«ИММУНОТОКСИКОЛОГИЯ КСЕНОБИОТИКОВ Монография Саратов 2007 УДК 612.014.46:616–092:612.017.1]–008.64–008.9–085.246.9.(024) ББК 52.84+52.54+52.8 я 43 З–127 Забродский П.Ф., Мандыч В.Г. Иммунотоксикология ксенобиотиков: ...»

2.9. Оценка активности ацетилхолинэстеразы в Т-клетках Для определения активности ацетилхолинэстеразы (АХЭ) в Тклетках тимуса и селезенки используют метод выделения популяции Т-лимфоцитов с максимальной активностью АХЭ из ядросодержащих клеток органов в градиенте плотности перколла (удельная плотность составляла 1,065). Клетки отмывают в 0,1 молярном фосфатном буфере (рН–8,0) и подсчитывают содержание лимфоцитов в суспензии. Выделенные таким образом клетки составляют около 80% Т-лимфоцитов «низкой плотности», характеризуются высокой активностью АХЭ [Szelenyi J.G., et al., 1982]. Активность АХЭ определяют по методу [Ellman G.M., et al.., 1961]. К 1,5 мл суспензии, содержащей 1-5108 клеток в 1 мл 0,1 молярного фосфатного буфера (рН –8,0), добавляли 20 мкл 0,075 моль ацетилхолина иодида и мкл 0,01 моль дитио-бис-нитробензойной кислоты. После 20 мин инкубации при 250 С реакцию останавливают добавлением 100 мкл 1,5–дифтор-2,4-динитробензола и регистрируют увеличение оптической плотности спектрофотометрически (420 нм) [Szelenyi J.G., et al., 1982]. За единицу активности АХЭ (Ед) принимают мкмоль ацетилхолина, гидролизованного за 1 мин в мл суспензии, содержащей 109 Т-лимфоцитов [Kutty K. M. et al., 1976]. Учитывая зависимость антителогенеза от перераспределения иммунокомпетентных клеток между лимфоидными органами [Maslinski W. K et al., 1987; Tiefenbach B., Wichner S., 1985], подсчитывают число ядросодержащих клеток в тимусе и селезенке после их выделения из органов в среду № 199 путем подсчета в камере Горяева через 4 сут (могут быть, в зависимости от задачи исследования, выбраны и иные сроки) после иммунизации (через 1 и 2 сут после введения последней дозы АХ и холинотропных веществ соответственно). Число Т- и В-лимфоцитов в тимусе и селезенке определяют по методике [Thomas I.K., Imamura T., 1986], а активность АХЭ – по описанному методу [Ellman G.M., et al.., 1961, Szelenyi J.G., et al., 1982].

2.10. Определение показателей ПОЛ, концентрации кортикостерона и катехоламинов в крови Перекисное окисление липидов (ПОЛ) оценивали по суммарной продукции радикалов методом люминолзависимой хемилюминесценции, активированной форболовым эфиром (0, МКм) [Takayama F. et al, 1998] по содержанию малонового диальдегида [Коробейникова Э.Н., 1989], активности каталазы и пероксидазы в крови спектрофотометрически [Валеева И.Х. и соавт., 2002] через различные сроки после применения токсикантов. При этом активность каталазы и пероксидазы являлась показателем функции антиоксидантной системы (АОС).

Для определения уровня кортикостерона в плазме крови крыс используется флюорометрический метод определения уровня неконъюгированных 11-оксикетостероидов [Moor P. de et al., 1962;

1976] через 1 – 24 ч после интоксикации ксенобиотиками.

Экстракция кортикостерона из анализируемых образцов плазмы крови проводится четыреххлористым углеродом. Для удаления пигментов плазмы и нестероидных соединений экстракты промывают с помощью 0,1% раствора NaOH и дистиллированной воды. Затем верхний слой, включающий в себя кортикостерон, переносится, выпаривается и повторно экстрагируется 6 мл метиленхлорида или хлороформа. Для образования флюоресцентных комплексов используется смесь концентрированной серной кислоты и этанола в соотношении 3:1. После развития флюоресценции растворы исследуют на флюориметре с использованием интерферентных фильтров: первичного с пропусканием волн длиной 470 нм и вторичного – 540 нм.

Содержание адреналина и норадреналина определяют в плазме крови животных по методу Э.Ш. Матлиной (1965). Этот метод является весьма трудоемким и устаревшим.

В настоящее время определение катехоламинов в тканях лабораторных животных проводят, используя радиометрический метод в сочетании тонкослойной хроматографии [Ткачева Г.А. и соавт., 1983].

ГЛАВА 3. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУНОТОКСИЧЕСКИХ

ЭФФЕКТОВ КСЕНОБИОТИКОВ

3.1. Основные механизмы иммунотоксичности Возможности реализовать иммунотоксический (иммунотропный) эффект у ксенобиотиков весьма разнообразны. При рассмотрении влияния ТХВ и фармакологических средств на доиммунные механизмы защиты (ДИМЗ) и иммунную систему (ИС) на уровне организма необходимо отметить тесную связь действия токсикантов или лекарственных средств на эти системы с функцией центральной нервной системы (ЦНС) и эндокринной системы (ЭС). Таким образом, опосредованное влияние ТХВ через ЦНС и ЭС сочетается с прямым действием ксенобиотиков на показатели НРО, морфологические и функциональные системы ИС [Априкян В.С., Галоян К.А., 1995;

Абрамов В.В., 1996; Ройт А. и соавт. 2000; Забродский П.Ф., 2000;

Хаитов Р.М. и соавт. 2002; Miller K. 1985;, Andrian U.H., 2000, Maekawa Y., 2005]. Взаимосвязь ЦНС, ЭС, ДИМЗ и ИС в реализации иммунотропных эффектов может быть представлена прямыми и обратными связями между этими системами.

Возможны следующие варианты воздействия ТХВ на иммунокомпетентные клетки [Spreafico F., Vecchi A., 1984; Descotes G., 1986; Luster M. J. et al., 1987; Sullivan J. B., 1989 Забродский П.Ф., 2000]: воздействие через ЦНС и эндокринную систему, в частности, вследствие реализации эффектов различных медиаторов (ацетилхолина, катехоламинов, нейропептидов и т.п.), а также действия гормонов гипофиза, надпочечников, щитовидной железы и других эндокринных органов; прямое воздействие токсиканта на иммунитет; действие метаболитов, в результате биотрансформации ТХВ в печени (легких, коже, лимфоцитах); иммунотропное действие ТХВ в качестве антигена; взаимодействие токсиканта, являющегося гаптеном, с белками с образованием комплекса, который действует на ИКК как антиген; действие ТХВ в качестве толерогена (при этом токсикант отменяет или снижает реализацию гуморальных или клеточных иммунных реакций).

