На правах рукописи

Ардашов Олег Васильевич

СИНТЕЗ СТЕРЕОИЗОМЕРОВ пара-МЕНТА-1,8-ДИЕН-5,6-ДИОЛА И ИХ

ПРОИЗВОДНЫХ ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ

(02.00.03 - органическая химия)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

НОВОСИБИРСК – 2012

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Новосибирском институте органической химии им. Н.Н. Ворожцова Сибирского отделения Российской академии наук

Научный руководитель: доктор химических наук, в.н.с.

Волчо Константин Петрович

Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор, Василевский Сергей Францевич ФГБУН Институт химической кинетики и горения СО РАН, руководитель группы кандидат химических наук, Савельев Виктор Александрович, ФГБУН Новосибирском институте органической химии им. Н.Н. Ворожцова СО РАН, с.н.с.

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт физиологически активных веществ Российской академии наук

Защита состоится «02» ноября 2012 г. В 915 часов на заседании диссертационного совета Д 003.049.01 при ФГБУН Новосибирском институте органической химии им. Н.

Н. Ворожцова СО РАН по адресу 630090, г. Новосибирск, проспект акад. Лаврентьева, 9.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирского института органической химии им. Н. Н. Ворожцова СО РАН.

Автореферат разослан « » сентября 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор химических наук Петрова Тамара Давыдовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Спирты с пара-мента-1,8-диеновым остовом проявляют широкий спектр биологической активности, включая противораковую, противопаразитическую, антимикробную, фунгицидную и другие активности. Наличие у этих соединений двух C=C двойных связей с различной реакционной способностью и гидроксильной группы, а также возможности получения спиртов с пара-мента-1,8диеновым остовом в виде обоих энантиомеров с высокой оптической чистотой позволяют использовать эти соединения в качестве исходных в асимметрическом синтезе, проводить различные модификации и получать новые ценные фармакологические агенты.

Методы синтеза спиртов с пара-мента-1,8-диеновым остовом исключительно разнообразны и направлены, в первую очередь, на решение проблем регио-, стерео- и энантиоселективности процессов. Особенно явно и наглядно эти проблемы проявятся в процессе разработки способов синтеза диолов и полигидроксисоединений с пара-мента-1,8диеновым остовом, в настоящее время областью химии практически неисследованной, но, без всякого сомнения, весьма перспективной, как с химической точки зрения, так и в связи с исследованиями их биологической активности.

Недавно было обнаружено [1],что (4S,5R,6R)-пара-мента-1,8-диен-5,6-диол с энантиомерным избытком 70% проявляет высокую противопаркинсоническую активность в опытах in vivo на мышах, а также имеет низкую токсичность. Совокупность этих свойств делает перспективными исследования противопаркинсонической активности изомеров и производных пара-мента-1,8-диен-5,6-диола.

Цель работы. Целью настоящей работы является синтез соединений, необходимых для проведения фармакологических исследований по противопаркинсонической и другим видам биологической активности пара-мента-1,8-диен-5,6-диола и его производных. Для достижения этой цели нами в настоящей работе поставлены следующие задачи:

1) Синтез всех восьми возможных стереоизомеров пара-мента-1,8-диен-5,6-диола с высокой (не менее 90%) оптической чистотой для установления влияния абсолютной конфигурации на противопаркинсоническую активность и выявления наиболее активного стереоизомера.

1. Толстикова, Т.Г., Павлова, А.В., Морозова, Е.А., Ардашов, О.В., Ильина, И.В., Волчо, К.П., Салахутдинов, Н.Ф., академик Толстиков, Г.А. Высокоэффективное противопаркинсоническое средство нового структурного типа. // Доклады Академии Наук. Физиология. – 2010. – Т. 435. - № 5. – С. 708–710.

2) Синтез четырех соединений, в каждом из которых отсутствует одна из четырех функциональных групп, имеющихся в наиболее активном из стереоизомеров пара-ментадиен-5,6-диола (две двойные связи и две гидроксильные группы), для установления противопаркинсонической активности.

3) Синтез набора вероятных метаболитов наиболее активного стереоизомера парамента-1,8-диен-5,6-диола, необходимых для последующих фармакокинетических испытаний при изучении метаболизма этого соединения.

4) Синтез набора производных пара-мента-1,8-диен-5,6-диола для изучения влияния химических модификаций на биологическую активность.

Научная новизна. В результате проделанной работы нами разработаны методы, позволяющие получить целевые диолы, их производные и триолы с пара-мента-1,8диеновым остовом с энантиомерными избытками, соответствующими энантиомерным избыткам коммерчески доступных исходных соединений - (+)- и (-)--пиненов и (+)- и (-)карвонов с высокой оптической чистотой, либо (-)-вербенона (коммерчески доступный с ee 70%, либо получаемый нами из (-)--пинена с ee 93%). Решение проблемы стереоселективности достигалось путем асимметрической индукции, благодаря последовательности различных методов эпоксидирования, окисления и восстановления.

Ключевыми стадиями наиболее важных синтезов стали процессы изомеризации на различных гетерогенных катализаторах соединений с пинановым остовом, содержащих, помимо эпоксидной функции, до двух гидроксильных групп. Так, использование монтмориллонитовых глин позволяет провести перегруппировку соединений с пинановым остовом в соответствующие соединения с пара-мента-1,8-диеновым остовом с хорошими или умеренными выходами. При этом конфигурация асимметрических центров в продукте изомеризации напрямую соотносится с конфигурацией соответствующих центров в исходном соединении. Использование NH4NO3 в нитроэтане также позволило провести одно из подобных превращений, а использование TiO2 открывает возможность проведения изомеризации эпоксида с сохранением пинанового остова, что позволяет далее решить некоторые проблемы региоселективного введения функциональных групп. Предметами исследований также стали проведение региоселективных трансформаций, таких как восстановление двойной связи, окисление гидроксильных групп, введение брома и хлора.

