного предприятия «Авивак») (37).

Серологическая диагностика выполнима даже в условиях лабораторий птицефабрик. Для выявления специфических антител к вирусу болезни Ньюкасла наиболее часто применяют РТГА и ИФА. Однократное получение положительных результатов этих тестов позволяет судить лишь о наличии у птицы специфических антител, которые могли появиться как в результате заболевания, так и после вакцинации (87,88).

Для постановки окончательного диагноза на ньюкаслскую болезнь необходимо выделение вируса, его индикация и идентификация в реакции гемагглютинации (РГА) и реакции торможения гемагглютинации (РТГА), а также определение вирулентности вируса (13,16). Ни клинические симптомы, ни патологоанатомические изменения не могут служить надежным источником для постановки диагноза, так как сильные вариации заболевания в зависимости от штамма, вида носителя и других факторов могут дать лишь основание предполагать наличие вируса-возбудителя болезни Нью-Касла (5,12,67,87).

Патологический материал от живых птиц включает трахеальные смывы и смывы из клоаки с частичками фекалий. От павшей птицы материал должен отражать клинические симптомы, проявившиеся до наступления гибели, а также явно пораженные органы. Обычно патологический материал составляют головной мозг, участки пораженных почек, кишечника, селезенки, печени и сердца. Образцы тканей можно объединять, хотя образцы кишечника с содержимым лучше держать отдельно. Также, если возможно, часть тканей желательно поместить в 10%-ный раствор формалина для дальнейших гистологических исследований (44,67).

Если срок между отбором патологического материала и его исследованием в лабораторных условиях предполагается более 72 часов, то целесообразно этот патологический материал заморозить (12,19,41,67).

Вирулентные вирусы болезни Ньюкасла могут размножаться во многих системах клеточных культур. В некоторых из них возможна репликация вирусов, имеющих низкую вирулентность. Однако значительно более восприимчивой и удобной средой размножения вирусов ньюкаслской болезни являются оплодотворенные куриные яйца (137).

Для выделения вируса используют 9-10-дневные куриные эмбрионы, полученные от невакцинированных кур, свободных от специфических патогенных микроорганизмов. В аллантоисную полость эмбрионов инокулируют суспензию, приготовленную из отобранного патологического материала. Для приготовления суспензии используют антибиотическую среду. Обработанные таким образом эмбрионы инкубируют при температуре 37С и периодически проверяют (19,20,37,61,67).

Инкубация в течение 3-4 суток должна сопровождаться периодической овоскопией. Погибшие эмбрионы охлаждают, спустя минимум четыре и максимум семь дней, из них собирают аллантоисную жидкость. Присутствие вируса определяют с помощью реакции гемагглютинации. Если гемагглютинация не дает положительных результатов, жидкость надо пассировать, по крайней мере, еще один раз. РГА может также быть отрицательной в случае сильно патогенного штамма вируса. Вирус при этом быстро вызывает гибель эмбриона и не успевает накопиться в количестве, в котором его можно обнаружить с помощью реакции. В таком случае как вариант – использование непрямого иммунопероксидазного метода индикации (19,143).

Гемагглютинация может быть вызвана бактериями, поэтому надо оценить возможное загрязнение жидкости с помощью посева на питательные среды (67).

Взятие образцов и другие методы выделения парамиксовирусов также применяются и для вируса ньюкаслской болезни. Для некоторых вирусов более успешен метод инокуляции 6-7-дневных оплодотворенных яиц через желточный мешок (143).

3. Принципы противоэпизоотической борьбы при ортомиксовирусной и парамиксовирусной инфекциях птиц Анализируя доступные литературные источники и существующие нормативные акты, следует отметить, что конкретно для голубеводства с учетом особенностей данного направления системы мер по борьбе и профилактики ортомиксовирусной инфекции и парамиксовирусной инфекции не предложены.

Современные методы борьбы с гриппом предусмотрены Ветеринарным законодательством и требуют обязательного выполнения. Они основаны на карантинировании и убое больной, подозреваемой в заражении, заболевании больной птицы (91).

Депопуляция птицы и карантинирование приводят к значительным экономическим потерям (50,51).

Также для предотвращения распространения гриппа и ньюкаслской болезни птиц в птицеводческих хозяйствах разработаны строгие организационные мероприятия. Они заключаются в размещении различных возрастных групп птиц в территориально обособленных зонах с необходимыми зооветеринарными разрывами; в комплектовании птичников и зон одновозрастной птицей и в соблюдении межцикловых профилактических перерывов с проведением тщательной дезинфекции и очистки помещений (12,20,37,39,48, 61,111,112).

