Главная >> Диссертации - все темы

Pages: |

| 2 | 3 |

«ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ВОДОРАСТВОРИМЫЕ ПОЛИМЕРЫ-НОСИТЕЛИ ГИДРОФОБНЫХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ...»

-- [ Страница 1 ] --

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

НАУКИ ИНСТИТУТ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ СОЕДИНЕНИЙ

РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК

На правах рукописи

ЛЕВИТ

Мария Леонидовна

ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ВОДОРАСТВОРИМЫЕ ПОЛИМЕРЫ-НОСИТЕЛИ

ГИДРОФОБНЫХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

Специальность 02.00.06 – Высокомолекулярные соединения

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени кандидата химических наук

Научный руководитель:

чл.-корр. РАН, д.х.н., проф.

Евгений Фёдорович Панарин Санкт-Петербург Список сокращений ААм – акриламида АИБА – 2,2’-азо-бис-(2-метилпропандиамин)дигидрохлорид АК – акриловая кислота Амиловый спирт – амил.сп.

АЦД – 6-монодеокси-6-моноамино--циклодекстрин БАВ – биологически активное вещество БАП – биологически активный полимер ВП – N-винилпирролидон ГФИАК – N-гидроксифталимидный эфир акриловой кислоты ДИНИЗ – динитрил-азо-бис-изомалянной кислоты ДМСО – диметилсульфоксид ДМФА – диметилформамид ДЦК – N,N’-дициклогексилкарбодиимид КК – кротоновая кислота МАГ – 2-деокси-2-метакриламидо-D-глюкоза МАК – метакриловая кислота МВАА – N-метил-N-винилацетамид ок.-ПМАГ – окисленный гомополимер 2-деокси-2-метакриламидо-D-глюкозы ок.-МАГ-ХМАК – окисленный сополимер МАГ-холестерилметакрилат МСХ – моносукцинат холестерина МСХ-Li – литиевая соль моносукцината лития НФ – п-нитрофенол НФЭ – п-нитрофениловый эфир 4ПАм – 4-пентенамид 4ПК – 4-пентеновая кислота ХАК – холестерилакрилат ХЛ – остаток холестерина ХКК – холестерилкротонат ХМАК – холестерилметакрилат ЦД – -циклодекстрин

1.1.4 Полимеры-носители на основе 2-деокси-2-метакрилоиламидо-D-глюкозы........ 1.2 Водорастворимые полимеры-носители, выступающие в качестве «хозяина» в системе «гость-хозяин» для связывания гидрофобных соединений

1.2.1 Синтез полимерных производных -циклодекстрина

1.2.1.1 Полимеризация ненасыщенных производных -циклодекстрина

1.2.1.2 Полимераналогичные превращения

1.2.2 Свойства полимерных производных -циклодекстрина

1.2.2.1 Комплексы -циклодекстрина с низкомолекулярными веществами................. 1.2.2.2 Комплексы -циклодекстрина с высокомолекулярными веществами............... 1.2.3 Синтез полимерных производных холестерина

1.2.3.1 Метод (со)полимеризации

1.2.3.1.1 Синтез непредельных производных холестерина

1.2.3.1.2 Полимеризация ненасыщенных производных холестерина

1.2.3.2 Метод полимераналогичных превращений

1.2.4 Свойства полимерных производных холестерина

ГЛАВА 2 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1 Исходные вещества и материалы

2.2 Методы синтеза

2.2.1 Синтез производных холестерина

2.2.1.1 Моносукцинат холестерина (МСХ)

2.2.1.2 Литиевая соль моносукцината холестерина (МСХ-Li)

2.2.2 Синтез мономеров

2.2.2.1 Синтез 2-деокси-2-метакриламидо-D-глюкозы (МАГ)

2.2.2.2 Непредельные производные холестерина

2.2.3 Синтез cополимеров

2.2.3.1 Синтез карбоксилсодержащих сополимеров

2.2.3.2 Синтез сополимеров, содержащих сложноэфирные активированные группы. 2.2.4 Синтез полимерных производных -циклодекстрина

2.2.5 Синтез полимерных производных холестерина

2.2.6 Синтез люминесцентно меченых сополимеров

2.3 Методы исследования

2.3.1 Оборудование

2.3.2 Определение состава полимеров

2.3.3 Измерение характеристической вязкости

2.3.4 Кинетика сополимеризации

2.3.5 Определение относительных активностей сомономеров

2.3.6 Кислотно-основные свойства сополимеров МАГ-(М)АК

2.3.7 Исследование внутримолекулярной подвижности макромолекул

2.3.8 Исследование образования комплексов включения

2.3.9 Исследование адсорбции холестерина на монолитных колонках

2.3.9.1 Синтез макропористого сорбента монолитного типа

2.3.9.2 Окисление ПМАГ и сополимера МАГ-ХМАК

2.3.9.3 Иммобилизация окисленных полимеров на монолитные колонки

2.3.9.4 Исследование адсорбции литиевой соли моносукцината холестерина............. ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Синтез полимеров-носителей

3.1.1 Сополимеризация МАГ с акриловой и метакриловой кислотами

3.1.1.1 Кинетика сополимеризации МАГ с ненасыщенными кислотами

3.1.1.2 Относительные активности МАГ, АК и МАК при сополимеризации............... 3.1.2 Сополимеры МАГ с 4-пентеновой кислотой

3.1.3 Синтез карбоксилсодержащих полимеров на основе N-виниламидов................. 3.1.4 Синтез сополимеров с активированными сложноэфирными группами............... 3.1 Синтез полимерных производных -циклодекстрина

3.3 Синтез полимерных производных холестерина

внутримолекулярная подвижность

3.4.1 Карбоксилсодержащие сополимеры МАГ-(М)АК

3.4.1.1 Кислотно-основные свойства сополимеров МАГ-(М)АК

3.4.1.2 Внутримолекулярная подвижность сополимеров МАГ-(М)АК

3.4.2 Холестеринсодержащие сополимеры

3.5 Исследование связывания гидрофобных соединений полимерами-носителями.... 3.5.1 Комплексообразование карбоксилсодержащих сополимеров МАГ-(М)АК с дифильными ионами поверхностно-активных веществ

3.5. сополимеров

3.5.1 Взаимодействие полимеров с низко- и высокомолекулярными соединениями в растворе

3.5.2.1 Связывание гидрофобных соединений полимерами, иммобилизованными на сорбенте

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

БЛАГОДАРНОСТИ

ВВЕДЕНИЕ

В настоящее время для модификации биологически активных веществ (БАВ) и создания новых эффективных лекарственных препаратов все большее значение приобретают водорастворимые полимеры. Модификация БАВ полимерами позволяет повысить их растворимость в воде, снизить токсичность, изменить спектр биологической активности, увеличить продолжительность циркуляции в организме, обеспечить целевой транспорт активных веществ в заданный орган-мишень.

Для решения этих задач применяются синтетические и природные карбо- и гетероцепные полимеры-носители (например, поливинилпирролидон, поливиниловый спирт, полиэтиленгликоль, декстран, хитозан, крахмал, белки, полипептиды). В зависимости от поставленных фармакологических и фармацевтических целей разрабатываются полимеры-носители с заданным химическим строением и молекулярной массой. Как правило, используемые в настоящее время полимерыносители биосовместимы, однако, они содержат ограниченный набор функциональных групп для связывания БАВ. В связи с этим, возникает необходимость введения в структуру полимеров групп с высокой реакционной способностью или лигандов, обеспечивающих ковалентное или нековалентное связывание БАВ. Ковалентное связывание БАВ с макромолекулой часто приводит к потере активности, поэтому для связывания используют гидролизуемые спейсеры, например, олигопептиды, или лабильные химические связи. Этот подход может быть применен только при наличии у БАВ соответствующих функциональных групп.

Более простым вариантом, не требующим использования функциональных групп БАВ, является реализация принципов системы «гость-хозяин». Поскольку большинство БАВ – дифильные соединения, содержащие гидрофобные фрагменты, они могут выполнять роль «гостя». В качестве «хозяина» выступают полимерные системы, несущие группы, способные, например, к образованию комплексов включения или к самоорганизации. Применение этого подхода позволяет сохранить нативные свойства БАВ и получить их водорастворимые формы. Поэтому ведётся поиск новых доступных универсальных полимеров-носителей для связывания гидрофобных БАВ.

В последние десятилетия, наряду с широко используемыми в биомедицинских целях поли-N-виниламидами, большое внимание привлекают поливинилсахариды.