Особую сложность составлял поиск подходящих методик и оптимальных условий превращений, поскольку часто исследуемые соединения не вступали в реакцию при использовании мягких методов, в то же время многие более жесткие методы и условия приводили к ароматизации или к образованию смесей продуктов. В случае использования в качестве исходных соединений (+)- и (-)-карвона и (-)-изопулегола в качестве основных подходов нами использованы получение и окисление Si-енолятов. Благодаря совокупности всех перечисленных методов, нами синтезирован набор сложных полифункциональных соединений с пара-мента-1,8-диеновым остовом, содержащих три и более асимметрических центров, по две или три гидроксильные группы или другие функциональные группы, в том числе атомы галогенов и аминогруппы, альдегидные и кетогруппы, что открывает большие возможности дальнейшей селективной модификации полученных соединений.

Среди наиболее важных результатов работы можно отметить следующие:

1) Синтезированы все восемь возможных стереоизомеров пара-мента-1,8-диен-5,6диола с энантиомерным избытком не менее 93 %.

2) Получены четыре соединения, в каждом из которых отсутствует одна из четырех функциональных групп, имеющихся в наиболее активном (4S,5R,6R)-стереоизомере парамента-1,8-диен-5,6-диола. Синтез проводился с учетом абсолютной конфигурации остающихся в целевых молекулах стереоцентров, в соответствии с их конфигурацией в структуре (4S,5R,6R)-пара-мента-1,8-диен-5,6-диола.

3) Синтезированы следующие возможные метаболиты (4S,5R,6R)-пара-мента-1,8диен-5,6-диола: цис- и транс-эпоксиды по 1,2-двойной связи, гидроксипроизводные по обеим метильным группам и лактон (3aS,7R,7aR)-7-гидрокси-6-метил-3-метилен-3a,4,7,7aтетрагидробензофуран-2(3H)-он, а также разработан подход к синтезу (4S,5R,6R)-парамента-1,8-диен-5,6-диол-7-карбоновой кислоты.

4) Получен набор производных пара-мента-1,8-диен-5,6-диолов, включающий в себя сложные эфиры: диацетат, моно- и диникотинаты, моно- и диизоникотинаты и дипролинаты, а также N- и C-производные (4S,5R,6R)-пара-мента-1,8-диен-5,6-диола по положению 10.

Практическую значимость проведенной работы можно подтвердить данными, полученными в результате фармакологических испытаний синтезированных соединений в ЛФИ НИОХ и в Санкт-Петербургском Научно-исследовательском институте гриппа. Так, показано, что абсолютная конфигурация пара-мента-1,8-диен-5,6-диола оказывает решающее влияние на его противопаркинсоническую активность. Наиболее активным (4S,5R,6R)-стереоизомер.

противопаркинсонического эффекта (4S,5R,6R)-пара-мента-1,8-диен-5,6-диола необходимыми являются все четыре имеющиеся в нем функциональные группы. Введение в положение 10 (4S,5R,6R)-пара-мента-1,8-диен-5,6-диола заместителей, содержащих атомы азота, ведет к потере противопаркинсонической активности. В то же время, при введении бутильного заместителя в это же положение высокая противопаркинсоническая активность этого соединения сохраняется. Эта информация чрезвычайно важна для выбора пути иммобилизации соединения (4S,5R,6R)-пара-мента-1,8-диен-5,6-диола с целью поиска возможных мишеней. 6-Мононикотинат (4S,5R,6R)-пара-мента-1,8-диен-5,6-диола проявил существенную активность против вируса гриппа A/California (H1N1)v.

Апробация работы. Основные результаты обсуждены на семинарах Отдела природных и биологически активных веществ, молодежных конкурсах научных работ НИОХ СО РАН; отдельные части работы были доложены на Международной конференции «Актуальные проблемы химии природных соединений» (Ташкент 2009), на IV Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул 2009), на II Российско-Корейской конференции “Current issues of natural products chemistry and biotechnology” (Новосибирск 2010 г), на XIII Молодежной научной школе-конференции «Актуальные проблемы органической химии».

(Новосибирск, 2010), на Международной научной конференции «Современные проблемы органической химии» (Новосибирск 2011), на Международной конференции “Renewable Wood and Plant Resources: Chemistry, Technology, Pharmacology, Medicine” (СанктПетербург, 2011) и на международной конференции «The 3rd Korea-Russia bio joint forum on the natural products industrialization and application» (Gangneung, 2011).

Публикации. По материалам диссертации в рецензируемых журналах опубликовано 7 работ, получено 4 патента.

машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка цитируемой литературы (171 наименование).

Работа содержит 110 схем и 17 рисунков.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Литературный обзор включает в себя сведения о синтезе спиртов и диолов с парамента-1,8-диеновым остовом, а также содержит информацию о выделении из природных источников, биологической активности и применении в асимметрическом синтезе этих соединений.

Синтез всех восьми стереоизомеров пара-мента-1,8-диен-5,6-диола (110).