Анализ данных литературы свидетельствуют о том, что иммунотоксичность различных ядов на субклеточном уровне определяется их способностью оказывать влияние на систему иммунитета путем инициации токсикантом перекисного окисления липидов мембран клеток. В частности, вследствие инактивации антиоксидантных ферментов и витаминов (супероксиддисмутазы, каталазы, пероксидазы, глютатионтрансферазы, глютатионпероксидазы, -токоферола, -каротина, витаминов Е, А, С и др.).

Механизмы токсичности диоксинов и дибензфуранов обусловлены соединением ядов с Ah-рецептором цитозоля мембраны иммуноцита, последующим поступлением в ядро клетки и взаимодействием с ДНК.

Токсичность ксенобиотиков может быть обусловлена реализацией эффектов медиаторов и гормонов, к большинству из которых на мембране ИКК имеются соответствующие рецепторы, вследствие действия токсикантов на ЦНС и эндокринную систему [Корнева Е.А., 1990; Забродский П.Ф., 1993; 2002; Szot R.J., Murphy S.D., 1970].

Иммунотоксичность ряда ТХВ обусловлена инактививацией ферментов цитозоля и мембраны ИКК (ацетилхолинэстеразы, нафтил-АS-ацетатэстеразы, -нафтилбутират-эстеразы, коферментов пируватоксидазной системы и др.), а также энзимов системы тканевого дыхания в митохондриях иммуноцитов [Забродский П.Ф. и соавт., 2001; Becker E.Z. et al., 1976; Хейхоу Ф.Г.Дж, Кваглино Д., 1983], индукцией или ингибированием синтеза Р-450-зависимых монооксигеназ, локализованных преимущественно в естественных клетках-киллерах и Т-лимфоцитах.

Токсиканты повреждают ДНК, РНК, а также органеллы эндоплазматического ретикулума, лизосом и рибосом, а также мембрану ИКК с последующим образованием аутоантител, взаимодействующих с иммуноцитом [Забродский П.Ф., 1998, 2002;

Смирнов В.С., Петленко С.В., Сосюкин А.Е., 2000; Descotes J., 1986;

Van Loveren. H. et al., 1990]. В реализации иммунотоксических эффектов имеют значение изменение углеводно-энергетического и нуклеинового обмена [Петрусенко Г.П., Тумилович М.К., 2004], разобщение тканевого дыхания и окислительного фосфоририрования, повреждение мебран ИКК и их органелл и другие механизмы [Алимова М. Т. и соавт,. 1991; Гущин Н.В. и соавт. 1991, Хусинов А.А. и соавт., 1991; Абрамов В.В., 1996; Смирнов В.С. и соавт., 2000;

Ройт А. и соавт. 2000; Забродский П.Ф., 2000; Хаитов Р.М. и соавт.

2002; Rodica G., Srefania M.,1973; Street J.C., Sharma R.P., 1975;

Trinchievi G., M. de Marchi, 1976; Wiltrowt R.W. et al., 1978; Casale G.P. et al., 1984; Devens B.H. et al., 1985; Loose L.D., 1985; Miller K., 1985; Descotes G., 1986; Thomas I.K., Imamura T., 1986; Luster M. J. et al., 1987; Rodgers K.E. et al., 1987; Sullivan J. B., 1989; Zhang P. et al., 2002].

В процессе иммуногенеза ТХВ могут оказывать воздействие на различные клетки крови, ИКК и их предшественники вплоть до полипотентной стволовой кроветворной клетки (ПСКК). Возможными мишенями для действия токсикантов могут являться [Кульберг А.Я., 1986; Ройт А. и соавт. 1991; 2000; Забродский П.Ф., 2000; Хаитов Р.М.

и соавт. 2002; Loose L.D., 1985; Miller K., 1985; Descotes G., 1986;

Luster M. J. et al., 1987; Sullivan J. B., 1989; Ellmeier W., 1999, Klein J., 2000, Benito J.M., 2004, Parham P., 2005]: клетки эритроидного ростка кроветворения (эритробласты, незрелые эритроциты, эритроциты), клетки миелоидного ряда кроветворения (клетка-предшественник нейтрофилов и моноцитов, клетка- предшественник эозинофилов и базофилов, гранулоциты, моноциты), клетки лимфоидного ряда кроветворения (протимоцит, тимоцит; Т-клетки, предшественник В2лимфоцита, В2-лимфоцит и плазматическая клетка, естественный киллер, DC2 – лимфоидная дендритная клетка, DC2 – интердигитальная клетка в тимусе и лимфоузлах, DC2 – клетка Лангерганса в коже), клетки мегакариоцитоиного ростка кроветворения (мегакариобласты, тромбоциты), клеткипредшественники В1 – лимфоцитов (В1 – лимфоцит).

ТХВ могут воздействовать на процесс взаимодействия антигенпредставляющих клеток (кортикальных эпителиальных клеток тимуса, макрофагов, дендритных клеток) с Т- и В-лимфоцитами. В результате возможно нарушение Т-зависимого антителообразования В-клетками (синтеза иммуноглобулинов М, G, A, D, E). ТХВ могут воздействовать и на В-клетки, синтезирующие IgM, без участия Тлимфоцитов, а также на лимфокины и процессы их взаимодействия с рецепторами ИКК [Забродский П.Ф., 2000; Descotes G., 1986; Luster M.

J. et al., 1987; Sullivan J. B., 1989; Ellmeier W., 1999, Klein J., 2000, Benito J.M., 2004].

Действие ТХВ на механизмы реализации клеточного иммунитета, осуществляемое цитотоксическими Т-лимфоцитами (Т-киллерами), многообразно и может быть реализовано путем повреждения Тэффектора, с нарушением синтеза им цитокинов, структуры цитокиновых рецепторов, нарушения процесса взаимодействия Ткиллера с мембраной клетки-мишени (с молекулами главного комплекса гистосовместимости класса I, ассоциированными с антигеном. В настоящее время они изучены недостаточно [Забродский П.Ф., 2005].

Как правило, ТХВ угнетают в той или иной степени НРО, ГИ и КИ.

Возможны варианты, когда один из компонентов, обеспечивающих иммунный гомеостаз, редуцируется в большей степени по сравнению с другими или повышается при супрессии других [Luster M.I., Blank J.A., 1987; Забродский П.Ф., 2000].

