На правах рукописи

УРБАН ЮЛИЯ НИКОЛАЕВНА

Определение фенотипических и молекулярно-генетических характеристик штаммов Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae, выделенных из ликвора детей, больных гнойным

бактериальным менингитом

03.02.03- микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва – 2014

Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.

Г.Н.Габричевского» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Научные руководители:

Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Афанасьев Станислав Степанович доктор биологических наук Воропаева Елена Александровна

Официальные оппоненты:

Дмитренко Ольга Александровна доктор медицинских наук, ведущий научный сотрудник лаборатории молекулярных основ патогенности. Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения РФ Червинец Вячеслав Михайлович доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой микробиологии и вирусологии с курсом иммунологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Тверская государственная медицинская академия»

Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Ведущая организация: Хабаровский филиал Федерального государственного бюджетного учреждения "Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук - Научноисследовательский институт охраны материнства и детства.

Защита состоится « » 2014 г. в _ часов на заседании диссертационного совета Д 208.046.01 при Федеральном бюджетном учреждении науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по адресу: 125212, Москва, ул.

Адмирала Макарова, 10.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте Федерального бюджетного учреждения науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» по адресу: 125212, Москва, ул. Адмирала Макарова, 10, htp//www.gabrich.ru

Автореферат разослан « » 2014 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук Борисова Ольга Юрьевна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы Гнойный бактериальный менингит (ГБМ), как форма инфекционной нейропатологии, занимает важное место в структуре заболеваний нервной системы и остается одной из причин летальности и инвалидизации больных. Ведущими возбудителями данного заболевания являются Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae тип b (Hib) (Сорокина М.Н. и др., 2003; Королева И.С., 2004).

Ежегодно в мире, по расчетным данным, регистрируется более 1,2 миллиона случаев бактериальных менингитов (WHO Vaccine Preventable Diseases Monitoring System, 2010) Для идентификации N. meningitidis, S. pneumoniae и H. influenzae широко используются микробиологические методы: бактериологический, микроскопический, иммунохимический (реакция латекс-агглютинации). Хотя бактериологический метод и принято считать золотым стандартом для подтверждения случаев заболевания в условиях клиники, уровень положительных результатов этого исследования относительно низкий по причине несоблюдения оптимальных условий хранения и транспортировки материала, и/или проведения антибактериальной терапии до взятия клинического материала, а учет результатов реакции латекс-агглютинации носит субъективный характер и может быть сложным для интерпретации (Королева И.С., 2004;

Laboratory Methods for the Diagnosis of Meningitis caused by Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae and Haemophilus influenzae, 2011). Поэтому, в последние годы для диагностики основных возбудителей гнойного бактериального менингита широко применяются молекулярные методы, в частности, метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), который находит широкое применение благодаря своей высокой чувствительности, специфичности и большей производительности (Carvalho M. G. et all, 2007; Maroufi Y., 2007; Mothershed E. A., 2004).

Определение серотипового и серогруппового пейзажа N. meningitidis, S.

pneumoniae и H. influenzae играет важную роль при внедрении вакцин, необходимых для профилактики гнойных бактериальных менингитов (WHO Vaccine Preventable Diseases Monitoring System, 2010). Для полноценного эпидемиологического надзора за N. meningitidis, H. influenzae и S. pneumoniae необходимы данные, которые позволяют проанализировать популяцию возбудителей (Brehony C., 2007). Данные об эволюции и закономерностях распространения патогенных бактерий, полученные с помощью метода мультилокусного сиквенс-типирования (МЛСТ), наиболее информативны, так как позволяют находить генетическую связь между штаммами и оценивать степень филогенетического родства возбудителей, а также дают представление о их географическом распространении (Лукашов В.В., 2009; Brehony C., 2007; Selender R. K., 1987).

