«ПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ ТРЕТЬЕ ИЗДАНИЕ Вот уже более 20 лет, со времени выпуска первого издания в ПРАКТИЧЕСКОЕ 1983 г., Практическое руководство по биологической ...»

13. Планы и процедуры в чрезвычайных ситуациях Каждая лаборатория, работающая с инфекционными микроорганизмами, должна принять меры предосторожности, соответствующие степени опасности микроорганизмов и животных, с которыми ведутся работы.

В каждом учреждении, которое работает с микроорганизмами групп риска 3 и 4 (изолированная лаборатория – уровень биологической безопасности 3 и максимально изолированная лаборатория – уровень биологической безопасности 4) или хранит такие микроорганизмы, необходимо иметь документ, содержащий план действий на случай возникновения чрезвычайной ситуации в лаборатории или помещении, где содержатся животные. Национальные и/или местные органы здравоохранения должны принимать участие в разработке плана обеспечения готовности к чрезвычайным ситуациям.

План действий на случай чрезвычайной ситуации Такой чрезвычайный план действий должен предусматривать следующие оперативные процедуры:

1. Меры на случай стихийных бедствий, например, пожара, наводнения, землетрясения и взрыва 2. Оценку риска биологической опасности 3. Преодоление последствий инцидента и деконтаминацию 4. Срочную эвакуацию людей и животных из помещений 5. Оказание неотложной медицинской помощи пострадавшим и получившим травмы 6. Медицинское наблюдение за пострадавшими 7. Клиническое ведение пострадавших 8. Эпидемиологическое расследование 9. Продолжение работы после инцидента.

При разработке такого плана следует рассмотреть возможность включения следующих позиций:

1. Выявление микроорганизмов высокого риска 2. Определение зон высокого риска, например, лабораторий, мест хранения, мест содержания животных 3. Определение персонала и населения, подвергающегося риску 4. Определение ответственных лиц и их обязанностей, например, сотрудника по биологической безопасности, персонала, отвечающего за биологическую безопасность, местный орган здравоохранения, клиницистов, микробиологов, ветеринаров, эпидемиологов, а также пожарные и полицейские службы 5. Перечни лечебных учреждений и изоляторов, в которые могут быть помещены пострадавшие или инфицированные люди

13. ПЛАНЫ И ПРОЦЕДУРЫ В ЧРЕЗВЫЧАЙНЫХ СИТУАЦИЯХ

6. Транспортировку пострадавших или инфицированных людей 7. Перечни источников получения защитной сыворотки, вакцин, лекарств, специального оборудования и вспомогательных средств 8. Предоставление аварийных средств, например, защитной одежды, дезинфицирующих средств, комплектов средств для удаления пролившихся химических и биологических материалов, оборудования и вспомогательных материалов для деконтаминации.

Экстренные процедуры для микробиологических лабораторий Колотые раны, порезы и царапины Пострадавший должен снять защитную одежду, вымыть руки и пораженную зону (зоны), обработать кожу соответствующим дезинфицирующим средством и, при необходимости, обратиться за медицинской помощью. При этом следует сообщить причину травмы и наименование микроорганизмов и заполнить медицинскую карточку.

Поглощение потенциально инфекционного материала Следует снять защитную одежду и обратиться за медицинской помощью. Следует сообщить наименование поглощенного материала и обстоятельства инцидента и заполнить медицинскую карточку.

Высвобождение потенциально инфекционных аэрозолей (за пределы бокса биологической безопасности) Все лица должны немедленно покинуть пораженную зону, а всех пострадавших следует направить на медицинское обследование. Следует сразу же проинформировать руководителя лаборатории и сотрудника, отвечающего за биобезопасность.

Никто не должен входить в помещение в течение надлежащего периода времени (например, 1 часа), чтобы обеспечить вытяжку аэрозолей и осаждение более тяжелых частиц. Если лаборатория не имеет централизованной системы вытяжки воздуха, то вход в нее следует отложить (например, на 24 часа).

Следует установить знаки, запрещающие вход в лабораторию. Через определенное время под наблюдением сотрудника, отвечающего за биобезопасность, следует приступить к деконтаминации. При проведении деконтаминации следует надеть защитную одежду и средства защиты органов дыхания.

Поврежденные контейнеры и пролитые инфекционные вещества Поврежденные контейнеры, зараженные инфекционными веществами, а также пролитые инфекционные вещества следует накрыть тканевыми или бумажными полотенцами, затем через них пролить дезинфицирующее средство и оставить на определенное время. Затем поврежденный материал вместе с полотенцами следует удалить; стеклянные осколки следует брать пинцетом. После этого контаминированную зону следует протереть дезинфицирующим средством. Если для сбора разбившихся предметов использовались совки, их также следует автоклавировать или поместить в эффективное дезинфицирующее средство. Одежду, бумажные полотенца и швабры, которые использовались для чистки, следует поместить в контейнер, предназначенный для контаминированных отходов. Все эти процедуры следует выполнять в перчатках.

Если контаминированы лабораторные бланки или другие печатные или письменные материалы, информацию следует скопировать на другой бланк, а оригинал выбросить в контейнер для контаминированных отходов.

ПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ

БЕЗОПАСНОСТИ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

Повреждение пробирок с потенциально инфекционным материалом в центрифугах, не имеющих герметичных стаканов Если во время работы машины произошло или подозревается повреждение пробирок, мотор следует выключить и оставить машину закрытой (в течение приблизительно 30 минут) для стабилизации. Если повреждение обнаружено после остановки машины, крышку следует немедленно закрыть и оставить закрытой (приблизительно 30 минут). В обоих случаях следует проинформировать сотрудника, отвечающего за биобезопасность.

Для проведения всех последующих операций следует надеть прочные (то есть из толстой резины) перчатки и поверх них, в случае необходимости, – одноразовые перчатки. Осколки стекла следует брать пинцетом или ватой и пинцетом.

Любые разбитые пробирки, осколки стекла, стаканы, цапфы и ротор следует поместить в некорродирующее дезинфицирующее средство, эффективное против соответствующих микроорганизмов (см. главу 14). Неразбитые закрытые пробирки можно поместить в дезинфицирующее средство в отдельном контейнере и затем повторно использовать.

Центрифужный стакан следует протереть тем же дезинфицирующим средством надлежащей концентрации, затем вновь протереть, промыть водой и высушить. Со всеми материалами, которые использовались для чистки, следует обращаться как с инфекционными отходами.

Повреждение пробирок внутри герметичных стаканов (с предохранительными крышками) Все закрытые центрифужные стаканы следует загружать и разгружать в боксе биологической безопасности. Если предполагается, что повреждение произошло в защитной крышке, ее следует ослабить, а стакан обработать в автоклаве. Защитную крышку можно также дезинфицировать химическим веществом.

Пожар и стихийные бедствия В разработке планов готовности к чрезвычайным ситуациям должны принимать участие пожарные и другие службы. Им следует сообщить заранее, в каких помещениях содержатся потенциально инфекционные материалы. Целесообразно организовать посещение этими службами лаборатории, чтобы ознакомить их с расположением помещений и находящимися в них материалами.

В случае стихийного бедствия местные и национальные службы по чрезвычайным ситуациям должны быть предупреждены о возможных опасностях в помещениях лаборатории и вблизи них. Входить в помещения они должны только в сопровождении специально подготовленного сотрудника лаборатории. Инфекционные материалы должны собираться в непромокаемые коробки или прочные одноразовые мешки.

Решение вопроса о дальнейшем использовании или удалении материалов принимает сотрудник по биобезопасности на основе распоряжений местных органов.

Службы экстренной помощи: к кому обращаться В учреждении на видном месте должна быть помещена следующая информация с указанием номеров телефонов и адресов:

1. Адрес и местоположение учреждения или самой лаборатории (они могут быть не известны тому, кто звонит, и тем службам, которые он вызывает) 2. Фамилия директора учреждения или лаборатории 3. Фамилия заведующего лабораторией 4. Фамилия сотрудника, отвечающего за биологическую безопасность

13. ПЛАНЫ И ПРОЦЕДУРЫ В ЧРЕЗВЫЧАЙНЫХ СИТУАЦИЯХ

5. Пожарные службы 6. Больницы/службы скорой помощи/медицинский персонал (по возможности, следует указать названия отдельных клиник, отделений и/или фамилии медицинских сотрудников) 7. Полиция 8. Врач 9. Ответственный лаборант 10. Службы водо-, газо— и электроснабжения.

Инвентарь экстренной помощи В наличии должен быть следующий инвентарь экстренной помощи:

1. Аптечка первой медицинской помощи, включая общие и специальные антидоты 2. Надлежащие огнетушители, противопожарные одеяла Рекомендуется также обеспечить наличие следующего инвентаря, который, однако, может варьироваться в зависимости от местных условий:

1. Полный комплект защитной одежды (комбинезон, перчатки и капюшон – для инцидентов, связанных с микроорганизмами групп риска 3 и 4) 2. Лицевые маски-противогазы с соответствующими химическими и угольными фильтровальными коробками 3. Оборудование для дезинфекции помещения, например, распылители и испарители формальдегида 4. Носилки 5. Инструмент, например, молотки, топоры, гаечные ключи, отвертки, лестницы, веревки 6. Приспособления и указатели для обозначения опасной зоны.

Дополнительную информацию см. в источниках (12) и (28).

14. Дезинфекция и стерилизация Чрезвычайно важное значение для биологической безопасности в лаборатории имеют базовые знания о дезинфекции и стерилизации. В связи с тем, что сильно загрязненные предметы не могут быть быстро дезинфицированы или стерилизованы, также важно знать основные принципы чистки до дезинфекции (предварительной чистки). Следующие общие принципы применяются ко всем известным классам микробиологических патогенов, за исключением прионов, которые в данной главе рассматриваются отдельно.

Конкретные требования в отношении деконтаминации будут зависеть от вида экспериментальной работы и характера используемого инфекционного агента или агентов.

Общую информацию, которая здесь приводится, можно использовать для разработки как стандартных, так и более специфических процедур, предназначенных для устранения биологических опасностей, имеющихся в каждой конкретной лаборатории.

Время контакта с дезинфицирующим средством зависит от материала и заводаизготовителя, поэтому все рекомендации в отношении использования дезинфицирующих средств должны соответствовать спецификациям заводов-изготовителей.

Определения Для дезинфекции и стерилизации используются разнообразные термины. В области биологической безопасности наиболее распространенными являются следующие:

Антисептическое средство – Вещество, которое подавляет рост и развитие микроорганизмов, но не обязательно убивает их. Антисептические средства обычно применяются к поверхности тела.