Синтез первой пары энантиомеров – соединений (4S,5R,6R)-110 и (4R,5S,6S)- осуществлен исходя из коммерчески доступных (-)- и (+)--пиненов ((-)-35 и (+)-35) с высокой оптической чистотой (схема 1). Сначала нами проведен синтез соответствующих (-)- и (+)- вербенонов ((-)-118 и (+)-118) в соответствии с методикой [2]. Взаимодействием (-)--пинена ((-)-35, ee 93%) с Pb(OAc)4, омылением и последующим окислением дихроматом натрия мы получили (-)-вербенон ((-)-118) с выходом 54% в пересчете на ((-)Схема 1.

2. Sivik, M.R., Stanton, K.J., Paquette, L.A. (1R,5R)-(+)-Verbenone of high optical purity. // Organic synthesis. – 1996. – V.

73. – P. 57 - 61.

Далее, в соответствии с методикой [3], взаимодействием (-)-вербенона ((-)-118) с H2O2 и последующим восстанавлением LiAlH4 получили эпоксид (-)-цис-вербенола ((-)цис-115, 48% в пересчете на (-)-118).

Изомеризация соединения (-)-цис-115 в присутствии монтмориллонитовой глины К10 позволила получить диол (4S,5R,6R)-110 с выходом 40%, а также гидроксикетон (S)гидроксиальдегид (-)-121 и пара-цимол 122 с выходами 24%, 9% и 6%, соответственно (схема 64).

(4R,5S,6S)-110 с общим выходом 11%.

Энантиомерный избыток (ee) в продуктах 110 здесь и далее определялся с помощью ГЖХ-МС на хиральной колонке, он диктовался оптической чистотой исходных -пиненов и составил 93% для (1R,2R,6S)-110 и 98% для (1S,2S,6R)-110.

Синтез второй пары энантиомеров, (4S,5S,6R)-110 и (4R,5R,6S)-110 приведен на схеме 2. транс-Вербенолы ((-)-транс-80 и (+)-транс-80) синтезировали в соответствии с методикой [4]. Омыление полученной ранее (схема 2) смеси ацетатов (-)-120 с последующим разделением колоночной хроматографией на силикагеле выделили (-)транс-вербенол ((-)-транс-80) с выходом 42%. Для эпоксидирования транс-вербенола ((-)транс-80) мы использовали систему VO(acac)2/t-BuOOH. Выход продукта (-)-транс- составил 89%.

В отличие от эпоксида цис-вербенола (-)-цис-115, при изомеризации соединения (-)транс-115 на глине К10 в качестве основного продукта (21%) образовывался 3. Il’ina, I.V., Volcho, K.P., Korchagina, D.V., Barkhash, V.A., Salakhutdinov, N.F. Synthesis of optically active, cyclic hydroxy ketones and 1,2-diketones from verbenone epoxide. // Helv. Chim. Acta. - 2006. – V. 89. N. 3. - P. 507 – 514.

гидроксикетон (S)-116, тогда как цис-диол (4S,5S,6R)-110 (ee 93%) был выделен с выходом 12%.

Аналогичным способом, исходя из смеси ацетатов (+)-120 получили с общим выходом 7% энантиомерный (4R,5R,6S)-110 (ee 98%).

Окислением стереоизомера (4S,5R,6R)-110 по Сверну системой (COCl)2 – ДМСО – NEt3 нами получен гидроксикетона (4S,5R)-114 с выходом 37%. Восстановлением соединения (4S,5R)-114 с помощью LiAlH4 и последующей колоночной хроматографией мы получили искомый полностью цис-изомер (4S,5R,6S)-110 с выходом 51%. Аналогично, исходя из (4R,5S,6S)-110, синтезировали (4R,5S,6R)-110 с общим выходом 21% по двум стадиям (схема 3).

Синтез еще двух стереоизомеров (4S,5S,6S)- и (4R,5R,6R)-110 осуществляли из (+)S)- и (-)-(R)-карвонов ((S)- и (R)-15) в соответствии со схемой 4. Синтез соединения (-)транс-136 мы проводили в соответствии с работой [5]. Взаимодействием (-)-(R)-карвона ((R)-15) (ee 99.5%) с диизопропиламидом лития и триметилхлорсиланом, окислением мета-хлорнадбензойной кислотой, разделением колоночной хроматографией и удалением триметилсилильной группы в соединении (-)-транс-136 с помощью NH4F·HF нами получен гидроксикетона (4S,5S)-114 с выходом 28% (в пересчете на (R)-15). Также с выходом 32% был выделен эпимерный продукт (4S,5S,6R)-110. Восстановление кетонной группы в соединении (4S,5S)-114 в спиртовую с помощью LiAlH4 и последующее разделение диастреомеров позволило получить соединение (4S,5S,6S)-110 с выходом 68% и ее 99.5% (схема 4).

Аналогично, исходя из (+)-(S)-карвона ((S)-15, ee 97%), синтезировали (4R,5R,6R)ee 97%) с общим выходом 17% по всем стадиям (схема 4).

4. Whitham, G.H. The Reaction of by a-Pinene with Lead Tetraacetate. // JCS – 1961. – N. 5. – P. 2232 - 2236.

5. Hong, S., Lindsay, H.A., Yaramasu, T., Zhang, X., McIntosh, M.C. Intramolecularly competitive Ireland-Claisen rearrangements: scope and potential applications to natural product synthesis. // J. Org. Chem. – 2002. – V. 67. – N. 7. – P.