Они обладают хорошей растворимостью в воде и биологических жидкостях и способны, как и полисахариды, участвовать в процессах межклеточного и межмолекулярного узнавания. В связи с этим перспективным является синтез нового класса карбоцепных биосовместимых полимеров-носителей на основе Nвиниламидов и винилсахаридов, способных к биоспецифическим взаимодействиям.

Для решения подобных задач необходима разработка методов введения в полимер реакционноспособных групп, лигандов или гидрофобных фрагментов, обеспечивающих ковалентное, электровалентное связывание или гидрофобное взаимодействие с БАВ. Несомненный научный и практический интерес представляет изучение влияния химического строения, конформационных и молекулярномассовых характеристик, а также гидрофобно-гидрофильного баланса полимераносителя на его способность связывать дифильные гидрофобные соединения.

Таким образом, создание на основе винилсахаридов и N-виниламидов новых типов полимеров-носителей, несущих высокореакционноспособные функциональные группы, а также фрагменты, обеспечивающие нековалентное связывание гидрофобных БАВ является актуальной задачей.

Цель настоящей работы – разработка методов синтеза на основе винилсахарида 2-деокси-2-метакриламидо-D-глюкозы N-виниламидов полимеров-носителей, содержащих карбоксильные, активированные сложноэфирные группы, а также остатки -циклодекстрина (ЦД) или холестерина.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

исследование радикальной сополимеризации винилсахарида 2-деокси-2метакриламидо-D-глюкозы (МАГ) с непредельными кислотами (акриловой и метакриловой): изучение кинетики и определение относительных активностей сомономеров; синтез карбоксилсодержащих сополимеров на основе МАГ и Nвиниламидов (N-винилпирролидона, N-метил-N-винилацетамида) с варьируемым составом и молекулярными массами; введение в структуру полимеров звеньев активированных эфиров;

разработка методов синтеза новых полимеров-носителей, содержащих остатки -циклодекстрина или холестерина и выполняющих функцию «хозяина» в системе «гость-хозяин» для связывания гидрофобных биологически активных веществ (БАВ);

изучение конформационных состояний синтезированных полимеров-носителей в водных растворах и их способности связывать БАВ в модельных условиях;

определение возможности использования полученных полимеров для связывания гидрофобных БАВ.

Методы исследования:

для синтеза полимеров-носителей использовались методы свободнорадикальной сополимеризации и полимераналогичных превращений;

для характеристики структуры, состава, молекулярно-массовых параметров, конформационных состояний синтезированных полимеров-носителей и полимерных систем на их основе применялись методы УФ, ИК, ЯМР спектроскопии, элементного анализа, потенциометрического титрования, вискозиметрии, статического и динамического светорассеяния, дилатометрии, адсорбционной хроматографии, поляризованной люминесценции.

Научная новизна работы состоит в следующем:

свободнорадикальной (со)полимеризацией и реакциями в цепях синтезированы новые карбоксилсодержащие полимеры и полимеры, содержащие активированные сложноэфирные группы, с широким диапазоном составов и молекулярных масс;

впервые исследован процесс радикальной сополимеризации 2-деокси-2метакриламидо-D-глюкозы с акриловой и метакриловой кислотами: изучена кинетика сополимеризации, определены относительные активности сомономеров и микроструктура сополимеров;

разработаны методы введения остатков -циклодекстрина и холестерина в полимеры на основе винилсахаридов и N-виниламидов и впервые получены циклодекстрин- или холестеринсодержащие сополимеры 2-деокси-2-метакриламидоD-глюкозы и N-метил-N-винилацетамида;

впервые оценены константы связывания модельных дифильных соединений в растворе (акридинового оранжевого и диметилбензиллауриламмоний хлорида), а также изучены конформационные состояния синтезированных полимеров в водных средах.

Практическая значимость работы:

синтезированные новые водорастворимые полимеры-носители, несущие карбоксильные и/или активированные сложноэфирные группы могут быть использованы для модификации аминосодержащих БАВ;

разработаны методы синтеза новых гидрофильных полимеров, содержащих остатки холестерина и -циклодекстрина, для связывания и регулирования концентрации гидрофобных соединений в водных средах;

комплексы синтезированных карбоксилсодержащих полимеров 2-деокси-2метакриламидо-D-глюкозы с диметилбензилалкиламмоний хлоридами, обладающие высокой актимикробной активностью, эффективны для лечения раневой инфекции.

На защиту выносятся следующие положения:

использование метода радикальной сополимеризации позволяет получать различающиеся по микроструктуре основной цепи и конформационным состояниям в непредельными кислотами в широком интервале состава и молекулярных масс, а также холестеринсодержащие полимеры на основе 2-деокси-2-метакриламидо-Dглюкозы, N-винилпирролидона, N-метил-N-винилацетамида;

методом полимераналогичных превращений возможен синтез полимерных производных -циклодекстрина на основе сополимеров 2-деокси-2-метакриламидо-Dглюкозы (МАГ), несмотря на наличие объемных заместителей в звеньях МАГ и в молекуле -циклодекстрина;

варьирование микроструктуры полимеров-носителей в результате использования гидрофильных и функциональных сомономеров различной природы, а также конформационными состояниями и растворимостью в воде полимерных производных -циклодекстрина и холестерина;

полимерные производные -циклодекстрина и холестерина на основе полимеров 2-деокси-2-метакриламидо-D-глюкозы, N-винилпирролидона, N-метил-Nвинилацетамида связывают гидрофобные соединения в водных растворах.

Обоснованность и достоверность данных и выводов настоящей работы подтверждается хорошей воспроизводимостью всех полученных результатов, их согласованностью при использовании независимых методов исследования полученных полимеров.

докладывались и обсуждались на российских и международных конференциях: 4th, 5th, 6th Saint-Petersburg Young Scientists Conference «Modern Problems of Polymer Science» (St. Petersburg, Russia, April 17-19, 2007, April 15-17, 2008, October 1922, 2009, Oсtober 1821, 2010), 6th, 7th International Symposium «Molecular order and mobility in polymer systems» (St. Petersburg, Russia, 2-6 June, 2008, 610 June, 2011), XXXVII, XXXVIII, XXXIХ, XL Международная межвузовская научно-практическая конференция студентов и аспирантов «Неделя науки в СПбГПУ» (Санкт-Петербург, Россия, 24-29 ноября, 2008; 30 ноября – 5 декабря, 2009; 6-11 декабря, 2010; 5- декабря, 2011), XVI Международная конференция студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов» (Москва, МГУ имени М.В. Ломоносова, 1417 апреля, 2009), V Всероссийская Каргинская конференция «Полимеры–2010» (Москва, 2125 июня, 2010).

отечественных журналах и тезисы 18 докладов, получен 1 патент.

Личный вклад автора состоял в непосредственном участии на всех этапах работы, выполнении всех экспериментальных исследований, анализе и интерпретации полученных результатов, их обобщении, а также подготовке докладов и публикаций.

Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института высокомолекулярных соединений Российской академии наук (ИВС РАН) по темам:

«Синтетические и полусинтетические биологически активные гидрофильные полимеры» (2008 – 2010 гг.) и «Полифункциональные, биологически активные полимерные системы» (2011 – 2013 гг.) при финансовой поддержке грантов РФФИ № 08-03-00324 «Синтез на основе винилсахаридов полимерных биолигандов для связывания соединений, вызывающих нарушение обмена веществ», также молодежных грантов “У.М.Н.И.К.” (проекты № 10208).

Структура работы. Диссертационная работа состоит из введения, литературного обзора, экспериментальной части, обсуждения результатов, заключения, выводов, списка используемой литературы (207). Работа изложена на 132 страницах и включает 21 таблицу и 52 рисунка.

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

На стыке научных направлений, изучающих химию полимеров, биологию и медицину, важное место занимают разработка методов создания водорастворимых полимеров-носителей биологически активных веществ (БАВ). Ввиду того, что во многих случаях БАВ – плохо растворимые в воде соединения, содержащие гидрофобные фрагменты, возможность их применения в качестве, например, терапевтических агентов ограничена. Использование полимерных производных БАВ позволяет придавать им совершенно новые свойства, минимизировать побочные эффекты, в ряде случаев повышать эффективность [19].

Упоминания об использовании полимеров в качестве носителей БАВ появились ещё полвека назад. Первые попытки были сделаны в 1955 г. Яцкевичем, который для улучшения эффективности присоединил мескалин через дипептидный спейсер к поли-N-винилпирролидону [10]. В 60-70-х годах группа Ушакова и Панарина синтезировала ряд водорастворимых полимерных производных антибиотиков с различным типом связи полимер-БАВ [1113]. Значительным толчком для развития плодотворных исследований в этой области стала предложенная Рингсдорфом в г модель биологически активных полимеров (БАП), включающая полимер-носитель, присоединенные к нему БАВ и векторы, способные к направленному транспорту системы в определённые клетки и органы [14]. К настоящему времени разработаны различные виды подобных полимерных систем, которым посвящен ряд обзоров [39], однако, продолжается интенсивный поиск новых полимеров-носителей с оптимальными свойствами для использования в различных областях биологии и медицины.

