ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ

УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

«МОСКОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ

МЕДИЦИНЫ И БИОТЕХНОЛОГИИ ИМЕНИ К.И. СКРЯБИНА»

На правах рукописи

ЛАЗУТИНА

Руслана Рафаилевна

ПРИМЕНЕНИЕ НЕСТЕРОИДНЫХ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ

ПРЕПАРАТОВ ПРИ ЛЕЧЕНИИ СОБАК С АСЕПТИЧЕСКИМ СИНОВИТОМ

КОЛЕННОГО СУСТАВА

(экспериментальное исследование) 06.02.04- ветеринарная хирургия

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель:

Почетный работник высшей школы РФ, доктор ветеринарных наук, доцент Борисов М.С.

Москва-

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………………………

ГЛАВА 1. НЕСТЕРОИДНЫЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ

ПРЕПАРАТЫ. АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР

ЛИТЕРАТУРЫ…………………… 1.1.Нестероидные противовоспалительные препараты. Классификация... 1.2. Механизм действия нестероидных противовоспалительных препаратов………………………..……………………………………………………………… 1.3. Фармакокинетика нестероидных противовоспалительных препаратов……………………………………………………………………………………….. 1.4. Побочные эффекты нестероидных противовоспалительных препаратов………………………………….……………………………………………………. 1.5. Клиническое использование нестероидных противовоспалительных препаратов………………………………..……………………………………………

ГЛАВА 2. ХАРАКТЕРИСТИКА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО МАТЕРИАЛА

И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ…………………………….……………….. 2.1. Методика моделирования острого асептического синовита коленного сустава у собак………………………………………………………………………... 2.2. Методика клинического исследования крови………………………………. 2.3. Методика исследования биохимического состава сыворотки крови… 2.4. Методика исследования синовиальной жидкости сустава……………. 2.5. Методика определения белка в синовиальной жидкости………………. 2.6. Методика бактериологического исследования синовиальной жидкости……………………………………………………………………………………….. 2.7. Методика рентгенографии коленного сустава у собак………………….

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ

ИССЛЕДОВАНИЙ……………………………………………………………... 3.1. Эффективности применения димексида и новокаиновых блокад у собак контрольной группы…….……………………………………………………………. 3.2. Эффективность применения препарата кетофен у собак первой опытной группы………………………………………………………………………. 3.3. Эффективность применения препарата римадил у собак второй опытной группы………………………………………………………………………. 3.4. Эффективность применения препарата кетофен в сочетании с лигфолом у собак третьей опытной группы………………………………………….... 3.5. Эффективность применения препарата римадил в сочетании с лигфолом у собак четвертой опытной группы………………………………………… ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ………………………….. ЗАКЛЮЧЕНИЕ……………………………………………………………………….. ВЫВОДЫ……………………………………………………………………………….. ПРИЛОЖЕНИЕ……………………………………………………………………..…

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ

ЛИТЕРАТУРЫ…………………………………………………………………………… ……………

ВВЕДЕНИЕ

В последние годы заболевания суставов у собак получили значительное распространение. Их причины различны: механические, физические, химические, многочисленные биологические факторы (специфические и неспецифические возбудители микробного, вирусного, грибкового характера); нарушение обменных процессов, связанные с кормлением и содержанием животных; генетическая предрасположенность и, наконец, аллергические воздействия, возникающие как под влиянием указанных причин, так и вследствие аутоиммунизации организма продуктами воспаления. Этим объясняется широкий интерес ветеринарных врачей к методам диагностики, лечения и профилактики данной патологии.

По данным литературы известно, что болезни суставов и конечностей у животных в целом составляют до 30% от числа всех незаразных болезней, а по отдельным регионам страны до 40%, среди собак этот показатель составляет 10-15%. А по данным московского региона заболевания костносуставной системы составляют 30%. Степень распространения заболеваний суставов увеличивается с возрастом; 95% всех случаев приходится на собак старше 5 лет и более 50%- старше 10 лет. Почти половина случаев артритов встречается у собак крупных пород, особенно часто у немецких овчарок, ротвейлеров, лабрадоров и др. [125,141].

Одним их основных диагностических и прогностических критериев при суставной патологии является исследование синовиальной жидкости.

Синовия в здоровых суставах образуется и постоянно пополняется за счет веществ, транссудирующих из крови, и активной секреции клеток покровного слоя синовиальной оболочки. В процессе транссудации в синовиальную жидкость поступают вода, электролиты, протеины и другие вещества. Интенсивность этих процессов обеспечивается структурными особенностями покровного слоя синовиальной оболочки, т.е. синовиоцитами, являющимися источником образования синовиальной жидкости.

В широко известной работе В.Н. Павловой [47] и других исследователей биохимически и радиоавтографически показана возможность синтеза в синовиоцитах гиалуроната из его предшественников, накопление меченного глюкозамина в зоне аппарата Гольджи, транспортирование гранул к поверхности клетки и поступление в суставную щель.

Актуальность темы.

К настоящему времени в научной литературе представлено большое количество работ, посвященных всестороннему изучению суставной патологии животных, однако подавляющее большинство данных исследований освещают главным образом вопросы этиологии, патогенеза и лечения заболеваний, связанных со связочным аппаратом и суставным хрящом: Шитов С.Т.

[63], Дедух Н.В. [14], Шабалаев И.В [61], Самошкин И.Б. [51,52], Слесаренко Н.А. [51,56], Сomerfold E.J. [90] и другие. При этом исследования синовиальной жидкости суставов животных отражены в немногочисленных работах Павловой В.Н. [47], Березкина А.Г. [4], Борисова М.С. [6,7,8] и требуют дальнейшего всестороннего изучения.

Наиболее широко распространенными лекарственными средствами, применяемыми в клинической практике при лечении животных с заболеваниями суставов, являются нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) [62]. Частота их применения определяется тем, что они трудно заменимы при многих заболеваниях, сопровождающихся воспалением, болями и лихорадкой. Эти препараты широко применяются, прежде всего, при воспалительных и дегенеративных заболеваниях суставов и позвоночника (ревматоидный артрит, остеоартроз, межпозвонковый остеохондроз, деформирующий спондилез и т.д.), однако, в последнее время область применения нестероидных противовоспалительных препаратов существенно расширилась, их стали использовать при аутоиммунных заболеваниях собак [33].

Однако, несмотря на несомненную клиническую эффективность, применение нестероидных противовоспалительных препаратов имеет свои ограничения. Это связано с тем, что даже кратковременный прием данных средств в небольших дозах может приводить к развитию побочных эффектов, которые в среднем встречаются примерно в 25% случаев. Поэтому в последние годы особое внимание привлечено к проблеме безопасного применения данных средств [79].

Класс нестероидных противовоспалительных препаратов включает в себя большое количество средств, которые имеют как общие, так и отличительные черты. Они различаются по выраженности анальгетической и антивоспалительной активности, спектру нежелательных осложнений, путям введения и ингибированию циклооксигеназы (ЦОГ)[209]. Большая часть этих препаратов предназначена для гуманной медицины и лишь в последние годы в лечебной практике активно начинают применять НПВП, разработанные специально для ветеринарии. Однако данные, имеющиеся в доступной литературе об эффективности и безопасности применения данных средств у животных противоречивы.

Учитывая вышесказанное, разработка и научное обоснование применения нестероидных противовоспалительных препаратов при суставной патологии и коррекция возможных осложнений является актуальной проблемой в ветеринарной медицине.

Цель исследования: экспериментальное обоснование эффективности применения нестероидных противовоспалительных препаратов последнего поколения при лечении собак с острым асептическим синовитом коленного сустава.

Для реализации цели были поставлены следующие задачи:

1. Установить эффективность применения римадила и кетофена при лечении собак с острым асептическим синовитом коленного сустава;

2. Изучить динамику морфологических и физико-химических показателей синовиальной жидкости у собак при лечении нестероидными противовоспалительными препаратами;

3. Выявить возможные осложнения при кратковременном применении данных препаратов на основании клинических данных, морфологических и биохимических показателей крови;

4. Подтвердить целесообразность применения препарата лигфол для профилактики осложнений при использовании кетофена и римадила;

5. Разработать наиболее эффективный и безопасный метод консервативного лечения собак с острым асептическим синовитом коленного сустава нестероидными противовоспалительными препаратами.

Научная новизна. Впервые изучена динамика цитоморфологического и физико-химического состава синовиальной жидкости при использовании нестероидных противовоспалительных препаратов у собак с острым асептическим синовитом коленного сустава. Выявлено преимущество лечения асептического синовита нестероидными противовоспалительными препаратами кетофен и римадил в сравнении с традиционным методом, определены более ранние сроки восстановления функции конечности. Установлено отрицательное действие кетофена и римадила на гематологические показатели.

Предложен комплексный метод лечения острых асептических воспалительных процессов суставов: сочетанное применение нестероидных противовоспалительных средств и препарата лигфол.

Теоретическая и практическая значимость работы. Определена сравнительная эффективность применения кетофена и римадила в эксперименте при остром асептическом воспалении коленного сустава у собак.

Показано преимущество применения нестероидных противовоспалительных препаратов при остром асептическом синовите с более быстрым восстановлением функций пораженного сустава животного по сравнению с традиционным методом лечения.

Изучены закономерности влияния кетофена и римадила на морфологический состав крови собак при применении нестероидных противовоспалительных препаратов: отмечено умеренное снижение показателей гемоглобина, эритроцитов и тромбоцитов у всех экспериментальных животных.

Разработанные схемы лечения собак с использованием нестероидных противовоспалительных средств в сочетании с лекарственным препаратом лигфол успешно применяются в ряде ветеринарных клиник г. Москвы и Московской области, а также используются при прочтении лекций студентам старших курсов (Приложение 1,2,3,4).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Клинико-морфологические показатели синовиальной жидкости и показатели крови при патологии суставов, как оценка эффективности применения нестероидных противовоспалительных препаратов.

2. Клинические и биохимические показатели крови, как контроль влияния нестероидных противовоспалительных препаратов на гомеостаз организма собак.

3. Осложнения при применении кетофена и римадила, их коррекция при помощи препарата лигфол.

4. Методика сочетанного применения НПВП кетопрофен и карпрофен с препаратом лигфол при лечении заболеваний суставов, сроки реабилитации и восстановления функции конечности у собак.

Апробация и публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 6 работ, из них 4 в изданиях, входящих в перечень ВАК РФ, основные положения которых были доложены и обсуждены на Всероссийской конференции «Ветеринарная медицина – теория, практика и обучение» (Санкт-Петербург, 2007) и на I Всероссийской межвузовской конференции по ветеринарной хирургии (Москва, 2010).

ГЛАВА 1. НЕСТЕРОИДНЫЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ

ПРЕПАРАТЫ. АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Нестероидные противовоспалительные препараты. Классификация Нестероидные противовоспалительные средства (НПВС) – большая, химически гетерогенная группа лекарственных средств, обладающих сходными механизмом действия и фармакологическими эффектами. НПВС относятся к числу наиболее часто используемых лекарственных препаратов в мировой лечебной практике [12, 13, 21, 32, 34, 35, 36].