Бактерицид – Химическое вещество или смесь химических веществ, которые убивают микроорганизмы. Этот термин часто используется вместо терминов «биоцид», «химический гермицид» или «противомикробный препарат».

Биоцид – Общий термин для любого агента, убивающего микроорганизмы.

Дезинфекция – Физические или химические средства уничтожения микроорганизмов, но не обязательно спор.

Дезинфицирующее средство – Химическое вещество или смесь химических веществ, которые используются для уничтожения микроорганизмов, но не обязательно спор. Дезинфицирующие средства обычно применяются к неподвижным поверхностям или объектам.

Деконтаминация – Любой процесс удаления и/или уничтожения микроорганизмов.

Этот термин используется также в отношении удаления или нейтрализации опасных химических и радиоактивных материалов.

Противомикробный препарат – Агент, убивающий микроорганизмы или подавляющий их рост и размножение.

Спороцид – Химическое вещество или смесь химических веществ, используемые для уничтожения микроорганизмов и спор.

14. ДЕЗИНФЕКЦИЯ И СТЕРИЛИЗАЦИЯ

Стерилизация – Процесс, в ходе которого уничтожаются и/или удаляются все классы микроорганизмов и спор.

Химический гермицид – Химическое вещество или смесь таких веществ, используемые для уничтожения микроорганизмов.

Очистка лабораторных материалов Процесс очистки – это удаление грязи, органических веществ и пятен. Очистка может производиться с помощью щетки, пылесоса, сухой протирки, мойки, влажной протирки с водой, содержащей мыло или моющее средство. Грязь, почва и органические вещества могут предохранять микроорганизмы и препятствовать воздействию деконтаминирующих средств (антисептиков, химических гермицидов и дезинфицирующих средств).

Предварительная чистка имеет большое значение для обеспечения надлежащей дезинфекции или стерилизации. Многие гермицидные препараты являются активными только в отношении предметов, прошедших предварительную чистку. Такую предварительную чистку следует проводить с осторожностью, чтобы не подвергнуться воздействию инфекционных агентов.

Впоследствии следует применять материалы, которые являются химически совместимыми с гермицидами. Чаще всего один и тот же химический гермицид используется как для предварительной чистки, так и для дезинфекции.

Химические гермициды Многие виды химических веществ могут использоваться в качестве дезинфицирующих и/или антисептических средств. Поскольку количество и разнообразие коммерческих препаратов постоянно возрастает, следует тщательно подбирать состав для конкретных нужд.

Гермицидная активность многих химических веществ увеличивается и быстрее проявляется при более высоких температурах. Но в то же время более высокие температуры могут ускорить их испарение и разрушение. Особая осторожность необходима при использовании и хранении таких химических веществ в тропических районах, где срок их годности может быть меньшим из-за высоких температур внешней среды.

Многие гермициды могут быть вредными для человека или окружающей среды.

Их следует отбирать, хранить, использовать и удалять, применяя меры предосторожности в соответствии с инструкциями завода-изготовителя. Для обеспечения личной безопасности при подготовке растворов химических гермицидов рекомендуется надевать перчатки и передники и защищать глаза.

Для регулярной чистки полов, стен, оборудования и мебели обычно нет необходимости применять химические гермициды. Однако в некоторых случаях для борьбы со вспышками их использование может быть целесообразным.

Правильное использование химических гермицидов способствует безопасности на рабочем месте и снижает риск, сопряженный с инфекционными агентами. По экономическим причинам, а также для облегчения контроля запасов и уменьшения загрязнения окружающей среды количество используемых химических гермицидов следует ограничивать в максимально возможной степени.

Ниже приводятся широко используемые классы химических гермицидов наряду с общей информацией об их применении и мерах безопасности. Если не указано иное, концентрации гермицидов даются в виде соотношения веса к объему. В таблице 12 кратко приведены рекомендованные концентрации хлорсодержащих растворов.

ПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ

БЕЗОПАСНОСТИ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

Таблица 12. Рекомендуемые концентрации хлорсодержащих растворов Требуемая концентрация активного хлора 0,1% (1 г/л) 0,5% (5 г/л) Раствор гипохлорита натрия (5% активного хлора) Порошок дихлоризоцианурата натрия (60% активного хлора) После удаления твердых материалов.

Для растворов, например крови, или до удаления твердых материалов.

См. текст.

Хлор (гипохлорит натрия) Хлор, быстродействующий окислитель, является легкодоступным химическим гермицидом с широким спектром действия. Обычно он продается в виде отбеливателя – водного раствора гипохлорита натрия (NaOCl), который можно разбавлять в воде для получения различных концентраций активного хлора.

Хлор, особенно в виде отбеливателя, является сильно щелочным и может вызывать коррозию металлов. Его активность можно сильно снизить с помощью органического материала (белка). При хранении запасов рабочих растворов гипохлорита натрия в открытых контейнерах, особенно при высоких температурах, хлор выделяется в виде газа, что уменьшает гермицидный потенциал таких растворов. Частота смены растворов гипохлорита натрия зависит от их начальной концентрации, вида контейнера (с крышкой или без) и его размеров, частоты и вида использования и окружающих условий. Как правило, растворы, в которые добавляются материалы с высоким содержанием органических веществ несколько раз в день, следует менять ежедневно, а менее часто используемые растворы можно менять раз в неделю.

Раствор универсального лабораторного дезинфицирующего средства для общих целей должен иметь концентрацию 1 г/л активного хлора. Более высокая концентрация раствора с содержанием 5 г/л активного хлора, рекомендуется для обработки разлившегося биологически опасного материала и больших количеств органических веществ. Растворы гипохлорита натрия, имеющиеся в качестве бытовых отбеливателей, содержат 50 г/л активного хлора, поэтому для получения концентраций 1 г/л и 5 г/л их следует разбавлять в соотношении 1:50 или 1:10, соответственно.

В случае промышленных растворов концентрация гипохлорита натрия составляет почти 120 г/л, поэтому для получения указанных выше уровней их следует разбавлять соответствующим образом.

Гранулы или таблетки гипохлорита кальция (Ca(ClO)2) обычно содержат приблизительно 70% активного хлора. Растворы, полученные при растворении гранул или таблеток, содержащих 1,4 г/л и 7 г/л, будут содержать 1,0 г/л и 5 г/л активного хлора соответственно.

Отбеливатель не рекомендуется использовать в качестве антисептического средства, но его можно использовать как дезинфицирующее средство общего назначения, а также для вымачивания контаминированных неметаллических материаДЕЗИНФЕКЦИЯ И СТЕРИЛИЗАЦИЯ лов. В чрезвычайных ситуациях гипохлорит натрия можно использовать также для дезинфекции питьевой воды с конечной концентрацией 1-2 мг/л активного хлора.

Газообразный хлор является высокотоксичным веществом. Поэтому гипохлорит натрия следует хранить и использовать только в хорошо вентилируемых помещениях. Кроме того, для предотвращения быстрого высвобождения газообразного хлора гипохлорит натрия не следует смешивать с кислотами. Многие побочные продукты хлора могут быть вредными для человека и окружающей среды, поэтому следует избегать смешанного использования хлорсодержащих дезинфицирующих средств, особенно гипохлорита натрия.

Дихлоризоцианурат натрия Дихлоризоцианурат натрия (NaDCC) в виде порошка содержит 60% активного хлора.

Растворы, приготовленные из порошкообразного NaDCC в концентрациях 1,7 г/л и 8,5 г/л, будут содержать, соответственно, 1 г/л и 5 г/л активного хлора. Одна таблетка NaDCC обычно эквивалентна 1,5 г активного хлора. Растворение одной или четырех таблеток в одном литре воды дает необходимые концентрации 1 г/л и 5 г/л, соответственно. NaDCC в виде порошка или таблеток можно легко и безопасным образом хранить. В твердом виде NaDCC можно применять для обработки пролившейся крови или других биологически опасных жидкостей и оставлять, по меньшей мере, на 10 минут, прежде чем удалять. Затем можно производить дальнейшую чистку пораженной зоны.

Хлорамины Хлорамины имеются в виде порошка, содержащего приблизительно 25% активного хлора. Хлорамины выделяют хлор медленнее, чем гипохлориты. Поэтому для обеспечения такой же эффективности, какую дают гипохлориты, требуются более высокие начальные концентрации. С другой стороны, растворы хлорамина не дезактивируются органическими веществами в той же степени, что и растворы гипохлорита, поэтому как для «чистых», так и для «грязных» условий рекомендуются концентрации 20 г/л.

Растворы хлорамина практически не имеют запаха. Тем не менее, предметы, замоченные в таких растворах, следует тщательно промыть и удалить любые остатки наполнителей, добавленных к порошку хлорамина-Т (тозилхлорамида натрия).

Диоксид хлора Диоксид хлора (ClO2) – это сильный и быстродействующий гермицид, дезинфицирующее средство и окислитель, который часто проявляет активность при более низких концентрациях, чем концентрации, необходимые при использовании гипохлорита натрия. В газообразном состоянии диоксид хлора является нестойким и быстро разлагается на газообразный хлор (Cl2) и газообразный кислород (O2) с выделением тепла. Однако диоксид хлора растворяется в воде и в виде водного раствора является стабильным. Диоксид хлора можно получить двумя способами: (1) смешать на месте два компонента – соляную кислоту (HCl) и хлорит натрия (NaClO2); и (2) заказать его в стабилизированном виде и затем активировать на месте, когда в этом возникнет необходимость.

Из всех биоциодов-окислителей диоксид хлора является наиболее селективным.

Озон и хлор являются гораздо более химически активными, чем диоксид хлора, и будут расходоваться в результате реакции с большинством органических соединений. Однако диоксид хлора вступает в реакцию только с восстановленными соединениями серы, вторичными и третичными аминами, а также с некоторыми другими в значительной степени восстановленными и сильно реагирующими органическими соединениями. Поэтому более стабильный остаток можно получить при испольПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ

БЕЗОПАСНОСТИ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

зовании диоксида хлора в гораздо меньших дозах, чем при использовании хлора или озона. В случаях более высокой органической нагрузки диоксид хлора, при его правильном получении, может быть использован более эффективно, чем озон или хлор, в связи с его более выраженной селективностью.

Формальдегид Формальдегид (HCHO) – это газ, убивающий все микроорганизмы и споры при температуре выше 20 °C. Однако он не действует против прионов.