водорастворимость, биосовместимость (отсутствие токсических эффектов, антигенности, канцерогенности и т.д.), достаточно длительная циркуляция системы в крови, но, при этом, и возможность выведения полимера через почки (в случае внутривенного введения). Кроме того, полимер-носитель должен иметь функциональные группы и/или лиганды, по которым может проходить ковалентное или нековалентное связывание БАВ. В последнем случае могут быть реализованы принципы системы «гость-хозяин», где в качестве «хозяина» выступают полимерные системы, несущие группы, способные к образованию комплексов включения или к организации искусственных систем самосборки [13, 6, 7, 15].

Среди наиболее значимых «хозяев» выделяют циклодекстрины и их полимерные производные. Циклодекстрины – водорастворимые природные нетоксичные соединения, способные, благодаря структурным особенностям, взаимодействовать с подходящими по размеру гидрофобными молекулами с образованием комплексов включения и обеспечивать, таким образом, их растворимость [1518].

Представляют также интерес водорастворимые полимеры, модифицированные гидрофобными молекулами. В водных растворах самоорганизация таких амфифильных полимеров, вследствие внутри- и межмолекулярной ассоциации гидрофобных остатков, приводит к образованию супрамолекулярных структур, состоящих из гидрофобных доменов, окруженных гидрофильными фрагментами полимерной цепи. Такие системы способны к инкапсулированию гидрофобных БАВ, что приводит к повышению их растворимости, защите БАВ от возможной инактивации под действием биологического окружения, возможности контролирования скорости выделения БАВ и др. [1922].

Самосборка макромолекул зависит от многих факторов, в частности от типа гидрофобных групп, их содержания, распределения звеньев в полимере, природы гидрофильного мономера. К подобным полимерам относятся водорастворимые полимерные производные холестерина [19, 2325].

В связи с наличием большого количества публикаций, связанных с разработкой полимеров-носителей различных типов, обзор литературы в настоящей работе будет ограничен рассмотрением методов синтеза одних из наиболее перспективных полимеров-носителей – поливинилсахаридов, в том числе карбоксилсодержащих поливинилсахаридов, способов создания полимерных систем, содержащих остатки циклодекстрина или холестерина, характеристик указанных полимеров-носителей.

Поливинилсахариды – водорастворимые, нетоксичные, биосовместимые синтетические карбоцепные полимеры, содержащие в боковой цепи углеводные фрагменты, способные к биоспецифическим взаимодействиям с присутствующими на поверхности клеточных мембран лектинами, что, в свою очередь, позволяет использовать такие полимеры для биомедицинских целей, в частности для создания углеводные фрагменты в качестве целеузнающих векторов, способны избирательно локализоваться в определённых органах, т.е. осуществлять направленный транспорт полимерных систем, включающих в свою структуру биологически активные вещества [29], а также повышать их биоадгезию [30]. Например, при исследовании взаимодействия блоксополимеров виниловых эфиров, несущих остатки сахаров, с лектином агглютинином зародыша пшеницы (WGA) обнаружено, что полимеры проявляют значительно большую активность при связывании с WGA, чем соответствующие низкомолекулярные соединения или олигомеры [31].

Некоторые поливинилсахариды проявляют иммуномодулирующую активность. В иммунодепрессантами [3235].

В настоящее время интенсивно ведутся работы по синтезу и исследованию поливинилсахаридов. Описано большое количество гомо- и сополимеров винилсахаридов. Используют различные способы получения поливинилсахаридов различной архитектуры: свободнорадикальную (со)полимеризацию, методы контролируемой «живой» (со)полимеризации – полимеризации с обратимым присоединением-фрагментацией в процессе передачи цепи (Radical AdditionFragmentation Transfer, RAFT) или с переносом атома (Atom Transfer Radical Polymerization, ATRP), модификацию, включая «клик» реакции. Известны статистические, графтсополимеры, блоксополимеры, звездообразные полимеры винилсахаридов [28, 3639].

Молекулы углеводов содержат большое количество гидроксильных групп, близких по реакционной способности. Для синтеза линейных полимеров необходимо использовать только монозамещённые непредельные производные сахаридов. Такие производные могут быть получены предварительным блокированием всех гидроксильных групп сахара, за исключением одной. В качестве защитных групп используются, например, диизопропилиденовые, ацетильные и др. Для получения водорастворимых полимеров эти группы по окончании процесса полимеризации удаляют. В результате получают полимеры, в которых углеводный фрагмент связан с полимерной цепью простой эфирной или сложноэфирной связью.

Так, например, были синтезированы 1,2:5,6-диизопропилиден-3-О-винил-Dглюкофураноза, 1-О-метакрилоил-2,3:5,6-диизопропилиден-D-маннофураноза [40], 1,2:3,4-диизопропилиден-6-О-метакрилоил-D-галактопираноза, 1,2,3,4-тетраацетил-6О-метакрилоил-D-глюкопираноза [41] и др.

Использование аминосахаров, в частности, глюкозамина, позволяет значительно упростить задачу и одностадийно провести присоединение непредельной группы к остатку сахара. Этим способом получают, например, 2-деокси-2-акрил- и 2-деокси-2метакриламидо-D-глюкозу (МАГ) [40].

Ещё одним удобным способом получения монопроизводных винилсахаридов является ферментативный метод, который обеспечивает высокую регио-, хемо- и стереоселективность процесса и не требует использования защитных групп [26, 42].

Так, например, при использовании щелочной протеазы синтезированы моноэфиры сахаров и ненасыщенных кислот, в частности, 6-О-акрилоил-, 6-О-метакрилоил- и 6О-кротоноилглюкозы [42, 43].

Синтез полимеров на основе винилсахаридов методом свободнорадикальной полимеризации осуществляют как в водных, так и органических средах в присутствии инициаторов радикального типа [28]. Полимеризацию мономеров с защищёнными гидроксильными группами проводят в неполярных растворителях [41, 4446], таких как толуол, бензол, а в случае незащищённых мономеров – в водных растворах, а также в N,N-диметилформамид (ДМФА) и N,N-диметилсульфоксид (ДМСО) [33, 4042, 4750].

Гомо- и статистические полимеры получены на основе 1,3,4,6-тетраацетил-2-деоксии 1,2:3,4-диизопропилиден-6-O-акрилоил-Dакриламид-D-глюкопиранозы галактопиранозы. После удаления защитных групп образующиеся полимеры были растворимы в воде [45].

Проведён синтез поливинилсахаридов на основе метакрилоильных производных глюкозы, различающихся положением глюкозного остатка относительно основной цепи (С-2, С-3 и С-6) и типом связи полимерная цепь — углевод (амидная и сложноэфирная) (Рисунок 1).

Рисунок 1 – Структура гомополимеров 3-О- и 6-О-метакрилоил-D-глюкозы (ПМГ С- и С-6), 2-деокси-2-метакриламидо-D-глюкозы (ПМАГ).

Такие различия в структуре полимера оказывают влияние на его биологические свойства, в частности, иммуномодулирующие. Так, максимальный стимулирующий эффект наблюдался у полиметакрилоилглюкозы с замещением по С-6 [32, 42].

Существенным фактором, определяющим биологические свойства полимеров, является их микроструктура. Известно, что природа непредельного радикала влияет на реакционную способность мономеров в процессе сополимеризации, что позволяет получать сополимеры различной микроструктуры. Так, сополимеризацией акрилоильных, метакрилоильных и кротоноильных производных D-глюкозы (по положению 3-О-, 6-О- или 2-N-) с N-винилпирролидоном (ВП) при различном соотношении сомономеров синтезированы водорастворимые сополимеры, различающиеся распределением углеводных фрагментов вдоль полимерной цепи. Для неактивных кротоноильных производных структура сополимеров с ВП представляет собой последовательность микроблоков, состоящих из звеньев ВП, разделённых единичными звеньями кротоноильного производного, в отличие от сополимеров ВП с метакрилоильными производными, где наряду с микроблоками звеньев ВП, присутствуют микроблоки звеньев метакрилата. [33, 42, 51]. При этом во всех случаях сополимеры кротоноильных производных, по сравнению с остальными сополимерами близкого состава, характеризовались более низкими значениями молекулярных масс (ММ).