Своевременная и адекватная антибиотикотерапия гнойного бактериального менингита позволяет снизить смертность и инвалидизацию пациентов (Королева И.С., 2007; Mortensen, J. E., 2006). Однако, лечение данного заболевания может быть неэффективным вследствие пониженной чувствительности к антибактериальным препаратам (АБП) штаммов N. meningitidis, H. influenzae и S. pneumoniae. Трудности в оценке антибиотикорезистентности культур обуславливают необходимость использования молекулярно-генетических методов для выявления маркеров, определяющих устойчивость к антибиотикам (Chiba N. et all, 2011).

В ряде стран, входящих в состав содружества независимых государств (СНГ), для идентификации S.pneumoniae, N.meningitidis, H.influenzae в лабораториях используются, в основном, бактериологические и иммунохимические методы, нет полноценной картины о распространении на этих территориях возбудителей гнойного бактериального менингита.

Актуальность работы заключается в необходимости всестороннего изучения циркулирующих штаммов N. meningitidis, S. pneumoniae и H. influenzae, вызывающих гнойный бактериальный менингит у детей в странах СНГ.

Степень разработанности темы исследования Гнойный бактериальный менингит по-прежнему остается серьезной проблемой здравоохранения, поэтому необходимо внедрение новых вакцин против возбудителей данного заболевания (WHO Vaccine Preventable Diseases Monitoring System, 2010). Для введения вакцинации проводится мониторинг циркулирующих штаммов.

Исследование возбудителей на пост-вакцинальном этапе необходимо для выявления серогрупповых/серотиповых замен в структуре циркулирующих штаммов (Платонов А.Е., 2011). В современных условиях использование молекулярно-генетических методов, совместно с классическими бактериологическими методами, позволяет провести всесторонние наблюдения за возбудителями, определить детерминанты, отвечающие за устойчивость к антибактериальным препаратам, расшифровать природу их устойчивости (Платонов А.Е., 2011). В России мониторингом циркулирующих возбудителей гнойного бактериального менингита с использованием как классических бактериологических, так и современных молекулярно-генетических методов занимается ряд исследователей (Козлов Р.С., 2005; Королева И.С., 2013; Мирнов К.О., 2011; Платонов А.Е, 2011; Савинова Т.А., 2011). Однако работ, посвященных изучению возбудителей гнойного бактериального менингита в странах СНГ, нет. Остается невыясненным состав доминирующих штаммов, их антибиотикорезистентность и филогенетические отношения. Данные исследования являются актуальными для Российской Федерации, в связи с ее географическим расположением и активной миграцией населения из стран СНГ.

Цель исследования Провести микробиологический и молекулярно-генетический скрининг образцов СМЖ и штаммов из ликвора и носоглотки, полученных от детей, больных гнойным бактериальным менингитом, для оценки фенотипических, молекулярногенетических и филогенетических свойств S. pneumoniae, N. meningitidis и H.influenzae.

Задачи исследования:

1. Провести мониторинг циркуляции N. meningitidis, S. pneumoniae и H.

influenzae в странах СНГ. Определить их серогрупповую и серотиповую принадлежность.

2. Оценить уровень фенотипической антибиотикочувствительности штаммов N.

meningitidis, S. pneumoniae и H. influenzae. Выявить наличие изменений в генах pbp1a, pbp2x и pbp2b, обуславливающих снижение чувствительности к пенициллину, и наличие генов mefA и ermB, ответственных за устойчивость к макролидам, у штаммов S. pneumoniae.

3. Определить доминирующие сиквенс-типы и клональные комплексы штаммов S. pneumoniae, N. meningitidis и H. influenzae, циркулирующих в странах СНГ, провести анализ филогенетического родства с построением дендрограмм.

4. Установить степень филогенетического родства между штаммами S.

pneumoniae, выделенными из СМЖ и со слизистой носоглотки.

5. Разработать алгоритм идентификации возбудителей гнойного бактериального менингита.

Впервые охарактеризована популяционная структура штаммов S. pneumoniae, N. meningitidis и H. influenzae, вызывающих гнойный бактериальный менингит у детей в странах СНГ с помощью метода мультилокусного сиквенс-типирования (МЛСТ).