2042 - 2055.

O OTMS O OH

Для всех восьми полученных стереоизомеров диола 110 в ЛФИ НИОХ проведены испытания на наличие противопаркинсонической активности. Наибольшую активность проявляет (4S,5R,6R)-стереоизомер. Интересно отметить, что изменение конфигурации всего одного атома углерода в положении 6 привело к тому, что образующийся при этом (4S,5R,6S)-стереоизомер проявил выраженный противоположный эффект. Оставшиеся стереоизомеры или не проявили активности, или значительно уступали (4S,5R,6R)стереоизомеру. Дальнейшие исследования мы проводили с учетом этих данных.

Уменьшение количества функциональных групп в диоле (4S,5R,6R)- использоваться смесь реагентов NiCl2 и NaBH4. Реакция проводилась при кипячении в метаноле в течение 5 ч, выход соединения 117 после обработки и очистки методом колоночной хроматографии составил 66% (схема 5).

Одним из наиболее удобных и простых методов стереоселективного синтеза (-)транс-карвеолов ((4S,6R)- и (4R,6S)-4) является изомеризация соответствующих эпоксидов -пинена ((+)- и (-)-31) в присутствии различных катализаторов.

Мы синтезировали эпоксид -пинена (-)-31 окислением (-)--пинена (-)- надуксусной кислотой с выходом 92%. Изомеризацию соединения (-)-35 проводили в присутствии смеси N-метилпироллидона и p-TsOH. После разделения колоночной хроматографией получили искомый (-)-транс-карвеол (4R,6S)-4 и камфоленовый альдегид (-)-32 с выходами 17 и 35%, соответственно (схема 6).

При кипячении диола (4S,5R,6R)-110 с MsCl в толуоле в присутствие i-Pr2NEt происходило и образование мезилата 143, и замещение вновь образовавшей группы на атом хлора, приведшее к получению смеси соединений 142 и 144, выход которых после колоночной хроматографии составил 49% и 15%, соответственно (схема 7).

Восстановление хлоргидрина 142 с помощью LiAlH4 позволило, после очистки колоночной хроматографией, получить целевое соединение (4S,5S)-13 с выходом 50% (схема 8).

Для синтеза соединения 137 мы в качестве исходного соединения использовали изопропенильную двойную связь, но не имеет двойной связи в цикле (схема 9). Изопулегон 146 получили с выходом 83% окислением соединения 145 с помощью хлорхромата пиридиния PCC, далее взаимодействием соединения 146 с LDA и TMSCl синтезировали енолят 147, выход которого составил 98%.

Окисление соединения 147 мета-хлорнадбензойной кислотой и последующее гидроксикетоны 148 и эпи-148 с выходами после разделения колоночной хроматографией 31 и 16%, соответственно. Наконец, восстановление соединения 148 с помощью LiAlH хроматографией 51%, кроме того, с выходом 11% был выделен изомерный диол эпи- (схема 9).

В ЛФИ НИОХ показано, что для достижения полного противопаркинсонического эффекта диола 110 необходимыми являются все четыре имеющиеся в нем функциональные группы.

Синтез предполагаемых метаболитов диола (4S,5R,6R)- В данном разделе мы поставили перед собой задачу синтеза эпоксидов транс- и цистриолов 160 и 161, а также разработку подходов к синтезу кислот 162 и 163 (рисунок 1).

Наилучшие результаты по эпоксидированию диола (4S,5R,6R)-110 достигнуты при использовании м-ClC6H4CO3H (m-CPBA). Так, при проведении реакции с 1.45 экв. m-CPBA при 0oC в течение недели конверсия диола (4S,5R,6R)-110 составила 91%, при этом выход эпоксидов транс- и цис-159 в пересчете на прореагировавший диол (4S,5R,6R)- составил 26% и 11%, соответственно. Отметим также, что по данным ЯМР 1Н в количестве 2 – 3% в результате реакции образуется смесь диастереомерных эпоксидов 164, выделить которые в индивидуальном виде не удалось (схема 10).

При использовании 1.66 экв. m-CPBA при замене растворителя с CH2Cl2 на Et2O и проведении реакции в течение трех недель получены эпоксиды транс- и цис-159, выделенные в количестве 32% и 10%, соответственно. Также, с суммарным выходом 42%, получена смесь четырех диастереомерных диэпоксидов 165, разделить которую на индивидуальные соединения не удалось (схема 10).

Взаимодействием соединения (4S,5R,6R)-110 с NBS в CCl4 в присутствии (t-BuO) при кипячении в течение 3 ч, с последующим нанесением реакционной смеси, без водной обработки, на колонку с SiO2 и хроматографированием, мы получили бромид 166 с выходом 34%. Взаимодействием бромида 166 с NaOAc в водном ДМСО получили ацетат 167 с выходом 72%. Наконец, омыление ацетата 167 водно-метанольным раствором NaOH привело нас к искомому триолу 160 с выходом 76%. Общий выход триола 160 в пересчете на исходный диол (4S,5R,6R)-110 составил 19% по трем стадиям (схема 11).