Наряду с методами (со)полимеризации поливинилсахариды могут быть получены реакциями в цепях. Так, например, взаимодействием аминопроизводных сахаров с активированными п-нитрофенильными группами сополимеров N-(2гидроксипропил)метакриламида в их состав введены остатки глюкозы, галактозы, маннозы, фуранозы и других сахаров. В результате синтезированы полимеры, способные к направленному транспорту в определенные органы [52, 53].

Поскольку гидроксильные группы поливинилсахаридов проявляют невысокую реакционную способность, для использования их в качестве полимеров-носителей необходимо вводить высокореакционноспособные функциональные группы, например, -CHO, -COOH, -NH2, и др. Среди наиболее широко используемых для связывания БАВ функциональных групп выделяют карбоксильные группы.

1.1.3 Карбоксилсодержащие поливинилсахариды Введение карбоксильных групп в состав поливинилсахаридов может быть осуществлено (со)полимеризацией соответствующих мономеров или же полимераналогичными превращениями. В первом случае используют как непредельные кислоты или их ангидриды, так и непредельные карбоксилсодержащие производные сахаров (Рисунок 2):

Рисунок 2 – Структуры непредельных производных сахаров.

Процесс (со)полимеризации проводят в водной, водно-солевой или органической среде. В качестве инициатора применяют динитрил-азо-бис-изомасляной кислоты (ДИНИЗ), 2,2’-азо-бис-(2-метилпропандиамин)дигидрохлорид (АИБА), 2,2’-азо-бисазо-бис-(4-циановалериановую [2-2(имидазолин-2-ил)пропан]дигидрохлорид, кислоту), окислительно-восстановительную систему (NH4)2S2O8/Na2S2O5 [44, 47, 48, 5456].

Описаны водорастворимые сополимеры винилсахаридов, содержащие 30-80 мол.

% карбоксильных групп с ММ=2.5·103–14·106. Структуры некоторых гомо- и сополимеров приведены в Таблице 1.

В случае защищённых производных сахаров растворимость в воде полученных полимеров достигалась после снятия защитных групп углеводного фрагмента.

Таблица 1 – Гомо- и сополимеры карбоксилсодержащих поливинилсахаридов акриловая кислота глюконамидопропилметакриламидметакриловая кислота малеиновая кислота оксиметил)этилен глюкуроноил-глюцитол/маннитолкарбамид;

поли-N-метакрилоксиэтил-N'глюкозил-глюконоил/манноноилкарбамид Продолжение Таблицы глюкарамид;

N-(п-винилбензил)-6-Dглюкарамид-акриловая кислота;

N-(п-винилбензил)-6-Dглюкарамид-акриламид лактоз- или -D-(метил)глюк]амидN-виниламид (N-винилацетамид, N-метил-N-винилацетамид или N-винилформамид) Добавлением сшивающих агентов в процессе полимеризации получены рНчувствительные сшитые полимеры на основе 6-акрилоил-1,2,3,4-тетраацетатглюкозы, и 3-О-метакрилоил-1,2:5,6-ди-Ометакрилоилоксиэтилгликозида изопропилиден--D-глюкофуранозы с метакриловой кислотой [5759].

Синтез карбоксилсодержащих гликополимеров также осуществляли полимераналогичными превращениями. В данном случае использовали полимерыносители, содержащие реакционные группы, способные взаимодействовать с функциональной группой углеводного фрагмента. Так, чередующиеся сополимеры ВП или этилена с малеиновым ангидридом модифицировали аминопроизводными сахаров, например, N-(4-аминобутил)-О--D-галактопиранозил-(14)-Dглюконамидом (Рисунок 3) [60, 61].

Рисунок 3 – Карбоксилсодержащий гликополимер на основе сополимера ВПмалеиновый ангидрид.

В результате получены гликополимеры, содержащие в своей структуре равномерно распределённые карбоксильные группы и углеводные фрагменты.

Степень замещения составила 3-50 %, МM = (2-8)·105 [60, 61].

1.1.4 Полимеры-носители на основе 2-деокси-2-метакрилоиламидо-D-глюкозы Ввиду доступности исходных реагентов и простоты синтеза, одним из наиболее поливинилсахаридов является 2-деокси-2-метакриламидо-D-глюкоза (МАГ).

В работах [40, 41, 62] гомополимер МАГ получали радикальной полимеризацией мономера в ДМФА или в воде при использовании в качестве инициатора ДИНИЗ, АИБА, перекиси водорода при 40-60 °С или окислительно-восстановительных систем молекулярной динамики изучены гидродинамические параметры гомополимера МАГ (ПМАГ), и показано, что ПМАГ представляет собой гибкоцепной полимер, подобный поли-N-винилпирролидону, но с большим значением равновесной жёсткости. Такой эффект объясняется большей заторможенностью цепей ПМАГ, возникающей вследствие образования водородных связей ОН-группами остатков глюкозы [62, 63].

Рисунок 4 – Схема радикальной полимеризации 2-деокси-2-метакриламидо-Dглюкозы.

Для создания функциональных полимеров-носителей синтезированы сополимеры МАГ, содержащие реакционноспособные альдегидные группы [64, 65]. При сополимеризации в качестве функционального сомономера использовали диэтилацеталь акролеина (ДАА). Выбор защищённой формы акролеина позволяет своевременно активировать альдегид в полученном полимере. Однако при сополимеризации МАГ (ДМФА, ДИНИЗ) с таким неактивным мономером аллильного типа полученный продукт представлял собой гомополимер МАГ. Известно, что ДАА сополимеризуется с ВП [66], поэтому был получен тройной сополимер с использование МАГ, ВП и ДАА. Альдегидные группы также были введены в ПМАГ и сополимер МАГ-ВП периодатным окислением vic-гликолей углеводных фрагментов звеньев МАГ [64, 65].

Частичным удалением формильной защиты путём кислотного гидролиза сополимеров МАГ-N-винилформамид осуществлено введение в состав сополимера первичных аминогрупп [50]. Полимеры, содержащие первичные и третичные гидрохлоридом (АлАм·HCl) (вода, AИБА), N,N-диметиламиноэтилметакрилатом N,N-диэтиламиноэтилметакрилатом Определены относительные активности сомономеров: rМАГ = 17.81, rАлАм·HCl = 0.13; rМАГ = 0.83, rДМАЭМ = 2.37; rМАГ= 0.87, rДЭАЭМ = 3.93. В случае сополимеризации МАГ с ДМАЭМ или ДЭАЭМ, последние выступают в качестве более активного радикала, растущие цепи преимущественно реагируют с аминоакрилатом, тогда как для системы МАГ-аллиламин гидрохлорид, наоборот, растущие цепи более активно реагируют с МАГ [67].

галоидными алкилами (этил-, октил- и додецилиодидом) статистического сополимера МАГ-ДМАЭМ. Растворимость таких тройных сополимеров в воде зависела от количества звеньев четвертичных аммониевых оснований и от длины алкильного радикала. Показано, что с увеличением гидрофобности группы в боковой цепи усиливаются внутрицепные гидрофобные взаимодействия, что способствует компактизации полимерных цепей [68].

синтезированы сополимеры МАГ с N-винилацетамидом и его N-алкильными аналогами – N-гексил- и N-октил-N-винилацетамидами, содержащие 5-50 мол. % заместителями образующиеся в процессе полимеризации сополимеры были обеднены звеньями N-алкилацетамида по сравнению с исходной мономерной смесью, что, возможно, связано с дополнительными стерическими препятствиями, создаваемыми более объёмными алкильными группами [46, 49].

Использование при (со)полимеризации агентов передачи цепи, в частности, меркаптанов, содержащих функциональные группы, позволяет получать (со)полимеры с соответствующей концевой группой [69]. Этим способом с помощью цистеамин гидрохлорида синтезирован ПМАГ с одной концевой первичной аминогруппой [70]. При взаимодействии такого полимера и статистического сополимера ВП с N-гидроксисукцинимидным эфиром акриловой кислоты получены графт-сополимеры, у которых основная цепь состоит из поли-N-винилпирролидона, а боковые цепи – из ПМАГ [71]. Кроме того, реакцией концевой аминогруппы ПМАГ с синтезирован макромономер, представляющий собой гомополимер МАГ с двойной связью на конце цепи. Сополимеризация этого макромономера с ДМАЭМ привела к образованию графт-сополимеров с основной цепью поли-ДМАЭМ и привитыми цепями ПМАГ [68].