История применения противовоспалительных средств уходит в древность. Как написано в египетских папирусах, в XV веке до н.э. для облегчения ревматических болей и лечения различных воспалительных заболеваний использовали вытяжки из растений, содержащих салициловую кислоту (мирт, листья ивы, мелиссы). В 1899 г. на немецкой фирме Байер химиком Феликсом Хоффманом был синтезирован аспирин (ацетилсалициловая кислота), который стал первым из группы нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП) [194]. Широкое применение НПВС определяется уникальным сочетанием противовоспалительных, анальгетических, жаропонижающих и антитромбических свойств, перекрывающих почти весь спектр основных симптомов, наиболее характерных для заболеваний ревматической природы. Такого одновременного сочетания положительных эффектов не наблюдается ни у одного из известных в медицине лекарственных средств. Нестероидные противовоспалительные средства вызывают меньше системных побочных эффектов, чем кортикостероиды. Основными показаниями для их назначения являются воспалительные процессы различного генеза, боль, лихорадка, заболевания соединительной ткани [205]. На сегодняшний день имеется большой арсенал НПВС (более 80), различных по химической структуре (таблица 1) [5, 35, 36, 64, 68]. В практической медицине используют для лечения более 100 созданных на их основе одно- и многокомпонентных готовых лекарственных форм (таблетки, капсулы, свечи, растворы для инъекций, кремы, гели, мази и т.д.).

Классификация нестероидных противовоспалительных препаратов по химической структуре (Насонов Е.Л., 1999) Производные салициловой кислоты: бенорилат («Бенорал») Производные N-антраниловой кисло- меклофенамовая кислотая («Меклоты (фенаматы): мет») Производные арилуксусной кислоты: фенклофенак («Фленак»**) Производные гетероарилуксусной зомепирак («Зомакс»**) Производные индол/инден уксусные «Осмогит», «Амуно Гитс») Производные арилпропионовой ки- ведапрофен («Квадрисол»*) * - НПВП специально разработанные для животных;

** - НПВП изъятые в промышленно развитых странах.

1.2. Механизм действия нестероидных противовоспалительных препаратов В 1971 г. группа исследователей из Великобритании во главе с J. Vane выдвинули гипотезу, что механизм действия аспирина и ему подобных препаратов заключается в ингибировании циклооксигенезы (ЦОГ) – ключевого фермента метаболизма арахидоновой кислоты [40,46,121,145,163,174,195].

Арахидоновая кислота, образующаяся из мембранных фосфолипидов под действием фосфолипазы А2, с одной стороны, является источником медиаторов воспаления (противовоспалительных простагландинов и лейкотриенов), а с другой стороны, из нее синтезируется ряд веществ, участвующих в физиологических процессах организма (простациклин I2, тромбоксан А2, гастропротекторные и вазодилатирующие простагландины и др.). Механизм арахидоновой кислоты идет по двум путям – циклооксигеназному (с образованием простагландинов, простациклина I2, тромбоксан А2) и липооксигеназному (с образованием лейкотриенов) [104,144] (рис. 1).

НПВП PGН PGF PGI TXA Рис. 1. Механизм действия НПВП (Lees P., May S.A., McKellar Q.A., 1991) Простагландины (ПГ) являются главными медиаторами воспаления благодаря наличию широкого спектра биологических эффектов [205]. ПГ (PGE2,PGD2,PGI2) вызывают дилатацию артериол, но не сказываются напрямую на сосудистую проницаемость. Тем временем, действие медиаторов, подобных гистамину и брадикинину, которые усиливают сосудистую проницаемость, улучшается через сосудорасширяющий ПГ - это важный пример совместного действия воспалительных медиаторов. Медиаторы, лежащие в основе клеточных миграций – лейкотриены В4, фактор тромбоцитарной активности (FAP или PAF) и цитокины, например, интерлейкин-1. Медиаторы, вызывающие боль состоят из гистамина и брадикинина, действие этих медиаторов на ноцицепторы значительно улучшаются через сенсибилизацию ПГ, PGE2,PGD2,PGI2. Таким образом, признаки воспаления возникают из-за действий и комплексных взаимодействий между воспалительными медиаторами [94].

Особенно большой прогресс в расшифровке механизмов противовоспалительной активности и природы побочных эффектов НПВП был достигнут в начале 90-х годов.

Во-первых, было установлено, что циклооксигеназа является бифункциональным, связанным с мембраной гемопротеином, располагающимся в эндоплазматическом ретикулуме вблизи места высвобождения арахидоновой кислоты из мембранных фосфолипидов. Циклооксигеназа имеет двойную каталитическую активность: катализирует окисление арахидоновой кислоты в простагландин G2, а за счет своей пероксидазной активности конвертирует ПГG2 и ПГН2, который является предшественником всех типов простагландинов и тромбоксана [35, 36, 103].

Во-вторых, появились новые факты, позволившие рассматривать ПГ как центральные паракринно/аутокринные медиаторы важнейших процессов, протекающих в организме человека: эмбриогенез, овуляция и беременность, костный метаболизм, рост и развитие клеток нервной системы, репарация тканей, функция почек и ЖКТ, тонус сосудов и свертывание крови, иммунный ответ и воспаление, клеточный апоптоз и др.

В-третьих, было открыто существование двух изоформ ЦОГ: структурного изофермента (ЦОГ-1) и индуцируемого изофермента (ЦОГ-2) [35,36,59,92,103,104,110, 111, 123, 157, 180, 182, 208, 209].

Хотя приблизительно 60% изоформ ЦОГ-1 и ЦОГ-2 являются гомологичными, с молекулярным весом 70 kD, они имеют сходные механизмы метаболизма арахидоновой кислоты и определенные различия [179]:

различные генетические последствия для каждой изоформы. Гены регулируются двумя независимыми системами, хотя ферментные реакции, катализируемые ими, идентичны;

место связывания ЦОГ-2 структурно на 25% больше, чем для ЦОГ-1, с вторичным местом связывания дополнительно к каталитическому центру. Это позволило создавать препараты, блокирующие активность ЦОГ-2 в концентрациях с минимальным эффектом на ЦОГ-1. Одно и то же вещество может действовать как ингибитор ЦОГ-2 в низкой концентрации и как конкурентный ингибитор ЦОГ-1 в высокой. Молекулярная основа для такого взаимодействия не вполне понятна;

ЦОГ-1 представлена в большинстве тканей, в условиях воспаления активность этой изоформы остается неизменной или с небольшим увеличением — в 2-4 раза. В меньших количествах ЦОГ-2 найдена в таких тканях, как мозг, кишечник, почки, яички, щитовидная и поджелудочная железы. При воспалении экспрессия ЦОГ-2 увеличивается в 20 и кроме арахидоновой кислоты, ЦОГ-2 способна участвовать в метаболизме других субстанций, таких как линолевая и линоленовая кислоты.

установлено, что ЦОГ-1 находится в основном в цитоплазме или связана с эндоплазматическим ретикулумом, тогда как ЦОГ-2 в больших количествах определяется в перинуклеарном пространстве.

Методами молекулярной биологии расшифрована трехмерная пространственная структура циклооксигеназы. Трехмерные структуры ЦОГ-1 и ЦОГсходны, но все же, имеют небольшие различия. Так, ЦОГ-2 имеет гидрофильный и гидрофобный карманы (каналы), в то время как в структуре ЦОГопределяется лишь гидрофобный карман (канал). Этот факт позволил разработать ряд относительно селективных (мелоксикам, нимесулид, набуметон) и высокоселективных (целекоксиб, рофекоксиб) ингибиторов ЦОГ- [88]. Молекулы этих лекарственных средств своей гидрофобной частью связываются с гидрофильным карманом (каналом), а гидрофильной частью – с гидрофобным карманом. Таким образом, они способны связываться лишь с ЦОГ-2, содержащей оба кармана (канала). Большинство других НПВС, взаимодействуя лишь с гидрофобным карманом, связываются как с ЦОГ-2, так и с ЦОГ-1. В верхней части гидрофобного канала присутствуют молекулы аминокислот тирозина в положении 385 и серина в положении 530. Необратимое ингибирование ЦОГ ацетилсалициловой кислоты связано с ацетилированием серина в положении 530 [75,103]. Установлено также, что связывающий участок ЦОГ-2 несколько шире, чем у ЦОГ-1, более «гибок» и имеет дополнительную боковую гидрофильную «полость» (карман, канал), формирование которой объясняют заменой крупной молекулы изолейцина в положении 523 и 434 в ЦОГ-1 на небольшую молекулу валина в ЦОГ-2, а также гистидина в положении 513 на аргинин [114]. Химическая структура некоторых НПВС, синтезированных в последние годы, более селективных в отношении ЦОГ-2 in vitro, отличается от структуры «традиционных» НПВС наличием ригидной боковой цепи, содержащей сульфоновую, сульфониловую или сульфонамидные группы [114].

Гипотеза селективности изоферментов ЦОГ способствовала созданию классификации блокаторов ЦОГ [22,103,150].

1. ЦОГ-1 - селективные ингибиторы (низкие дозы аспирина).

2. ЦОГ - неселективные блокаторы (большинство нестероидных противовоспалительных препаратов, включая используемые в ветеринарии:

карпрофен, кетопрофен, ведапрофен, флуниксин, толфенаминовая кислота [135,136,137,138,139]).

3. Преимущественные ЦОГ-2 - ингибиторы (мелоксикам и нимесулид, которые имеют меньшее количество побочных эффектов в сравнении со стандартными НПВП, но сохраняется риск развития их при использовании в высоких дозах).

4. Селективные ЦОГ-2 - ингибиторы (целекоксиб, рофекоксиб, валдекоксиб, парекоксиб, эторикоксиб).

Эта классификация базируется на данных биологических, биохимических, фармакологических и клинических исследований, среди которых важное место занимает характеристика функциональной активности НПВС в отношении изоформ ЦОГ in vivo и in vitro. При этом определяют дозу препарата, необходимую для 50% подавления (IC50) ЦОГ-1 и ЦОГ-2. Так, преимущественные ингибиторы ЦОГ-2 в некоторых системах in vitro подавляют ЦОГпримерно в 2-3 раза сильнее, чем ЦОГ-1. Однако, in vivo (при использовании метода цельной крови) в максимальной терапевтической концентрации (мелоксикам) в определенной степени ингибируют ЦОГ-1 [165]. К специфическим ингибиторам ЦОГ-2 относят препараты, которые в максимальной терапевтической концентрации не вызывают значительного подавления ЦОГа при исследовании in vitro подавляют ЦОГ-2 более чем в 100 раз активнее, чем ЦОГ-1. Современная концепция гласит, что ЦОГ-1 является конституциональной формой фермента, выполняющего важные физиологические функции в организме и ответственного за синтез простагландинов, простациклина I2 и тромбоксана А2.