Формальдегид является относительно медленно действующим веществом и нуждается в относительной влажности воздуха около 70%. Он продается в виде твердого полимера – параформальдегида, в виде хлопьев или таблеток или в виде формалина – раствора газа в воде в концентрации приблизительно 370 г/л (37%), содержащего в качестве стабилизатора метанол (100 мл/г). И в том, и в другом виде его нагревают до образования газа, который используется для деконтаминации и дезинфекции замкнутых пространств, таких как боксы безопасности и помещения (см. раздел о деконтаминации помещений, содержащийся в настоящей главе). Формальдегид (5-процентный раствор в воде) может использоваться как жидкое дезинфицирующее средство.

Предполагается, что формальдегид является канцерогенным. Он представляет собой опасный газ раздражающего действия с острым неприятным запахом, его пары могут раздражать глаза и слизистые оболочки, поэтому его следует хранить в вытяжном шкафу или в хорошо вентилируемом помещении. В работе с формальдегидом следует соблюдать национальные правила химической безопасности.

Глутаральдегид Подобно формальдегиду, глутаральдегид (OHC(CH2)3CHO) также действует против вегетативных бактерий, спор, грибков, а также содержащих и не содержащих липиды вирусов. Он не вызывает коррозии и действует быстрее, чем формальдегид.

Однако для того, чтобы убить споры бактерий, ему требуется несколько часов.

Глутаральдегид обычно поставляется в виде раствора в концентрации приблизительно 20 г/л (2%) и в некоторых случаях до применения его необходимо «активировать» (сделать щелочным) путем добавления содовых компонентов, которые прилагаются к препарату. Активированный раствор можно повторно использовать в течение 1-4 недель в зависимости от состава, вида и частоты его использования.

Измерительные стержни, прилагаемые к некоторым препаратам, дают лишь приблизительную информацию об уровнях активного глутаральдегида в используемых растворах. При помутнении растворы глутаральдегида должны быть уничтожены.

Глутаральдегид является токсичным и раздражает кожу и слизистые оболочки, поэтому следует избегать контактов с ним. Его следует применять в вытяжном шкафу или в хорошо вентилируемой зоне. Не рекомендуется использовать его в виде аэрозоля или раствора для деконтаминации поверхностей в окружающей среде. В работе с глутаральдегидом следует соблюдать национальные правила химической безопасности.

Фенольные соединения Фенольные соединения – широкая группа препаратов – относятся к самым ранним гермицидам. Однако в результате возникшего в последнее время беспокойства по поводу безопасности их использование является ограниченным. Они действуют против вегетативных форм бактерий и содержащих липиды вирусов и при правильном приготовлении проявляют также активность против микобактерий. Они не действуют против спор, а их действие против нелипидных вирусов носит неоднозначДЕЗИНФЕКЦИЯ И СТЕРИЛИЗАЦИЯ ный характер. Многие фенольные препараты используются для деконтаминации поверхностей в окружающей среде, а некоторые из них (триклосан и хлороксиленол) являются широко используемыми антисептиками.

Триклосан широко применяется для добавления в продукты, предназначенные для мытья рук. Он действует против вегетативных бактерий и безопасен для кожи и слизистых оболочек. Однако в ходе лабораторных исследований было обнаружено, что бактерии, которые стали резистентными к низким концентрациям триклосана, начинают проявлять резистентность и к некоторым видам антибиотиков. Значение этого открытия для практической работы пока не установлено.

Некоторые фенольные соединения чувствительны к жесткости воды и могут терять активность, поэтому их следует разбавлять дистиллированной или деионизированной водой.

Фенольные соединения не рекомендуется использовать для дезинфекции поверхностей, вступающих в контакт с пищевыми продуктами и в местах нахождения маленьких детей. Они могут абсорбироваться тканью и резиной и могут также проникать в кожу. В работе с фенольными соединениями следует соблюдать национальные меры химической безопасности.

Четвертичные аммониевые соединения Многие виды четвертичных аммониевых соединений используются в смесях и часто в сочетании с другими гермицидами, например, со спиртом. Они обладают хорошей активностью против некоторых вегетативных бактерий и содержащих липиды вирусов. Некоторые виды (например, хлорид бензалкона) используются в качестве антисептиков.

Гермицидная активность ряда четвертичных аммониевых соединений значительно снижается за счет органических веществ, жесткости воды и анионных моющих средств. Поэтому необходимо обращать внимание на выбор средств для предварительной чистки, если затем для дезинфекции будут использоваться четвертичные аммониевые соединения. В растворах четвертичных аммониевых соединений могут развиваться потенциально вредные бактерии. В связи с медленным биологическим разложением эти соединения могут также накапливаться в окружающей среде.

Спирты Этанол (этиловый спирт, C2H5OH) и 2-пропанол (изопропиловый спирт (CH3)2CHOH) имеют одинаковые дезинфицирующие свойства. Они действуют против вегетативных бактерий, грибков и содержащих липиды вирусов, но не против спор. Их действие на нелипидные вирусы носит неоднозначный характер. Для достижения наибольшей эффективности их следует разбавлять водой в концентрации приблизительно 70%: большие или меньшие концентрации могут оказаться не столь гермицидными. Основным преимуществом водных растворов спирта является то, что они не оставляют осадка на обработанных предметах.

Смеси с другими агентами являются более эффективными, чем просто спирт, например 70-процентный раствор спирта со 100 г/л формальдегида и спирт с содержанием 2 г/л активного хлора. 70-процентным водным раствором этанола можно обрабатывать кожу, рабочие поверхности лабораторных столов и боксов биобезопасности, а также замачивать в нем небольшие части хирургических инструментов.

Поскольку этанол сушит кожу, его часто смешивают со смягчающими средствами.

Протирание рук средствами, содержащими спирт, рекомендуется для деконтаминации незначительно загрязненных рук в тех случаях, когда невозможно или неудобно вымыть их надлежащим образом. Однако следует помнить о том, что этанол не эффективен против спор и не может убивать нелипидные вирусы всех видов.

ПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ

БЕЗОПАСНОСТИ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

Спирт является летучим и легковоспламеняющимся веществом, поэтому его не следует применять вблизи открытого огня. Рабочие растворы следует хранить в надлежащих контейнерах, чтобы избежать испарения спирта. Спирт может вызывать затвердение резины и растворять некоторые виды клея. Для предотвращения использования этанола в иных целях, помимо дезинфекции, необходимо наладить его правильный учет и хранение в лаборатории. На бутылках с растворами, содержащими спирт, должны быть наклеены четкие этикетки с предупреждением о том, что их нельзя автоклавировать.

Йод и йодофоры Действие этих дезинфицирующих средств подобно действию хлора, но они несколько менее ингибируются органическими веществами. Йод может оставлять пятна на ткани и окружающих поверхностях и обычно не подходит для использования в качестве дезинфицирующего средства. С другой стороны, йодофоры и йодные настойки являются хорошими антисептиками. Поливидониодин является надежным и безопасным чистящим средством в хирургии и антисептиком для дооперационной обработки кожи. Антисептики, изготовленные на основе йода, как правило, не подходят для использования на медицинских/стоматологических инструментах и устройствах.

Йод не следует применять на алюминии или меди.

Йод может быть токсичным. Органические препараты на основе йода следует хранить при температурах 4–10 °C, чтобы избежать роста в них потенциально вредных бактерий.

Перекись водорода и надкислоты Подобно хлору, перекись водорода (H2O2) и надкислоты являются сильными окислителями и могут быть сильными гермицидами широкого спектра действия. Они также являются более безопасными, чем хлор, для человека и окружающей среды.

Перекись водорода выпускается либо в готовом для использования виде (3-процентный раствор), либо в виде 30-процентного водного раствора, который можно применять после разведения стерилизованной водой в пропорции 1 часть перекиси на 5-10 частей воды по объему. Однако действие таких 3-6-процентных растворов только перекиси водорода в качестве гермицидов является медленным и ограниченным. Имеющиеся в настоящее время препараты содержат другие ингредиенты для стабилизации содержания перекиси водорода, ускорения его гермицидного действия и снижения его коррозионной активности.

Перекись водорода может использоваться для деконтаминации рабочих поверхностей лабораторных столов и боксов биобезопасности, а более концентрированные растворы могут подходить для дезинфекции чувствительных к теплу медицинских/ стоматологических инструментов и устройств. Использование паров перекиси водорода или надуксусной кислоты (CH3COOOH) для деконтаминации чувствительных к теплу медицинских/стоматологических инструментов и устройств требует специального оборудования.

Перекись водорода и надкислоты могут быть коррозийными для таких металлов, как алюминий, медь, латунь и цинк, и могут также обесцвечивать ткани, волосы, кожу и слизистые оболочки. Обработанные ими предметы следует тщательно промыть до контакта с глазами и слизистыми оболочками. Их всегда следует хранить вдали от источника тепла и предохранять от воздействия света.

Местная деконтаминация окружающей среды Деконтаминация лабораторных помещений, мебели и оборудования требует сочетания жидких и газообразных дезинфицирующих средств. Поверхности могут быть деДЕЗИНФЕКЦИЯ И СТЕРИЛИЗАЦИЯ контаминированы с помощью раствора гипохлорита натрия (NaOCl); для обеспечения общих санитарно-гигиенических условий может подойти раствор, содержащий 1 г/л активного хлора, но для ситуаций, сопряженных с высоким риском, рекомендуются более концентрированные растворы (5 г/л). Для деконтаминации окружающей среды готовые растворы, содержащие 3 % перекиси водорода (H2O2), могут вполне заменить растворы гипохлорита натрия.

Помещения и оборудование можно деконтаминировать с помощью фумигации газообразным параформальдегидом или кипящим формалином. Это очень опасная процедура и ее должен проводить специально обученный персонал. До обработки газом все двери, окна и т.п. должны быть герметизированы с помощью липкой ленты или иного материала. Фумигация должна проводиться при температуре окружающей среды не менее 21 °C и относительной влажности воздуха 70%. (См. также содержащийся в настоящей главе раздел, посвященный деконтаминации боксов биологической безопасности.) После фумигации, прежде чем разрешить вход персоналу, помещение следует хорошо проветрить. До проветривания входить в помещение можно только в соответствующем респираторе. Для нейтрализации формальдегида можно использовать газообразный гидрокарбонат аммония.

Фумигация небольших пространств парами перекиси водорода также может быть эффективной, но для получения паров требуется специальное оборудование.

Деконтаминация боксов биологической безопасности Для деконтаминации боксов биологической безопасности классов I и II существует оборудование, которое автоматически производит, обеспечивает циркуляцию и нейтрализует газообразный формальдегид. В качестве альтернативы можно использовать соответствующее количество параформальдегида (конечная концентрация в воздухе –0,8%), которое следует подогреть в сковороде на электрической плитке.