1.2 Водорастворимые полимеры-носители, выступающие в качестве «хозяина» в системе «гость-хозяин» для связывания гидрофобных соединений Как уже упоминалось, для связывания гидрофобных БАВ могут быть использованы полимеры-носители, способные к нековалентным взаимодействиям и осуществляющие роль «хозяина» в системе «гость-хозяин».

К соединениям, способным образовывать комплексы включения относятся циклодекстрины. (Рисунок 5). Они представляют собой циклические олигомеры Dглюкопираноз, звенья которых соединены друг с другом с помощью -1,4гликозидной связи.

Рисунок 5 – Молекулярная структура -циклодекстрина.

Циклодекстрины, содержащие 6, 7 и 8 глюкопиранозных звеньев, называются соответственно -, - и -циклодекстринами. Молекулярная структура этих производных глюкозы приближается к усеченному конусу с гидрофильной внешней поверхностью и более гидрофобной внутренней полостью.

Все вторичные гидроксильные группы расположены на широком основании конуса, первичные – на противоположном конце, т.е. в плоскости сечения. Внутри полости существуют водородные связи между атомами водорода и кислородом гликозидных мостиков.

За счет такой структуры циклодекстрины могут взаимодействовать с гидрофобными молекулами с образованием комплексов включения, обеспечивая их растворимость в биологических жидкостях. Кроме того, циклодекстрины способны к распознаванию мономерных и полимерных молекул «гостя» различной полярности, хиральности и т.д. [1518, 72].

Для солюбилизации плохо растворимых в воде веществ также успешно используют амфифильные полимеры, способные к образованию организованных структур в водных растворах (Рисунок 6) [1922]:

Рисунок 6 Процесс самосборки амфифильных полимеров в водных средах (иллюстрация из [2]).

Одним из определяющих факторов, влияющих на самосборку макромолекул, является выбор гидрофобной молекулы. Среди большого числа гидрофобных и дифильных веществ особый интерес представляет холестерин и его производные, относящиеся к классу стероидов (Рисунок 7).

Холестерин участвует в основных обменных процессах биологических систем, является важнейшим компонентом клеточных мембран, обеспечивая их стабильность и текучесть. Структура холестерина за счет жесткости колец обусловливает возможность пространственного упорядочивания молекул, содержащих его фрагменты, что является движущей силой их самосборки [24, 25].

Рисунок 7 – Структура холестерина.

Остатки холестерина (ХЛ), введенные в состав полимеров, характеризуются большей гидрофобностью по сравнению с додецильной, цетильной, олеоильной, циклододецильной, 1-адамантильной и 1-нафтильной группами. Так, например, значения критической концентрации образования агрегатов (ККА) в водных растворах для холестеринсодержащих полимеров ниже, чем для полимеров, модифицированных указанными гидрофобными группами даже при более низком содержании остатков холестерина. Увеличение содержания холестериновых групп в полимере сопровождается уменьшением значений ККА [23, 7375]. При этом введение остатков ХЛ в состав полимера способно улучшить его биологические противоопухолевого антибиотика доксорубицина, содержащее ХЛ, обладает значительно более высокой антиканцерогенной активностью (вплоть до 100 %) по сравнению с полимерами, в которых в качестве гидрофобного фрагмента используются олеильные, додецильные остатки, и не содержащими гидрофобные фрагменты полимерами [73, 76].

Далее в литературном обзоре будут рассмотрены основные способы синтеза гидрофильных полимеров, содержащих остатки -циклодекстрина (ЦД) или холестерина. Введение данных молекул в структуру полимеров возможно методами 1) (со)полимеризации или 2) полимераналогичных превращений.

1.2.1 Синтез полимерных производных -циклодекстрина 1.2.1.1 Полимеризация ненасыщенных производных -циклодекстрина Для получения растворимых ЦД-содержащих полимеров по первому способу необходимо использовать непредельные производные ЦД с невысокой степенью свободнорадикальную сополимеризацию в водном растворе [7784], в органических растворителях [85, 86] или их смесях [87, 88]. Наряду с ДИНИЗ [82, 8588] в качестве инициатора используют водорастворимый АИБА [80], персульфат калия [7779, 81], а также окислительно-восстановительные инициирующие системы, например, (NH4)2S2O8/Na2S2O5 [83, 84].

Рисунок 8 – Структура некоторых непредельных производных ЦД: 6-монодеокси-6метакрилоилэтиламино-ЦД (I) [80], 6-монодеокси-6-(2-гидрокси-3метакрилоилэтилендиамин)-ЦД и 6-монодеокси-6-(2-гидрокси-3метакрилоилгексаметилендиамин)-ЦД (II) [85], 6-монодеокси-6-аллиламино-ЦД (III) и моно-2-О-(3-аллилокси-2-гидроксипропил)-ЦД (IV) [83], аллил-ЦД (V) [89, 90], акрилоил-ЦД (VI) и акрилоил-6-аминокапроноил-ЦД (VII) [87, 88], 2-гидрокси-3метакрилоилоксипропил-ЦД (VIII) [78, 79, 81], метакрилоил-ЦД (IX) [91], малеолилЦД (X) [86, 92].

гидрофильными сомономерами, такими как N-винилпирролидон (ВП) [7882], аллиламин [77], акриламид и акриловая кислота [83, 88], N-изопропилакриламид [85, 92], 2-гидроксиэтилакрилат [84] (Рисунок 9), получены нейтральные, ионогенные, рН- и термочувствительные водорастворимые полимерные производные ЦД, а также гидрогели.

Рисунок 9 – Мономеры, используемые для синтеза гидрофильных полимеров ЦД: Nвинилпирролидон (I), аллиламин (II), акриламид (III), акриловая кислота (IV), Nизопропилакриламид (V), 2-гидроксиэтилакрилат (VI).

В зависимости от исходного мольного соотношения сомономеров в процессе полимеризации полимерные производные содержали 2.6-74.0 мол. % остатков ЦД и имели ММ = 22·103–18·105. При этом растворимость сополимеров в воде, например, для сополимеров ВП с 2-гидрокси-3-метакрилоилоксипропил-ЦД (МП-ЦД, Рисунок 8, VIII), исчезала только при содержании остатков ЦД более 60 мол. % [81].

Для пары ВП-(МП-ЦД) определены относительные активности сомономеров (вода, K2S2O8, 80 °С): rВП=0.06, rМП-ЦД =0.93 [81].

Описан синтез сетчатых полимеров – гомо- и сополимеров МП-ЦД и 2гидроксиэтилметакрилата – для использования в качестве стационарной фазы в жидкостной хроматографии. Сшитый полимер также получен реакцией 2гидроксиэтилметакрилата с -циклодекстрином и 1,6-гексаметилендиизоцианатом в присутствии этиленгликоль диметакрилата [93,94].

Синтез мономерных производных циклодекстрина с невысокой степенью замещения обычно осложняется его многостадийностью и небольшими выходами продуктов на каждой стадии реакции. Кроме того, вследствие большого количества гидроксильных групп в молекуле ЦД образуется смесь веществ, и для выделения целевого соединения прибегают к сложным, иногда многоступенчатым присоединение циклодекстрина к полимерным цепям методом полимераналогичных реакционноспособные группы, и функциональные производные ЦД.

Для синтеза водорастворимых полимерных производных ЦД используются, например, полиаллиламин (MM=10·103 и 60·103) [96], полиакриловая кислота (ММ=25·104) [97, 98], сополимер акриламид-акриловая кислота (ММ=11·104) [99], 8лучевой звёздообразный полиэтиленгликоль (ПЭГ-8) (ММ=10·103, 20·103 и 40·103), несущий на концах лучей карбоксильные или аминогруппы [100, 101], частично аминированный поливиниловый спирт [102], сополимер винилметиловый эфирмалеиновый ангидрид (ММ=80·103) [103]. В качестве функциональных производных при этом применяют 6-монотозил-ЦД, 6-монодеокси-6-моноамино-ЦД (АЦД), моноальдегид-ЦД, сукцинил-ЦД или моно-алкоголят-ЦД. Взаимодействие между группами –NH2, –ОН и –COOH проводят в присутствии конденсирующих агентов:

N,N'-дициклогексилкарбодиимида, N-этил-N-(3диметиламинопропил)карбодиимида, карбонилдиимидазола, в некоторых случаях используют N,N'-диметиламинопиридин в качестве катализатора, и/или проводят реакцию при повышенной температуре (50-60 С) [97100, 102]. Варьирование соотношения исходных реагентов позволяет влиять на степень модификации [96, 103]. Для звездообразного ПЭГ-8 с функциональными группами на концах лучей достигнута 90-97 % степень замещения [100, 101].