ЦОГ-1 структурный фермент, постоянно присутствующий в клетках различных органов, регулирует продукцию простагландинов, участвующих в обеспечении нормальной функциональной активности клеток. ЦОГ-1 присутствует в тромбоцитах и необходима для синтеза тромбоксана А2. Фармакологическое ингибирование биосинтеза тромбоксана ведет к потере способности тромбоцитов к нормальной агрегации в ответ на многие, но не все стимулы [54,97]. Ацетилсалициловая кислота – единственная из НПВС – ингибирует ЦОГ-1 в тромбоцитах необратимо, в то время как другие нестероидные противовоспалительные препараты ингибируют активность циклооксигеназы-1 в тромбоцитах обратимо, и агрегационная функция тромбоцитов восстанавливается полностью в течение первых суток (диклофенак, ибупрофен, флурбипрофен, индометацин) – 4 (напроксен) суток после отмены препарата.

Активность ЦОГ-1 в эндотелиальных клетках ответственна за продукцию простациклина I2, который осуществляет контроль естественной физиологической цитопротекции (защиты клеток слизистой оболочки от действия повреждающих факторов) в слизистой оболочке желудка. Простагландины, синтезируемые при участии ЦОГ-1, обеспечивают защиту слизистой от повреждающего действия вводимых в желудок веществ, так же как от действия желудочного сока [13,201].

В почках простагландины синтезируются в основном в мозговом веществе, восходящем сегменте петли Генли и в корковом слое. Почечные простагландины осуществляют контроль следующих функций: общий почечный кровоток, распределение почечного кровотока между отделами почек, реабсорбция ионов натрия и воды, высвобождение ренина. Все эти функции (за исключением секреции ренина) являются ЦОГ-1 зависимыми [103]. Секреция ренина связана с активностью ЦОГ-2, так как её конституциональное присутствие в macula densa было показано иммуногистохимически, а активность зависит от снижения уровня ионов натрия [103].

ЦОГ-2 в норме присутствует в тканях в крайне низкой концентрации, но при развитии воспаления её уровень резко возрастает [59,112,116]. ЦОГ- является индуцируемой изоформой фермента, участвующего в синтезе противовоспалительных простагландинов. Существование ЦОГ-2 впервые предложили Needleman с соавторами (1990), которые продемонстрировали, что бактериальные липополисахариды увеличивают синтез простагландинов в моноцитах человека in vivo [104]. Это увеличение ингибировалось дексаметазоном, и было связано с синтезом de novo ЦОГ-2. Циклооксигеназа - стимулируется в мигрирующих и других клетках медиаторами воспаления цитокинами.

В последующем ЦОГ-2 была клонирована [130]. Полагают, что именно ЦОГ-2 принимает участие в продукции простагландинов, вовлеченных в процессы воспаления, мутагенеза, клеточной пролиферации и деструкции [35,36,104,114,130,152,179,180]. Действительно, мощными индукторами активности гена ЦОГ-2 являются интерлейкин-1, фактор некроза опухоли, эпидермальный фактор роста, и другие биологически активные вещества, которые являются противовоспалительными агентами [35,36,103,104,112].

ЦОГ-2 является индуцируемой формой, она экспрессируется макрофагами, синовиоцитами, фибробластами, гладкой мускулатурой сосудов, хондроцитами и эндотелиальными клетками после индуцирования их цитокинами или факторами роста и является ответственной за воспалительные процессы в организме [78,93,127,149,197,199].

В 1994 г. J. Vane сформулировал гипотезу, согласно которой противовоспалительное, анальгетическое и жаропонижающее действие НПВП связано с их способностью ингибировать ЦОГ-2, в то время как наиболее часто встречающиеся побочные эффекты (поражение ЖКТ, почек, нарушение агрегации тромбоцитов) связаны с подавлением активности ЦОГ-1 [198]. Это создало теоретические предпосылки для создания нового класса НПВП, обладающих способностью селективно ингибировать ЦОГ-2, применение которых может сделать лечение этими препаратами более безопасным [198].

Получены данные о том, что большинство НПВС в большей степени подавляют активность циклооксигеназы-1, чем ЦОГ-2 [33,34,97,113,119].

Открытие циклооксигеназы-2 определило новый подход к разработке новых нестероидных противовоспалительных средств. ЦОГ-2, в отличии от ЦОГ-1, индуцируется в мигрирующих клетках бактериальными липополисахаридами, цитокинами, факторами роста. Предполагается, что избирательное ингибирование ЦОГ-2 должно избирательно подавлять биосинтез простагландинов в очагах воспаления, при этом активность ЦОГ-1 не будет изменяться, и биосинтез простагландинов в других тканях, таких как желудочнокишечный тракт, почки не будут затронуты. Разработаны новые соединения, имеющие высокую избирательность по отношению к ЦОГ-2 [146]. Предполагалось, что внедрение таких препаратов позволит создать новые высокоэффективные НПВС, без повреждающего влияния на слизистую желудочнокишечного тракта. Из новой генерации НПВС одним из первых был препарат предшественник набуметон [3,35,36], а затем создан препарат этодалак, который в отличие от набуметона вводится в метаболически активной форме. В последующем на фармацевтическом рынке появился препарат мелоксикам [35,36,125,152]. По своей терапевтической активности эти препараты не уступают пироксикаму, напроксену, диклофенаку, но оказывают значительно менее выраженное воздействие на слизистую оболочку желудочнокишечного тракта [10,35,36,125,152].

В последние годы появились новые аспекты о роли ЦОГ-зависимого синтеза простагландинов в норме и патологии и ЦОГ-независимых механизмах эффективности и токсичности НПВС. Точка зрения о том, что ЦОГ- является «физиологическим», а ЦОГ-2 – «патологическим» ферментом, некоторыми авторами в настоящее время пересматривается [40,72,97]. Имеются данные о повышении проницаемости защитного барьера кишечника для макромолекул при длительном применении НПВС [28]. Полученные данные о физиологической роли ЦОГ-2 зависимого синтеза простагландинов в заживлении язв, «адаптивной цитопротекции» клеток желудочно-кишечного тракта к токсическим веществам и стрессу, регуляции овуляции, синтезе простациклина клетками эндотелия сосудов, репарации при переломах костей [32].

Применение специфических ингибиторов ЦОГ-2 при эффективности, сопоставимой с другими, в том числе, неселективными нестероидными противовоспалительными средствами, сопряжено с достоверно меньшей частотой развития желудочно-кишечных изъязвлений и кровотечений из язв [108].

В то же время, в обзоре кокрановской библиотеки показано, что применение рофекоксиба связано с большим риском развития сердечно-сосудистых заболеваний и нефатального инфаркта миокарда на фоне развития тромботических осложнений [108]. В связи с чем, препарат отозван с рынка США.

Вполне возможно, что развитие этого побочного эффекта характерно для всего класса коксибов – селективных ингибиторов ЦОГ-2.

Ранее предполагалось, что нестероидные противовоспалительные препараты, в том числе и специфические ингибиторы ЦОГ-2, могут замедлять прогрессирование болезни Альцгеймера, особенностью которой является воспалительная реакция в структурах головного мозга. Однако в более поздних клинических исследованиях [85] и систематических обзорах [188] данное подтверждение не подтвердилось.

В настоящее время признано, что НПВС выполняют большое разнообразие дополнительных действий на молекулярном и клеточном уровнях, хотя степень их участия в терапевтических эффектах неясна [144,195]. Ингибиция ЦОГ в каскаде арахидоновой кислоты, ингибиция действия ПГ на их рецепторы, ингибиция 5-липооксигеназы, которая действует на арахидоновую кислоту для образования лейкотриенов, ингибиция действия брадикинина, супрессия освобождения цитокинов, например интерлейкина-1, ингибиция освобождения лизосомальных и нелизосомальных ферментов, модуляция синтеза оксида азота, ингибиция нейтрофильной активности, угнетающей также освобождение свободных радикалов, например, гидроксил, и супероксидных радикалов и ферментов, например, -глюкоронидазы.

Недавно из тканей мозга собаки была выделена третья изоформа фермента циклооксигеназы – ЦОГ-3, после этого было предложено, что она является центральным медиатором болевых реакций. Далее было показано, что ЦОГ-3 является разновидностью ЦОГ-1 и ее фактическая функция до сих пор не ясна. Однако, существует предположение, что некоторые НПВП, давно существующие на рынке препаратов, такие как парацетамол, дипирон и изопирин являются селективными ингибиторами ЦОГ-3 [85,185]. Механизм анальгетического и антипиретического действия ацетаминофена (парацетамола) отличается от механизма действия НПВС. Считается, что ацетаминофен угнетает синтез простагландинов путем блокады ЦОГ непосредственно в гипоталамических центрах терморегуляции и боли. Слабая периферическая ЦОГ-ингибирующая активность позволяет объяснить отсутствие у ацетоминофена (который является простым анальгетиком), в отличие от НПВС, противовоспалительной активности, а также отсутствие антиагрегатного, токолитического эффектов, бронхоспазма и язвообразования. Ацетаминофен вызывает снижение концентрации метаболитов простагландинов в моче, но не ингибирует их синтез тромбоцитами и клетками слизистой оболочки желудка [85,113]. За границей введен новый класс НПВП - двойные ингибиторы (dual inhibitors), которые ингибируют два фермента, регулирующих биотрансформацию арахидоновой кислоты, ЦОГ и 5-липоксигеназу (5-LO). На данный момент лицензирование прошли два препарата: тепоксалин, используемый в ветеринарии и ликофелон, применяемый в медицине [66,99,107,128,159,193].

1.3. Фармакокинетика нестероидных противовоспалительных препаратов Большинство НПВС являются органическими малолипофильными кислотами (рКа=3,0 а 5,5). Отсюда, поглощение, начиная с желудка и тонкой кишки собак и кошек, улучшается посредством блокады ионов и их диффузии (желудочный сок и химус имеют значение рН низкие, которые для плазмы составляют 7,4). В случае, когда НПВС сильно связаны с плазматическими протеинами, переход в интерстициальную жидкость ограничен, и объем центрального отделения, как объем распределения имеют тенденцию быть слабыми. Имеются несколько исключений, например толкофеноменовая кислота, у телят, собак и поросят и флюниксин у телят имеют объемы распределения более высокие, действительно, кажется по причине желчной секреции и энтерогепатической рециркуляции. Фармакокинетика рециркуляции объединенной формы толкофеноменовой кислоты стала объектом изучения на собаках [166]. Благодаря ограниченному распределению НПВС аккумулируются в воспалительном экссудате, тогда как молекулы, связанные с плазматическим протеином минуют циркуляцию в то время, когда образуется отечная жидкость. Некоторые важные фармакокинетические свойства НПВС изложены в таблице 2 [143].