В 1983 году G.Harris предположил, что причиной вторичных (в том числе постинтоксикационных) иммунодефицитных состояний может быть повреждение структуры ДНК лимфоцитов и/или процессов репарации ДНК под влиянием эндогенных метаболитов или лекарств, а нарушения функционирования ИКК могут быть обусловлены неполноценностью процессов реанжировки генов иммуноглобулинов, так как в этих процессах участвуют те же ферменты, что и в репарации ДНК.

Иммунотоксичность ТХВ может рассматриваться на различных уровнях интеграции организма: систем и органов, клеточном, субклеточном и молекулярном. Кроме того, необходимо учитывать, что реализация иммунотропных эффектов токсикантов происходит на различных стадиях иммуногенеза, а также в процессе кооперации клеток при индуцировании гуморальных или клеточных иммунных реакций. В зависимости от изменения НРО, КИ или ГИ могут быть выделены различные типы нарушений иммунного гомеостаза.

3.2. Общая характеристика нарушения иммунного гомеостаза под Данные о влиянии различных токсикантов на доиммунные механизмы защиты (неспецифическую резистентность организма – НРО) и иммунный статус в настоящее время весьма обширны и противоречивы [Шубик В. М., 1976; Лазарева Д. Н., Алехин Е. К., 1985; Смирнов В.С. и соавт., 2000; Забродский П.Ф., 1998, 2002, 2004а; Descotes J., 1986; Luster M.J. at el., 1987]. Анализ иммунотоксических эффектов токсичных химических веществ (ТХВ) обусловлен необходимостью выявления наиболее чувствительных параметров НРО и системы иммунитета к тем или иным ядам и для обоснования применения адекватных характеру нарушений иммунного гомеостаза различными токсикантами иммуностимуляторов.

За несколько последних десятилетий данные, полученные о влиянии токсичных химических веществ (ТХВ) на доиммунные механизмы защиты, в целом определенно свидетельствуют о возможности снижения неспецифических факторов защиты организма при их остром действии [Смирнов В.С. и соавт., 2000; Забродский П.Ф., 2002; Василенко О.А., 2004; Петрусенко Г.П., Тумилович М.К., 2004]. Так, доказано уменьшение бактерицидной активности сыворотки крови (БАСК), лизоцимной, комплементарной и фагоцитарной активности, а также других неспецифических факторов резистентности организма при хроническом воздействии сернистого ангидрида и фенола [Космодамианская Д. М., 1968], акролеина, окиси углерода [Стрельникова Л. А., Раткина В. Г.,1983], неорганических соединений фтора [Андронова М. Н. и соавт., 1988], стирола [Казакова В. В., 1971], севина, хлорофоса и ДДТ [Фридман Г.И., 1970], дихлорэтана [Забродский П.Ф. и соавт., 1997]. Исследователи вполне закономерно связывают снижение НРО с повышением уровня заболеваемости различными инфекциями [Luster M.J. at el., 1987;

Лужников Е.А., Костомарова Л.А., 2000]. Не исключено, что острое действие некоторых ТХВ может увеличивать НРО. Так, подобный эффект обнаружен при длительной интоксикации крыс малыми дозами гербицида симазана [Барштейн Ю. А. B. и соавт., 1991].

Имеющая исключительно важное значение в реализации доиммунных механизмов защиты (НРО) и многочисленных иммунных реакциях моноцитарно-макрофагальная система (ММС) подвержена отрицательному действию большого числа ТХВ. К ним относятся полигалогенизированные ароматические углеводороды [Bleavins M.

R., Aulerich R. J.,1983], метилизоцианат [Dwivedi P. D. et al.,1988], инсектицид токсафен [Allen A. L. Et al.,1983], сероводород, аммиак [Дьячук И. А., 1979], различные инсектициды [Золотникова Г.

П.,1980], анилин [Саноцкий И. В.,1969], гербицид 2,4-Д [Жамсаранова С. Д. и соавт., 1988], свинец [Bagiuski B., 1985], двуокись кремния [Gennari M. et al., 1987], трихлорэтан [Sauders V.M.

et at., 1985], трихлорэтилен, хлор, хлорфенол [Descotes J., 1986], оксид бутилолова [Vos J.G. et al., 1984], роданистый аммоний и тиомочевина [Савченко М.В., 1987], ацетонитрил [Забродский П.Ф., Киричук В.Ф., 1998] и другие вещества. Нарушение функции макрофагов легких вызывают оксиды свинца, никеля, ванадия, диоксиды ртути, марганца, азота, хлориды кадмия и никеля [Sullivan J.

B., 1989]. Активность нейтрофилов при хронической интоксикации снижают многие пестициды, ароматические, хлорированные и фторсодержащие углеводороды, бензин, свинец, ртуть, бериллий, сероуглерод, формальдегид [Шубик В. М., 1976]. Как правило, угнетение функции моноцитарно-макрофагальной системы сопровождается ТНарушение фагоцитоза может происходить вследствие действия ТХВ на процессы хемотаксиса, адгезии, активации мембраны фагоцита, образования фагосомы, слияния лизосомальных гранул с фагосомой, уничтожения чужеродных клеток при помощи кислородзависимых или кислороднезависимых механизмов.

Снижение НРО под влиянием фосфорорганических инсектицидов (ФОИ) описано в многочисленных работах [Золотникова Г.П., 1980;

Перелыгин В.М. и соав., 1971; Жамсаранова С.Д. и соавт., 1988;

Пирцхалава А.В., 1989; Шведов В. Л., Анисимова Г. Г., 1989;

Чугунихина Н.В., Хасанова М.И., 1994; Woodin A.M., Wieneke A.A., 1969; Woodin A.M., Harris A.,1973; Taurog J.D.,et al., 1979;

Hermanowicz A., Kossman S., 1984; Kossman S., et al., 1985]. Ряд химических соединений способен активировать фагоцитоз в определенные периоды хронической интоксикации или при действии относительно небольших доз (концентраций). Такими свойствами обладают хлорид марганца [Smialowicz R.J. et al., 1985], некоторые пестициды в начальном периоде интоксикации, метилмеркаптан и нитроаминосоединения [Шубик В. М., 1976]. В отношении действия кадмия данные литературы противоречивы. Исследователи описывают и стимуляцию фагоцитоза под влиянием этого металла [Thomas P. T.

et al., 1985], и его супрессию [Bagiuski B., 1985]. Дильдрин оказывает активирующее влияние на нейтрофилы крыс [Hewett J. A., Roth R. A., 1988], севин и метафос увеличивают миграционную активность макрофагов [Долинская С. И. И соавт., 1989]. Установлено увеличение фагоцитарной активности под влиянием ДДТ и севина с последующим снижением данного показателя через 2-3 месяца с момента начала хронической интоксикации [Miller K., 1985]. Активацию макрофагов вызывает у мышей бенз(а)пирен в дозе 40 мг/кг [Blanton R. H. et al., 1986].