Другую сковороду, содержащую гидрокарбонат аммония в количестве, на 10% превышающем количество параформальдегида, следует также поместить на второй электрической плитке в бокс. Электрические плитки должны подключаться снаружи бокса, с тем чтобы можно было контролировать операцию, включая и выключая плитки по мере необходимости. Если относительная влажность воздуха ниже 70%, то внутрь бокса, до герметичного заклеивания клейкой лентой передней дверки, следует поместить емкость с горячей водой. Для того чтобы газ не мог попасть в помещение, переднюю открытую часть и выпускное отверстие следует закрыть плотной пластиковой пленкой. Место прохождения электрошнуров также следует герметизировать с помощью клейкой ленты.

Затем включают в сеть электроплитку с параформальдегидом. Ее следует выключить из сети после испарения всего параформальдегида. Бокс оставляют закрытым, по меньшей мере, на 6 часов. Затем включают в сеть электроплитку со второй сковородой, чтобы испарить гидрокарбонат аммония, после чего плитку выключают и включают вытяжку бокса с двумя интервалами около 2 сек. с целью обеспечить циркуляцию гидрокарбоната аммония. Бокс следует оставить закрытым на 30 минут, после чего можно открыть переднюю дверку (или снять пластиковую пленку). Перед использованием поверхности бокса следует протереть с целью удаления остаточного материала.

Мытье/деконтаминация рук По возможности, при работе с биологически опасными материалами следует надевать подходящие перчатки, но это не исключает необходимости регулярного и

ПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ

БЕЗОПАСНОСТИ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

правильного мытья рук. Руки следует мыть после работы с биологически опасными материалами и животными, а также перед выходом из лаборатории.

В большинстве случаев тщательного мытья рук водой с обычным мылом достаточно для их деконтаминации, однако в ситуациях высокого риска рекомендуется использовать гермицидное мыло. Следует тщательно мылить руки мылом в течение не менее 10 сек., сполоснуть чистой водой и высушить с помощью чистого бумажного или тканевого полотенца (при наличии, можно использовать сушилки для рук теплым воздухом).

Рекомендуется использовать краны, включающиеся ногой или предплечьем. Если они отсутствуют, то для включения крана следует использовать бумажные/тканевые полотенца, чтобы предотвратить повторную контаминацию вымытых рук.

Как указано выше, если отсутствует возможность надлежащим образом вымыть руки, для деконтаминации незначительно загрязненных рук их можно протереть средствами, содержащими спирт.

Высокотемпературная дезинфекция и стерилизация Тепло является наиболее распространенным физическим агентом, используемым для деконтаминации патогенов. «Сухой» жар не оказывает никакого коррозийного воздействия и используется для обработки многих лабораторных предметов, которые выдерживают температуру 160 °C или выше в течение 2-4 часов. Сжигание или прокаливание (см. ниже) также является одной из форм сухого жара. «Влажный»

жар наиболее эффективен при использовании в процессе автоклавирования.

Кипячение не обязательно убивает все микроорганизмы и/или патогены, но его можно использовать в качестве минимальной обработки для дезинфекции, если другие методы (химическая дезинфекция или деконтаминация) неприменимы или отсутствуют.

Со стерилизованными предметами следует обращаться и хранить их таким образом, чтобы они оставались чистыми до их использования.

Автоклавирование Использование насыщенного пара под давлением (автоклавирование) является наиболее эффективным и надежным способом стерилизации лабораторных материалов. Для большинства целей стерилизацию правильно загруженных автоклавов обеспечат следующие циклы:

1. Выдержка в течение 3 минут при температуре 134 °C 2. Выдержка в течение 10 минут при температуре 126 °C 3. Выдержка в течение 15 минут при температуре 121 °C 4. Выдержка в течение 25 минут при температуре 115 °C.

Ниже приводятся примеры различных автоклавов.

Паровые автоклавы вытеснительного типа. На рисунке 10 показан общий принцип работы автоклавов вытеснительного типа. Пар поступает в камеру под давлением и вытесняет более тяжелые слои воздуха вниз через клапан в дренажную трубу, оборудованную фильтром НЕРА.

Предвакуумные автоклавы. Автоклавы этого вида обеспечивают удаление воздуха из камеры до поступления пара. Воздух удаляется через клапан, оборудованный НЕРА-фильтром. В конце цикла пар автоматически удаляется. Такие автоклавы могут функционировать при температуре 134 °C, в связи с чем цикл стерилизации может быть сокращен до 3 минут. Они идеально подходят для пористых материалов, но из-за вакуума их нельзя использовать для обработки жидкостей.

14. ДЕЗИНФЕКЦИЯ И СТЕРИЛИЗАЦИЯ

Автоклавы, работающие под давлением. Их следует использовать только в том случае, если отсутствуют автоклавы вытеснительного типа. Такие автоклавы загружаются сверху и нагреваются с помощью газа, электричества или других видов энергии. Пар образуется в результате кипения воды в основании автоклава, а воздух поднимается вверх и выходит через выпускной клапан. После удаления воздуха клапан закрывается и нагревание уменьшается. Давление и температура повышаются до достижения клапаном заранее установленного уровня. Это является началом рабочего цикла. В конце цикла нагревание прекращается и температура понижается до 80 °C или ниже, после чего можно открыть крышку.

подача клапаны пара к вакуумному насосу или паровому эжектору Рисунок 10. Автоклав вытеснительного типа Загрузка автоклава Материалы следует размещать в камере неплотно, чтобы пар мог легко проникать, а воздух – легко выходить. Пластиковые пакеты следует открыть, чтобы дать пару доступ к их содержимому.

ПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ

БЕЗОПАСНОСТИ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

Меры предосторожности при работе с автоклавами.

Соблюдение следующих правил может свести к минимуму опасности, возникающие при работе с емкостями, находящимися под давлением.

1. Ответственность за использование и регулярное обслуживание следует возложить на подготовленных сотрудников.

2. Программа профилактики должна включать регулярную инспекцию квалифицированным персоналом камеры, герметичности дверец и всех измерительных и контрольных устройств.

3. Пар должен быть насыщенным и не содержать химических веществ (например, ингибиторов коррозии), которые могут контаминировать стерилизуемые предметы.

4. Все материалы, подлежащие автоклавированию, должны быть помещены в контейнеры, обеспечивающие беспрепятственное удаление воздуха и хорошую проводимость тепла; камера должна быть загружена неплотно, чтобы дать пару равномерный доступ ко всем загруженным предметам.

5. Если автоклав не оборудован внутренними предохранительными запорами, препятствующими открыванию двери при повышенном давлении, то в этом случае необходимо предусмотреть возможность открытия дверки только после закрытия основного клапана подачи пара и снижения температура до 80 °C.

6. При автоклавировании жидкостей устройство выпуска пара следует установить на медленный режим, так как жидкости при их выгрузке могут выкипать из-за перегрева.

7. При открывании автоклава оператор должен надеть подходящие перчатки и защитные козырьки, даже если температура упала ниже 80 °C.

8. В ходе обычной проверки эффективности автоклава индикаторы биологической стабильности и термопары должны помещаться в центр каждой загрузки. Для определения правильных циклов функционирования настоятельно рекомендуется проводить регулярный контроль «наихудших случаев» загрузки с использованием термопар и регистрирующих устройств.

9. Дренажный экранирующий фильтр камеры (в случае наличия) следует ежедневно снимать и чистить.

10. Следует обращать особое внимание на то, чтобы выпускной клапан пара не был закрыт бумагой или другими материалами.

Сжигание Сжигание является полезным методом уничтожения останков животных, а также анатомических и других отходов с предварительной деконтаминацией или без нее (cм. главу 3). Сжигание является альтернативой автоклавированию только в том случае, если мусоросжигатель находится под контролем лаборатории.

Правильное сжигание предполагает необходимость эффективных средств контроля температуры и камеры вторичного сжигания. Многие мусоросжигатели, особенно имеющие только одну камеру сжигания, не подходят для работы с инфекционными материалами, останками животных и предметами из пластмассы. Такие материалы уничтожаются не полностью, в результате чего с исходящим потоком может происходить загрязнение атмосферы микроорганизмами, токсичными химическими веществами и дымом. Тем не менее, существует много конструкций камер сжигания. В идеале, температура в первичной камере должна быть не менее 800 °C, а во вторичной камере – не менее 1000 °C.

Материалы для сжигания, даже если они прошли предварительную деконтаминацию, должны переноситься в мусоросжигатель в мешках, желательно в пластиДЕЗИНФЕКЦИЯ И СТЕРИЛИЗАЦИЯ ковых. Сотрудники, работающие с мусоросжигателем, должны быть надлежащим образом проинструктированы относительно загрузки и контроля температуры. Следует также отметить, что эффективное функционирование мусоросжигателя в значительной степени зависит от правильного сочетания сжигаемых материалов.

В настоящее время многие обеспокоены тем, что существующие и проектируемые мусоросжигатели могут оказывать отрицательное воздействие на окружающую среду, поэтому сейчас проводится работа по улучшению экологических характеристик мусоросжигателей и повышению их эффективности с точки зрения затрат энергии.

Удаление отходов Удаление лабораторных и медицинских отходов регулируется различными региональными, национальными и международными нормами, поэтому до разработки и осуществления программы по обработке, транспортировке и удалению биологически опасных отходов, следует ознакомиться с самыми последними изданиями документов по этому вопросу. Как правило, с золой, образующейся в мусоросжигателе после сжигания отходов, можно обращаться как с обычными бытовыми отходами и вывозить силами местных служб. Автоклавированные отходы можно сжигать во внешних мусоросжигателях или вывозить на мусорные свалки (см. главу 3).

Дополнительную информацию см. в источниках (13) и (29-39).

15. Основы перевозки инфекционных материалов Перевозка инфекционных и потенциально инфекционных материалов строго регламентирована национальными и международными нормативными положениями. В этих положениях изложен порядок правильного использования упаковочного материала, а также другие требования к погрузочно-разгрузочным операциям.

Лабораторный персонал должен обращаться с инфекционными материалами в соответствии с применимыми транспортными нормами. Соответствие этим правилам обеспечит:

1. Снижение вероятности нарушения упаковки и утечки и, как следствие 2. Уменьшение воздействия возможных инфекций 3. Повышение эффективности поставок упакованных материалов.