Первостепенное значение в противоэпизоотической борьбе отводится специфическим мероприятиям, а именно применению эффективных инактивированных вакцин. Оптимальный результат получен при иммунизации инактивированной адсорбат-вакциной в сочетании с антивирусным препаратом мидантаном. Подобного мнения придерживаются также другие исследователи (26).

Наряду с образованием поствакцинальной невосприимчивости, иммунизация обеспечивает снижение вирусовыделения. На этом основании ряд авторов отмечает необходимость применения массовых методов вакцинации птиц, таких, как алиментарный и аэрозольный. Кроме того, по этой причине в систему противоэпизоотических мероприятий против гриппа птиц включена вакцинация птиц, не проявляющих клинические формы болезни, в т.ч. голубей (17,57,65,73,82).

Многочисленные исследователи в нашей стране и за рубежом указывают на важное значение тщательного соблюдения мер, исключающих распространение возбудителя (1,5,9,17,44,73,82,90,91,93,100,110,121,161,162, 163,164,167,171). Среди методов борьбы с гриппом значительного внимания заслуживает разработка и совершенствование средств обеззараживания объектов, инфицированных гриппом А, штаммом Н5N1 (44).

В диапазоне мер по борьбе с гриппом птиц сообщают о серьезной роли дезинфектантов, подчеркивая значение вирулицидного препарата – делеголя (39).

Весьма важным моментом борьбы с гриппом является организация мероприятий в оздоравливаемом пункте, где предусматривается систематическая выбраковка птиц и аэрозольная дезинфекция помещений. Указанные процедуры исключают опасность реинфекции (39).

К неспецифическим мерам профилактики парамиксовирусной инфекции относятся соблюдение условий кормления и содержания птицы, ветеринарно-санитарных правил, а также соответствующая степень биологической защиты голубятни. Эффективной защиты необходимо добиваться, создавая мелкосетчатые крупные вольеры для декоративной птицы, организуя устранение мест открытого хранения кормов, пищевых отходов, привлекающих синантропную птицу. Серьезным моментом в профилактике болезни НьюКасла являются общие ветеринарно-санитарные мероприятия, особенно карантин и дезинфекция (67).

В случае вспышки ньюкаслской болезни на птицеводческое хозяйство, фабрику, голубятню, зоопарк накладывают ограничения хозяйственной деятельности, запрещают ввоз, вывоз, обмен, продажу, перегруппировку голубей, проводят мероприятия по устранению контактов с другой птицей, если они содержатся вблизи или совместно, с дикой птицей (67,91).

После заражения вирусом ньюкаслской болезни у всех птиц возникает иммунный ответ. Первичная иммунная реакция на заражение – клеточноопосредованная. Она может быть определена уже через 2-3 дня после инфицирования. Вероятно, именно этим объясняется развитие ранней защиты против контрольного заражения, которая отмечается у вакцинированных птиц еще до появления определяемого гуморального ответа. Однако значение клеточно-опосредованного иммунитета до конца не ясно. И хотя было показано, что он содействует защите, его наличие недостаточно для полноценной защиты (67).

Нейтрализовать вирусы ньюкаслской болезни могут антитела, действующие против каждого из функциональных поверхностных гликопротеинов HN и F. Причем нейтрализация в более полном объеме под действием моноклональных антител, специфичных для эпитопов на гликопротеины F происходит скорее, чем от антител, направленных против гликопротеинов HN. Антитела при инфицировании появляются через 4-6 суток, как в крови, так и в секреторных выделениях верхних дыхательных путей кишечника и гардеровых железах. Антитела в этом случае представлены, в основном, Ig M и Ig A, и, в меньшей степени, – Ig G (13,67).

Голуби, имеющие антитела против вируса ньюкаслской болезни, будут передавать их своему потомству через яичный желток. Уровень антител у молодняка голубей напрямую зависит от титров антител у родителей и в первые 10-20 дней предохраняет голубят от заболевания (11,143,161).

4. Специфическая профилактика ортомиксовирусной Литературные данные об использовании вакцин против гриппа птиц голубям скудны. Однако вакцинопрофилактике гриппа придается большое значение (14,60,65,73,93).