Выявлено, что штаммы S.pneumoniae относились к сиквенс-типам СТ 239, 246, 2436, 473, а также СТ 230 и СТ 1176, в которые вошли штаммы, устойчивые к пенициллину, N.meningitidis - к клональному комплексу ST-11 complex/ET-37 complex и H.

influenzae - к клональному комплексу А1/А2.

Проведено молекулярно-генетическое исследование детерминант антибиотикорезистентности S. pneumoniae и показано, что устойчивость к пенициллину у S.

pneumoniae связана с изменениями в генах, кодирующих чувствительность к пенициллину, а устойчивость к эритромицину обусловлена приобретением соответствующих островков патогенности (генов резистентности к антибиотикам).

Впервые идентифицированы два новых сиквенс-типа N.meningitidis CT-10735 и (http://pubmlst.org/perl/bigsdb/bigsdb.pl?page=profileInfo&db=pubmlst_neisseria_seqdef& scheme_id=1&profile_id=10735) и 28791 (http://pubmlst.org/perl/bigsdb/bigsdb.pl?page =profileInfo&db=pubmlst_neisseria_seqdef&scheme_id=1&profile_id=1073, что способствует повышению эффективности эпидемиологического надзора за менингококковой инфекцией.

Разработанный алгоритм идентификации возбудителей гнойного бактериального менингита позволяет сделать заключение о клинической значимости возбудителя в инфекционном процессе и оптимизировать лечебно-профилактические мероприятия.

Теоретическая и практическая значимость работы Предложенный алгоритм идентификации инвазивных и неинвазивных штаммов с применением классических бактериологических и молекулярно-генетических методов позволит оценить патогенетическую значимость различных возбудителей гнойного бактериального менингита в инфекционном процессе.

Сведения о составе и распределении серогруппового/серотипового пейзажа N.meningitidis, S.pneumoniae и H. influenzae в странах СНГ дают возможность обосновать введение в национальный календарь прививок вакцин против данных возбудителей.

Данные о наличии антибиотикорезистентности у штаммов S.pneumoniae и N.meningitidis могут быть использованы для оптимизации антибиотикотерапии гнойных бактериальных менингитов в странах СНГ.

Создан банк ДНК N.meningitidis, S.pneumoniae, H.influenzae для дальнейших исследований, определения генетической структуры (сиквенс-типы) и определения антибиотикорезистентности, связанной с генетическими изменениями циркулирующих патогенов.

Результаты исследований и разработок внедрены в научно-исследовательскую работу лаборатории клинической микробиологии и биотехнологии ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора (Акт внедрения от 24 июля 2014 г.) Оптимизированные молекулярно-генетические методы типирования основных возбудителей гнойного бактериального менингита используются в Региональном референс-центре по инвазивным бактериальным заболеваниям, управляемым вакцинацией (РРЛ по ИБЗ), Европейского Регионального Бюро Всемирной Организации Здравоохранения (ЕРБ ВОЗ) при проведении мониторинга за основными возбудителями гнойных бактериальных менингитов в странах СНГ. Результаты проведенных исследований размещены в базе данных ВОЗ и включены в ежегодно издаваемые бюллетени по наблюдению за возбудителями гнойных бактериальных менингитов в Европейском регионе ВОЗ.

Методология и методы и исследования Методология данной работы спланирована согласно поставленной цели. Основными объектами исследования стали фенотипические, молекулярно-генетические и филогенетические свойства циркулирующих штаммов, вызывающих ГБМ. Научная литература, посвящённая проблеме основных свойств S.pneumoniae, N.meningitidis и H.influenzae, была проанализирована формально-логическими методами исследования. Предметом исследования явились штаммы S.pneumoniae, N.meningitidis и H.influenzae, выделенные из спинномозговой жидкости (СМЖ) детей больных ГБМ. В работе использованы бактериологические, иммунохимические и молекулярногенетические методы исследования.