Фармакокинетические свойства НПВС (Lees.P, Landoni M.F., Giraudel J., Фармакокинетические свойства Значения У моногастричных видов желудочная абсорбция облегчена блокадой диффузии Биодоступность в общем более 70% и возмеханизм Хендерсона – Хасельбака) можное приближение к 100% вследствие присутствия кислой рН в желудке Хорошо и быстро абсорбируется, начиная Биодоступность может приближаться к римышечной Очень высокая степень связывания с плаз- 1.Объем распределения слабый – менее 0, Варианты, отмеченные по видам и периоду Данные периоды полувыведения не предполувыведения сказуемы и не являются видоспецифичными. Необходимо обосновывать различное Время полувыведения НПВС (в час) у лошадей (Landoni M.F., Lees P., 1996) Молекула Плазма (полувыведение) Воспалительный экссудат (полувыведение).

Все нестероидные противовоспалительные препараты – являются слабыми органическими кислотами, выделения которых через почки будет варьироваться, теоретически, в соответствии с рН мочи. Таким образом, щелочная моча жвачных животных и лошадей, будет способствовать ее захвату, и будет выделяться с мочой в ионизированной форме. Соответственно, кислая моча собак и кошек будет разрушать ионизацию, и неионизированные молекулы будут хорошо реабсорбироваться, начиная с почечных каналец (т.к. они растворимы в жире). Между тем, высокое содержание плазматических протеинов, связывающих большую часть НПВС, в первом случае сильно уменьшат их проход в клубочковый ультрафильтрат. Отсюда только маленькие количества могут быть выделены в мочу. У собак почечная недостаточность ассоциировалась с увеличением освобождения толфеноменовой кислоты и была высказана мысль, что почечная недостаточность могла увеличить печеночный метаболизм или изменить энтерогепатический цикл молекулы [143]. Опубликованные данные ограничены, вероятно, что большая часть НПВС метаболизирована на уровне печени в менее активный метаболит. Это предполагается главным механизмом уменьшения активности молекулы, к тому же генетическая изменчивость в зависимости от видов, от времени полувыведения (таблица 4) отражает изменения гепатической метаболитической способности в зависимости от видов. Все метаболиты НПВС не являются неактивными.

Периоды полувыведения НПВС(ч) (Lees.P, Landoni M.F., Giraudel J., Toutain %-эти лекарства вводятся в виде рацемической смеси (50\50), времена полувыведения различаются в зависимости от составляющих. S,R- энантомеры, RS=полувыведение для всего лекарства.

1.4. Побочные эффекты нестероидных противовоспалительных препаратов Существенными факторами, ограничивающими использование НПВП, являются их побочные эффекты [23]. Между 1984 и 1991 годами CNITV было проинформировано о 248 случаев острых отравлений домашних животных (собак, кошек, лошадей) [129], связанных с приемом НПВП [122].

Среди побочных эффектов можно выделить общие, характерные для данной группы, связанные с механизмом их действия и специфические, свойственные каждому конкретному препарату. Побочные действия НПВП подразделяются на гематологические, токсическое действие на желудочнокишечный тракт, печень, почки, центральную нервную систему, сердечнососудистую и дыхательные системы, тератогенные эффекты, эмбриотоксичность и аллергенные свойства [53,120]. Установлено, что наиболее частыми побочными эффектами для большинства НПВП являются их повреждающее действие на слизистую желудочно-кишечного тракта, которое может достигать 75% среди всех их побочных эффектов [1,62].

1.4.1.НПВП-гастропатии В настоящее время связь между приемом НПВП и повреждениями желудочно-кишечного тракта четко установлена [4,11,12,14,15,17,64,67,103, 115,167,169,187,201,210]. У пациентов с остеоартритом, принимающих НПВП, язвообразование отмечается в 15-20% случаев. Осложнения язвенной болезни (например, кровотечение и перфорация) гораздо чаще встречаются у пациентов, принимающих эти препараты, по сравнению с пациентами, не принимающими их. Суммарный риск поражения желудочно-кишечного тракта примерно в 3 раза выше, чем в контроле [77,80,102,117,160,162,171, 177,183,189,203].

НПВС, прерывая циклооксигеназный путь метаболизма арахидоновой кислоты, блокируют синтез простагландинов и нестабильных метаболитов не только в очагах воспаления, но и в других органах и тканях. В связи с этим развитие гастропатии рассматривается как одно из их системных проявлений побочного действия, обязательно присущего данным средствам. Угнетение ЦОГ-1 – основной патогенетический механизм развития НПВПиндуцированных гастро - и дуоденопатий [11,14,15,59,64].

Гастроэнтерологические побочные эффекты НПВП условно подразделяются на несколько основных категорий [43,147].

1. Симптоматические (диспепсия): тошнота, рвота, диарея, запоры, изжога, боли в эпигастральной области.

2. НПВП-гастропатия (NSAID-induced gastropathy): субэпителиальные геморрагии, эрозии и язвы желудка, реже – двенадцатиперстной кишки, выявляемые при эндоскопическом исследовании, и желудочно-кишечные кровотечения.

3. Энтеропатия и воспаление кишечника.

Современная концепция профилактик НПВП-гастропатии опирается на выделение пациентов с высоким риском осложнений со стороны желудочнокишечного тракта. Все они условно могут быть разделены на две большие группы. Первую составляют модифицируемые факторы риска: прием высоких доз НПВП или нескольких препаратов этой группы одновременно. Ко второй группе относятся пожилой возраст, язвенный анамнез, применение низких доз аспирина, антикоагулянтов, глюкокортикоидов [133,134,185].

Лечение гастродуоденальных эрозий и язв, вызванных приемом НПВП, предполагает их отмену, уменьшение дозы НПВП или замену препарата парацетамолом. Если отмена препарата нестероидного противовоспалительного средства по каким-либо причинам невозможна, противоязвенную терапию проводят на фоне продолжающегося приема НПВП, сроки заживления гастродуоденальных язв и эрозий в таких случаях увеличивается [2].Наиболее эффективными препаратами для лечения являются мизопростол (200 мкг 2- раза в сутки) и, вероятно, омепразол (20-40 мг/сут). Антагонисты Н2рецепторов можно использовать при рубцевании язвенного поражения двенадцатиперстной кишки и желудка (особенно при наличии инфекции Н.pylory), однако возможность применения этих препаратов (по крайней мере в стандартных дозах) для профилактики НПВП-индуцированных язв желудка в настоящее время не доказана[173].Ряд исследователей считают, что только ингибированием синтеза простагландинов в слизистой желудочнокишечного тракта нельзя объяснить гастротоксическое действие.

Ингибирование циклооксигеназы неизбежно влечет за собой избыточную продукцию лейкотриенов, активных констрикторов микрокапилляров и повышенное генерирование свободных радикалов вследствие повышенной активности 5-липооксигеназы, способствует углублению сосудистых нарушений и развитию локальной ишемии [126]. Показано, что ингибиторы 5липооксигеназы [151] и антагонисты 5-лейкотриенов при совместном введении с индометацином значительно снижали ульцерогенное действие индометацина у мышей [168]. Более десяти лет внимание исследователей сосредоточено на изыскании средств, способных избирательно тормозить липооксигеназный путь метаболизма арахидоновой кислоты. Изучаются представители различных классов соединений: частично насыщенные ароматические соединения, гидроксаматы, восстанавливающие агенты и другие [69]. Обсуждению эффективности различных препаратов посвящены обзоры [70,156].

Блокатор СуsLT1-рецепторов пептидолейкотриенов монтелукаст натрия оказывал профилактическое действие при повреждении слизистой желудка у крыс аспирином [25].

Вехой в понимании противовоспалительных эффектов стероидов стало установление ингибирующего их влияния на индукцию NO – синтетазы (синтетазы оксида азота (II)) – фермента, экспрессируемого в воспалительных клетках при их активации [96]. Этот эффект стероидов опосредуется через активацию их рецепторов и имеет место при низких концентрациях, достигаемых введением их в терапевтических дозах. Сила ингибирующего действия стероидов на индукцию NO – синтетазы коррелирует с их противовоспалительной активностью [158]. Этот механизм объясняет ряд сопутствующих эффектов глюкокортикоидов, в частности, провокацию язвообразования, способствование распространению инфекции [75,118,186]. В качестве представителей поколения НПВС, высвобождающих оксид азота, можно назвать нитрофенак (диклофенак, обогащенный донором NO) [63], NCX- (индометацин, освобождающий оксид азота) [132]. Дальнейшая разработка NO- высвобождающих НПВС позволит создать новые эффективные противовоспалительные средства без ульцерогенных свойств [61,95, 131,176, 202].

1.4.2.Нарушение функций почек К нарушениям функций почек, связанным с применением НПВП относятся: вазоконстрикция, снижающая скорость клубочковой фильтрации и увеличивающая содержание креатинина в крови; задержка натрия и увеличение объема циркулирующей крови; папиллярный некроз; гиперкалиемия;

гипонатриемия; острый аллергический интерстициальный нефрит, обусловленный использованием фенопрофена; острый канальцевый некроз при лечении фенилбутазоном; интерстициальный нефрит в ответ на применение аспирина и фенацетина; острая и хроническая почечная недостаточность [75,89,109].

ПГ играют важную роль в физиологической регуляции сосудистого тонуса и функции почек. Модулируя вазоконстрикторный и антинатрийуретический эффект ангиотензина II, они взаимодействуют с компонентами ренин-ангиотензиновой системы, обладают вазодилатирующей активностью в отношении сосудов почек (ПГЕ2 и простациклина), оказывают прямое натрийуретическое действие (ПГЕ2). Ингибируя системный и локальный (внутрипочечный) синтез ПГ, НПВП могут вызывать увеличение артериального давления не только у больных с артериальной гипертензией, но и у пациентов с нормальным артериальным давлением [98]. Риск НПВПиндуцированной АГ особенно высок у старых животных, длительно принимающих НПВП, с сопутствующими заболеваниями сердечно-сосудистой системы.

В последние годы определенное подтверждение получила точка зрения о том, что НПВП, более селективные в отношении ЦОГ-2, чем ЦОГ-1, не только в меньшей степени повреждают ЖКТ, но проявляют и меньшую нефротоксическую активность. Установлено, что именно ЦОГ-1 экспрессируется в атериолах, клубочках почки и собирательных канальцах. ЦОГ-1 – зависимый синтез ПГ играет важную роль в регуляции периферической сосудистой резистентности, почечного кровотока, клубочковой фильтрации, экскреции натрия, синтеза антидиуретического гормона и ренина. По данным Л.Е. Насонова, лечение препаратами, более селективными в отношении ЦОГ-2 (например, ибупрофен в низких и средних дозах), ассоциируется с меньшим риском АГ по сравнению с менее селективными препаратами (индометацин и пироксикам).

1.4.3.Другие побочные эффекты Гепатотоксичность. Клиренс нестероидных противовоспалительных препаратов осуществляется преимущественно путем печеночного метаболизма с образованием неактивных метаболитов, экскретируемых с мочой.