Международные правила перевозки Правила перевозки инфекционных материалов (любым видом транспорта) основаны на принятых Организацией Объединенных Наций Типовых правилах перевозки опасных грузов (40). Содержащиеся в них рекомендации разработаны Комитетом экспертов Организации Объединенных Наций по перевозке опасных грузов (КЭПОГ). Для придания этим правилам обязательного характера компетентные органы должны включить их в национальное законодательство и международные правила, регулирующие перевозки отдельными видами транспорта (например, Технические инструкции по безопасной перевозке опасных грузов воздушным транспортом (41) Международной организации гражданской авиации (ИКАО) и Европейское соглашение о международной дорожной перевозке опасных грузов (ДОПОГ) (42)).

Международная ассоциация воздушного транспорта (ИАТА) ежегодно издает Руководящие принципы по отгрузке инфекционных веществ (43). Эти принципы должны соответствовать Техническим инструкциям ИКАО в качестве минимального стандарта, но могут налагать дополнительные ограничения. Соблюдение принципов ИАТА является обязательным, если отгрузка осуществляется членами ИАТА.

Поскольку Типовые правила перевозки опасных грузов носят динамичный характер в том плане, что один раз в два года в них вносятся поправки, для ознакомления с применимыми правилами следует обращаться к самому последнему изданию текстов этих правил на национальном и международном уровнях.

Участие ВОЗ в работе КЭПОГ сводится к выполнению консультативных функций.

Крупные изменения в правилах перевозки инфекционных веществ были внесены в 13-е издание (2003 г.) Типовых правил ООН (40). Справочную информацию, касающуюся принятых поправок, можно получить в ВОЗ (44).

Международные типовые правилах не имеют целью подменить какие бы то ни было местные или национальные требования. Однако в тех случаях, когда национальные требования отсутствуют, следует применять международные типовые правила.

15. ОСНОВЫ ПЕРЕВОЗКИ ИНФЕКЦИОННЫХ МАТЕРИАЛОВ

Важно отметить, что международные перевозки инфекционных веществ также подчиняются национальным правилам, касающимся импорта/экспорта.

Базовый принцип тройной упаковки Система тройной упаковки, которая применяется для транспортировки инфекционных и потенциально инфекционных материалов, проиллюстрирована на рисунке 11.

Эта система упаковки состоит из трех слоев: первичный контейнер, вторичная упаковка и внешняя упаковка.

Первичный контейнер, в котором находится образец, должен быть герметичным и иметь маркировку, указывающую на его содержимое. Он должен быть завернут в достаточное количество абсорбирующего материала, способного поглотить всю жидкость в случае повреждения контейнера или утечки.

Вторичная водонепроницаемая упаковка используется для защиты первичного контейнера (контейнеров). Несколько обернутых первичных контейнеров могут быть помещены в одну вторичную упаковку. Некоторые нормативные тексты содержат положения, регламентирующие ограничение объема и/или веса упакованных инфекционных материалов.

Третий слой служит для защиты вторичной упаковки от физического повреждения во время перевозки. В соответствии с самыми последними правилами должны также представляться бланки данных об образце, письма и другая информация, позволяющая идентифицировать или описать образец или установить личность перевозчика и получателя.

Типовые правила ООН предписывают использование двух различных систем тройных упаковок. Базовая система тройной упаковки применяется к транспортировке разнообразных инфекционных материалов; однако микроорганизмы высокого риска должны перевозиться в соответствии с более строгими требованиями. Для получения более подробной информации об использовании различных упаковок в зависимости от вида перевозимых материалов рекомендуется обратиться к тексту применяемых национальных и/или международных типовых правил.

Процедура обработки пролившегося материала В случае разлития инфекционного или потенциально инфекционного материала следует применять следующую процедуру чистки.

1. Надеть перчатки и защитную одежду, включая, в случае необходимости, защитные приспособления для лица и глаз.

2. Накрыть пролившийся материал тканевым или бумажным полотенцем, чтобы предотвратить его дальнейшее распространение.

3. Вылить соответствующее дезинфицирующее средство через полотенце на пролившийся материал и прилегающую зону (как правило, для этой цели достаточно 5-процентного раствора гипохлорита натрия, но в случае разлития на борту самолетов следует применять четвертичные аммониевые дезинфицирующие средства).

4. Применять дезинфицирующее средство следует концентрическими кругами, начиная с внешней зоны пролившегося материала и постепенно продвигаясь к центру.

5. По истечении надлежащего периода времени (например, 30 минут), удалите весь материал. При наличии разбившегося стекла или других острых предметов для их сбора используйте совок для мусора или кусок картона и затем положите их в прочный контейнер для последующего уничтожения.

ПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ

БЕЗОПАСНОСТИ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

Упаковка и маркировка инфекционных материалов категории А (пробирка с материалом для исследований) вторичная упаковка (водонепроницаемая) Упаковка и маркировка инфекционных материалов категории B абсорбирующий упаковочный материал вторичная упаковка (герметичная на спучай протечек и просеивания) указания: «Кому» / «От кого»

Рисунок 11. Примеры систем тройной упаковки (графическая информация была любезно предоставлена

15. ОСНОВЫ ПЕРЕВОЗКИ ИНФЕКЦИОННЫХ МАТЕРИАЛОВ

6. Очистите и продезинфицируйте участок разлития (в случае необходимости, повторите этапы 2-5).

7. Положите контаминированные материалы в водонепроницаемый, стойкий к проколам контейнер для последующего удаления.

8. После успешной дезинфекции проинформируйте соответствующий орган о том, что участок был деконтаминирован.

ЧАСТЬ V

Введение в биотехнологию 16. Биологическая безопасность и технология рекомбинантной ДНК Технология рекомбинантной ДНК заключается в соединении генетического материала, полученного из различных источников, и создании таким образом генетически модифицированных организмов (ГМО), возможно, никогда ранее не существовавших в природе. На первых этапах работы молекулярные биологи выражали опасения по поводу того, что такие организмы могут обладать непредсказуемыми и нежелательными свойствами, которые могут представлять биологическую опасность за стенами лабораторий. Эти опасения легли в основу научной конференции, состоявшейся в 1975 г. в Асиломаре, шт. Калифорния, США (45). На этой встрече были обсуждены вопросы безопасности и предложены первые руководящие принципы в области технологии рекомбинантной ДНК. Дальнейшие научные исследования на протяжении более чем 25 лет показали, что при проведении надлежащей оценки риска и принятии соответствующих защитных мер генная инженерия может быть безопасной.

Технология рекомбинантной ДНК или генная инженерия была впервые использована для клонирования сегментов ДНК в бактериальных организмах в целях повышенной экспрессии специфических генных продуктов, необходимых для дальнейших исследований. Молекулы рекомбинантной ДНК были также использованы для создания ГМО, таких как трансгенных и «нокаутных» (с выключенными генами) животных, а также трансгенных растений.

Технология рекомбинантной ДНК уже оказала огромное влияние на биологию и медицину и, возможно, окажет еще большее воздействие теперь, когда синтезирована нуклеотидная последовательность полного человеческого генома. Десятки тысяч генов не известного до сих пор предназначения будут изучены на основании использования технологии рекомбинантной ДНК. Генная терапия может стать общепринятой при лечении определенных заболеваний и вполне вероятно, что с использованием технологий генной инженерии будут созданы новые векторы для переноса генов. В современном сельском хозяйстве может также значительно возрасти роль трансгенных растений, выведенных на основании технологии рекомбинантной ДНК.

Эксперименты в области создания и использования ГМО должны проводиться после проведения оценки риска с точки зрения биологической безопасности. Патогенные свойства таких организмов и любые потенциальные опасности, связанные с ними, могут быть не известны и не описаны должным образом. В этой связи необходимо оценить особенности организма-донора, свойства последовательностей ДНК, предназначенных для переноса, особенности организма-реципиента и свойства окружающей среды. Эти данные должны содействовать определению уровня биологической безопасности, требуемого для безопасного обращения с создаваемым ГМО, и установлению необходимых систем биологической и физической изоляции.

Соображения биологической безопасности для биологических систем экспрессии Биологические системы экспрессии состоят из векторов и клеток-хозяев. В целях эффективности и безопасности в процессе их использования они должны соотПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ

БЕЗОПАСНОСТИ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

ветствовать ряду критериев. Примером такой биологической системы экспрессии является плазмида pUC18. Часто используемая в качестве клонирующего вектора в комбинации с клетками Escherichia coli K12, плазмида pUC18 была полностью секвенирована. Все гены, необходимые для экспрессии в другой бактерии, были выделены из ее предшественника – плазмиды pBR322. E. coli K12 представляет собой непатогенный штамм, который не может постоянно колонизировать кишечник здоровых людей и животных. Типовые эксперименты в области генной инженерии в E. coli K12/pUC18 могут безопасно проводиться на первом уровне биологической безопасности при условии, что для встраиваемых продуктов экспрессии инородной ДНК не требуются более высокие уровни биологической безопасности.

Соображения биологической безопасности для векторов экспрессии Более высокие уровни биологической безопасности могут требоваться, если:

1. Экспрессия последовательностей ДНК, извлеченных из патогенных организмов, может повысить вирулентность ГМО 2. Встраиваемые последовательности ДНК не описаны должным образом, например, во время создания геномных библиотек ДНК из патогенных микроорганизмов 3. Генные продукты имеют потенциальную фармакологическую активность 4. Генные продукты несут информацию о токсинах.

Вирусные векторы для переноса гена Вирусные векторы, например, аденовирусные векторы, используются для переноса генов в другие клетки. В таких векторах отсутствуют определенные гены репликации вируса, и они размножаются в клеточных линиях, что восполняет этот недостаток.

Штаммы таких векторов могут быть заражены вирусами, способными к репликации, генерируемыми редкими спонтанными рекомбинациями в размножающихся клеточных линиях, или могут возникать из-за недостаточной очистки. Для обращения с такими векторами требуется тот же уровень биологической безопасности, что и для обращения с родительским аденовирусом, из которого они извлечены.

Трансгенные и «нокаутные» животные С животными-носителями инородного генетического материала (трансгенными животными) необходимо обращаться на таких уровнях изоляции, которые требуются для инородных генетических продуктов. Животные с целевым выключением определенных генов («нокаутные» животные), как правило, не представляют особых биологических опасностей.

Примером трансгенных животных являются животные, экспрессирующие рецепторы к вирусам, обычно не способным инфицировать данный вид животных. Если такие животные окажутся за стенами лаборатории и передадут трансген популяции диких животных, то теоретически может возникнуть животный резервуар для данного вируса.