Материалы и методы исследований Результаты диссертационной работы основаны на лабораторном исследовании 810 образцов СМЖ и 33 клинических штаммов, выделенных из СМЖ, взятой у детей в возрасте от 1 месяца до 59 месяцев и 29 дней, поступивших в дозорные госпиталя с подозрением на менингит. СМЖ и клинические штаммы поступали из следующих стран: Азербайджан, Армения, Грузия, Белоруссия, Узбекистан и Украина за период 2007-2013 г.г. Для сравнения с клиническими штаммами S.pneumoniae, выделенными из СМЖ детей в странах СНГ, были взяты клинических штаммов из СМЖ и 9 клинических штаммов, выделенных со слизистой носоглотки у пациентов клинико-диагностического центра ФБУН МНИИЭМ им.Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора.

Бактериологические методы. Для видовой идентификации полученные штаммы засевали на кровяной и «шоколадный» агар (Oxoid, Великобритания), термостатировали в течение 24-48 часов при 370С в атмосфере с ~5% CO2 и идентифицировали с использованием микроскопических, бактериологических и биохимических методов ( «Лабораторные методы диагностики бактериальных менингитов, вызванных Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae.

Пособие ВОЗ, 2-е издание», 2011г.).

Серологические методы. Для серологического типирования штаммов H.influenzae, N.meningitidis применяли коммерческие тест системы Pastorex meningitidis Latex kit (Biorad, США), индивидуальные антисыворотки к N. meningitdis (BD, США). Серотипирование штаммов S.pneumoniae проводили с помощью коммерческого набора Pneumotest Latex kit (SSI, Дания) и реакции набухания капсулы (проба Нейфельда) с использованием индивидуальных антисывороток (SSI, Дания). Постановку реакций и оценку результатов проводили в соответствии с инструкциями производителей.

Определение чувствительности культур S.pneumoniae, N.meningitidis и H.influenzae к антибиотикам проводили с помощью диско-диффузионного метода Кирби-Бауэра (ДДМ) и определения минимальной ингибирующей концентрации (МИК) с использованием тест-полосок «E-test», содержащими антимикробные препараты («Oxoid», Великобритания): пенициллин, ампициллин, цефотаксим, ципрофлоксацин, хлорамфеникол, эритромицин, ванкомицин, триметропим/сульфаметоксазол. Оценку чувствительности микроорганизмов осуществляли согласно МУК 4.2. 1890-04 и стандартам, рекомендуемым Институтом клинических и лабораторных стандартов (Clinical and Laboratory Standarts Institute, CLSI, США).

Для выявлявления продукции -лактамаз у штаммов H. influenzae использовали экспресс-тест с нитроцифином (Oxoid, Великобритания), результат оценивали согласно инструкции производителя.

Молекулярно-генетические методы исследования. Экстракцию ДНК из СМЖ осуществляли с помощью коммерческого набора для выделения ДНК QIAmp DNA Mini Kit (Qiagen, США), согласно протоколу с частичной модификацией (Carvalho M. G.et all, 2007). Экстракцию хромосомальной ДНК из культур N.meningitidis и H. Influenzae осуществляли методом кипячения, согласно общепринятому протоколу (Маниатис Т.,1984). Для экстракции хромосомальной ДНК из культур S.pneumoniae использовали дополнительный ферментативный лизис. Для приготовления ферментативного буфера в 50 мкл Трис буфера (pH 8,0) добавляли мкл мутанолизина (3000 Ед/мл) (Sigma, США) и 8 мкл гиалуронидазы (30 мг/мл) (Sigma, США). 18-24 часовую культуру клеток S. pneumoniae, выросшую на кровяном агаре, вносили в 0,85% раствор NaCl до получения суспензии, сопоставимой со стандартом 3,0 по МакФарланду, и инкубировали при 700С в течение 15 минут. Затем, пробирки с суспензией центрифугировали при 12000 об/мин в течение 2 минут, после чего сливали супернатант, а осадок ресуспензировали в 50 мкл ферментативного буфера, пробирки с буфером инкубировали при 370С в течение 30 минут, затем кипятили содержимое при 1000С 10 минут, пробирки с суспензией центрифугировали при 13000 об/мин в течение 3 минут (Carvalho M. G. et all, 2007).