Большое значение в нарушении иммунного гомеостаза имеет поражение ТХВ естественных клеток-киллеров (ЕКК), так как именно данные лимфоциты осуществляют защиту от различных микроорганизмов до включения основных иммунных реакций.

Известно, что нетоксичные концентрации цинка снижают активность ЕКК в 6-20 раз [Ferry F., Donner M., 1984]. Аналогичным свойством обладают хлорид никеля [Smialowicz R. J. et al., 1984], растворители пропиленгликоль [Denning D. W. et al., 1987] и этиленгликоль [Забродский П. Ф., Германчук В.Г., 2000], оксид бутилолова [Vos J.G.

et al., 1984]. В то же время, некоторые химические вещества увеличивают активность ЕКК. Так, хлорид марганца повышает естественную цитотоксичность у мышей при однократном введении в дозах 10-160 мг/кг вследствие возрастания уровня сывороточного интерферона [Smialowicz R. J. et al., 1984].

Ароматические углеводороды [Moszczynsky P., Lisiewicz J., 1984], полихлорированные дибензфураны [Hideaki K. et al., 1987], метилизоцианат [Johnson K. W. et al., 1986; Saxena A. K. et al., 1988], гексахлорбензол [Van Loveren. H. et al., 1990], гербицид толуин [Николаев А. И. И соавт., 1988], соли никеля [Smialowicz R. J. et al., 1984], акрилаты и нитрилы [Шустов В. Я. и соавт., 1987; Забродский П. Ф., Киричук В. Ф., 1998; Германчук В.Г., 2000], атропиноподобные соединения [Адо А.Д. и соавт., 1985а; 1985б, 1985в, 1985г, 1987, 1995;

MacManus J.P. et al., 1975] и большинство пестицидов [Павлов А.В. и соавт., 1991] поражают преимущественно зависимое от Т-клеток звено иммунной системы. Фосфорорганические соединения в основном вследствие блокирования эстераз, локализованных в Т-лимфоцитах, поражают в большей степени Т-зависимое антителообразование, функцию цитотоксических Т-лимфоцитов и иммунные реакции, связанные с функцией Тh1- и Тh2- лимфоцитов [Забродский П.Ф.и соавт., 1993, 2001; Хейхоу Ф.Г.Дж., Кваглино Д, 1983; Ferluga J. et al., 1972; Newcombe D.S., 1991].

Данные литературы позволяют считать, что снижение НРО и показателей иммунной системы под влиянием ФОИ, свинца, аммония и их соединений могут быть обусловлены нарушением функции нейрогуморальных механизмов [Корнева Е.А., 1990; Петрусенко Г.П., Тумилович М.К., 2004], увеличением в плазме крови гормонов гипофиза, глюкокортикоидов и биогенных аминов [Кузьминская У.А.

и соавт., 1980; Забродский П.Ф., 1993; Szot R.J., Murphy S.D., 1970], действием ацетилхолина на холинорецепторы нейтрофилов [Dulis B.H.

et al., 1979], изменением в клетках крови содержания циклических нуклеотидов [Henson P.M., Oades Z.G., 1976], ингибированием эстераз Т-клеток, нейтрофилов и моноцитов [Забродский П.Ф., 1993;

Забродский П.Ф. и соавт., 2001; Хейхоу Ф.Г.Дж., Кваглино Д., 1983] и системы комплемента [Becker E.Z. et al., 1956, 1964, 1966, 1967, 1971, 1976]. В результате реализации данных механизмов может происходить снижение гуморального иммунного ответа и супрессия клеточных иммунных реакций [Алексеев В.И и соавт., 1981; Иванов В.В., 1986; Федоров С.М. и соавт., 1988; Алимова М. Т. и соавт,. 1991;

Гущин Н.В. и соавт. 1991, Хусинов А.А. и соавт., 1991; Rodica G., Srefania M.,1973; Street J.C. и Sharma R.P., 1975; Trinchievi G., M. de Marchi, 1976; Wietrowt R.W. et al., 1978; Tiefenbach B., Lange P., 1980;

Casale G.P. et al., 1983, 1984; Devens B.H. et al., 1985; Thomas I.K., Imamura T., 1986; Rodgers K.E. et al., 1985а, 1985б, 1985в, 1986а, 1986б, 1986в, 1987].

К ксенобиотикам, подавляющим преимущественно В-систему иммунитета, относятся: хлорорганический инсектицид токсафен [Allen A. L. et al., 1983], трихлорэтан [Sauders V. M. et al., 1985], свинец [Jaremin B. et al., 1983], трихлорэтилен, монохлорамин, бромхлорметан, трибромметан [Koller L. D., 1987], хлорид бериллия [Yoshiyuki M. et al., 1984], перхлорат натрия [Weetman A. P. et al., 1984], диметилнитрозамин [Luster M. J., 1987].

В ряде случаев установлено, что действие фосфорорганических соединений (ФОС), особенно в малых дозах, может не вызывать снижения антителообразования [Koller L.D. et al., 1976; Tiefenbach B., Wichner S., 1985; Desi I. еt al., 1986] и даже увеличивать антителопродукцию к брюшнотифозному О- и Vi-антигену [Шафеев М.Ш.,1976], повышать синтез IgМ и IgG [Kossman S. et al., 1985], IgG и IgА [Ананченко В.Г. и соавт. 1987; Решетова Н.В. и соавт., 1987].

Противоречивость данных в отношении влияния ФОС на В-систему иммунитета у людей и животных может быть обусловлена особенностями токсикодинамики и токсикокинетики, определяющих иммунотоксичность этих соединений [Lee T.P. et al., 1979; Audre F. et al. 1983], проведением экспериментов в различное время суток, характеризующихся различной концентраций в плазме крови кортикостероидов [Иванова С.С., 1998; Dhabhar F. S. et al., 1996] и другими причинами, в частности, характером изменения внутриклеточного содержания цГМФ под влиянием ацетилхолина [Денисенко П.П., 1980; Абрамов В.В. и соавт., 1986; Калинкович А.Г.

и соавт., 1988; Garoroy M.R. et al., 1975; MacManus J.P. et al., 1975].