полисахариды. Аминопроизводные ЦД (АЦД, 6-монодеокси-6-этилендиамино-ЦД или 6-монодеокси-6-бутилендиамино-ЦД) «прививали» к частично окисленным маннану (ММ=27·104) [104], карбоксиметилцеллюлозе (ММ=30·103) [104] или Макропористый силикагель, модифицированный ковалентным присоединением к нему ЦД-производного N-карбоксиметилхитозана, был использован в качестве стационарной фазы хиральной высокоэффективной жидкостной хроматографии, что позволило разделить рацематы 2,4-динитрофенил--аминокислот [106].

Способы получения сшитых производных, содержащих остатки ЦД, на основе полиакриламида и хитозана описаны в [107111].

1.2.2 Свойства полимерных производных -циклодекстрина Полимерные производные -циклодекстрина способны солюбилизировать многие гидрофобные соединения, в том числе БАВ. Они используются для очистки воды, почвы от токсичных веществ и загрязнителей, для удаления нежелательных составляющих пищевых продуктов, имеющих по своей природе гидрофобный характер и способных выступать в качестве молекул «гостя». Разрабатываются полимерные системы доставки БАВ для фармацевтического и биомедицинского применения. Производные ЦД применяют для энантиоселективного распознавания в капиллярном электрофорезе, в высокоэффективной жидкостной хроматографии, при этом показано, что полимерные производные ЦД обладают рядом преимуществ по сравнению со свободным ЦД.

1.2.2.1 Комплексы -циклодекстрина с низкомолекулярными веществами В работах [85, 91] продемонстрирована способность гидрогелей, содержащих остатки -циклодекстрина, к нековалентному связыванию БАВ, в частности мелатонина, гидрокортизона. В результате образования комплекса включения между полостью ЦД и БАВ происходит замедление его скорости диффузии. При этом повышение содержания остатков ЦД в гидрогеле позволяет пролонгировать высвобождение БАВ.

Для регулирования содержания билирубина в крови был разработан адсорбент на основе ЦД-содержащего сшитого полиакриламида [107]. Показано, что он может эффективно связывать билирубин в различных условиях.

Сшитый хитозан, содержащий остатки ЦД, адсорбировал п-нонилфенол и бисфенол А [109], а также был использован для адсорбции холестерина из яичных желтков [110].

1.2.2.2 Комплексы -циклодекстрина с высокомолекулярными веществами Полимерные производные ЦД способны формировать комплексы с полимерами, содержащими различные гидрофобные боковые группы [99]. Так, в работе [80] образование комплекса включения сополимера ВП-(6-монодеокси-6метакрилоилэтиламино-ЦД) с поли--капролактоном, несущим на конце цепи вискозиметрии и динамического светорассеяния. Методами просвечивающей электронной, атомно-силовой микроскопии и динамического светорассеяния обнаружено, что в водных средах происходит образование мицелл, в которых гидрофобные домены, состоящие из остатков адамантана, образуют нерастворимое ядро, стабилизированное гидрофильными цепями ЦД-содержащего сополимера ВП.

Структура мицелл в значительной степени зависит от условий получения, могут быть получены как многоцентровые, так и одноцентровые мицеллы (Рисунок 10):

Рисунок 10 – Структура мицелл в зависимости от условий получения, иллюстрация из ссылки [80].

Изучение констант диссоциации комплексов, образованных между полимерными производными ЦД и полимерами, содержащими гидрофобные остатки, методами ЯМР, флюоресценции и кругового дихроизма показало, что в случае алкильных заместителей, устойчивость комплекса повышается с увеличением длины алкильного радикала, т.е. его гидрофобности. Это приводит к образованию сеток между полимерами на основе акриловой кислоты, модифицированными ЦД, и полимерами с н-октадецильными группами или адамантаном за счет формирования комплексов типа «хозяин-гость» между боковыми цепями (Рисунок 11), что продемонстрировано в работах [97, 98].

Степень «сшивки» сетки можно варьировать, подбирая подходящие по размеру немодифицированного ЦД полимерные сетки частично или полностью (в зависимости от количества добавленного ЦД) разрушаются, вследствие образования более прочных комплексов со свободным ЦД.

Рисунок 11 – Полимерная сетка, образованная за счет комплексов включения между гидрофобными заместителями одной полимерной молекулы и остатками ЦД другой полимерной молекулы (иллюстрация из [97]).

Такие сетки, образованные за счет комплексов включения имеют ряд преимуществ: не надо использовать сшивающие агенты, которые очень часто потенциально опасны для белков и клеток; сетка существует непостоянно – происходят обратимые взаимодействия между полимерными цепями, таким образом можно влиять на свойства сетки.

Исследованы гидрогели, возникающие в результате взаимодействия полимеров, содержащих ЦД, холестерин и адамантан на концах цепей звездообразного 8лучевого полиэтиленгликоля. При смешении ПЭГ-8-ЦД и ПЭГ-8-адамантан раствор становился вязкотекучим, в случае же взаимодействия ПЭГ-8-ЦД с ПЭГ-8-холестерин наблюдали образование трехмерной сетки. При этом, константа ассоциации комплекса включения между остатками ЦД и холестерина в 1.5 раза выше, чем константа ассоциации комплекса включения между остатками ЦД и адамантана [100, 101].

1.2.3 Синтез полимерных производных холестерина В молекуле холестерина присутствует двойная связь в положении 5-6, однако она недостаточно активна при полимеризации. Поэтому, для получения производных холестерина, способных к (со)полимеризации, необходимо ввести в молекулу холестерина непредельный заместитель.

1.2.3.1.1 Синтез непредельных производных холестерина Обычно синтез мономеров осуществляют взаимодействием гидроксильной группы холестерина или его производных с ненасыщенными карбоновыми кислотами [73, 112, 113], их хлорангидридами [114117] или с функциональной группой непредельного соединения [118]. Помимо акрилоильных [116] и метакрилоильных [115, 117, 119] производных холестерина (Рисунок 12) получены мономеры, у которых непредельная связь отделена от молекулы холестерина спейсером [76, 112, 113, 114, 116, 120122].

Рисунок 12 – Схема синтеза холестерил(мет)акрилата.

Наличие спейсера сказывается на физико-химических свойствах образующихся полимеров.

Получены также ненасыщенные производные холестерина с непредельным заместителем по положению 5-6 (Рисунок 13) [123, 124]. Однако этот способ более трудоёмкий, многостадийный и сопровождается обязательным предварительным блокированием гидроксильной группы.

Рисунок 13 – Схема синтеза непредельных производных холестерина по положению С6.

Различие положений, по которым присоединён непредельный радикал, оказывает влияние на ориентацию остатков холестерина в образующихся полимерах, что, в свою очередь, может влиять на свойства полимеров [123, 124].

1.2.3.1.2 Полимеризация ненасыщенных производных холестерина осуществляют методом свободнорадикальной (со)полимеризации гидрофильных мономеров и непредельных производных холестерина. Как правило, процесс проводят в растворе органического растворителя или смеси растворителей при использовании в качестве инициатора ДИНИЗ [73, 76, 114, 118, 125, 126].

Структуры некоторых непредельных производных холестерина, используемых для синтеза водорастворимых сополимеров, представлены на Рисунке 14.

Рисунок – Непредельные производные холестерина: 3холестерил(триэтиленгликоль)-N-винилпирролидон и 3-холестерилгексаноат-Nвинилпирролидон [125], холестерил(триэтиленгликоль)акрилат (II) холестерил-6-метакриламидогексаноат (III) [73, 76], 2-холестерилоксиэтилметакрилат (IV) [118], холестерилметакрилат (ХМАК) (V), холестерил-6-метакрилоилгексаноат (Х-С5-МАК) (V) [126].

Описан синтез нейтральных, ионных, рН- и термочувствительных статистических и графт-сополимеров, содержащих в боковой цепи остатки холестерина на основе Nвинилпирролидона [125], (мет)акриламида [114], (ГЭМА) [118], 2-акриламидо-2-метилпропансульфоната натрия (АМПС) [126] и др.

(Рисунок 15).

Варьированием мольного соотношения реагентов в процессе сополимеризации получены полимерные производные холестерина, содержащие 0.5-18 мол. % остатков холестерина с молекулярной массой (10-25)·103. При этом растворимость полимеров в воде зависит, главным образом, от количества остатков холестерина и наличием спейсера между остатком холестерина и основной цепью.

Рисунок 15 – Гидрофильные мономеры, используемые для синтеза водорастворимых N-винилпирролидон (I), N-(2гидроксипропил)-метакриламид (III), 2-гидроксиэтилметакрилат (IV), 2-акриламидометилпропансульфонат натрия (V).