Некоторый подъем печеночных ферментов, особенно аминотрансфераз (АЛТ, АСТ), в определенной степени характерен при применении любого НПВС. Подобная реакция впервые была замечена при использовании аспирина у пациентов с системной красной волчанкой и ювенильным ревматоидным артритом. Случаи тяжелого идиосинкразического гепатита имели место при применении диклофенака, сулиндата и фенилбутазона. Отмечены случаи холестаза. Гепатотоксичность обычно выявляется в первые 6 месяцев лечения. Поэтому необходим контроль функций печени в течение первого месяца приема препарата и в дальнейшем - каждые 3 месяца. [170,190].

К прочим побочным эффектам относится снижение свертываемости крови, агранулоцитоз, арегенеративная и гемолитическая анемия, нарушение познавательной функции, сердечная недостаточность, эмбриотоксичность, возможность тератогенности.

1.5.Клиническое использование нестероидных противовоспалительных препаратов Основные показания для применения НПВП – острые и хронические заболевания различной природы и локализации, сопровождающиеся болью и воспалением.

Салицилат натрия – первое синтетическое НПВС, было применено клинически в медицине и ветеринарии около 150 лет назад. Появление ацетилсалициловой кислоты (аспирин) 100 лет назад, ознаменовало начало эры борьбы с болью и воспалением через применение НПВС. С того времени многочисленные действующие начала применялись в медицине человека и ветеринарии, например, фенилбутазон стал применяться с 60-х гг. И аспирин и фенилбутазон используются в ветеринарии до сих пор. Другие средства сейчас уже применяются в европейской ветеринарии домашних животных, включая кетопрофен, карпрофен, ведапрофен, меклофенаменовая кислота, толкофенаменовая кислота, флуниксин, мелоксикам, нимесулид, дипирон и рамифеназон, тепоксалин. За исключением нимесулида и новых молекул, НПВС являются по химическому строению карбоксиловыми или эноловыми кислотами. Терапевтическое применение НПВП [82,142,143,148,153,155] представлено в таблице 5.

Лечение заболеваний опорно-двигательной системы У собак и лошадей НПВП чаще всего применяют при заболеваниях опорно-двигательного аппарата (артрозы, артриты, травмы, вывихи, послеоперационные отеки, грыжи межпозвоночных дисков и т.д.). НПВП в основном назначаются старым животным, которые страдают артропатиями, в первую очередь с точки зрения того, что эта группа препаратов эффективно устраняют боль, которой сопровождаются данные заболевания (рисунок 2).

Фармакологическое действие и терапевтическое использование НПВС (Lees.P, Landoni M.F., Giraudel J., Toutain P.L., 2004) Фармакологическое действие Терапевтическое использование Противовоспалительное Уменьшение оэдемы и или инфильтрации Устранение сердечно-сосудистых и биохиАнтиэндотоксемическое мических изменений производимых бактериальными эндотоксинами Противораковое (антиканцерогенное) благодаря ингибиции ЦОГ-2 при раке ободочной кишки людей (кетофен, римадил) Рис. 2. Алгоритм лечения нестероидными противовоспалительными Существует мнение о дегенеративных изменениях хряща при лечении остеоартритов НПВП. Экспериментальные исследования показали, что некоторые НПВП, включая аспирин, ускоряют эрозию хряща. Другие НПВП не вызывают никакого побочного эффекта, а некоторые увеличивают скорость синтеза хрящевого матрикса (протеогликанов) хондроцитами или хрящевыми эксплантами в тканевой культуре. Это было показано в исследованиях in vitro на хрящевых эксплантатах собак [73,200] и лошадей [141], которые могут составлять основу действия хондропротекции in vivo. Однако подтверждение, что хрящевые эрозии уменьшаются у пациентов, страдающих остеоартритом, пока еще не получены. Повышенная нагрузка на сустав усиливает скорость развития эрозии, но умеренная нагрузка необходима для нормального функционирования хряща.

Нестероидные противовоспалительные препараты являются сильными анальгетиками при воспалительных артритах (таблица. 6). К тому же экспериментальные модели артрита у собак, сделанные в Adjuvant Complet de Freund, установили, используя значения ЕС50 для моделирования РК\РД для нимесулида (5 мг\кг per os), 2,72 и 6,26 g\ml для уменьшения температуры и контроля хромоты [76,192].

Преимущества НПВП для применения в ветеринарии (Lees.P, Landoni M.F., Обладают комбинацией анальгетических, противовоспалительных и антиперетических свойств.

Обычно хорошо переносят в рекомендуемых дозах.

Производят в основном терапевтические эффекты в течение 12-24 часов.

Следовательно, можно не вводить более 2-х доз в сутки.

Введение парентеральными и энтеральными путями.

В противовес кортикостероидам, не являются иммуносупрессорами и не замедляют заживление ран.

Немедленно аккумулируются в местах острых воспалений Антиатерогенные эффекты НПВП В последние годы получены данные о важной роли ЦОГ–2–зависимого воспаления в развитии и прогрессировании атеросклеротического поражения сосудов. Учитывая современную концепцию о воспалительной природе атеросклеротического поражения сосудов [172,191], это позволяет по–новому взглянуть на перспективы применения ингибиторов ЦОГ–2 в кардиологии.

Установлено, что в атеросклеротической бляшке (у человека и экспериментальных животных) наблюдается гиперэкспрессия ЦОГ–2, что ассоциируется с прогрессированием атеросклеротического поражения сосудов, а ингибиторы ЦОГ–2 тормозят этот процесс [68,71,81,86,171]. Высказано предположение, что подавление ЦОГ–2 зависимого воспалительного компонента атеросклеротического поражения сосудов приводит к улучшению функции эндотелия (например, за счет увеличения синтеза оксида азота и уменьшения окислительного стресса), способствует атеросклеротической стабилизации бляшки [86]. Действительно, по данным экспериментальных исследований, у мышей с дефицитом ЛНП–рецепторов, у которых на фоне приема продуктов питания с высоким содержанием жира развивается тяжелое атеросклеротическое поражение сосудов, введение индометацина и рофекоксиба тормозит прогрессирование атеросклероза [81]. Этот эффект наблюдался несмотря на подавление синтеза PGI2. Имеются данные, что ингибиторы ЦОГ–2 улучшают функцию миокарда при экспериментальном инфаркте миокарда [175].

Анальгетический эффект Контроль острой боли у животных очень важен. В течение последних лет, участилось использование нестероидных противовоспалительных средств в качестве анальгетиков при сильных болевых реакциях, связанных с травматизмом, некоторыми заболеваниями и хирургическими вмешательствами (таблица 7).

Заболевания, при которых НПВП проявляют анальгетический эффект (Lees.P, Landoni M.F., Giraudel J., Toutain P.L., 2004) Заболевания, провоцирующие интенсивную или умеренную боль Ортопедические заболевания, например, заживление переломов Восстановление сухожилий (связок), вывих коленной чашки Абдоминальная хирургия, разрыв диафрагмы Оральная и зубная хирургия Ушная хирургия Анальная хирургия Костные злокачественные опухоли Повреждения межпозвоночных дисков Панкреатит Отит Различные офтальмологические заболевания Недавние клинические исследования доказали, что НПВС, введенные в послеоперационный период могут являться мощными обезболивающими средствами, подобными опиоидам. В том числе НПВС действуют более долго и не вызывают побочных седативных эффектов, в отличие от 2антогонистов и опиоидов. Было выдвинуто мнение, что превентивная анальгезия, т.е. введение анальгетиков в качестве составляющего программы премедикации до общей анестезии, улучшает условия проведения хирургического вмешательства и предотвращает необходимость контролировать боль в послеоперационный период.

Подводя итог вышеизложенному, необходимо отметить, что нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) составляют неотъемлемую часть лекарственных средств, которые ежедневно используются ветеринарными специалистами в практической деятельности. Однако, препаратов, разработанных специально для животных гораздо меньше, чем спектр НПВП, используемых в медицине и, главным образом, они представлены ЦОГ-неселективными производными арилпропионовой кислоты (по химической структуре).

В литературе обнаруживаются лишь немногочисленные данные, касающиеся применения нестероидных противовоспалительных препаратов у животных, в частности у собак. В основном это сведения, описанные практикующими врачами, рассматривающие клинические случаи, а также исследования иностранных авторов, раскрывающие вопросы механизма действия, фармакокинетики и выявления побочных эффектов (главным образом, НПВП-гастропатий) при применении данных средств.

Наиболее широко используемыми ветеринарными НПВП в последние годы являются препараты кетофен (действующее вещество кетопрофен) и римадил (действующее вещество карпрофен). Вопрос о том, какой из этих препаратов наиболее эффективен и безопасен, остается долгое время открытым и является актуальным для практикующих специалистов. Поэтому несомненный интерес представляют исследования, посвященные выявлению лечебной эффективности данных препаратов, сравнивая их между собой и с другими средствами, используемыми при лечении суставной патологии у животных. Для изучения данных вопросов мы воспользовались экспериментальной моделью острого асептического синовита коленного сустава, воссозданной у собак. Параллельно часть исследований посветили изучению цитоморфологического состава синовиальной жидкости, и выявлению возможных побочных эффектов при терапии данными средствами и их медикаментозной коррекции.

ГЛАВА 2. ХАРАКТЕРИСТИКА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО МАТЕРИАЛА

И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проводились в условиях кафедры ветеринарной хирургии МГАВМиБ им. К.И. Скрябина и лабораторные исследования проводились на базе ветеринарной клиники «Астин», г.Балашиха в период с 2005 по 2009 г.

Материалом для экспериментальных исследований нами были определены 25 беспородных собак в возрасте от 1,5 до 4 лет, весом от 18 до 25 кг.

Содержание животных в стандартных клетках в стационаре кафедры ветеринарной хирургии, в котором имеется принудительная вентиляция, освещение естественное и электрическое. Микроклимат удовлетворительный. Моцион в пределах 1 часа утром и вечером. Кормление готовыми сухими сбалансированными кормами премиумкласса, норма рассчитывалась согласно весу животных. В 100 граммах сухого корма содержалось: белок 26%, жиры 14%, зола 6%, клетчатка 4%, влажность10%, кальций 1,05%, фосфор 0,83%, витамин А 12,941 lU/кг, витамин Д3 1,896 lU/кг, витамин Е 133 мг/кг, медь (сульфат меди)17,5 мг/кг, омега-6 >2,70%, омега-3 >0,45%.Доступ к воде неограничен.

Поение, раздача корма и уборка осуществлялась вручную.

Для проведения исследований нами были определены 5 групп собак.

Условия содержания и кормления в контрольной и опытных группах были одинаковы. Подбор групп животных проводили по принципу аналогов. Отбор собак для исследования проводили на основе полного обследования с анализом анамнестических, клинических и лабораторных данных. Все животные были клинически здоровы, физиологические и лабораторные показатели были в пределах нормы.