К группе токсикантов, вызывающие комбинированные нарушения функции Т- и В-систем иммунитета, относится большое число ксенобиотиков, нарушающих как гуморальные, так и клеточные иммунные реакции: хлорорганические пестициды и карбаматы, полигалогенизированные ароматические углеводороды, в частност, диоксин, полихлорированные дифенилы и другие соединения.

Пожалуй, нет ТХВ, способного поражать только факторы НРО, Т- или В-систему иммунитета вследствие их тесной взаимосвязи [Забродский П.Ф., 2002, 2005]. Токсичные вещества оказывают разнонаправленное воздействие неодинаковой интенсивности на разные звенья иммунной системы. Следует принимать во внимание, что данные различных авторов в отношении иммунотропных свойств ТХВ весьма противоречивы.

Патогенез одновременного поражения Т- и В-систем иммунитета может быть связан, в основном, с нарушением следующих процессов:

дифференцировкой полипотентных стволовых кроветворных клеток;

созреванием клеток–предшественников Т- и В-лимфоцитов;

распознаванием иммуноцитами антигена, активацией пролиферацией, дифференцировкой и регуляцией функции иммунокомпетентных перераспределением их между органами иммунной системы;

продукцией лимфокинов Т-хелперами и другими клетками;

цитотоксической функции Т-клеток и синтезом антител плазматическими клетками. Реализация этих механизмов обеспечивается антимитотическим действием ТХВ, а также, как уже отмечалось, инициацией перекисного окисления липидов мембран иммуноцитов, инактивацией энзимов, нарушением нейроэндокринной регуляции иммунологических процессов и другими эффектами [Забродский П.Ф., 2002].

Таким образом, в настоящее время условно по своим основным иммунотоксическим свойствам выделяют следующие ТХВ:

поражающие преимущественно Т- или В-систему иммунитета;

снижающие активность ЕКК; подавляющие функцию моноцитарномакрофагальной системы; разнонаправленно влияющие на Т- и Взвено иммунитета. Большинство токсичных веществ в той или иной степени действуют как на Т- и (или) В-систему иммунитета, так и на моноцитарно-макрофагальную систему и другие факторы, определяющие доиммунные механизмы защиты. В зависимости от характера дисфункции системы иммунитета при действии токсикантов для профилактики и лечения инфекционных, онкологических и других связанных с иммунодефицитными состояниями заболеваний могут использоваться соответствующие иммуностимуляторы.

3.3. Иммуносупрессивные свойства фармакологических Рассматривая иммунотропные свойства ТХВ, целесообразно расссмотреть иммуномодулирующие эффекты фармакологических препаратов, не относящихся к эндогенным биологически активным соединениям [Descotes J.. 1986], свойства которых и полная библиография приведены в монографии П.Ф. Забродского (1998).

Практически все лекарственные средства в зависимости от дозы, иммуносупрессивные, так и иммуностимулирующие свойства.

Следует отметить, что ряд веществ в одних и тех же дозах (концентрациях), угнетая одни иммунные реакции, может активировать другие.

Одной из групп соединений, относящихся к иммуномодуляторам, являются вещества, обладающие иммуносупрессивными свойствами (имму-нодепрессанты). Способность к снижению иммунного ответа достигается при этом неспецифическим воздействием на иммунную систему. Эта группа соединений довольно обширна и включает такие вещества, как циклоспорин А, циклофосфамид, азотиоприн, иносиплекс, синтетические полирибонуклеотиды и др [Ройт А. и соавт., 2000; Хаитов Р.М. и соавт., 2000].

Из иммуносупрессантов в клинике наиболее широко используются кортикостероиды. Эффект их связан с диффузией через клеточную мембрану, взаимодействием с цитоплазматическими стероидными рецепторами. Возникающие при этом конформационные изменения служат сигналом для специфической стимуляции синтеза белков через ядерную ДНК и РНК и рибосомы. В результате повышается активность ферментов, стабилизируются внутренние структуры и мембраны. Установлено, что в зависимости от дозы дексаметазона может происходить либо стимуляция продукции ИЛ-2, либо его полное подавление. Глюкокортикоиды действуют как на эфферентную (фагоцитоз, переработка антигена), так и на афферентную фазу иммуногенеза. Существенное значение в их иммуносупрессивном действии имеет изменение под их влиянием миграции иммунокомпетентных клеток, их пролиферации, снижение выработки лимфокинов, цитотоксичности, повышение супрессорной активности, ингибирование митоген- и аллоантигениндуцированной пролиферации Т-клеток посредством первичного угнетения экспрессии цитокинов.

Установлено, что кортизол (10-8-10-5 М) in vitro приводил к значительному снижению активности естественных клеток-киллеров.

При этом величина супрессии находилась в прямой зависимости от концентрации стероидов. При сочетании кортизола с простагландином Е2 отмечался аддитивный эффект. В опытах in vivo и in vitro дексаметазон, тестостерон, метандростенолон дозозависимо подавляли фитогемагглютинин-стимулированную реакцию бластной Глюкокортикоиды и катехоламины (отдельно или в комплексе) могут патофизиологических условиях, увеличивая запрограммированную гибель тимоцитов некоторых субпопуляций и уменьшая таким образом размер тимуса. Следует отметить, что относительно невысокие концентрации кортикостероидов способны активировать иммуногенез вследствие ингибирования клеток-супрессоров [Фролов Б.А. и соавт., 1985].

Из алкалоидов выраженным иммуносупрессивным свойством обладает колцихин, известный как ингибитор митоза. Вместо типичных веретен подобные структуры вырабатываются в результате реакции с микроканальцами, в анафазе хромосомы не могут разъединиться: наступает либо гибель клетки, либо образование мутантов. Колцихин оказывает влияние на синтез ДНК и РНК, подавляет фагоцитоз, неселективно уменьшает содержание циркулирующих хелперных/индукторных и супрессорных/цитотоксических Т-клеток [Ilfeld D., 1984].

Антимитотический эффект вызывают алкалоиды барвинка, розевин и винкристин. Эти препараты останавливают митоз на стадии метафазы, изменяют нуклеиновый обмен, являются антагонистами глутаминовой кислоты].

К иммуносупрессантам относятся также антиметаболиты, антагонисты пурина (6-меркаптопурин, азотиоприн), пиримидина, аминокислот, фолиевой кислоты (метотрексат), алкилирующие вещества (циклофосфан, алкилсульфаны, бисульфан и др.) Данные соединения оказывают влияние на пролиферацию, дифференцировку клеток, Т-клеточные и антителозависимые иммунные реакции.

К обширной группе иммунодепрессантов относятся антибиотики.