Аллильным бромированием (-)-вербенона ((-)-118) с помощью NBS в присутствии (tBuO)2 при кипячении в течение 32 ч синтезировали бромид 168. Далее бромид 168 без выделения и очистки превращали далее в ацетат 169 взаимодействием с ацетатом натрия в водном ДМСО в течение 5 суток. Выход продукта 169 составил 74% в пересчете на прореагировавший (-)-вербенон ((-)-118), конверсия соединения ((-)-118) составляла 87%) (схема 12). Затем мы осуществили восстановление ацетата 169 с помощью LiAlH4 в Et2O при 0оС в течение 5 ч. В результате получили диол 170 с выходом 96%. Далее, взаимодействием соединения 170 с t-BuOOH в присутствии VO(acac)2 при кипячении в смеси PhMe – MeOH (14 : 1) в течение 2 ч мы получили эпоксид 171 с выходом 92%.

Наконец, изомеризацией продукта 171 в присутствии глины К10 в CH2Cl2 в течение 30 мин нами получен искомый триол 161, выход которого после разделения колоночной хроматографией на силикагеле составил 40%. Общий выход триола 161 в пересчете на (-)вербенон ((-)-118) составил 26% по 5 стадиям (схема 12).

Тетрагидропиранилирование ацетата 167 проводили в CH2Cl2 при взаимодействии с дигидропираном в присутствии пара-толуолсульфоната пиридиния (PPTS) в течение 3 сут.

Избыток дигидропирана отделялся колоночной хроматографией, далее проводилось омыление NaOH в водном метаноле в течение суток. В результате получили бис-ТГПпроизводное триола 160 – соединение 174. Поскольку в соединении 174 содержится дополнительно два асимметрических центра в тетрагидропиранильном фрагменте, оно получено в виде набора четырех стереоизомеров в равном соотношении с суммарным выходом после очистки колоночной хроматографией на силикагеле 88% в пересчете на ацетат 167. Окисление MnO2 стереоизомеров 174 позволило получить набор четырех диастереомерных альдегидов 175 в равном соотношении с суммарным выходом 75% (схема 13).

Нами найден простой эффективный способ депиранилирования стереоизомеров 175, заключающийся в использовании p-TsOH в водном диоксане. Реакцию проводили в течение 20 ч в разбавленном растворе при общей концентрации реагентов менее 1%. В результате получили искомый альдегид 172 с выходом после очистки колоночной хроматографией на силикагеле 67% (схема 14). Отметим, что увеличение общей концентрации реагентов за счет уменьшения количества растворителей приводит к значительному уменьшению выхода продукта 172.

Таким образом, нами разработан способ получения защищенного триола 160, а именно – бис-ТГП-производного 174, проведено его окисления до соответствующего альдегида и найдена методика удаления защитных групп с образованием альдегида 172 с общим выходом 44% по четырем стадиям в пересчете на ацетат 167.

Синтез защищенного по вторичным гидроксильным группам региоизомерного триола 161 разработан нами на основе эпоксида (-)-цис-вербенола ((-)-цис-115).

Нами, совместно с сотрудниками Института катализа им Г. К. Борескова СО РАН Демидовой Ю. С. и к.х.н. Симаковой И. Л. изучена изомеризация эпоксида (-)-цис-115 на 5%Au/TiO2 при кипячении в течение 20 ч в дихлорэтане. В результате нами получены продукты 177, (4S,5R,6R)-110 и (S)-116 с выходами после разделения колоночной прореагировавший эпоксид (-)-цис-115 (конв 70%) (схема 15).

При дальнейшем изучении изомеризации эпоксида (-)-цис-115 неожиданно выяснилось, что реакция протекает на TiO2 и в отсутствии Au. В данном случае реакция идет медленнее, и конверсия 75% достигается при кипячении в дихлорэтане в течение 40 ч.

Однако препаративный выход соединения 177 в пересчете на прореагировавший эпоксид (цис-115 был выше и составил 40%. Продукты (4S,5R,6R)-110 и (S)-116 выделены в количестве 15% и 20%, соответственно (схема 16).

Взаимодействие соединения 177 с t-BuOOH в присутствии VO(acac)2 при кипячении в PhMe в течение 40 минут привело к образованию смеси альдегидов, по видимому, вследствие вторичных реакций раскрытия эпоксида и изомеризации. Усовершенствованная методика заключается в проведении реакции эпоксидирования в эфире при 0oC t-BuOOH в присутствии VO(acac)2 и 2,6-лутидина (2,6-Lu). Применив эту методику к соединению 177, мы получили искомый эпоксид 178 с выходом после очистки колоночной хроматографией на SiO2 91%. Ацилирование полученного эпоксида 178 Ac2O в присутствие NEt3 и DMAP в эфире протекало с количественным выходом, и давало в качестве продукта диацетат (схема 17).

Изомеризацию соединения 179 в присутствии NH4NO3 при кипячении в EtNO2 в течение 4 ч. Выход соединения 180 после разделения колоночной хроматографией в этом случае достигал 40% (схема 18).

Окисление соединения 180 проводили MnO2 в CCl4, в результате получили альдегид 181 с выходом 45% после очистки колоночной хроматографией на SiO2 (схема 18). К сожалению, омыление соединения 181 провести не удалось, поскольку даже в присутствии 20 мол. % NaOH как в водном диоксане, так и в водном MeOH происходила ароматизация, предположительно протекающая через образование в качестве интермедиата соответствующего енолята.

Окисление соединения 172 проводили Ag2O при использовании NaOH в качестве основания при проведении реакции в водном диоксане в течение 12 ч при комнатной температуре. В результате получили соответствующий кислоте 162 лактон 184 с выходом 21% после очистки колоночной хроматографией на SiO2 (схема 19).