Такая возможность обсуждалась в отношении полиовирусов, так как она имеет особое отношение к проблеме искоренения полиомиелита. Трансгенные мыши, экспрессирующие человеческий рецептор к полиовирусу, полученный в различных лабораториях, были восприимчивы к полиовирусной инфекции, введенной различными способами, а возникшее у них в результате заболевание в клиническом и гистопатологическом плане было сходно с человеческим полиомиелитом. Однако

16. БИОЛОГИЧЕСКАЯ БЕЗОПАСНОСТЬ И ТЕХНОЛОГИЯ РЕКОМБИНАНТНОЙ ДНК

модель мыши отличается от человеческой тем, что репликация в пищеварительном тракте вводимых пероральным способом полиовирусов либо неэффективна, либо вообще не происходит. Поэтому, вероятность того, что попадание такой трансгенной мыши в дикую природу приведет к возникновению нового животного резервуара для полиовирусов, крайне мала. Тем не менее, этот пример показывает, что в отношении каждой новой линии трансгенных животных необходимо проводить тщательные исследования для определения возможных путей передачи инфекции животным, дозы инокулята, необходимой для инфицирования, и степени распространения вируса инфицированными животными. Кроме того, необходимо принимать все меры для обеспечения строгой изоляции трансгенных мышей, экспрессирующих рецептор.

Трансгенные растения Трансгенные растения, экспрессирующие гены, которые делают их толерантными к гербицидам или устойчивыми к насекомым, в настоящее время являются предметом многочисленных споров во многих частях мира. В центре дискуссий лежит безопасность продуктов питания, изготовленных из таких растений, и долговременные последствия от их культивирования для окружающей среды.

Трансгенные растения, экспрессирующие гены животного или человеческого происхождения, используются для создания лечебных и пищевых продуктов. При оценке риска необходимо определить уровень биологической безопасности для выращивания таких растений.

Оценка риска для генетически модифицированных организмов При оценке риска для работы с ГМО необходимо учитывать свойства организма-донора и организма-реципиента/хозяина.

Свойства, которые необходимо учитывать, включают следующие:

Опасности, связанные непосредственно с встраиваемым геном (донорского организма) Оценка необходима в тех случаях, когда встраиваемый генный продукт обладает известными биологически и фармакологически активными свойствами, которые могут оказать вредное воздействие, такими как, например:

1. Токсины 2. Цитокины 3. Гормоны 4. Регуляторы генной экспрессии 5. Факторы вирулентности или энхансеры 6. Онкогенные последовательности 7. Устойчивость к антибиотикам 8. Аллергены.

В таких случаях необходимо производить оценку уровня экспрессии, необходимого для достижения биологической и фармакологической активности.

Опасности, связанные с реципиентом/хозяином 1. Чувствительность организма-хозяина 2. Патогенность штамма хозяина, включая вирулентность, инфективность и выработку токсинов 3. Модификация круга хозяев

ПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ

БЕЗОПАСНОСТИ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

4. Иммунный статус реципиента 5. Последствия воздействия.

Опасности, возникающие из-за изменения патогенных признаков Многие модификации не охватывают гены, продукты которых в своей основе вредны, но побочные эффекты могут возникнуть и в результате изменения существующих непатогенных и патогенных признаков. Модификация нормальных генов может привести к изменению патогенности. При попытке определить эти потенциальные опасности можно учитывать следующие моменты (список не полный):

1. Есть ли рост инфективности или патогенности?

2. Можно ли преодолеть какую-либо блокирующую мутацию в организмереципиенте в результате встраивания инородного гена?

3. Кодирует ли инородный ген детерминанту патогенности из другого организма?

4. Включает ли инородная ДНК детерминанту патогенности, можно ли предвидеть, что этот ген усилит патогенность ГМО?

5. Существует ли лечение?

6. Повлияет ли генетическая модификация на чувствительность ГМО к антибиотикам или другим формам терапии?

7. Возможно ли полное уничтожение ГМО?

Другие соображения Вопрос проведения исследований на целых животных и растениях также требует внимательного рассмотрения. Исследователи должны выполнять правила, ограничения и требования для проведения работ с ГМО, установленные в соответствующих странах и институтах.

Страны могут иметь национальные органы, устанавливающие руководящие принципы для работы с ГМО, и оказывать содействие ученым при установлении надлежащего уровня биологической безопасности для проведения их работы. В некоторых случаях между странами могут существовать различия в классификации уровня, или же страны могут принять решение о классификации работы на более низком или более высоком уровне при поступлении новой информации о конкретной системе «вектор/хозяин».

Оценка риска является динамичным процессом, при котором принимаются во внимание новые разработки и научный прогресс. Проведение надлежащей оценки риска является гарантией тому, что технология рекомбинантной ДНК будет и в будущем приносить пользу человечеству.

Дополнительную информацию см. в источниках (17) и (46-48).

ЧАСТЬ VI

Химическая, противопожарная и электрическая безопасность 17. Опасные химические вещества Сотрудники микробиологических лабораторий наряду с угрозой инфицирования патогенными микроорганизмами подвержены также угрозе воздействия химических веществ. Очень важно, чтобы они были должным образом осведомлены о токсичности этих химических веществ, о путях их воздействия и опасностях, связанных с обращением с этими веществами, а также с их хранением (см. приложение 5). Данные о безопасности материалов или другая информация о химических опасностях имеется у заводов-изготовителей и/или поставщиков химических веществ. Такая информация должна быть доступна в лабораториях, в которых используются эти химические вещества, например, в виде раздела руководства по безопасности или проведению соответствующих действий.

Пути воздействия Воздействие опасных химических веществ может произойти:

1. При вдыхании 2. При контакте 3. При поглощении 4. При уколе иглой 5. Через поврежденную кожу.

Хранение химических веществ Химические вещества должны храниться в лаборатории только в количествах, необходимых в течение дня. Основная масса химических веществ должна храниться в специально предназначенных комнатах или зданиях.

При хранении химические вещества нельзя располагать в алфавитном порядке.

Общие правила в отношении несовместимости химических веществ В целях избежания пожара и/или взрыва обращение с веществами из левого столбца таблицы 13 и их хранение необходимо осуществлять таким образом, чтобы не допустить их контакта с веществами из соответствующей строки правого столбца таблицы.

Токсическое воздействие химических веществ Некоторые химические вещества оказывают вредное воздействие на здоровье людей, работающих с ними или вдыхающих их пары. Кроме явных ядов, известны и другие химические вещества, обладающие различными токсическими эффектами.

Затронутыми или серьезно пораженными могут оказаться дыхательная система, кровь, легкие, печень, почки, желудочно-кишечный тракт, а также другие органы и ткани. Ряд химических веществ обладает канцерогенным или тератогенным воздействием.

ПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ

БЕЗОПАСНОСТИ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

Таблица 13. Общие правила в отношении несовместимости химических

КАТЕГОРИЯ ВЕЩЕСТВ НЕСОВМЕСТИМЫЕ ВЕЩЕСТВА

Щелочные металлы, например, на- Двуокись углерода, хлорированные трий, калий, цезий и литий углеводороды, вода Уксусная кислота, сероводород, ани- Окислители, например, хромовая кислота, лин, углеводороды, серная кислота азотная кислота, перекиси, перманганаты Пары некоторых растворителей при вдыхании могут оказывать токсическое воздействие. Помимо перечисленных выше серьезных поражений организма, возможно постепенное и не явно выраженное ухудшение здоровья, которое может проявляться в нарушениях координации, сонливости и других подобных симптомах, повышающих вероятность различных несчастных случаев.

Продолжительное или неоднократное воздействие на кожу жидкой фазы многих органических растворителей может привести к ее повреждениям, которые могут быть вызваны обезжириванием. Возможно также появление коррозийных и аллергических симптомов.

Для более подробной информации о токсическом воздействии химических веществ см. приложение 5.

Взрывоопасные химические вещества Нельзя допускать контакта азидов, часто используемых в антибактериальных растворах, с медью или свинцом (например, в сточных трубах и водопроводной сети), так как это может привести к сильнейшим взрывам даже в случае незначительного контакта.

Окисленные и высохшие до кристаллов эфиры чрезвычайно нестабильны и потенциально взрывоопасны.

Хлорная кислота, при ее высыхании на дереве, кирпиче или ткани, может при ударе взорваться и привести к пожару.

Пикриновая кислота и пикраты детонируют при нагревании и от удара.

Разлитие химических веществ Многие изготовители лабораторных химических веществ выпускают схемы действий в случае их разлития. Такие схемы, а также наборы для ликвидации последствий разлития имеются также и в торговой сети. Соответствующие схемы необходимо вывесить на видном месте в лаборатории. Должно быть также предусмотрено следующее оборудование:

1. Наборы для ликвидации последствий разлития химических веществ 2. Защитная одежда, например, толстые резиновые перчатки, бахилы или резиновые сапоги, респираторы 3. Лопаты и совки 4. Щипцы для сбора осколков 5. Швабры, тряпки и бумажные полотенца 6. Ведра 7. Кальцинированная сода (углекислый натрий, Na2CO3) или гидрокарбонат натрия (NaHCO3) для нейтрализации кислот и коррозийных химических веществ 8. Песок (для засыпания разлитых щелочей) 9. Негорючее моющее средство.

17. ОПАСНЫЕ ХИМИЧЕСКИЕ ВЕЩЕСТВА

В случае значительного разлития химических веществ необходимо предпринять следующие действия:

1. Уведомить ответственного за технику безопасности.

2. Эвакуировать из помещения персонал, не задействованный в ликвидации последствий разлития.

3. Уделить внимание лицам, которые могли подвергнуться воздействию разлитых химических веществ.

4. Если разлито горючее вещество, необходимо погасить весь открытый огонь, перекрыть газ в комнате и прилегающих к ней помещениях, открыть окна (если это возможно), а также выключить электроприборы, которые могут искрить.

5. Избегать вдыхания паров разлитых веществ.

6. Наладить вытяжную вентиляцию, если это безопасно.

7. Обеспечить необходимые предметы и материалы (см. выше) для удаления разлитого вещества.

Сжатые и сжиженные газы Информация о хранении сжатых и сжиженных газов приведена в Таблице 14.

Таблица 14. Хранение сжатых и сжиженных газов

КОНТЕЙНЕР ИНФОРМАЦИЯ О ХРАНЕНИИ

Баллоны со сжатым газом и • Должны быть надежно закреплены (наприконтейнеры со сжиженным мер, прикованы) к стене или прочной скамье • Большие количества должны храниться в специальных помещениях в отдалении от лаборатории. Эти помещения должны запираться • Не должны находиться рядом с нагревательными приборами, открытым пламенем и иными источниками тепла, искрящим электрическим оборудованием или под прямыми лучами солнца.