По принципу действия иммуносупрессивные антибиотики представляют собой крайне гетерогенную группу, однако у них удалось обнаружить способность к селективности, что может быть использовано для целенаправленного влияния на определенные процессы обмена в иммунных реакциях.

В ряде случаев противоречивость данных литературы в отношении стимулирующих или супрессирующих влияний антибиотиков на гуморальный или клеточный иммунный ответ связана с применением в экспериментах различных доз препаратов, особенностями их назначения, видом или линией животных, использованием в опытах разных микроорганизмов и антигенов, получением данных в опытах in vivo или in vitro.

Снижение большинства из исследованных иммунных параметров при лечении антигрибковыми средствами (амфотерицин-В и др.) подтверждает данные многочисленных исследований, описанные в монографии J. Descotes (1986). При этом отмечается активация фагоцитоза у флюороцитозина, а нистатин многократно увеличивает некоторые показатели гуморального иммунитета (Т-зависимый ответ на ЭБ, пролиферацию Т- и В-лимфоцитов, стимулированную соответственно фитогемагглютинином и липополисаха-ридом).

Психотропные препараты могут обладать в зависимости от условий применения как иммуностимулирующим, так иммунодепрессивными свойствами. В литературе наибольшее отражение нашло описание их иммуноcупрессирующих эффектов.

Производные фенотиазинов (хлорпромазин, клотиапин, клозапин, левомепромазин, перфеназин, прохлорперазин, промазин, прометазин, тиоридазин, тиопроперазин, трифлуороперазин) угнетают многочисленные показатели НРО, клеточного и гуморального иммунитета в опытах in vivo и in vitro на различных видах животных, а также при изучении показателей у больных, получaвших данные вещества. Установлен ингибиторный эффект фенотиазинов (флуфеназина) на цитолиз опухолевых клеток, опосредованный естественными клетками-киллерам], описано угнетение трифторпиразином и хлорпромазином розеткообразования.

Представлены доказательства, что хлорпромазин ингибирует синтез мРНК, специфичной для ИЛ-2, -интерферона, -фактора некроза опухолей и с-myc протоонкогена; угнетает пролиферацию тимоцитов.

Аналогичные свойства установлены у производного бутирофенона галоперидола, трициклических антидепрессантов (амитриптилина, дезипримина, имипрамина, нортриптилина).

бензодиазепинов данные противоречивы, свойства этих соединений существенно зависят от их структуры и типа действия (центрального или периферического).

Под влиянием диазепама установлено угнетение пролиферации Тлимфоцитов, индуцированных фитогемагглютинином in vitro при концентрации 0,13 мМ. При 3-дневной экспозиции диазепам снижал Т-зависимое антителообразование в дозах 1 и 8 мг/кг в день при применении в течение соответственно 20 и 14 дней, а также реакцию ГЗТ. Флунитразепам уменьшал фагоцитоз, оцениваемый в НСТ-тесте.

Тем не менее, в опытах на мышах и крысах установлено, что феназепам в дозах 5 мг/кг при однократном применении увеличивал антителообразование, в более высоких – снижал его [Забродский П.Ф., 1991]. Производные бензодиазепина Rо 5-4864 и диазепaм усиливали гуморальный иммунный ответ вследствие индукции способности макрофагов стимулировать антителообразование. Выявлено стимулирующее влияние бензодиазепинов только при высоких дозах иммунизации. Показано, что диазепам усиливает хемотаксис человеческих лимфоцитов и выработку Т-зависимых антител у крыс.

В условиях in vitro показано, что диазепам в концентрациях 10-7-10-6 М в значительной степени тормозит фагоцитоз и киллинг человеческими полиморфноядерными клетками и моноцитами. Диазепам и тазепам стимулируют розеткообразование в малых дозах, не проявляя эффекта в средних и угнетая в больших.

В механизме иммуносупрессорных эффектов бензодиазепинов существенное значение имеет ингибирование продукции ИЛ-3 и ИЛ-2, причем это свойство не характерно для центральных лигандов (клоназепама). Считают, что иммуносупрессорная активность характерна для лигандов периферического и смешанного, но не центрального типа.

У больных однократное внутривенное введение мидазолама (0, мг однократно, внутривенно) сопровождается выраженным отсроченным ингибированием, индуцируемой липополисахаридом продукции 1, -фактора некроза опухоли и ИЛ-6 моноцитами периферической крови. Таким образом, бензодиазепины изменяют способность моноцитов синтезировать ключевые медиаторы воспалительного ответа. Выявлено угнетение реакции ГЗТ у мышей под влиянием мепробамата.

Неоднозначны данные в отношении иммунотропных эффектов ГАМК: описано как стимулирующее действие этого соединения на иммунитет вследствие увеличения межклеточной кооперации и действия на рецепторы лимфоцитов, так и иммуносупрессивный эффект, который отменялся индукцией Р-450-зависимых монооксигеназ печени.

анальгетиков установлено, что морфин в опыте на мышах снижает функцию клеточного иммунитета, неспецифическую защиту организма и устойчивость к инфекции.

Одной из причин постхирургической иммуносупрессии считают применение анестезирующих газов – закиси азота, галотана, энфлурана. Показано, что все эти анестезирующие вещества снижают in vitro активность ЕКК у человека на 12-33% в зависимости от природы газа, его дозы и соотношения ЕКК и клеток-мишеней. Через некоторое время после наркоза активность ЕКК нормализуется].

Хемотаксис, реакцию ГЗТ, пролиферацию Т-лимфоцитов и их цитотоксичность угнетают барбитураты, вводимые внутривенно, – метогекситал, пентобарбитал, тиопентал, а также местные анестетики – буривакаин, лидокаин, прилокаин, прокаин, тетракаин.

В опытах на мышах метронидазол (100-200 мг/кг, в течение 5 дней) и циметидин (200 мг/кг, в течение 5 сут) снижали реакцию ГЗТ, тинидазол (100-200 мг/кг в течение 5 сут) не оказывал влияния на данную реакцию. Исследованные препараты в дозе 10 мг/кг (внутрибрюшинно, ежедневно, на протяжении 8 сут после иммунизации крыс яичным альбумином) ингибировали миграцию лейкоцитов плазмы в присутствии антигена. Описанные эффекты обусловлены взаимодействием препаратов с Н2-рецепторами Тлимфоцитов.

Серотонин увеличивает Т-клеточную активность при низких дозах и уменьшает при высоких.