У многих видов птиц применялись вакцины на основе инактивированного вируса гриппа. Эффективность этих вакцин в ослаблении клинических признаков и смертности подтверждена документально. Птицы чувствительны к инфицированию вирусами гриппа, принадлежащими к любому из 15 подтипов гемагглютинина. Поэтому невозможно предсказать, каким из них будут заражены птицы, вакцинация против всех на практике не применяется. С другой стороны, если вспышка болезни является уже свершившимся фактом и определен подтип вируса, вакцинация может оказаться полезной (120).

Сразу же после вспышек 1997-1999 годов начались поиски вакцины против вируса птичьего гриппа. Поскольку неадаптированный H5N1 вирус является патогенным для мышей, именно эти животные были использованы как модель иммунной системы млекопитающих для исследования летальной инфекции птичьего гриппа.

Производство вакцины против вируса гриппа H5N1 в системе куриных эмбрионов невозможно из-за гибели куриных эмбрионов при заражении этим вирусом и высоком уровнем биобезопасности, необходимым для работы с этим вирусом и производством вакцины на основе этого вируса. Для разработки вакцины на основе цельного вируса использовались авирулентный вирус H5N4, выделенный от мигрирующих уток, вирус H5N1 и авирулентный рекомбинантный вирус H5N1. Все вакцины были инактивированы формалином. Интраперитональная иммунизация мышей каждой вакциной вызывала выработку гемагглютинин-ингибирующих и вирус-нейтрализующих антител, в то время как интраназальная вакцинация без адьюванта индуцировала как мукозальный, так и системынй антительный ответ, который защищал мышей от контрольного заражения летальным вирусом H5N1 (170).

Интрамускулярное введение вакцины, приготовленной на основе непатогенного штамма A/Duck/Singapore-Q/F119-3/97 (H5N3), антигенно связанного с человеческим вирусом H5N1, в сочетании с квасцами или без них, приводило к полной защите от летального контрольного заражения вирусом H5N1.

Защита от инфекции наблюдалась у 70% животных, которым вакцина вводилась сама по себе и у 100% животных, которым вакцина вводилась в сочетании с квасцами. Протективный эффект вакцинации коррелировал с уровнем вирус-специфических сывороточных антител. Эти результаты говорят о том, что в случае пандемии возможно использование антигенно связанных, но не патогенных вирусов гриппа в качестве кандидатов в вакцину (136,147).

Исследования ДНК вакцин показали, что ДНК вакцина, кодирующая гемагглютинин из A/Ty/Ir/1/83 (H5N8), который отличается от A/HK/156/ (H5N1) в пределах 12% в НА1, предотвращает гибель мышей, но не заболевание при инфицировании H5N1. Следовательно, ДНК вакцина, сделанная на основе гетерологичного штамма Н5 не защищает мышей от инфицирования вирусом птичьего гриппа H5N1, но полезна при защите мышей от гибели (164).

Противогриппозные вакцины, индуцирующие значительный перекрестный гетеросубтипный иммунитет, могут преодолеть ограничения эффективности вакцин, вызванные антигенной вариабельностью вируса гриппа А.

Мыши, получившие трехкратную интраназальную иммунизацию вакциной H3N2 в сочетании LT(R192G), были полностью защищены при летальном контрольном инфицировании высокопатогенным человеческим вирусом H5N1, причем вирусные титры в носовой полости и легких были, по крайней мере, в 2500 раз ниже, чем у контрольных мышей, получавших только LT(R192G). Напротив, мыши, которые получили трехкратную вакцинацию вакциной H3N2 подкожно в присутствии или отсутствии LT(R192G) или неполного адьюванта Фрейнда, не были защищены при летальном контрольном инфицировании и никакого заметного снижения титров вируса в тканях не наблюдалось на 5 день после контрольного инфицирования вирусом H5N1.

Вакцинация без LT(R192G) приводила лишь к частичной защите против гетеросубтипного контрольного заражения. Результаты исследования гетеросубтипного иммунитета подтвердили полезность мукозальной вакцинации, которая стимулирует перекрестную защиту против множества вирусных субтипов, включая вирусы, представляющие потенциальную пандемическую опасность (149).

Факторы, влияющие на решение о вакцинации тптиц, рассмотрены в работе Beard (108). При частых вспышках гриппа, вызванных вирусами средней и низкой вирулентности, предлагается использовать инактивированные вакцины. Однако при этом затрудняется серологический контроль, в то время как вирусная инфекция может начаться и существовать без развития болезни.