Маленькие газовые баллоны • Нельзя сжигать.

одноразового использованияa,b Когда оборудование не используется и в комнате никого нет, главный вентиль подачи газа должен быть перекрыт.

На дверях помещений, в которых используются баллоны с воспламеняющимся газом, должны быть предупреждающие указатели.

Дополнительную информацию см. в источниках (1) и (49-51), а также в приложении 5.

18. Другие опасности работы в лабораторных условиях Работники лабораторий могут столкнуться с опасностями, исходящими от источников энергии, такими как огонь, электричество, излучение и шум. В этой главе приводится основная информация об этих видах опасности.

Огнеопасность Необходимо тесное взаимодействие между ответственными за технику безопасности и местными пожарными службами. Кроме химической опасности, следует принимать во внимание возможность распространения инфекционного материала под воздействием огня. От этого зависит решение – гасить пожар или лишь сдерживать его.

Желательна помощь местных пожарных служб в обучении лабораторного персонала технике пожарной безопасности, немедленным действиям в случае возникновения пожара и использованию противопожарного оборудования.

В каждой комнате, а также в коридорах и холлах необходимо вывешивать на видном месте предупреждения о возможном возгорании, инструкции по принятию необходимых мер и план эвакуации в случае пожара.

Наиболее распространенными причинами пожаров в лабораториях являются:

1. Перегрузка электрической сети 2. Плохое состояние электропроводки, например, плохая или поврежденная изоляция кабеля 3. Слишком длинные газовые трубы или электропровода 4. Оборудование, оставленное включенным без необходимости 5. Оборудование, не предназначенное для использования в лабораторных условиях 6. Открытое пламя 7. Поврежденные газовые трубы 8. Неправильное обращение с горючими и взрывоопасными материалами, а также неправильное их хранение 9. Неправильное обращение с химическими веществами, не совместимыми друг с 10. Размещение искрящего оборудования рядом с горючими веществами и испарениями 11. Неправильная или недостаточная вентиляция.

Средства тушения пожара должны размещаться около дверей комнат и в стратегически важных местах коридоров и холлов. Это оснащение может включать пожарные шланги, ведра (с водой или песком) и огнетушитель. Необходимо регулярно проверять огнетушители, поддерживать их в исправном состоянии и своевременно менять по истечению срока годности. Специфические типы огнетушителей и области их использования указаны в Таблице 15.

18. ДРУГИЕ ОПАСНОСТИ РАБОТЫ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

Таблица 15. Типы и области использования огнетушителей

ТИП ИСПОЛЬЗУЮТСЯ ДЛЯ ТУШЕНИЯ НЕЛЬЗЯ ИСПОЛЬЗОВАТЬ ДЛЯ ТУШЕНИЯ

Водяные Бумаги, дерева, тканей Электроприборов, огнеопасных Углекислотные Огнеопасных жидкостей и Щелочных металлов, бумаги (CO2) газовые газов, электроприборов Порошковые Огнеопасных жидкостей и Оборудования и инструментов газов, щелочных металлов, многократного пользования, так Пенные Огнеопасных жидкостей Электроприборов Более подробную информацию см. в источнике (49).

Опасность работы с электрооборудованием Необходимо регулярно проверять все электрические установки и оборудование, включая системы заземления.

В лабораторных электрических цепях должны быть установлены автоматические выключатели и прерыватели тока при электрическом замыкании на землю. Автоматические выключатели не защищают людей; они предназначены для защиты электропроводки от перегрузок и, следовательно, для предотвращения пожаров. Прерыватели тока при электрическом замыкании на землю предназначены для защиты людей от электрошока.

Все лабораторное электрооборудование должно быть заземлено, желательно посредством трехконтактных штепсельных вилок.

Все лабораторное электрооборудование и электропроводка должны соответствовать государственным стандартам и правилам по безопасности работы с электрооборудованием.

Шум Работа в условиях чрезмерного шума сказывается со временем на здоровье персонала. В некоторых лабораторных помещениях, в которых, например, установлены лазерные системы или содержатся животные, создается значительный шум, который воздействует на работников. Для определения опасности, которую представляет такой шум для персонала, можно проводить замеры его уровня. Там, где это обосновано, возможна установка технических средств, таких как заграждения или барьеры вокруг производящего шум оборудования, или перегородки между помещениями, где производится много шума, и другими рабочими помещениями. Там, где нельзя снизить уровень шума и где работники лаборатории постоянно подвергаются его чрезмерному воздействию, необходимо осуществлять программу по сохранению слуха, охватывающую использование средств защиты слуха во время работы в условиях опасного шума, и программу медицинского контроля для определения воздействия шума на здоровье работников.

Ионизирующее излучение Радиологическая защита представляет собой защиту людей от вредных последствий ионизирующего излучения, включающих:

ПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ

БЕЗОПАСНОСТИ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

1. Соматические последствия, то есть клинические симптомы, наблюдаемые у лиц, подвергнувшихся облучению. Соматические последствия включают индуцированные облучением виды рака, например, лейкемию и рак костей, легких и кожи, которые могут возникать через много лет после облучения. Менее серьезные соматические последствия включают незначительные повреждения кожи, выпадение волос, анемии, поражение желудочно-кишечного тракта и формирование катаракты.

2. Наследственные последствия, то есть симптомы, наблюдаемые у потомков подвергнувшихся облучению лиц. Наследственные последствия облучения гонад включают повреждение хромосом или генную мутацию. Облучение в высоких дозах зародышевых клеток в гонадах может вызвать гибель клеток, приводящую к ослаблению репродуктивной функции у обоих полов и к нарушениям менструального цикла у женщин. Облучение развивающегося плода, особенно на 8–15 неделях беременности, может увеличить риск возникновения врожденных пороков развития, умственной неполноценности или развития в дальнейшей жизни рака, индуцированного облучением.

Принципы защиты от ионизирующего облучения В целях ограничения вредных последствий ионизирующего облучения необходимо контролировать использование радиоизотопов, которое должно осуществляться в соответствии с государственными стандартами. Защита от излучения строится на основании следующих четырех принципов:

1. Максимальное сокращение времени облучения 2. Максимальное удаление рабочих мест от источника излучения 3. Экранирование источника излучения 4. Применение нерадиометрических технологий вместо использования радионуклидов.

Защита включает следующие мероприятия:

1. Время. Время облучения во время действий с радиоактивными материалами может быть сокращено путем:

— Применения новых, неизвестных технологий без использования радионуклидов до того, как они будут приняты на вооружение — Проведения работ с радионуклидами продуманно, своевременно и неторопливо — Обеспечения безотлагательного возвращения всех радиоактивных материалов в хранилище сразу же после окончания работы с ними — Частого удаления радиоактивных отходов из лаборатории — Проведения по возможности минимального времени в зоне излучения или в — Составления эффективного расписания работ с радиоактивными материалами и плана соответствующих лабораторных мероприятий.

Чем меньше время, проведенное в зоне излучения, тем меньше полученная индивидуальная доза, как видно из уравнения:

2. Расстояние. Мощность дозы для большинства гамма- и рентгеновского излучений изменяется в зависимости от величины, обратной квадрату расстояния от источника излучения:

18. ДРУГИЕ ОПАСНОСТИ РАБОТЫ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

Увеличение расстояния от источника излучения вдвое приведет к уменьшению облучения за тот же период времени на четверть. Для увеличения расстояния между оператором и источником излучения используются различные устройства и механические приспособления, например, щипцы, пинцеты и зажимы с длинными рукоятками, а также дистанционно управляемые пипетки. Необходимо помнить, что незначительное увеличение расстояния может привести к значительному снижению мощности дозы.

3. Экранирование. Экраны, поглощающие или ослабляющие энергию излучения, установленные между источником излучения и оператором или другими сотрудниками лаборатории, помогут ограничить облучение. Выбор материала и толщина экрана зависят от проникающей способности (типа и энергии) излучения.

Заграждение из акрилового волокна, дерева или легкого металла толщиной 1,3–1,5 см защищает от -частиц высоких энергий, тогда как свинец с высокой плотностью необходим для экранирования гамма- и рентгеновского излучений высоких энергий.

4. Применение других технологий. Материалы, основанные на радионуклидах, не должны использоваться там, где возможно применение других технологий.

Если применение других технологий невозможно, необходимо использовать радионуклиды с минимальной проникающей способностью или энергией.

Практика безопасной работы с радионуклидами Правила работы с радиоактивными веществами должны охватывать четыре области:

1. Зону излучения 2. Рабочее место 3. Место для радиоактивных отходов 4. Регистрацию и действия в критических ситуациях.

Наиболее важные правила включают следующие:

1. Зона излучения — Использовать радиоактивные вещества только в специально предназначенных местах.

— Допускать присутствие только необходимого персонала.

— Использовать средства личной защиты, включая лабораторные халаты, защитные очки и одноразовые перчатки.

— Контролировать индивидуальные дозы облучения.

Лаборатории, в которых используются радионуклиды, необходимо устраивать таким образом, чтобы не допускать распространения радиации и упрощать очистку и обеззараживание помещений. Работа с радионуклидами должна проводиться в небольшой комнате, прилегающей к главной лаборатории, или в специально предназначенном месте в пределах лаборатории, удаленном от мест, где проводятся другие виды работ. У входа в зону излучения должны быть вывешены предупреждающие знаки в виде международных символов радиационной опасности (Рисунок 12).

2. Рабочее место — Использовать сливные поддоны, накрытые одноразовыми абсорбирующими материалами.

— Ограничивать количества радионуклидов.

ПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ

БЕЗОПАСНОСТИ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

Рисунок 12. Международный символ — Экранировать источники излучений в зоне излучения, на рабочем месте и в месте для радиоактивных отходов.

— Отмечать контейнеры с радиоактивными материалами символом радиационной опасности, а также надписывать название радионуклида, его активность и дату исследования.

— Использовать измерители ионизирующих излучений для контроля рабочих помещений, защитной одежды и рук после завершения работы.

— Использовать надлежащим образом экранированные транспортные контейнеры.

3. Место для радиоактивных отходов — Часто удалять радиоактивные отходы из рабочих помещений.

— Регулярно и четко регистрировать использование и утилизацию радиоактивных материалов.

— Проверять регистрационные записи дозиметрических показателей материалов, превышающих допустимые дозы.

— Разработать и регулярно осуществлять планы действий в критических ситуациях.

— При возникновении критических ситуаций, в первую очередь, оказывать помощь пострадавшим.

— Проводить тщательную уборку зараженных мест.