Видовую детекцию N.meningitidis, H. influenzae и S. pneumoniae осуществляли с помощью метода ПЦР РВ. Использовали последовательности праймеров и флуоресцентно меченные зонды, рекомендованные согласно руководству «Лабораторные методы диагностики бактериальных менингитов, вызванных Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae. Пособие ВОЗ, 2-е издание»

(2011г.). Амплификацию с детекцией в режиме реального времени проводили в амплификаторе ABI 7500 (Applied Biosystems, США). Для определения серотипа S.pneumoniae применяли метод мультиплексной ПЦР (мПЦР), согласно схемам и (http://www.cdc.gov/ncidod/biotech/strep/pcr.htm).

Определение генетической чувствительности к пенициллину и генетической резистентности к макролидам штаммов S. pneumoniae проводили с помощью ПЦР РВ с использованием праймеров и флуоресцентно меченных зондов, рекомендованных Chiba N et all., 2011.

Мультилокусное сиквенс типирование. Последовательность праймеров для амплификации и секвенирования генов «домашнего хозяйства», протоколы амплификации и реакции секвенирования использовали согласно рекомендациям базы данных S.pneumoniae MLST (http://spneumoniae.mlst.net/), H.influenzae MLST (http://haemophilus.mlst. net/), Neisseria PubMLST (http://pubmlst.org/neisseria/). Определение нуклеотидной последовательности фрагментов проводили модифицированным методом Сенгера на автоматическом секвенаторе ABI Prism 3100 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, США) с использованием набора реагентов для секвенирования BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, США), согласно рекомендациям производителя. Исследования проводились на базе ЗАО «ПИННИ» («Постгеномные и нанотехнологические инновации», CJSC «PYNNY» Инновационного центра медицинских нанобиотехнологий ГУ НИИ физико-химической медицины МЗ РФ, г. Москва).

Статистическая обработка, анализ данных и программное обеспечение.

Статистическую обработку полученных данных проводили, применяя стандартный пакет статистических программ Microsoft Excel 2007. Для сравнения качественных признаков между исследуемыми группами использовали критерий хиквадрат (2) (Винник А.Л., 1991; Гланц С., 1998). Результаты секвенирования, полученные в формате хроматограммы, обрабатывали в программе CromasLite, секвенированные последовательности сопоставляли с международной on-line базой MLST (http://pubmlst.org). Для определения клональности исследуемых штаммов использовали алгоритм eBURSTv3, интегрированный в МЛСТ вебсайт (http://eburst.mlst.net).

С использованием программы «Vector NTI Suite v. 9» проводили склеивание полученных нуклеотидных последовательностей. Выравнивание последовательностей осуществляли с помощью сервиса BLAST(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PAGE_ TYPE=BlastSearch&BLAST_SPEC=blast2seq&LINK_LOC=align2seq). Построение филогенетической дендрограммы осуществляли методом присоединённых соседей (Neigbor joining –NJ) с использованием программного обеспечения MEGA 5. (Tamura K., 2011).

Личное участие автора в получении результатов.

Личное участие соискателя в получении результатов, изложенных в диссертации, заключалось в выполнении молекулярно-генетических исследований (ПЦР РВ, мПЦР), в обработке и анализе данных секвенирования, проведении биоинформационного анализа полученных данных, теоретическом обобщение результатов, статистической обработка данных. Бактериологические исследования проводились совместно с сотрудниками лаборатории клинической микробиологии и биотехнологии ФБУН МНИИЭМ им. Г. Н. Габричевского Роспотребнадзора: ведущим научным сотрудником Егоровой Е.А., младшим научным сотрудником Оганесяном А.Н.

Положения, выносимые на защиту:

1. Для выявления и определения серогрупп и серотипов N. meningitidis, S.

pneumoniae и H. influenzae в спинномозговой жидкости целесообразно использовать молекулярно-генетические и бактериологические методы.