Хотя получить кислоту 162 в индивидуальном виде не удалось, для небольшого количества смеси кислоты 162 с лактоном 184 записан ХМС с соответствующим видом МС, а также определена точная масса молекулярного иона. При окислении альдегида 181 в аналогичных условиях получена сложная смесь продуктов, содержание кислоты 163 в которой по данным ГЖХ – МС достигает 10%. В результате нами получены необходимые нам для фармакокинетики виды МС и хроматографические данные о времени выхода кислот 162 и 163.

Взаимодействием диола (4S,5R,6R)-110 с 5 экв. Ac2O в присутствие NEt3 и каталитических количеств N,N-диметилпиридин-4-амина (DMAP) в Et2O течение 4 ч нами получен диацетат 185 с количественным выходом (схема 20).

Синтез никотинатов и изоникотинатов мы осуществляли взаимодействием диолов 110 с гидрохлоридами хлорангидридов соответствующих никотиновой и изоникотиновой кислот в присутствии NEt3 и каталитических количеств DMAP в Et2O течение суток.

Разделение и очистку продуктов производили методом колоночной хроматографии. Так, исходя из диола (4S,5R,6R)-110 при использовании 3.2 экв. 3-PyCOCl x HCl нами получены моно- и диникотинаты (4S,5R,6R)-186 и (4S,5R,6R)-187 с выходами 21% и 50%, соответственно. Подобным образом, взаимодействием диола (4S,5R,6R)-110 с 2.1 экв. 4PyCOCl x HCl синтезированы моно- и диизоникотинаты (4S,5R,6R)-188 и (4S,5R,6R)-189 с выходами 37% и 27%, соответственно, в пересчете на прореагировавший диол (4S,5R,6R)В данном случае конверсия диола (4S,5R,6R)-110 была неполной и составляла 79% (схема 21).

Аналогично нами синтезированы моно- и диникотинаты из других изомеров диола 110 ((4R,5S,6S)-110 и (4R,5R,6S)-110), а также из эпоксипроизводного транс-159.

Проведенные в Санкт-Петербургском институте гриппа исследования показали, что 6-мононикотинат (4S,5R,6R)-пара-мента-1,8-диен-5,6-диола активность против вируса гриппа A/California (H1N1)v.

Далее мы осуществили синтез дипролинатов диола (4S,5R,6R)-110. В качестве (содержание (4S,5R,6R)-110 – 85%, (4R,5S,6S)-110 – 15%). Сначала, взаимодействием Lпролина (192) с Boc2O в CH2Cl2 в присутствии NEt3 в течение 3.5 ч по методике получили Boc-производное 193 с выходом 95%. Далее проводили конденсацию с помощью DCC в присутствии DMAP в CH2Cl2 в течение суток, затем удаляли Boc-защитные группы взаимодействием с CF3CO2H в CH2Cl2. Оптимальными условиями реакции удаления защитной группы оказались перемешивание реакционной смеси в течение 8 ч при 0оС. В результате получили смесь дипролинатов (4S,5R,6R)-194 и (4R,5S,6S)-194 (85 : 15) с суммарным выходом 29% в пересчете на диол (4S,5R,6R)-110 (схема 22).

Исходя из бромида 166 нами был синтезирован набор 10-производных диола (4S,5R,6R)-110.

Аминопроизводное 195 синтезировано по методу Габреэля через соответствующий фталимид 196. Взаимодействием бромида 166 с фталимидом калия в ДМФА в течение суток получили соединение 196 с выходом после очистки колоночной хроматографией 78%. Соединение 196 кипятили с этилендиамином в смеси CHCl3 – EtOH (2 : 1) в течение ч. В результате получили искомый продукт 195 с выходом после очистки колоночной хроматографией 93% (схема 23).

Взаимодействием бромида 166 с морфолином в CHCl3 в течение 2 сут получено производное 197 с выходом после очистки колоночной хроматографией 63% (рисунок 2).

выходами (рисунок 2). Аналогично, взаимодействием бромида 166 с гидрохлоридом римантадина (200) в течение 8 сут. получили с суммарным выходом 51% смесь эпимерных по метильной группе продуктов (R)- и (S)-201 (1 : 1). Далее, проведя серию последовательных хроматографий, нам удалось выделить продукт (R)-201 в количестве 5%, а также с выходом 8% получить эпимерным (S)-201 с de 82% (схема 24).

Наконец, используя в качестве реагента н-BuLi при проведении реакции в ТГФ в течение суток, мы получили соответствующее бутилпроизводное 202 с выходом 18%, а также продукт гетероциклизации 173 с выходом 15% (схема 25).

Проведенное в ЛФИ НИОХ изучение противопаркинсонической активности 10производных диола (4S,5R,6R)-110 на мышах in vivo показало, что введение заместителей, содержащих атом азота, ведет к потере противопаркинсонической активности. В то же время, при введении алифатического заместителя (бутил в соединении 202) в положение диола (4S,5R,6R)-110 сохраняется высокая противопаркинсоническая активность этого соединения. Эта информация чрезвычайно важна для выбора пути иммобилизации соединения (4S,5R,6R)-110 с целью поиска возможных мишеней.

ВЫВОДЫ

1) Впервые успешно осуществлен синтез всех восьми стереоизомеров пара-ментадиен-5,6-диола с энантиомерным избытком не менее 93%, исходя из коммерчески доступных (+)- и (-)--пиненов и (+)- и (-)-карвонов с высокой оптической чистотой.