При проведении экспериментальной работы нами были использованы следующие методики: моделирование острого асептического синовита коленного сустава у собак, клинические и биохимические исследования крови, исследование синовиальной жидкости суставов (физические свойства, цитологический состав, определение белка и рН), рентгенологические, бактериологические и клинические исследования.

Исследования проводили на собаках, у которых экспериментально вызвали острый асептический синовит коленного сустава.

Первую опытную группу составили 5 собак, для лечения которых мы использовали нестероидный противовоспалительный препарат кетофен (действующее вещество кетопрофен). В первый день лечения мы проводили артроцентез и на протяжении 3-х первых суток применяли подкожные инъекции 1% раствора кетофена (из расчета 2 мг\кг массы тела 1 раз в сутки), далее использовали таблетированную форму кетофена (из расчета 1 мг\кг массы тела 1 раз в сутки) до клинического выздоровления.

Вторая опытная группа состояла из 5 собак, для лечения которых мы использовали нестероидный противовоспалительный препарат римадил (действующее вещество карпрофен). В первый день лечения проводили артроцентез, с интервалом 12 часов двукратно подкожно вводили раствор римадила (из расчета 4 мг/кг массы тела), далее использовали таблетированную форму римадила (из расчета 2 мг/кг массы тела 2 раза в день) до клинического выздоровления.

Для лечения животных третьей опытной группы (5 собак) применяли нестероидный противовоспалительный препарат кетофен. В первый день лечения производили артроцентез и на протяжении 3-х первых суток применяли подкожные инъекции 1% раствора кетофена (из расчета 2 мг\кг массы тела 1 раз в сутки), далее использовали таблетированную форму кетофена (из расчета 1 мг\кг массы тела 1 раз в сутки) до клинического выздоровления.

Одновременно мы применяли препарат лигфол внутримышечно 1 раз в день в дозе 1 мл на 1,2,5,7 сутки от начала лечения.

Четвертую опытную группу составили 5 собак, для лечения животных применяли нестероидный противовоспалительный препарат римадил. В первый день лечения проводили артроцентез, с интервалом 12 часов двукратно подкожно вводили раствор римадила (из расчета 4 мг/кг массы тела), далее использовали таблетированную форму римадила (из расчета 2 мг/кг массы тела 2 раза в день) до клинического выздоровления. Одновременно использовали препарат лигфол внутримышечно в дозе 1 мл на 1,2,5,7 сутки от начала лечения.

Контрольная группа состояла из 5 собак. Для лечения животных в первый день проводили артроцентез, применяли пара- и интраартикулярные блокады с 0,5%-ым раствором новокаина (одна инъекция в 3 дня), компрессы с димексидом (действующее вещество диметилсульфоксид) в разведении 1: с дистиллированной водой до клинического выздоровления.

2.1. Методика моделирования острого асептического синовита коленного Собак фиксировали в боковом лежачем положении таким образом, чтобы пунктируемый сустав находился сверху. В области введения иглы выбривали волосы, кожу обрабатывали 950 этиловым спиртом с дальнейшей двукратной обработкой 5% раствором йода.

Место инъекции пальпировали пальцем левой руки и проводили пункцию у медиального края связки коленной чашки примерно посередине между коленной чашкой и местом прикрепления к большеберцовой шероховатости.

При введении инъекционной иглы (20G) в бедроберцовый сустав из ее канюли начинала стекать синовиальная жидкость, из нормального сустава она была прозрачной, тягучей, дополнительно аспирировалась шприцом (рис. 3).

В полость сустава вводили скипидар однократно в дозе 0,4-0,5 мл, после чего проводили 5-6 пассивных движений конечностью (рис. 4). Ко 2- дню после введения раздражающего раствора у собак развивался острый асептический синовит коленного сустава (рис. 5,6).

Рис. 4. Введение скипидара в полость сустава Рис. 5. Коленный сустав до индуцирования патологического процесса Рис. 6. Коленный сустав на 3-й сутки после введения скипидара 2.2. Методика клинического исследования крови Для исследования забор крови у собак мы проводили из кончика ушной раковины до кормления. Предварительно место пункции тщательно выбривали, кожу обрабатывали 950 этиловым спиртом. Иглу вводили на глубину до 5 мм. Вторую и третью капли крови наносили непосредственно на обезжиренные предметные стекла, делали мазок. Мазки высушивали на воздухе.

Окраска мазков по Паппенгейму. На нефиксированный мазок наносили 1-2 мл готовой краски Май-Грюнвальда, представляющей собой раствор эозиновокислого метиленового синего (0,5мл) в метиловом спирте (100%) плюс чистый глицерин (50мл). По истечении 3 мин. к краске добавляли равное количество дистиллированной воды и продолжали окрашивать еще 1-2 мин.

После этого краску смывали и мазок докрашивали свежеприготовленным раствором краски Романовского-Гимза в течение 10-15 мин.

Подсчет цитограмм крови проводили при помощи светового микроскопа «Биолам» под иммерсионным объективом х90 и окуляром х10. Для подсчета лейкоцитов использовали 11-клавишный счетчик.

Определение содержания гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов проводили с помощью автоматического гематологического анализатора Abacus (Junior Vet).

Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) по способу Панченкова. Аппарат Панченкова состоит из деревянного штатива, специально градуированных капиллярных пипеток, имеющих просвет 1 мм и длину мм. Каждый капилляр градуирован от 9 до 100 делений, на уровне нулевой точки нанесена метка К (кровь), а на уровне цифры 50 – метка Р – реактив.

Для постановки СОЭ в капилляр набирали 5%-ый раствор лимоннокислого натрия до отметки Р и выдували на часовое стекло. В этот же капилляр набирали кровь 2 раза до отметки К и также выдували. Стеклянной палочкой перемешивали кровь с антикоагулянтом, набирали капиллярной пипеткой до отметки нуль и ее устанавливали в штатив. СОЭ учитывали через 1 час [50].

2.3. Методика исследования биохимического состава сыворотки крови Для исследования забор крови у собак проводили из подкожной вены грудной конечности. Вену пережимали резиновой трубкой, туго наложенной проксимально по отношению к локтевому суставу. Волос в месте пункции выбривали, кожу обрабатывали 950 этиловым спиртом и 5% раствором йода.

Захватывали конечность каудально таким образом, чтобы вена в месте прокола находилась между большим и указательным пальцем. После прокола кожи и фасций иглу вводили в просвет вены на 1-2 см. Кровь набирали в специальные одноразовые пробирки. Получали сыворотку, которую подвергали дальнейшему исследованию на биохимическом анализаторе Рефлотрон Плюс (Reflotron Plus) Roche Diagnostics.

2.4. Методика исследования синовиальной жидкости сустава Синовиальную жидкость мы получали путем пункции бедроберцового сустава с соблюдением правил асептики и антисептики.

В нормальную синовиальную жидкость добавляли 1-2 капли лидазы для растворения гиалуроновой кислоты, аккуратно взбалтывали пробирку, далее центрифугировали 2-3 минуты (700-800 об/мин). Полученный осадок наносили на обезжиренное предметное стекло, затем другим стеклом распределяли ровным слоем и высушивали на воздухе. В период острого воспаления тканей сустава синовиальный экссудат дополнительно не подготавливали, а сразу же наносили каплю экссудата на обезжиренное предметное стекло и готовили мазок.

Цитологический состав клеточных элементов в мазках синовиальной жидкости определяли так же, как и в мазках крови. На чистые обезжиренные стекла наносили 1 каплю синовиальной жидкости, затем другим стеклом распределяли ровным тонким слоем и высушивали на воздухе. Мазок окрашивали по Паппенгейму.

Подсчитывали количество лейкоцитов и эритроцитов в синовиальной жидкости следующим образом. Синовиальную жидкость из сустава набирали в два смесителя (для лейкоцитов и эритроцитов) до метки 0,5, затем в смеситель для лейкоцитов набирали жидкость Тюрка до метки 11, а в смеситель для эритроцитов 1% раствор хлорида натрия до метки 101 и осторожно переворачивали смесители в течение 2-3 минут. Определение количества лейкоцитов и эритроцитов проводили по методике А.И. Гладштейн. Подсчет лейкоцитов и эритроцитов осуществляли в камере Горяева в 100 больших квадратах. Полученное число умножали на 50, что указывало на количество клеток в 1 мм3.

Методика исследования рН среды синовиальной жидкости.

рН синовиальной жидкости собак определяли сразу после ее забора, используя портативный рН-метр-милливольтметр рН-410.

2.5. Методика определения белка в синовиальной жидкости (биуретовый метод) Метод основан на образовании в щелочной среде окрашенных комплексных соединений меди при взаимодействии пептидных группировок молекул белков с биуретовым реактивом. Интенсивность окраски образовавшихся продуктов прямо пропорциональна концентрации общего белка, измеряемой при 540 (500-560) нм.

Расчет концентрации белка проводили по следующей формуле:

С=(Еon/Ek)*60, где: С-концентрация белка, г/л;

Еon – оптическая плотность анализируемой пробы;

Ek – оптическая плотность калибровочной пробы;

60 – концентрация белка в калибровочном растворе.

2.6. Методика бактериологического исследования синовиальной жидкости Данное исследование проводилось с целью подтверждения асептического течения воспалительного процесса в суставе после вызывания экспериментального синовита коленного сустава у собак. Пунктат, забранный из полости сустава с соблюдением правил асептики и антисептики помещали в стерильную пробирку. Содержимое наносили на предметное стекло, окрашивали по Грамму, помещали в пробирки с мясо-пептоновым бульоном (МПБ) и производили посев на скошенный мясо-пептоновый агар (МПА). Пробирки помещали в термостат на 24 часа при температуре 370С, по истечению данного срока мы проводили визуальную оценку.

2.7. Методика рентгенографии коленного сустава у собак Рентгенографию суставов проводили в клинике кафедры ветеринарной хирургии МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, при этом использовали рентгеновский аппарат Siemens. У животных снимки проводили в двух проекциях – боковой и прямой в норме, при остром воспалении и в период клинического выздоровления.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ

ИССЛЕДОВАНИЙ

Выполняя поставленные задачи, нами была проведена серия опытов на беспородных собаках возрастом от 1,5 до 4 лет, весом от 18 до 25 кг, хорошей упитанности, правильным телосложением. Всего в опытах находилось 25 собак, из которых было сформировано 5 групп. Животным была воссоздана модель острого асептического синовита коленного сустава и применялись различные методы лечения с использованием традиционного способа лечения в качестве контроля (компрессы димексида, новокаиновые блокады), и с применением нестероидных противовоспалительных препаратов кетофен, римадил и препарата лигфол.

Полученные данные эксперимента затем были подвергнуты анализу и обобщению в сопоставлении с немногочисленными данными литературы.

До введения животных в эксперимент проводили тщательное обследование всех особей, учитывая клинические и лабораторные исследования. За две недели до введения собак в опыт им проводили дегельминтизацию препаратом «Каниквантел» из расчета 1 таблетка на 10 кг массы тела животного.