Вакцинированные стаи нельзя считать свободными от вируса гриппа, но использование вакцин обычно уменьшает вирусовыделение, что снижает риск передачи вируса другим птицам (120).

Борисовым А.В. подобраны штаммы вируса гриппа птиц и отработан метод изготовления инактивированных эмульсионных вакцин против гриппа птиц на основе масляного адъюванта Montanide ISA 70 VG. Экспериментальные моно- и полиштамные инактивированные эмульсионные вакцины из штаммов подтипов Н5, Н7 и Н9 через 14-28 суток после введения индуцировали выработку у птиц антител в титрах, более чем в полтора раза превышающих минимальный защитный уровень и обеспечивающих напряженный иммунитет продолжительностью не менее 240 суток. Опытные образцы моно- и полиштамных инактивированных эмульсионных вакцин обеспечивали 100% защиту привитых цыплят при совместном содержании их с птицами, зараженными вирусами гриппа гомологичных подтипов (14).

Bruiji I.A. и соавторами клинически исследована инактивированная вирусомальная вакцина, доказана эффективность, активность и рентабельность (13). Desheva J.A., Lu X.H., Rextin A.R. с соавтю (2006) характеризуют вирус гриппа Н5N2 как реассортант, предлагают его для изготовления аттенуированной и инактивированной вакцин против высокопатогенного вируса с пандемическим потенциалом (112).

Достаточную иммуногенность инактивированной вакцины против гриппа отмечают Шабловская Е.А. и другие исследователи (6,17,41,44, 60,65,73,156).

Профилактическую вакцинацию клинически здоровых птиц против гриппа обычно проводят двукратно – в возрасте 30-45 и 90-120 суток, убой на мясо разрешается не ранее 40 суток после введения препарата (2,17).

Иммунизация проводится вакциной инактивированной эмульгированной против гриппа птиц, штамм Н5N1, производства Покровского завода биопрепаратов ВНИИЗЖ (17). Применение мирамистина и фоспренила усиливает иммуногенную эффективность инактивированных вакцин против гриппа птиц (21).

5. Специфическая профилактика парамиксовирусной Создание напряженного иммунитета – основная задача профилактических мероприятий при болезни Нью-Касла. В первую очередь осуществление этой задачи обеспечивают специфические мероприятия. К специфическим мерам профилактики относится вакцинация. Вакцинация против ньюкаслской болезни должна приводить к развитию иммунитета против инфекции парамиксовирусом. Однако, существующие вакцины лишь облегчают течение заболевания, и птицы не испытывают его тяжелых последствий. Но репликация и выделение вируса при этом происходят, хотя и на более низком уровне. Кроме того, при сопутствующих инфекциях и инвазиях может быть снижен уровень иммунитета, достигаемый при вакцинации против ньюкаслской болезни (67).

Вакцины против ньюкаслской болезни разделяются на живые и инактивированные.

Живые вакцины готовят из лентогенных (ГАМ-61, Ла-Сота, Бор- ВГНКИ, Бор-82, F, B1, V4) и мезогенных (H, Muksteswar, Komarov, Roakin) штаммов вируса. Более высокая вирулентность последних делает приготовленные из них вакцины пригодными только для ревакцинации птицы (67).

Кроме того, ими можно проводить не только индивидуальную, но и групповую иммунизацию птицы (например, выпаиванием с водой), что требует меньших затрат времени и средств, а также не сопровождается значительным стрессом птицы (118,160). Основными используемыми в России штаммами для вакцинации являются: ГАМ-61, Ла-Сота (вакцина «Оровак»), Бор- ВГНКИ, В1, «Н» (28,37,45,61,62,67,75,81,84,92,109,).

Преимущество живых вакцин состоит в том, что они создают местный иммунитет и, в сжатые сроки, – напряженный общий иммунитет. Ими можно проводить не только индивидуальную, но и групповую иммунизацию птицы выпаиванием с водой, аэрозольным распылением, что требует меньших затрат времени и средств и не сопровождается значительным стрессом птицы.

Однако в голубеводстве это не всегда удобно и оптимально (10,26).