Наибольшую противопаркинсоническую активность проявляет (4S,5R,6R)-стереоизомер.

2) Проведен направленный синтез четырех соединений, в каждом из которых отсутствует одна из четырех функциональных групп, имеющихся в (4S,5R,6R)-пара-ментадиен-5,6-диоле (две гидроксильные группы и две двойные связи): (1R,2R,6S)-6изопропил-3-метилциклогекс-3-ен-1,2-диол, (-)-транс-карвеол, (4S,5S)-пара-мента-1,8диен-5-ол и Для (1R,2R,3R,6S)-3-метил-6-(проп-1-ен-2-ил)циклогексан-1,2-диол.

достижения полного противопаркинсонического эффекта (4S,5R,6R)-пара-мента-1,8-диендиола необходимыми являются все четыре имеющиеся в нем функциональные группы.

3) Впервые синтезированы возможные метаболиты (4S,5R,6R)-пара-мента-1,8-диендиола: транс- и цис-эпоксиды по 1,2-двойной связи; триолы пара-мента-1,8-диен-5,6,7триол и пара-мента-1,8-диен-5,6,10-триол; лактон (3aS,7R,7aR)-7-гидрокси-6-метил-3метилен-3a,4,7,7a-тетрагидробензофуран-2(3H)-он.

4) Разработан подход к синтезу одного из возможных метаболитов (4S,5R,6R)-парамента-1,8-диен-5,6-диола - (4S,5R,6R)-пара-мента-1,8-диен-5,6-диол-7-карбоновой кислоте, включающий в себя на ключевых стадиях изомеризацию эпоксида (-)-цис-вербенола на TiO2, протекающую с сохранением пинанового остова, и изомеризацию (1R,2S,3S,4R,5S)с пинановым 6,6-диметилспиро[бицикло[3.1.1]гептан-2,2'-оксиран]-3,4-диилдиацетата остовом в (1R,2R,6S)-3-(гидроксиметил)-6-(проп-1-ен-2-ил)циклогекс-3-ен-1,2диилдиацетат с пара-ментановым остовом на NH4NO3 в EtNO2.

Синтезирован набор производных пара-мента-1,8-диен-5,6-диолов по гидроксильным группам, включающий в себя диацетат, моно- и диникотинаты, моно- и диизоникотинаты и дипролинаты. Получен набор N- и C-производных (4S,5R,6R)-парамента-1,8-диен-5,6-диола по положению 10. 6-Мононикотинат (4S,5R,6R)-пара-мента-1,8диен-5,6-диола проявил существенную активность против вируса гриппа A/California (H1N1)v.

Основные результаты диссертации опубликованы в следующих сообщениях:

1. Ardashov, O.V., Il’ina, I.V., Korchagina, D.V., Volcho, K.P., Salakhutdinov, N.F. Unusual -hydroxyaldehyde with a cyclopentane framework from verbenol epoxide. // Mendeleev Commun. – 2007. – V. 17. – P. 303 – 305.

2. Ардашов, О.В., Ильина, И.В., Корчагина, Д.В., Волчо, К.П., Салахутдинов, Н.Ф.

Необычные продукты взаимодействия вербенона и вербенола с Nбромсукцинимидом в присутствии воды. // Журн. Орган. Химии. – 2009. - Т. 45. - № 3. Толстикова, Т.Г., Павлова, А.В., Долгих, М.П., Ильина, И.В., Ардашов, О.В., Волчо, К.П., Салахутдинов, Н.Ф., Толстиков, Г.А. "Новый высокоэффективный противосудорожный агент – (4S,5R,6R)-пара-мента-1,8-диен-5,6-диол". Доклады Академии Наук. Физиология. – 2009. – Т. 429. - № 1. – С. 139–141.

4. Ардашов, О.В., Генаев, А.М., Ильина, И.В., Корчагина, Д.В., Волчо, К.П., Салахутдинов, Н.Ф. Гидрирование и конформационный анализ (1R, 2R, 6S)-3-метилметилэтенил)циклогекс-3-ен-1,2-диола // Журн. Орган. Химии. - 2010. - Т. 46. С. 1775 - 1778.

5. Толстикова, Т.Г., Павлова, А.В., Морозова, Е.А., Ардашов, О.В., Ильина, И.В., Волчо, К.П., Салахутдинов, Н.Ф., академик Толстиков, Г.А. Высокоэффективное противопаркинсоническое средство нового структурного типа. // Доклады Академии Наук. Физиология. – 2010. – Т. 435. - № 5. – С. 708–710.

6. Ardashov, O.V., Pavlova, A.V., Il’ina, I.V., Morozova, E.A., Korchagina, D.V., Karpova, E.V., Volcho, K.P., Tolstikova, T.G., Salakhutdinov, N.F. Highly potent activity of (1R,2R,6S)-3-methyl-6-(prop-1-en-2-yl)cyclohex-3-ene-1,2-diol in animal models of Parkinson’s disease. // J. Med. Chem. – 2011. – V. 54. – N. 11. – P. 3866 – 3874.

7. Ardashov, O.V., Zarubaev, V.V., Shtro, A.A., Korchagina, D.V., Volcho, K.P., Salakhutdinov, N.F., Kiselev, O.I. Antiviral activity of 3-methyl-6-(prop-1-en-2yl)cyclohex-3-ene-1,2-diol and its derivatives against influenza A(H1N1)2009 virus. // Letters in Drug Design & Discovery. – 2011. - V. 8. – N. 4. - P. 375 - 380.