Для предупреждения возможного инфицирования собак, проводили пассивную иммунизацию подкожным введением препарата «Витакан С» по 1 дозе на животное двукратно с интервалом 24 часа.

Животные содержались в стандартных клетках в стационаре кафедры ветеринарной хирургии МГАВМиБ им. К.И.Скрябина. Освещение дневное и электрическое, вентиляция приточно-вытяжная, микроклимат удовлетворительный. Поение, кормление и уборку осуществляли вручную. Моцион в пределах часа утром и вечером. Кормление сбалансированным сухим кормом премиум-класса согласно весу собак. В 100 граммах сухого корма содержалось: белок 26%, жиры 14%, зола 6%, клетчатка 4%, влажность10%,, кальций 1,05%, фосфор 0,83%, витамин А 12,941 lU/кг, витамин Д3 1,896 lU/кг, витамин Е 133 мг/кг, медь (сульфат меди)17,5 мг/кг, омега-6 >2,70%, омега- >0,45%.

По данным исследований все собаки были клинически здоровы, активны, энергичны в движениях, корм поедали охотно. Прием воды в пределах физиологической нормы, естественные отправления без особенностей, рвоты и диареи не отмечали. Изменений со стороны опорно-двигательного аппарата и других систем организма не наблюдалось. Рентгенографическими исследованиями патологических изменений в суставах не выявлено.

Температура тела составляла 37,9-38,50С, частота пульса 72-98 ударов в минуту, дыхательные движения 17-25 в минуту.

При исследовании морфологические показатели крови были следующими: гемоглобин 126-165 г/л, эритроциты 6,45-8,24 млн./мм3, тромбоциты 267-467 тыс./мм3, лейкоциты 8,3-10,2 тыс./мм3, СОЭ-1-2. Популяции лейкоцитов распределялись следующим образом: базофилы 0-1, эозинофилы 1-3, палочкоядерные нейтрофилы 1-6, сегментоядерные нейтрофилы 57-70, лимфоциты 18-37, моноциты 1-5 %. При аспирации суставов синовиальная жидкость была клейкой, тягучей, прозрачной, бесцветной, без запаха и видимых включений. Количество до 1 мл, рН среды 7,4-7,7, содержание лейкоцитов 0,120-0,230 тыс.кл/мм3. Клеточный состав распределялся следующим образом: лимфоциты 62-77, моноциты 1-3, ретикулоциты 13-26, плазмоциты 3-9, гистиоциты 1-4, макрофаги 0-1, синовиоциты 0-3 % (рис. 7,8,9,10,11,12).

Биохимическое исследование сыворотки крови: общий белок 55,8-72,4 г/л, альбумин 23,4-38,1 г/л, креатинин 59,8-98,4 мкмоль/л, мочевина 2,7-6, ммоль/л, общий билирубин 3,1-8,9 мкмоль/л, АЛТ 26-69 ед./л, АСТ 21- ед./л. Гематологические и цитоморфологические показатели синовиальной жидкости находятся в пределах физиологическиой нормы.

После изучения клинического статуса, животных вводили в опыт. Собакам экспериментально была воссоздана модель острого асептического воспаления коленного сустава. В полость сустава вводили скипидар однократно в дозе 0,4-0,5 мл, после чего проводили 5-6 пассивных движений конечностью. К второму-третьему дню у собак развивалось воспаление. Животные были разделены на 5 групп.

митоз ретикулоцита Рис. 7,8. Синовиальная жидкость коленного сустава собак в норме. Окраска по Паппенгейму. Объектив 90, окуляр Рис. 9,10. Синовиальная жидкость коленного сустава собак в норме.

Окраска по Паппенгейму. Объектив 90, окуляр Рис.11,12. Синовиальная жидкость коленного сустава собак в норме. Окраска 3.1. Эффективность применения димексида и новокаиновых блокад Контрольная группа была сформирована из 5 беспородных собак, возрастом 1,5-3,5 года, весом 18-24 кг, хорошей упитанности, суки. У собак наблюдали повышение температуры тела до 39,6-39,70С, пульса до 128- ударов в минуту, дыхательных движений до 26-29 в минуту. Животные были угнетены, большее время суток лежали, вставали неохотно. Прием корма был снижен или отсутствовал, воды повышен. Естественные отправления в норме, изменений со стороны желудочно-кишечного тракта и других систем организма не обнаруживали. Область пораженного коленного сустава была горячей, отечной, кожа напряженной, неподвижной (рис. 15). Контуры сустава были сглажены, синовиальные вывороты напряжены, при бимануальной пальпации ощущалась флюктуация. При проводке отмечали хромоту смешанного типа от средней до высшей степени, при пассивных движениях выявляли резкую болезненность. На рентгенограммах определяли увеличение суставной щели на 2-3 мм (рис. 13,14). При артропункции свободно аспирировали жидкий, мутноватый экссудат без видимых примесей, без ощутимого запаха, рН среды составляла 7,0-7,2. Количество лейкоцитов повышалось до 2,500-3,500 тыс.кл/мм3, цитологический состав синовии был следующим: палочкоядерные нейтрофилы 17-29, сегментоядерные нейтрофилы 39-54, лимфоциты 20-41, моноциты 2-4 %, ретикулоциты, плазмоциты, гистиоциты, макрофаги, синовиоциты не выявлялись (рис. 16). Исчезновение лимфоидноретикулярных клеток, с одновременным нарастанием уровня нейтрофилов.

В крови обнаруживали: гемоглобина 115-147 г/л, эритроцитов 5,67-7, млн./мм3, тромбоцитов 234-392 тыс./мм3, лейкоцитов 14,2-15,9 тыс./мм3, СОЭ-3-5. Лейкограмма приобрела следующий вид: эозинофилы 1-3, палочкоядерные нейтрофилы 14-17, сегментоядерные нейтрофилы 41-51, лимфоциты 27-37, моноциты 3-5 %. Наблюдался регенеративный сдвиг.

В сыворотке крови содержалось: общий белок 88,3-99,6 г/л, альбумин 25,3-40,5, креатинин 52,1-89,0 мкмоль/л, мочевина 3,5-6,8 ммоль/л, общий билирубин 5,8-8,9 мкмоль/л, АЛТ 58-74 ед./л, АСТ 52-76 ед./л.

Рис. 13. Рентгенграмма бедроберцового сустава собаки в норме. Прямая проекция Рис. 14. Рентгенограмма бедроберцового сустава собаки на 3-й день после индуцирования острого асептического синовита. Прямая проекция Рис.15. Собака №4. Острый асептический синовит правого коленного Рис. 16. Синовиальная жидкость. 3-й день острого асептического синовита коленного сустава. Наличие большого количества нейтрофилов и эритроцитов. Окраска по Паппенгейму. Объектив 90, окуляр Для лечения собак контрольной группы применяли традиционный метод лечения. В первый день проводили артроцентез и применяли компрессы с димексидом (действующее вещество диметилсульфоксид) в разведении 1: с 0,5 % раствором новокаина, пара- и интраартикулярно вводили 0,5% раствор новокаина 5-7 мл (одна инъекция в 3 дня) до клинического выздоровления.

Контрольное обследование собак проводили на 6-8 сутки лечения. У животных данной группы значительных улучшений в клиническом течении болезни не наблюдали. Температура тела составляла 38,9-39,40С, частота пульса 118-126 ударов в минуту, дыхательные движения 19-26 в минуту.

Общее состояние удовлетворительное, прием корма и воды активный, естественные отправления в норме. При пальпации обнаруживали болезненность, кожа в области сустава малоподвижная, ткани уплотненные, местная температура и промеры сустава незначительно повышены, чем противоположного здорового сустава. При пассивных движениях конечностью болезненность сохранялась. Животные ходили и вставали неохотно. Хромота опирающегося типа на поврежденную конечность сохранялась (рис. 17). На рентгенограммах отмечалось незначительное увеличение суставной щели до 1мм.

Гематологические показатели были следующими: гемоглобин 120- г/л, эритроциты 6,12-8,01 млн./мм3, тромбоциты 254-396 тыс./мм3, лейкоциты 12,9-14,2 тыс./мм3, СОЭ-2-4. В качественном составе лейкоцитов обнаруживалось: эозинофилы 1-2, палочкоядерные нейтрофилы 10-15, сегментоядерные нейтрофилы 41-55, лимфоциты 25-39, моноциты 3-4 %.

При аспирации синовиальная жидкость суставов была прозрачной, вязкость снижена, видимых включений не наблюдали, рН среды 7,1-7,2. Лейкоциты 2,200-3,150 тыс.кл/мм3, из которых палочкоядерных нейтрофилов 13сегментоядерных нейтрофилов 17-21, лимфоцитов 31-46, моноцитов 2-5, обнаруживали единичные тканевые клетки (ретикулоцитов 0-2, плазмоцитов 0-1, гистиоцитов 0-1 %), синовиоциты, макрофаги не обнаруживали (рис. 18).

Рис. 17. Собака № 3. Острый асептический синовит правого коленного сустав, 7-й день лечения контрольная группа эритроцит нейтрофил плазмоцит Рис. 18. Синовиальная жидкость. Острый асептический синовит коленного сустава, 7 день лечения. Наличие большого количества нейтрофилов, эритроцитов и единичных плазмоцитов. Окраска по Паппенгейму. Объектив 90, В сыворотке крови определяли: общий белок 80,2-92,3 г/л, альбумины 24,2-38,5 г/л, креатинин 63,0-93,7 мкмоль/л, мочевина 4,3-5,9 ммоль/л, общий билирубин 4,8-7,9 мкмоль/л, АЛТ 55-69 ед./л, АСТ 49-73 ед./л.

Микробиологическими исследованиями экссудата из полости сустава (на МПБ, МПА, окраска мазков по Граму) микрофлоры нами не обнаружено.

Полное клиническое выздоровление животных контрольной группы наблюдали на 18-20 сутки лечения (рис. 19). Температура тела 38,2-38,40С, частота пульса 88-100 ударов в минуту, дыхательные движения 17-19 в минуту. Собаки были активны, энергичны в движении, охотно бегали. Аппетит, жажда, естественные отправления были в пределах физиологической нормы, расстройств со стороны желудочно-кишечного тракта и других систем организма при обследовании не наблюдали. При пальпации коленного сустава и пассивных движениях конечностью отклонений от нормы не обнаруживали.

Промеры суставов были одинаковы с интактными. Синовиальные вывороты при пальпации не напряжены, безболезненны, местная температура не повышена, хромота отсутствовала. На рентгенограмме патологических изменений не обнаруживали. Клинические, морфологические, биохимические показатели крови и синовиальной жидкости были в пределах физиологической нормы.

Показатели крови следующие: гемоглобина 121-150 г/л, эритроцитов 6,28-8,11 млн./мм3, тромбоцитов 278-406 тыс./мм3, лейкоцитов 10,6-12, тыс./мм3, СОЭ-1-2. В лейкограмме основные популяции распределялись следующим образом: эозинофилы 1-3, палочкоядерные нейтрофилы 5-6, сегментоядерные нейтрофилы 53-70, лимфоциты 20-36, моноциты 3-4 %.