Живым вакцинам присущ ряд недостатков, главный из которых, – реактогенность, частота проявления которой зависит от условий, в которых находится прививаемая птица и наличия сопутствующих инфекций, инвазий. Исследованиями Пименова Н.В. отмечена высокая степень субклинического микоплазмоза у голубей, а также широкое распространение гемофилеза, орнитоза, капилляриоза. Чаще всего, у голубей ньюкаслская болезнь протекает ассоциировано с сальмонеллезом. В связи с этим более патогенные – мезогенные штаммы увеличивают количество осложнений от применения живых вакцин. Поэтому первичную иммунизацию целесообразно проводить вакциной из лентогенного штамма вируса Нью-Касла, в последующий период необходимо усиливать специфический иммунитет многократными ревакцинациями, а лучше вообще прибегать к инактивированной вакцинации, создающей напряженный иммунитет на длительные сроки (67).

Также отрицательной стороной для применения в голубеводстве существующих живых вакцин против болезни Нью-Касла является то, что все они представляют из себя птичий, антигенно отличимый от голубиного, вариант парамиксовируса 1 серотипа (10,67).

Результативность первичной иммунизации живыми вакцинами против ньюкаслской болезни может снижаться при наличии у прививаемых голубей как и других птиц материнских антител, что делает ограниченным применение живых вакцин у молодняка – птенцов. При использовании живых вакцин необходимо помнить о том, что они могут быстро инактивироваться под воздействием различных химических веществ, дезинфектантов, физических факторов (ультрафиолет, температура). В связи с этим возникают дополнительные условия и трудности при хранении и транспортировке живых вакцин.

Также применение вакцин из перечисленных штаммов осложняется и тем, что они ориентированы исключительно на сельскохозяйственную птицу и не апробированы на голубях. Несмотря на то, что некоторые голубеводы используют данные вакцины, качество вакцинации не контролируется, остается не всегда удовлетворительным, а возможность каких-либо осложнений после применения живых вакцин очень высока (69).

Инактивированные вакцины обладают рядом преимуществ перед живыми. К их числу, следует отнести, во-первых, очень низкий уровень побочных реакций у привитой птицы; во-вторых, возможность использования в ситуациях, непригодных для применения живых вакцин, особенно при наличии сопутствующих в стаде птицы вирусных и бактериальных инфекций; втретьих, индукцию высоких титров специфических антител, сохраняющихся в организме привитой птицы на длительное время. На инактивированные вакцины не оказывает значительного влияния материнский иммунитет, и ими можно прививать как молодняк, так и взрослую птицу независимо от иммунного статуса (67). Хранить эти препараты легче, чем живые вакцины (12,67,160).

К недостаткам инактивированных вакцин можно отнести их более высокую стоимость и необходимость больших затрат труда и времени при применении (160,168). Однако в условиях голубятен это не является отрицательной стороной, а скорее, наоборот, преимуществом возможности индивидуальной точной дозировки для каждого голубя.

Важным преимуществом является возможность ассоциировать инактивированные вакцины с другими антигенами, например, возбудителей сальмонеллеза, что, в свою очередь, снижает затраты труда и уменьшает количество стресса, испытываемого птицей при вакцинации против каждого заболевания отдельно. Принимая во внимание наибольшую эпизоотическую распространенность ньюкаслской болезни и сальмонеллеза среди голубей (68), оптимальным вариантом для специфической профилактики является ассоциированная инактивированная вакцина, содержащая антигены парамиксовируса серотипа 1 голубиного варианта и Salmonella typhimurium (69).

Mayo M.A. (2002) отмечает, что в опытах, проведенных на голубях с использованием инактивированных вакцин из обычных штаммов ньюкаслской болезни, применяемых для сельскохозяйственной птицы, и специально изготовленных инактивированных вакцин из штаммов голубиных вариантов ньюкаслской болезни, было показано, что вакцины, полученные из голубиного варианта ньюкаслской болезни, дают более эффективную защиту (13,67, 109,142,144).

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на кафедре клинической диагностики и болезней молодняка ФГБОУ ВПО МГАВМиБ в период с 2008 по 2011 гг. Ряд исследований проведены на базах кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней ФГБОУ ВПО МГАВМиБ, биокомбинате ООО «Торговый дом «БиАгро» и в ветеринарных лабораториях г. Москвы и Московской обл.

Материалы.