8. Толстикова, Т.Г., Павлова, А.В., Морозова, Е.А., Ильина, И.В., Ардашов, О.В., Волчо, К.П., Салахутдинов, Н.Ф. Средство для лечения болезни Паркинсона. Заявка.

№ 2009148376 от 24.12.2009. Патент № RU 2 418 577. Опубликовано: 20.05.2011 Бюл.

№ 14. Патентообладатели: НИОХ СО РАН, ООО «Томская фармацевтическая фабрика». WO2011093742 (A2) 2011-08-04 (Medication for treating Parkinson's 9. Толстикова, Т.Г., Павлова, А.В., Долгих, М.П., Ильина, И.В., Ардашов, О.В., Волчо, К.П., Салахутдинов, Н.Ф. 3-Метил-6-(проп-1-ен-2-ил)циклогекс-3-ен-1,2-диол – в качестве анальгезирующего средства. Рег. № 2009126492. Патент № RU 2 409 351 от 20.01.2011, Бюл. № 2. Патентообладатель: НИОХ СО РАН.

10. Толстикова, Т.Г., Павлова, А.В., Морозова, Е.А., Ильина, И.В., Ардашов, О.В., Волчо, К.П., Салахутдинов, Н.Ф. Применение 2-гидрокси-3-метил-6-(1метилэтенил)циклогекс-3-енона в качестве анальгезирующего средства. Заявка № 2010106573 от 24.02.2010. Патент № RU 2 421 213. Опубликовано: 20.06.2011 Бюл. № 17. Патентообладатель: НИОХ СО РАН.

11. Толстикова, Т.Г., Павлова, А.В., Морозова, Е.А., Ильина, И.В., Ардашов, О.В., Корчагина, Д.В., Волчо, К.П., Салахутдинов, Н.Ф. 2-(4-Гидрокси-3-метоксифенил)диметил-3,4,4a,5,8,8a-гексагидро-2H-хромен-4,8-диол – новое анальгезирующее средство. Заявка на патент. Рег. № 2010106866 от 24.02.2010. Патент № RU 2430100.

Опубликовано: 27.09.2011 Бюл. № 27. Патентообладатель: НИОХ СО РАН.

Основные результаты диссертации доложены на отечественных и международных конференциях:

1. Ардашов, О.В., Ильина, И.В., Карпова, Е.В., Волчо, К.П., Салахутдинов, Н.Ф. Синтез четырех стереоизомеров 3-метил-6-изопропенилциклогекс-3-ен-1,2-диола.

Конференция «Актуальные проблемы химии природных соединений». Сборник тезисов. Ташкент, Узбекистан. 18-19 марта 2009 г. С. 223.

2. Ардашов, О.В., Ильина, И.В., Карпова, Е.В., Волчо, К.П., Салахутдинов, Н.Ф. Синтез 3-метил-6-изопропенилциклогекс-3-ен-1,2-диолов и их производных, потенциальных биологически активных соединений. Материалы IV Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья».

Барнаул, 21-23 апреля 2009 г. Книга 2. С. 103.

3. Ardashov, O.V., Il’ina, I.V., Volcho, K.P., Salakhutdinov, N.F. Synthesis of Six 3-Methylmethylethenyl)cyclohex-3-en-1,2-diol Stereoisomers with High Optical Purity. 2nd Annual Russian-Korean Conference “Current issues of natural products chemistry and biotechnology”. Book of Abstracts. 2010 Novosibirsk, Russia, March 15-18, p. 50.

4. Ардашов, О.В., Ильина, И.В., Корчагина, Д.В., Волчо, К.П., Салахутдинов, Н.Ф.

Синтез всех восьми стереоизомеров 3-метил-6-(1-метилэтенил)циклогекс-3-ен-1,2диола с высокой оптической чистотой. XIII Молодежная научная школа-конференция «Актуальные проблемы органической химии». Новосибирск, 12-19 сентября 2010, с.

5. Ardashov, O.V., Il’ina, I.V., Korchagina, D.V., Volcho, K.P. and Salakhutdinov, N.F.

Synthesis of the Reduced Analogs of (1R,2R,6S)-3-Methyl-6-(prop-1-en-2-yl)cyclogex-3en-1,2-diol. "Current Topics in Organic Chemistry", Book of Abstract, Novosibirsk, Russia.

June 6-10, 2011 P. 80.

6. Volcho, K.P., Il’ina, I.V., Ardashov, O.V., Pavlova, A.V., Tolstikova, T.G., Salakhutdinov, N.F. New CNS-active compounds synthesized from monoterpenoids. International Conference “Renewable Wood and Plant Resources: Chemistry, Technology, Pharmacology, Medicine”. Saint Petersburg, June 21-24, 2011, p. 242-243.

7. Volcho, K.P., Il’ina, I.V., Ardashov, O.V., Pavlova, A.V., Tolstikova, T.G., Salakhutdinov, N.F. Synthesis of new CNS-active compounds from monoterpenes. The 3rd Korea-Russia bio joint forum on the natural products industrialization and application. Gangneung, Republic of Korea, October 05-07, 2011. Book of abstracts. P. 115-129.

Формат бумаги 60х84 1/16. Объем 1 печ. л.

Отпечатано на ротапринте ФГБУН Новосибирского института органической химии им. Н. Н. Ворожцова СО РАН.

630090, Новосибирск, 90, пр. акад. Лаврентьева,