Блокаторы К+-каналов (тетраэтиламмоний и 4-аминопиридин), блокаторы Са2+-активированных К+-каналов (квинин), блокаторы Са+2-каналов (никель и верапамил) подавляют стимулированную липополисахаридом В-клеточную пролиферацию. Аминокислотные препараты в определенных дозах снижают иммунный ответ. Так, авиамин в дозе 65 мг/кг обладает иммуносупрессорными свойствами.

В экспериментах на мышах выявлено как ингибирующее, так и стимулирующее действие кофеина на иммунитет в зависимости от схемы применения препарата и дозы.

Теофиллин ингибирует различные клеточные иммунные реакции, фагоцитоз, активность ЕКК, в то же время вследствие активации цАМФ этот препарат способен повышать Т-зависимое антителообразование. Циннаризин снижает Т-зависимое антителообразование и пролиферацию В-клеток, но увеличивает реакцию ГЗТ. Это, вероятно, обусловлено его активацией лимфоцитов Th1-типа и супрессией Th2-клеток.

Из гормональных препаратов помимо кортикостероидов иммуносупрессивными свойствами обладают половые гормоны:

тестостерон, диэтилстильбестрол (увеличивает наряду с общей иммуносупрессией содержание в крови гранулоцитов, моноцитов, повышает фагоцитоз и устойчивость к инфекционным процессам, вызванным некоторыми видами микроорганизмов), эстрадиол (описано увеличение фагоцитоза и синтеза антител к ЭБ у мышей), эстрон, прогестерон.

Таким образом, спектр препаратов с иммуносупрессивными эффектами довольно широк, одни из них используются как иммунодепрессанты, противоопухолевые вещества, другие обладают иммунодепрессивным действием, которое следует рассматривать как побочное.

Механизмы иммуносупрессивных эффектов реализуются на субкле-точном уровне (ингибирование, модификация ферментативной активности, образование антиметаболитов, включение в синтез в качестве антагонистов аминокислот, фолиевой кислоты, пиримидина, пурина, поражение клеточных органелл, ингибирование митоза и другие изменения нуклеинового обмена, апоптоз клетки и т.п.), на клеточном (модификация мембраны клетки, изменение экспрессии антигенных детерминант, взаимодействие со специфическими рецепторами тучных клеток, снижение синтеза интерлейкинов), на уровне межклеточных взаимодействий и путем ингибирования эффекторных функций иммуноцитов. Точками приложения иммуносупрессоров преимущественно могут быть эфферентная, центральная или аффекторная фазы иммуногенеза. По преобладающему эффекту препараты, угнетающие функцию иммуногенеза, могут действовать на распознавание антигена, его процессинг в макрофагах, активацию, пролиферацию и дифференцировку иммуноцитов.

ГЛАВА 4. ИММУНОТОКСИЧНОСТЬ ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИХ

ПЕСТИЦИДОВ И АНТИХОЛИНЭСТЕРАЗНЫХ ТОКСИЧНЫХ

ХИМИКАТОВ

4.1. Общая характеристика фосфорорганических соединений Фосфорорганические соединения (ФОС) относятся к большой группе веществ, широко использующихся в сельском хозяйстве в качестве пестицидов (ФОП): инсектицитов (фосфорорганические инсектициды – ФОИ), фунгицидов, акарицидов, гербицидов (для уничтожения сорняков), дефолиантов (препаратов, вызывающих опадение листьев и облегчающих уборку некоторых культур), десикантов (препаратов, способствующих подсушиванию растений), ротентицидов (средств для борьбы с грызунами). В промышленности ФОС используются для синтеза различных веществ, обладающих избирательным действием в отношении определенных видов животных, и других целей. В быту ФОС применяются в качестве инсектицидов. Некоторые ФОС относятся к боевым отравляющим веществам (БОВ).

Отравления ФОИ могут происходить при нарушении техники безопасности в процессе использования данных соединений по назначению, а также при употреблении их в качестве суррогатов алкоголя или с суицидальной целью. В настоящее время в связи с проводящимся широкомасштабным уничтожением токсичных химикатов (боевых отравляющих веществ – VX, зарина и зомана), относящихся к фосфорорганическим отравляющим веществам (ФОВ), возможны массовые интоксикации при авариях и нарушениях техники безопасности. Не исключено примененение ФОВ в качестве отравляющих веществ при осуществлении террористических актов (например, использование сектой «Аум Синрике» в 1975 году зарина в метро города Токио).

В литературе ФОС по токсичности разделяют на 4 группы:

сильнодействующие токсичные вещества – тиофос, меркаптофос, метилэтилтиофос; высокотоксичные вещества – метилмеркаптофос, фосфамид, ДДВФ, базудин, антио, цидеал, фталофос, бензофосфат ЛД50 - 50-200 мг/кг), соединения средней токсичности – хлорофос, метилнитрофос, карбофос, трихлорметафос-3, сайфос - (ЛД50 - 200мг/кг); вещества малой токсичности – винилфосфат, бромофос, абат, цианокс, валексон, демуфос- (ЛД50 - более 1000 мг/кг) [Медведь Л.И. и соавт., 1968; Каган Ю.С., 1977; Лужников Е.А. и Костомарова Л.Г., 2000]. На наш взгляд, следует выделить и пятую группу, к которой относятся ФОВ (ФОС), являюшиеся БОВ с ЛД50 менее мг/кг (зарин, зоман, VX).

ФОС представляют собой большую группу токсикантов, обладающих антихолинэстеразным эффектом и довольно подробно описаных в многочисленных учебниках и монографиях [Каган Ю.С., 1977; Саватеев Н.В., 1978; Мошкин Е.А. и соавт., 1980; Лужников Е.А., 1982; Лудевиг Р., Лос К.,1983; Могуш Г., 1984; Бадюгин И.С. и соавт., 1992; Маркова И.В. и соавт., 1998; Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 1989, 2000].

Основной механизм действия ФОС на системы и органы организма – нарушение каталитической функции ферментов холинэстераз (антихолинэстеразное действие). Инактивация ацетилхолинэстеразы приводит к накоплению ацетилхолина в центральной нервной системе (ЦНС), мозговом веществе надпочечников, ганглиях симпатической и парасимпатической нервной системы, а также в синаптической щели нервных окончаний парасимпатической нервной системы, подходящим к м-холинорецепторам внутренних органов. Кроме того, ацетилхолин выделяется из пресинаптической мембраны нервных окончаний симпатической нервной системы, иннервирующей потовые железы, и соматической нервной системы, иннервирующей скелетные мышцы. В результате действия ацетилхолина реализуется мускариноподобное, никотиноподобное и центральное действие ФОВ [Саватеев Н.В., 1978; Мошкин Е.А. и соавт., 1980; Лужников Е.А., 1982; Лудевиг Р., Лос К.,1983; Могуш Г., 1984; Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 1989, 2000]. К основным неантихолинэстеразным механизмам действия ФОВ относится их способность фосфорилировать некоторые белки, действовать на м- и нхолинорецепторы (курареподобное действие на скелетные мышцы), взаимодействовать с протеолитическими ферментами, оказывать влияние на адренергические структуры, обеспечивать так называемое «облегчающее» действие (способствует выходу ацетилхолина из нервных окончаний) [Прозоровский В.Б., Саватеев Н.В., 1976;

Саватеев Н.В., 1978; Виноградов В.М. и соавт. 1985; Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 1989, 2000].