Состав и свойства синовиальной жидкости нормализовались: показатель рН составил 7,2-7,4, количество лейкоцитов 0,330-0,580 тыс.кл/мм3. В составе клеточных элементов: палочкоядерные нейтрофилы 5-10, сегментоядерные нейтрофилы 16-29, лимфоциты 44-64, моноциты 2-4, ретикулоциты 3-7, плазмоциты 1-3, гистиоциты 1-2, макрофаги 0-1, синовиоциты 1-2 %.

Показатели сыворотки крови также были в пределах физиологической нормы: общий белок 72,1-84,5 г/л, альбумин 23,8-32,1, креатинин 65,4-89, мкмоль/л, мочевина 3,2-6,0 ммоль/л, общий билирубин 4,9-7,0 мкмоль/л, АЛТ 43-65 ед./л, АСТ 43-69 ед./л.

Рис. 19. Собака №4. Острый асептический синовит коленного сустава.

18-ый день лечения. Клиническое выздоровление Подводя итог можно отметить следующее, выздоровление собак контрольной группы наступало к 18-20 суткам наблюдения. В этот период исследуемые гематологические показатели, включая эритроциты, гемоглобин и тромбоциты соответствовали нормативным показателям. Биохимические показатели крови на всем протяжении эксперимента оставались в пределах физиологической нормы, следовательно, на гомеостаз организма данный метод лечения отрицательного действия не оказывал. Цитоморфологические показатели синовиальной жидкости приближались к нормативным показателям, отмечалось значительное снижение количества лейкоцитов, однако в синовии обнаруживались единичные клетки палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов.

3.2. Эффективность применения препарата кетофен у собак первой Первую опытную группу составили 5 собак. Возраст животных от 1, до 4 лет, беспородные, хорошей упитанности, массой 18-23 кг, суки. У собак наблюдали повышение температуры тела до 39,5-39,80С, пульса до 108- ударов в минуту, дыхательных движений до 27-34 в минуту. В области коленного сустава отмечали разлитую, горячую, болезненную, отечную припухлость. Синовиальные вывороты напряжены, при бимануальной пальпации ощущали флюктуацию. Пассивными движениями выявляли резкую болезненность в коленном суставе, при проводке отмечали хромоту смешенного типа от средней до высшей степени. У собак наблюдали апатию, угнетение в общем состоянии, аппетит был значительно снижен или отсутствовал, жажда повышена. Естественные отправления в норме. Собаки большее время суток находились в вынужденном лежачем положении, вставали неохотно, пораженной конечностью частично касались пола (рис. 20).

Рис. 20. Собака № 6. Острый асептический синовит правого коленного На рентгенограммах определяли увеличение суставной щели на 2-3 мм.

Из полости сустава свободно аспирировали жидкий, мутный экссудат без видимых включений, рН- 7,0-7,2, лейкоциты 2,500-3,500 тыс.кл/мм3, палочкоядерные нейтрофилы 17-32, сегментоядерные нейтрофилы 42-51, лимфоциты 20-33, моноциты 2-4 %, ретикулоциты, плазмоциты, гистиоциты, макрофаги, синовиоциты не выявлялись.

В крови обнаруживали: гемоглобин 129-150 г/л, эритроциты 6,02-7, млн./мм3, тромбоциты 215-304 тыс./мм3, лейкоциты 13,7-15,8 тыс./мм3, СОЭПопуляции лейкоцитов распределялись следующим образом: эозинофилы 1-2, палочкоядерные нейтрофилы 9-15, сегментоядерные нейтрофилы 53лимфоциты 21-28, моноциты 4-5 %. В сыворотке крови: общего белка 89,5-94,9 г/л, альбуминов 30,1-40,1 г/л, креатинина 54,5-90,5 мкмоль/л, мочевины 5,0-7,9 ммоль/л, общего билирубина 7,4-10,1 мкмоль/л, АЛТ 45- ед./л, АСТ 42-79 ед./л.

Для лечения собак первой опытной группы использовали НПВП кетофен (действующее вещество кетопрофен). В первый день лечения проводили артроцентез. На протяжении трех первых суток применяли подкожные инъекции 1% раствора кетофена (из расчета 2 мг\кг массы тела один раз в сутки), далее в виде таблеток (из расчета 1 мг\кг массы тела один раз в сутки) до полного клинического выздоровления.

На 6-8 сутки лечения у животных первой опытной группы отмечали улучшения в клиническом течении болезни. Температура тела -38,5-39,10С, частота пульса 90-100 ударов в минуту, дыхательные движения 23-28 в минуту. У собак появлялись клинические симптомы активности, наблюдалось уменьшение хромоты, полное исчезновение воспалительного отека. В области коленного сустава ткани были с незначительным уплотнением, кожа подвижная, эластичная, при пассивных движениях болезненность не определялась. Глубокой пальпацией в области связок отмечали слабую болевую реакцию. При активном движении отмечали слабую хромоту типа опирающейся конечности.

В крови собак обнаруживали: гемоглобин 116-144 г/л, эритроциты 5,93-7,23 млн./мм3, тромбоциты 234-311 тыс./мм3, лейкоциты 11,2-12, тыс./мм3, СОЭ-2-3. В лейкограмме: эозинофилов 0-2, палочкоядерных нейтрофилов 4-7, сегментоядерных нейтрофилов 57-67, лимфоцитов 24-35, моноцитов 3-5 %. Наблюдалось снижение показателей гемоглобина, эоритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, СОЭ.

Синовиальная жидкость из ранее поврежденных суставов была прозрачной, тягучей, без видимых включений, рН- 7,3-7,4. Насчитывали лейкоцитов 1,200-1,800 тыс.кл/мм3, в мазках - палочкоядерных нейтрофилов 5-7, сегментоядерных нейтрофилов 17-21, лимфоцитов 59-63, моноцитов 2-3, ретикулоцитов 5-8, плазмоцитов 2-3, гистиоцитов 0-1, макрофагов 0-1, синовиоцитов 0-2 %. Отмечалось появление лимфоидно-ретикулярных клеток.

В сыворотке крови определяли: общего белка 68,2-79,1 г/л, альбуминов 28,2-38,3, креатинина 63,4-86,2 мкмоль/л, мочевины 4,4-6,7 ммоль/л, общего билирубина 6,3-8,9 мкмоль/л, АЛТ 43-82 ед./л, АСТ 39-74 ед./л.

Бактериологическими исследованиями экссудата из полости пораженного сустава микрофлоры не было выделялось.

Полное клиническое выздоровление животных первой группы наблюдали на 10-13 сутки лечения (рис. 21). Температура тела 38,1-38,40С, частота пульса 80-86 ударов в минуту, дыхательные движения 19-23 в минуту. Собаки были активны, энергичны в движении. Прием корма, воды, естественные отправления были в пределах физиологической нормы, расстройств со стороны желудочно-кишечного тракта и других систем организма при клиническом обследовании не наблюдалось. При пальпации коленного сустава и его пассивных движениях отклонений от нормы не обнаруживали. Промеры суставов были одинаковы с интактными. Синовиальные вывороты при пальпации не напряжены, безболезненны, местная температура не повышена, хромота отсутствовала. На рентгенограмме патологических изменений в суставе не обнаруживали.

Содержание в крови было: гемоглобина 109-140 г/л, эритроцитов 5,83млн./мм3, тромбоцитов 245-317 тыс./мм3, лейкоцитов 9,9-11,8 тыс./мм3, СОЭ-1-3. В лейкограмме показатели изменялись следующим образом: эозинофилы 0-3, палочкоядерные нейтрофилы 2-4, сегментоядерные нейтрофилы 60-68, лимфоциты 25-35, моноциты 1-4 % (таблица 8, рис. 22,23). Анализируя полученные данные, необходимо отметить, что при возникновении воспалительного процесса, у всех животных, введенных в эксперимент, наблюдалось снижение показателей гемоглобина, эритроцитов и тромбоцитов. При этом данные показатели в контрольной группе приближались к первоначальным (до проведения эксперимента) в период нормализации воспалительного процесса и клиническом выздоровлении животных. В группе же кетофена наблюдается продолжающееся снижение данных показателей на всем протяжении терапии и к периоду клинического выздоровления собак. Показатели лейкоцитов и СОЭ в группе кетофена приближаются к нормативным раньше, чем в контрольной группе примерно на 7-10 дней.

Состав и свойства синовиальной жидкости нормализовались: показатель рН составил 7,4-7,5, количество лейкоцитов 0,210-0,540 тыс.кл/мм3. В составе клеточных элементов: сегментоядерные нейтрофилы 2-4, лимфоциты 68-74, моноциты 1-2, ретикулоциты 13-16, плазмоциты 3-6, гистиоциты 1-2, макрофаги 1-2, синовиоциты 1-3, фибробласты 0-1 % (таблица 9). Из приведенных данных, очевидно, что синовиальная жидкость в нормальном суставе собак содержит лейкоциты (моноциты, лимфоциты) и тканевые клетки, включая клетки покровного слоя – синовиоциты. Некоторые авторы [45] отмечают присутствие в нормальном суставе нейтрофилов и эритроцитов, полученные нами результаты противоречат данным утверждениям.

Развитие воспалительного процесса в суставе сопровождается снижением показателя рН до 7,1, к концу первой недели лечения (что соответствует окончанию первой фазы воспалительного процесса), отмечается значительное повышение уровня рН до 7,3 в опытной группе животных, при этом у контрольных собак данный показатель достигает соответствующего показателя в период клинического выздоровления. Количественный состав лейкоцитов не зависимо от способа лечения изменялся одинаково.

Показатели сыворотки крови также были в пределах физиологической нормы: общий белок 64,3-73,8 г/л, альбумина 27,0-37,6 г/л, креатинин 65,1мкмоль/л, мочевина 3,7-5,8 ммоль/л, общий билирубин 5,6-9,1 мкмоль/л, АЛТ 39-62 ед./л, АСТ 27-70 ед./л, щелочная фосфатаза 170-215 ед./л, амилаза 786-1152 ед./л (таблица10).При возникновении синовита коленного сустава отмечается подъем уровня общего белка, за счет повышения уровня глобулинов, данные показатели нормализуются к клиническому выздоровлению собак у животных обеих групп. Данные таблицы указывают на отсутствие патологических изменений в остальных исследуемых показателях, как в контрольной, так и в опытной группе собак.

Рисунок 21. Собака №6. Острый асептический синовит правого коленного сустава. 10-й день лечения препаратом кетофен. Клиническое выздоровление. Опорная функция конечности восстановлена Показатели крови при остром асептическом синовите коленного сустава у собак на фоне лечения кетофеном 10-13 сутки ных 1 опытной группы 18-20 сутки ных контрольной группы