Для некоторых систем определены относительные активности сомономеров в процессе сополимеризации (Таблица 2).

Таблица 2 – Значения относительных активностей сомономеров Как можно видеть (Таблица 2), значения относительных активностей различны для исследованных пар сомономеров, полученные сополимеры различаются по своей микроструктуре. Могут быть получены как сополимеры с практически случайным распределением звеньев, так и сополимеры, обогащенные на ранних стадиях полимеризации звеньями холестеринсодержащего сомономера [126, 127].

Остатки холестерина могут быть введены в состав полимера не только сополимеризацией их непредельных производных, но и при использовании в процессе полимеризации холестеринсодержащего инициатора или агента передачи цепи. Так, например, гомополимеризацию ГПМА или АМПС проводили в присутствии инициатора 4,4’-азо-бис-(4-циано-1-холестерил)пентаноата, в результате образующиеся полимеры содержали на одном конце цепи остатки холестерина.

Кроме того, в случае ГПМА, проводили полимеризацию с использованием не только холестеринсодержащего инициатора, но и тиохолестерина – регулятора роста цепи, что позволило получить полимеры, несущие на обоих концах остатки холестерина. В зависимости от соотношения реагентов степень полимеризации составляла 14, 72, и 123, а ММ = (2.6-18)·103 [128, 129].

контролируемую радикальную полимеризацию, например, RAFT или ATRP. При этом производное холестерина может выступать как в качестве сомономера, если производное непредельное, так и макромолекулярного агента передачи цепи (RAFT) или макроинициатора (ATRP). Синтезированы, например, статистический сополимер метакриловая кислота-холестерилметакрилат (ХМАК), содержащий 7 мол. % звеньев ХМАК [130], блок-сополимер холестерилметакрилат-2-гидроксиэтилметакрилат а также содержащие остатки холестерина на конце цепи поли-2метакрилоилоксиэтилфосфорилхолин [132], поли-N,N-диметиламиноэтилметакрилат [133], блок-сополимеры молочной кислоты с глицидилметакрилатом [134] или с варьировалась от 5·103 до 72·103, Mw/Mn составляло 1.04-1.37.

Наряду с методом радикальной сополимеризации для синтеза водорастворимых производных холестерина применяют реакции в цепях функциональных полимеровносителей. Осуществлена модификация холестерина или его производных, например, холестерилхлорформиата, полиаллиламином (ПАлАм, ММ=15·103) [23], двойным и гидроксиметакриламид (МM=10·103) и ИПАА-N,N-диметилакриламид (ДМАА)-ундеценовая кислота (MМ=9.3·103) [137], графт-сополимерами – ГПМАакрилоил(монометокси)ПЭГ [118] и поливиниловый спирт-ПЭГ [138], а также по одному или двум концам цепи (со)полимеров ИПАА-ДМАА,,-димеркапто-полиИПАА [139, 140] или ПЭГ (ММ=2-35·103) [100, 141, 142].

В зависимости от соотношения исходных реагентов, природы полимера-носителя, наличия дополнительных боковых гидрофильных цепей в состав полимерных производных удалось ввести до 50 мол. % остатков холестерина [118]. Растворимость в воде может быть также улучшена введением заряженных групп в состав полимеров.

Так, например, в случае ПАлАм, проводили алкилирование аминогрупп полимера йодистым метилом [23].

Для синтеза биодеградируемых амфифильных полимеров используют полиаминокислоты. Описаны полимерные производные на основе поли-L-лизина (ММ=(40-60)·103) и производных полиаспартамида, несущих функциональные гидроксильные или N-изопропиламинные группы, содержащие 5-30 мол. % остатков холестерина. [130, 143].

Остатки холестерина были введены в состав природных полисахаридов: хитозана [74, 75, 144], пуллулана, амилопектина, маннана, декстрана, амилозы, инулина, левана (ММ=(5-20)·104), гидроксиэтилцеллюлозы [146], глюкоманнана Содержание холестерина в полученных водорастворимых производных – от 0.8 до 6. мол. %.

1.2.4 Свойства полимерных производных холестерина Все вышеописанные полимерные производные холестерина образуют в водных растворах супрамолекулярные структуры: от простых агрегатов, мицелл различной формы до плотных наноструктур с жёсткими микродоменами со средними размерами от десятков до нескольких сотен нанометров. Характеристики образующихся агрегатов зависят от многих факторов: содержания остатков холестерина в полимере, их подвижности (удаленности от основной цепи), концентрации раствора полимера, гидрофильной составляющей полимера и др. [23, 73, 75, 132134, 136, 139, 144].

Для образования этих супрамолекулярных структур бывает достаточно введения в состав полимера очень небольшого количества ХЛ: менее 1 мол. % [126]. Обычно с ростом содержания остатков холестерина в полимере средний размер частиц возрастал [73, 76, 126, 143], однако встречаются случаи, где, наоборот, он уменьшался [23, 75]. Обе эти тенденции авторы объясняют увеличением гидрофобности полимера за счёт введения дополнительных холестериновых групп, что, в свою очередь, может способствовать появлению новых гидрофобных контактов, приводящих к увеличению размеров частиц, или же, напротив, компактизации существующего гидрофобного домена, а значит, уменьшению размеров частиц.

Повышение гидрофильности полимера путём увеличения содержания в его составе гидрофильных звеньев сопровождается снижением размера частиц [132, 135, Алкилирование иодистым метилом аминогрупп холестеринсодержащих 143].

производных полиаллиламина привело к двойственному результату: при содержании остатков холестерина 2-3 мол. % гидродинамический диаметр частиц после алкилирования возрастал с 230 до 361 нм, а при содержании 6 мол. % происходило уменьшение размеров с 167 до 115 нм. Такое поведение полимеров обусловлено конкуренцией двух факторов: гидрофобного взаимодействия холестериновых остатков и электростатического отталкивания одноименно заряженных четвертичных аммониевых групп [23].

У производных полиаспартамидов, содержащих звенья N-изопропилэтиленамина, распределение частиц по размерам зависело от рН среды. Так, в кислых средах, по сравнению со щелочными, формировались частицы меньшего размера, что также связывают с увеличением гидрофильности полимерной цепи за счёт протонирования аминогруппы [143].

Методами динамического светорассеяния и просвечивающей электронной микроскопии было найдено, что, в зависимости от исходной концентрации холестеринсодержащего полимера на основе ИПАА-N-гидроксиметилакриламида, полученные в водных растворах мицеллы характеризовались различной формой:

сферической, звездообразной, кубической. Кроме того, структура мицелл зависела от условий их формирования. Термочувствительный характер полимера оказывал влияние на средние размеры частиц. Превышение значения нижней критической температуры растворения полимера сопровождалось значительным их ростом. Так, если при 25-38 °С диаметр мицелл составлял 32-34 нм, то при 42 °С – более 200 нм [136, 139].

Варьирование строения полимерных производных холестерина позволяет получать различные супрамолекулярные структуры: обычные мицеллы;

«цветкоподобные» мицеллы, состоящие из холестериновых сердцевин, окружённых «лепестками» гидрофильных фрагментов и соединённых за счёт межмолекулярной представляет собой «жемчужное ожерелье», они состоят из эллипсоидальных «жемчужин», образованных остатками холестерина и покрытых гидрофильной оболочкой полимера, при этом «жемчужины» соединены между собой полимерными мостиками [76] и др. (Рисунок 16).

Рисунок 16 – Модели супрамолекулярных структур холестеринсодержащих полимеров: (а) – «цветкоподобной» мицеллы на основе сополимера АМПС-Х-С5-МА, (б) – «жемчугоподобной» наночастицы, состоящей из остатков холестерина, покрытых гидрофильной оболочкой ГПМА (иллюстрации из [126] и [76]).

Благодаря образованию компактных гидрофобных микродоменов, выступающих в качестве «хозяина» в системе «гость-хозяин», полимерные производные холестерина способны солюбилизировать многие гидрофобные соединения, в том числе БАВ: пирен [73, 136, 144], метилоранж [23], 1-(6-диметиламино-2-нафтил)-1додеканоат [128], холестерин [125, 128], эпирубицин [144], доксорубицин [137], напроксен [134, 135], бруцин [142], винкристин [119], этопозид [147].

Так, возможность эффективной солюбилизации, которая пропорциональна концентрации полимеров, а также экстракции (из раствора толуола) холестерина водными растворами холестеринсодержащих сополимеров ВП и акриламида продемонстрирована с помощью меченного радиоактивным изотопом холестерина ([14С]-холестерин). Методом электронной микроскопии показано, что в процессе солюбилизации образуются агрегаты ламинарной структуры. Авторы предполагают, что происходит встраивание низкомолекулярного [14С]-холестерина между содержащими холестерин звеньями полимерной цепи, образуется структура, подобная бислою биологической плазматической мембраны [114, 125].