— Запрашивать помощь в отделе безопасности, при наличии такового.

— Составлять и хранить отчеты о происходящих инцидентах.

ЧАСТЬ VII

безопасной работы и обучение персонала 19. Ответственный за биологическую безопасность и совет по биологической безопасности Необходимо, чтобы в каждой лаборатории проводилась всесторонняя политика по обеспечению безопасности, имелось руководство по безопасности и вспомогательные программы для проведения такой политики. Как правило, ответственность за это несет директор или руководитель института или лаборатории, который может возложить определенные обязанности на ответственного за биологическую безопасность или иных сотрудников.

За безопасность работы в лаборатории отвечают также все ее руководители и сотрудники, причем каждый сотрудник несет ответственность за свою собственную безопасность и за безопасность своих коллег. Сотрудники должны выполнять свою работу безопасным образом и сообщать о всех небезопасных действиях, условиях или происшествиях своему руководителю. Желательно периодически проводить проверки соблюдения техники безопасности самими сотрудниками лабораторий или приглашаемыми специалистами.

Ответственный за биологическую безопасность По возможности необходимо назначать ответственного за биологическую безопасность, который должен следить за последовательным проведением политики и осуществлением программ по обеспечению биологической безопасности в лаборатории.

Ответственный за биологическую безопасность выполняет свои обязанности по поручению руководителя института или лаборатории. В небольших подразделениях ответственным за биологическую безопасность может быть микробиолог или технический работник, выполняющий эти обязанности по совместительству. В какой бы мере назначаемый на эту должность сотрудник не занимался работой по обеспечению биологической безопасности, он должен обладать необходимыми профессиональными знаниями для того, чтобы предложить, проверить и одобрить специальные методики обеспечения надлежащей биологической изоляции и биологической безопасности.

Ответственный за биологическую безопасность должен руководствоваться соответствующими национальными и международными правилами, постановлениями и директивами, а также помогать сотрудникам лаборатории в разработке стандартного порядка действий. Он должен иметь базовые технические знания в области микробиологии, биохимии и основных физических и биологических наук. Также желательны знания в области лабораторной и клинической практики и безопасности, включая знания об оборудовании для изоляции биологической опасности и инженерных основах конструкции, функционирования и технического обслуживания оборудования. Ответственный за биологическую безопасность должен также иметь способности общения с администрацией, техническим и вспомогательным персоналом.

В функции ответственного за биологическую безопасность входят:

1. Консультации в области биологической безопасности, защиты от биологической опасности и соответствия техническим требованиям.

ПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ

БЕЗОПАСНОСТИ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

2. Периодические внутренние проверки состояния биологической безопасности в отношении технических методов, процедур и протоколов, а также биологических веществ, материалов и оборудования.

3. Обсуждение случаев нарушения протоколов или методики соблюдения биологической безопасности с соответствующими лицами.

4. Контроль за тем, чтобы все сотрудники прошли соответствующий курс обучения основам биологической безопасности.

5. Обеспечение дальнейшего последовательного обучения в области биологической безопасности.

6. Расследование случаев возможного попадания потенциально инфекционных или токсичных материалов за пределы лаборатории и отчет об обнаруженных фактах с соответствующими рекомендациями руководителю лаборатории и совету по биологической безопасности.

7. Координация действий с медицинским персоналом по поводу возможных приобретенных в лаборатории инфекций.

8. Обеспечение надлежащей деконтаминации в случаях разлития инфекционных материалов или других происшествий с ними.

9. Обеспечение надлежащего обращения с отходами.

10. Обеспечение надлежащей дезинфекции всех приборов перед их ремонтом или техническим обслуживанием.

11. Постоянная осведомленность о позиции коллектива в отношении охраны здоровья и окружающей среды.

12. Разработка надлежащей методики импорта/экспорта патогенных материалов в лабораторию/из лаборатории в соответствии с установленными национальными правилами.

13. Изучение аспектов биологической безопасности всех планов, протоколов и оперативной методики проведения научных исследований с использованием инфекционных материалов до их осуществления.

14. Разработка системы действий в критических ситуациях.

Совет по биологической безопасности Необходимо создать совет по биологической безопасности для разработки политики и практических правил в области биологической безопасности. Совет по биологической безопасности должен также изучать протоколы научных исследований с использованием инфекционных материалов, животных, рекомбинантной ДНК и генетически модифицированных материалов. В задачи совета может также входить проведение оценок риска, разработка новых методик обеспечения безопасности и арбитражные разбирательства конфликтов по вопросам безопасности.

В состав совета по биологической безопасности должны входить сотрудники из разных отделов организации, а также научные работники. Ядро совета по биологической безопасности могут составлять:

1. Ответственный (ответственные) за биологическую безопасность 2. Ученые 3. Медицинские работники 4. Ветеринар (ветеринары) (если в исследованиях используются животные) 5. Представители технического персонала 6. Представители администрации лаборатории.

Совет по биологической безопасности должен консультироваться с ответственными за технику безопасности различных отделов и другими специалистами (например, со специалистами в области защиты от излучений, промышленной безопасности,

19. ОТВЕТСТВЕННЫЙ ЗА БИОЛОГИЧЕСКУЮ БЕЗОПАСНОСТЬ И СОВЕТ ПО

БИОЛОГИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ

профилактики пожаров и т.п.) и может периодически обращаться за помощью к независимым экспертам в различных областях, местным властям и государственным органам регулирования. К обсуждениям особо спорных и сложных протоколов исследований могут привлекаться и другие специалисты.

20. Безопасность вспомогательного персонала Безопасная и эффективная работа лаборатории во многом зависит от вспомогательного персонала, поэтому необходимо, чтобы такой персонал прошел надлежащее обучение технике безопасности.

Инженерные и эксплуатационные службы Квалифицированные инженеры и рабочие, осуществляющие техническую эксплуатацию и ремонт помещений и оборудования, должны обладать определенными знаниями о характере проводимых в лаборатории исследований и правилах и методах соблюдения безопасности.

Испытание оборудования после его технического обслуживания, например, проверка эффективности боксов биологической безопасности после замены фильтров, может проводиться ответственным за биологическую безопасность или под его наблюдением.

Лаборатории и институты, не имеющие собственных инженерных и эксплуатационных служб, должны установить контакты с местными техническими службами и ознакомить их с оборудованием и работой лаборатории.

Работники инженерных и эксплуатационных служб могут допускаться в лаборатории третьего и четвертого уровней биологической безопасности только с разрешения и под наблюдением ответственного за биологическую безопасность и/или руководителя лаборатории.

Уборочные службы (бытовое обслуживание) Уборка лабораторий третьего и четвертого уровней биологической безопасности должна проводиться персоналом лабораторий. Работники уборочных служб могут допускаться в лаборатории третьего и четвертого уровней биологической безопасности только с разрешения и под наблюдением ответственного за биологическую безопасность и/или руководителя лаборатории.

21. Программы обучения Необходимо иметь постоянно действующую программу обучения технике безопасности для того, чтобы лабораторный и вспомогательный персонал был все время осведомлен о безопасных методах работы. Ведущую роль в обучении персонала играют руководители лабораторий при содействии ответственных за биологическую безопасность и других специалистов. Эффективность обучения в области биологической безопасности, да и всего обучения в области безопасности и охраны здоровья, зависит от обязательств, принятых администрацией, мотивационных факторов, надлежащего первичного курса обучения на работе, надлежащих средств связи и, в конечном счете, от целей и задач организации. Основными элементами эффективной программы обучения в области биологической безопасности являются:

1. Оценка потребностей. Этот процесс включает определение поставленных задач, их приоритетности (с точки зрения частоты, важности, сложности их выполнения), а также детализацию мер, которые необходимо принять для решения этих задач.

2. Постановка целей обучения. Это определенные действия, которые должен продемонстрировать обучаемый на работе после обучения. При постановке целей можно учитывать условия, при которых совершаются определенные действия, и требуемый уровень квалификации.

3. Определение содержания и средств обучения. Содержание обучения – это те знания или навыки, которые должен приобрести обучаемый для того, чтобы суметь выполнить поставленные цели. Содержание программы обучения в области биологической безопасности обычно определяется по отношению к тем сотрудникам, которые лучше других знают работу и предъявляемые к ней требования. Другие применяемые подходы могут фокусироваться на результатах упражнений по решению той или иной проблемы или на исправлении ошибок, которые совершили работники при осваивании какого-либо навыка. Нельзя сказать, что какой-либо один метод обучения (лекции, обучение по телевидению, обучение с помощью компьютера, интерактивное видеообучение и т.п.) является главным. Многое зависит от конкретных потребностей, состава учебной группы и т.д.

4. Учет индивидуальных способностей к обучению. Чтобы обучение было эффективным, необходимо учитывать характерные особенности и отличительные черты обучаемых. Отдельные лица и группы обучаемых могут отличаться своими способностями, уровнем образования, культуры и развития разговорного языка, а также уровнем профессионализма до обучения. При выборе подхода к обучению можно учитывать и то, как обучаемые представляют программу обучения с точки зрения улучшения рабочего процесса и личной безопасности. Некоторые обучаемые лучше усваивают учебный материал визуально и на практике; другие же лучше овладевают учебным материалом, представленным в письменной форме. Необходимо также учитывать любые особые потребности работников, например, адаптировать курс обучения для работников с проблеПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ

БЕЗОПАСНОСТИ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

мами слуха. Кроме учета всех этих элементов, составителям программ обучения в области безопасности рекомендуется ознакомиться с основами обучения взрослых людей.

5. Определение условий обучения. Форма обучения (например, учебный курс, видеофильм, письменный материал) не должна противоречить или препятствовать совершенствованию профессиональных навыков или изучаемой теме, наоборот, они должны быть взаимосвязанными. Например, если целью обучения является развитие способностей по применению той или иной методики решения проблемы, то подход должен основываться, в основном, на процессах обдумывания и обоснования, а не просто на механическом запоминании. Обучение должно ориентироваться на продуктивные действия и/или надлежащую обратную связь (позитивную/точную/надежную). Кроме того, формы обучения, при которых предоставляется возможность практики в условиях, близких к рабочим, повышают умение пользоваться полученными навыками во время настоящей работы.

6. Оценка обучения. Она предоставляет информацию, которая позволяет определить, была ли достигнута цель обучения. Оценка обучения обычно проводится по четырем направлениям:

— оценка реакции обучаемых на проведенный курс обучения — оценка запоминания обучаемыми пройденного материала и/или — выполнения соответствующих действий — оценка изменения поведения на работе — оценка ощутимых результатов с точки зрения целей и задач организации.