Вакцины. Вакцина инактивированная эмульгированная на основе штамма Н5N1 производства ФГУП «Покровский завод биопрепаратов», вакцина инактивированная эмульгированная ФЛУ ПРОТЕКТ Н5 производства ФГУП «Ставропольская биофабрика», инактивированная бивалентная вакцина против гриппа птиц подтипов Н5+Н7 экспериментальной серии ГНУ ВНИВИП, вакцина «Виросальм» ассоциированная инактивированная против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц производства ООО «Торговый дом «БиАгро», живая лиофилизированная вирусвакцина из штамма «La Sota» производства ФГУП «Щелковский биокомбинат», вирусвакцина сухая против ньюкаслской болезни из штамма «Бор-74 ВГНКИ»

производства ФГУП «Щелковский биокомбинат», вирусвакцина из штамма «ГАМ-61» экспериментальной серии ФГУ ВГНКИ, вакцина «Salmavir» инактивированная против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла фирмы «Pharma»

(Польша).

Диагностические антигены: набор для выявления антител к вирусу гриппа птиц подтипа Н5 в реакции торможения гемагглютинации ФГУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир, мкр. Юрьевец (регистрационный номер ПВР 1набор для выявления антител к вирусу ньюкаслской болезни в реакции торможения гемагглютинации ФГУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир, мкр.

Юрьевец (регистрационный номер ПВР 1-4.1/00828); набор компонентов для выявления антител к вирусам: синдрома снижения яйценоскости-76, ньюкаслской болезни и парамиксовирусной инфекции птиц-2 в реакции торможения гемагглютинации ООО «Кронвет», г. Санкт-Петербург (регистрационный номер 1-2.6/01749).

Реактивы и лабораторная посуда: спирт этиловый, масло иммерсионное, глицерин, фуксин, метиленовая синь, сульфат аммония, хлорит магния, ПЦРбуфер, олигонуклеотиды для ПЦР, раствор Люголя, дистиллированная, диминерализованная вода, хлористый натрий, двуосновной фосфорнокислый натрий, фосфатно-буферный раствор, бромистый этидий, минеральное масло, физиологоческий раствор, Tween-20 и др.; пробирки стеклянные лабораторные, пипетки, автоматические пипетки-дозаторы «Колор», чашки Петри, пробирки «Eppendorf», матрасы лабораторные, 6-литровые бутыли и другие стеклянные стерильные емкости разного объема, бактериальные петли, пипетки мерные, стекла покровные, стекла предметные и другие.

Питательные среды: МПБ, 2% и 0,25% МПА, агары Эндо, Левина, среды Гисса с добавлением сахаров и многоатомных спиртов, среда Клиглера, среды Симмонса, Сабуро, Эдвардса, сальмонеллезно-шигеллезный, висмутсульфитный агар, бульон Хоттингера, триптон-соевый бульон, тиогликолевая среда и другие ФГУ «Дагестанский научно-исследовательский институт питательных сред» и фирмы «Oksoid» (Великобритания).

Лабораторное оборудование: набор инструментов патологоанатомический малый, автоклав АВТРМ, сухожар СТ 8804, холодильники «Минск 10»

и «Апшерон», термостат «TERMOSTAT TV 51», микроскопы: монокулярный «ЛОМО» Микмед 1 и бинокулярный «Ernst Leitz Wetzlar №367545», весы торсионные вт-500, автоматические пипетки-дозаторы DL 9128 (200- мкл) и «Колор» (20-200 мкл), рН-метры ИТ-1101 и ИПЛ 102, центрифуга «Zanetzki» T-23, ультрацентрифуга Becman L5-65, стерилизующие фильтры СФ-300, масляно-воздушный насос, амплификатор ТЕРЦИК («ДНКтехнология»), амплификатор GeneAmp PCR System 2400 (фирмы «PerkinElmer», США), лупа бинокулярная МБС-9 и другие.

Животные и живые объекты исследований. Для лабораторных опытов и производственных испытаний в работе использованы голуби беспородные взрослые массой 250-350 г – 100 голов, голуби декоративные, спортивные разных возрастов и массы – не менее 2192 голов; белые мыши массой 16-20 г – 35 голов, СПФ куриные эмбрионы – 120.

Методы.

Для решения поставленных задач базу исходных данных формировали на основании:

- анализа текущей ежемесячной отчетности ветеринарной службы г. Москвы и Московской области за 2007-2009 гг.;

- полугодовых отчетов по мониторингу птицеводческих предприятий, фермерских и личных подсобных хозяйств Московского региона, предоставленных Управлением Россельхознадзора;