При острых отравлениях ФОС возникают психоневрологические нарушения, нарушения функции дыхания, сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта, печени, почек и других органов и систем [Голиков С.Н, 1968; Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 1989, 2000].

К обычным осложнениям тяжелых отравлений ФОС относятся пневмонии, поздние интоксикационные психозы и полиневриты [Лужников Е.А., Костомарова Л.Г., 2000].

Несомненно, что одной из причин постинтоксикационной пневмонии явяляется нарушение механизмов физиологической регуляции системы иммунитета [Забродский П.Ф., 1998]. Возможны и другие инфекционные осложнения и заболевания после острого отравления ФОС [Каган Ю.С., 1977].

Механизм восстановления ферментативной активности АХЭ состоит в связывании реактивирующего агента с остатком ФОС и отрыве последнего от фермента. Отравленный энзим может очень быстро «стареть» и тогда не реактивируется. Например, полупериод «старения» составляет при ингибировании ДФФ – 20 мин, зоманом – мин и т. д. Поэтому применение реактиваторов должно осуществляться как можно раньше.

Восстановление каталитической активности холинэстеразы, угнетенной ФОВ, определяется как процесс реактивации ацетилхолинэстеразы. Фармакологические препараты, способные ускорить такой процесс реактивации, называются реактиваторами холинэстеразы и являются антидотами ФОВ. Кроме того, основным антидотом ФОВ является атропин. В Вооруженных Силах РФ для оказания первой медицинской помощи при отравлениях боевыми отравляющими веществами, относящимися к ФОВ, существуют специальные рецептуры, содержащие холиноблокаторы, реактиваторы холинэстеразы и ряд других соединений [Саватеев Н.В., 1978;

Куценко С.А., 2004].

4.2. Основные токсикометрические характеристики антихолинэстеразных токсикантов и холиномиметиков По данным различных авторов иммунотоксические параметры одних и тех же ФОС могут различаться, как правило, в 2-3 раза. Эта общая особенность для всех ТХВ, связанная с проведением экспериментов на животных в различное время года, обусловленная генотипическими различиями животных одного вида, особенностями их содержания, питания, климатической зоной, микроклиматом вивария и т.п. Чем выше токсичность химических соединений, тем меньше различия токсикометрических параметров, установленные в различных лабораториях.

Краткая токсикометрическая характеристика соединений (ЛД50), применяющихся в качестве ФОИ, приведена в табл. 4.1 [Голиков С.Н., 1968; Забродский П.Ф., Линючев М.Н., 1993].

Токсичность фосфорорганических инсектицидов Препарат Вид животного Способ введения ЛД50, мг/кг Токсичность (ЛД50) прямых холиномиметиков и обратимых и необратимых ингибиторов холинэстеразы по данным различных авторов приведена в табл. 4.2.

Токсичность прямых холиномиметиков и обратимых и необратимых ингибиторов холинэстеразы Препарат Вид животного Способ введения ЛД50, мг/кг Продолжение таблицы 4. Пиридостигмин Прозерин Физостигмин (эзерин) Лобелин В табл. 4.3 приведена токсичность (ЛД50) ФОВ, относящихся к антихолинэстеразным токсичным химикатам.

Токсичность ФОВ, относящихся к токсичным химикатам 4.3. Влияние ФОС и антихолинэстеразных токсичных химикатов на доиммунные механизмы защиты от инфекции и систему Интенсивные исследования влияния фосфорорганических соединений на гуморальный иммунный ответ началось в 60-е годы, в период получения Ф.Бернетом и П.Медаваром Нобелевской премии (в 1960 году) за исследования по искусственной индукции иммунологической толерантности и открытия R. Porter (1962) схемы строения иммуноглобулинов [Забродский П.Ф., 1998; Хаитов Р.М. и соавт., 2000; Descotes J., 1986]. Внимание исследователей в основном было сосредоточено на эффектах, обусловленных хроническим воздействием ФОП [Феерман И.С. и соавт., 1964; Штенберг А.И., Джунусова Р.М.,1968; Фридман Г.И., 1970].

Рядом исследователей было показано, что ФОС вызывают снижение антителообразования. При последующем изучении функции В-звена иммунитета после хронического воздействия метилмеркаптофоса, хлорофоса, циклофоса и других ФОС эти результаты были существенно дополнены и подтверждены с помощью различных методов исследования гуморальной иммунной реакции [Николаев А.И. и др., 1972; Диноева С.К., 1974; Забродский П. Ф., 1986; Жминько П.Г., 1986; Присяжнюк Т.Н. и соавт., 1986; Desi I., Varga L., 1983]. Так, было установлено, что при ежесуточном поступлении хлорофоса (5-100 мг/кг) в организм крыс с водой через месяц увеличивалось количество лимфоцитов в периферической крови, затем содержание этих клеток в тимусе и селезенке уменьшалось пропорционально суточной дозе яда [Иванов В.В., 1986].

У лиц, контактирующих с ФОП, изменялись корреляционные связи внутри пула лимфоцитов и нейтрофилов, зависимость между содержанием В-лимфоцитов и общим количеством лимфоцитов [Федоров С.М. и соавт., 1988]. Незначительное снижение синтеза антител сопровождалось существенным уменьшением лимфоидного индекса селезенки. При введении роннела (фенхлорфоса) перорально в дозе 0, ррm (ежедневно в течение 3-8 недель) отмечали снижение лимфоидного индекса тимуса на 49%. Уменьшение данного показателя регистрировали при введении фенхлорфоса перорально в дозе 1 ррm в течение 3-8 недель на 39% [Rodica G., Srefania M.,1973].

В наших исследованиях было установлено (рис. 4.1), что при действии российского VX через 2 сут происходит прямо связанное с дозой снижение лимфоидного индекса (ЛИ) тимуса и селезенки, статистически значимое при дозах токсиканта, составляющих 0,25;