2. Среди циркулирующих штаммов N. meningitidis, H. influenzae и S. рneumoniae в странах СНГ механизмы антибиотикорезистентности определялись видовыми особенностями возбудителей.

3. Исследуемые штаммы N. meningitidis, S. pneumoniae и H. influenzae принадлежат к широко распространённым сиквенс-типам и клональных комплексам.

4. Филогенетический анализ позволил установить определённую связь между штаммами S. pneumoniae, выделенными из спинномозговой жидкости и со слизистой носоглотки.

Степень достоверности и апробация результатов исследования О достоверности полученных результатов работы свидетельствует достаточный объем выборки анализируемых образцов (810 образцов СМЖ и 47 клинических штаммов), использование сертифицированных бактериологических, иммунохимических и молекулярно-генетических методов, которые характеризуются высокой специфичностью и чувствительностью. Комплексное бактериологическое, иммунохимическое и молекулярно-генетическое исследование клинических штаммов позволило получить сопоставимые данные, что свидетельствует о достоверности полученных результатах.

Диссертация апробирована на заседании секции Учёного Совета ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора (протокол № 2 от 22 мая 2014г.).

Результаты диссертационной работы представлены, доложены и обсуждены на The 29th Annual Meeting of the European society for pediatric infectious diseases, 7- June, 2011, Hague, Netherlands; The 4th Congress of Europen Microbiologist, June 26-30, 2011, Geneva, Switzerland; The 27th International Congress of Pediatrics 2013 (ICP), August 24-29, 2013, Melbourne, Australia; на VI ежегодном Всероссийском конгрессе по инфекционным болезням, Москва, 24-26 марта, 2014.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ, в том числе 4 – в рецензируемых изданиях, 6 – в сборниках материалов конференций.

Структура и объем и диссертации. Диссертация изложена на 117 странице печатного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, заключение, выводы, практические рекомендации, перспективы дальнейшей разработки темы. Диссертация иллюстрирована 16 рисунками и таблицами. В библиографическом указателе приведен 188 источник, из них 47 –на русском и 141 – на иностранном языках.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Идентификация возбудителей гнойного бактериального менингита в спинномозговой жидкости и характеристика выделенных клинических штаммов При выполнении работы было исследовано 810 образцов СМЖ с использованием метода ПЦР РВ. Выявлено 267 (32%) позитивных образцов, из которых (55,4%) - N. meningitidis, 76 (28,4%) - S.pneumoniae и 43 (16,2%) - H.influenzae (рисунок 1A). Таким образом, доминирующим возбудителем ГБМ в странах СНГ явился N. meningitidis. С использованием метода ПЦР РВ определены серогруппы/серотипы позитивных образцов. На H. influenzae группы b приходилось 100% (n=43) всех положительных образцов. В 148 образцах, в которых выявлена ДНК N.meningitidis, наблюдалось следующее распределение: 66,2% (n=98) - N. meningitidis В; 22,2% (n=33) - N. meningitidis C; 6,1 % (n=9) - N. meningitidis W135; 4,8% (n=7) - N. meningitidis A и 0, 7% (n=1), N. meningitidis Х (рисунок 1Б).

Рисунок 1. А - распределение возбудителей ГБМ, выявленных в СМЖ; Браспределение серотипов N.meningitidis в СМЖ.

С использованием метода мПЦР определены серотипы 76 положительных образцов, содержащих ДНК S.pneumoniae. Наблюдалось следующее распределение S.pneumoniae: серогруппа 6 (6A/B/C) – 30,3% (n=23), серотип 14 - 13,3% (n=10), серотип 23F - 9,3% (n=7), серотип 19F - 5,4% (n=4), серотип 1 - 2,7% (n=2) и по 1,3% (n=1) приходилось на каждый следующий серотип: 2, 3, 4, 7 A/F, 8, 9V/A, 11 A/D, 17F, 15B/C, 18 (18 A/B/C). У 26% (n=20) серотип определен не был и данные образцы обозначены как нетипируемые (NT).

Таким образом, доминирующим генотипом среди выявленных менингококков