Однако для холестеринсодержащих производных полиаллиламина (ПАлАм), по данным просвечивающей электронной микроскопии, добавление свободного холестерина не сопровождалось образованием ожидаемых бислоёв, а приводило к образованию новых структур: плотные наноструктуры с жёсткими микродоменами трансформировались в наночастицы с обогащённым холестерином плотным ядром, покрытым оболочкой ПАлАм, или, в случае алкилированных производных ПАлАм, в вытянутые ламинарные наночастицы [23]. Такой результат авторы связывают с образованием близко расположенных жёстких структур, сформированных холестериновыми группами, которые препятствуют интеграции холестерина в полимерную цепь и образованию бислойных визикул. В результате, свободный холестерин предпочтительно находится в сердцевине частицы, создавая, тем самым, обогащённые холестерином домены-кластеры.

Контролируемое выделение в водных растворах БАВ, инкапсулированных холестеринсодержащими полимерами или ковалентно присоединённых к ним, было изучено in vitro при 37 °С (рН 7.4) и in vivo [142]. Разработаны системы, в которых высвобождение БАВ происходит в зависимости от условий среды [73, 133, 137]. Так, например, продемонстрирована возможность рН-контролируемого выделения доксорубицина, ковалентно присоединённого через рН-чувствительную гидразидную связь, из полимерного производного на основе N-2-гидроксиметакриламида (ГПМА), содержащего остатки холестерина, и показана их цитостатическая активность in vitro.

В опытах in vivo (на мышах с ЕL-4 T клеточной лимфомой) найдено, что указанные производные, по сравнению с немодифицированным доксорубицином и его полимерными производными, содержащими отличные от холестерина гидрофобные группы, характеризуются пролонгированной циркуляцией в крови, улучшением аккумуляции в опухоли и, в целом, значительно более высокой противоопухолевой активностью [73].

Разработана эффективная система доставки двухцепочечной РНК (siRNA) на основе сополимера ПЭГ-поливиниловый спирт с присоединёнными через рНчувствительную ацетальную связь остатками холестерина, связанными комплексом включения с аминопроизводными ЦД, которые, в свою очередь, связывали siRNA [138].

представляют большой интерес для создания систем связывания различных гидрофобных соединений, получения новых полимеров-носителей БАВ для использования в биотехнологических и биомедицинских целях.

Анализ литературных данных показывает, что перспективными для создания новых типов полимеров-носителей гидрофобных БАВ являются гидрофильные полимеры, несущие высокореакционноспособные функциональные группы или лиганды, выступающие в роли «хозяина». Вместе с тем, сведения по синтезу и исследованию такого типа полимеров на основе винилсахарида 2-деокси-2метакриламидо-D-глюкозы (МАГ) практически отсутствуют. Единственное упоминание о возможности получения функциональных сополимеров МАГ, где в качестве реакционноспособных выступают карбоксильные или активированные сложноэфирные группы, представлено в публикации [148]. Указанные полимеры Nвиниламидов описаны только для N-винилпирролидона [78–82, 125, 127, 149, 150]. В связи с этим, основными направлениями диссертационной работы являлись: синтез водорастворимых функциональных полимеров-носителей на основе винилсахарида реакционноспособные карбоксильные и активированные сложноэфирные группы, кислотами; разработка методов введения в структуру полимеров МАГ и Nвиниламидов остатков -циклодекстрина и холестерина; исследование конформационных состояний синтезированных полимеров в водных растворах;

определение возможности использования полученных полимеров для связывания гидрофобных БАВ, в частности, холестерина.

ГЛАВА 2 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

(+)–D-Глюкозамин глицидилметакрилат (ГМА) 97%, этиленгликольдиметакрилат (ЭДМА) 98% (Aldrich, Германия), мета-периодат натрия (Fluka, Германия), 6-водный хлорид железа (III) (Нева-реактив, СПб) использовали без дополнительной очистки. N-винилпирролидон (ВП), N-метил-N-винилацетамид (МВАА), акриловую кислоту (АК), метакриловую кислоту (МАК) (Aldrich, Германия), 4-пентеновую кислоту (4ПК) очищали перед использованием перегонкой в вакууме. Кротоновую кислоту (КК) (Merck, Германия) и п-нитрофенол (НФ) перекристаллизовывали из воды, холестерин (Sigma, Германия) и динитрил-азо-бис-изомасляной кислоты (ДИНИЗ) (Fluka, Германия) – из этанола, 2,2`азо-бис-(2-амидинопропандиамин)дигидрохлорид (АИБА) (Aldrich, Германия) переосаждали из водного раствора ацетоном.

Все использованные в работе растворители очищали стандартными методами [151, 152]. Ткип. и nD растворителей соответствовали литературным данным.

Буферные растворы готовили на основе химических реактивов аналитической степени чистоты и дистиллированной воды с последующим фильтрованием через микрофильтр с размером пор 0.45 мкм (Millipore Inc., Австрия).

Колонки из нержавеющей стали диаметром 4.6 и длиной 50 мм (Supelco, США), использованные в качестве формы для получения монолитных колонок, а также реактив Шиффа (фуксисернистая кислота), используемый для определения содержания альдегидных групп в окисленных полимерах, были предоставлены лабораторией полимерных сорбентов и носителей для биотехнологии ИВС РАН.

Реактив Златкиса-Зака (0.1 % раствор хлорного железа (III) в смеси серной и ледяной уксусной кислот в соотношении 1:1.5), используемый для специфического определения холестерина в водных растворах, готовили аналогично методу, описанному в [153].

1.96 г (0.020 моль) очищенного возгонкой янтарного ангидрида и 5 г (0.013 моль) холестерина растворяли в 15 мл пиридина и нагревали на масляной бане при 100 °С с обратным холодильником. Через 24 ч реакционную смесь разбавляли водой (50 мл), подкисляли НCl до рН 2-3. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом, экстракт промывали водой, сушили над безводным сульфатом натрия и упаривали на роторном испарителе. Полученный продукт перекристаллизовывали из ацетона, а затем из этанола. Выход МСХ составил 4.35 г (70 %), Тпл=179-181 °С (Тпл. лит. = 185 °С [144]). Элементный состав: найдено: С, 76.18 %, 76.07; Н, 10.67 %, 10.69 %, вычислено для C31H50O4: С, 76.42 %; Н, 10.27 %. В ИК-спектре исчезает полоса колебаний гидроксильных групп ОН холестерина при 3400 см1, появляются характеристические полосы сложноэфирной и карбоксильной групп С=О при см1 и 1709 см1, простой эфирной группы С-О-С при 1170 см1.

H ЯМР (СDСl3) (характерные сигналы): (м.д.) = 0.65 (3H, s, холестерин 18Н3), 0.83 (3H, d, холестерин 26-Н3), 0.85 (3H, d, холестерин 27-Н3), 0.89 (3H, d, холестерин 21-Н3), 0.99 (3H, s, холестерин 19-Н3), 2.29 (2H, d, холестерин 4-Н2), 2. (2H, m, НООС-CH2-CH2-COO-ХЛ), 2.65 (2H, m, НООС-CH2-CH2-COO-ХЛ), 4.6 (1H, m, холестерин 3-Н1), 5.35 (1H, m, холестерин 6-Н1).

2.2.1.2 Литиевая соль моносукцината холестерина (МСХ-Li) 0.28 г (0.0006 моль) МСХ растворяли в небольшом количестве диоксана, добавляли 0.096 г (0.0013 моль) раствора карбоната лития в воде. Реакционную смесь гомогенизировали, нагревали на водяной бане при 50 °С и перемешивании в течение 48 ч, затем упаривали на роторном испарителе. Сухой остаток заливали горячим этилацетатом, раствор доводили до кипения и оставляли при комнтаной температуре на ночь. Нерастворимую часть отфильтровывали, промывали этилацетатом, сушили в вакууме. Полученную соль растворяли в воде и лиофилизовали. Выход целевого продукта составил 0.25 г (90 %). В ИК-спектре соли появляются полосы валентных колебаний карбоксианионов О=С–О– при 1570 см1 и 1420 см1.

2.2.2.1 Синтез 2-деокси-2-метакриламидо-D-глюкозы (МАГ) МАГ получали по методу, описанному в [40, 64]. К раствору 30 г (0.139 моль) (+)-D-глюкозамин гидрохлорида в 450 мл метанола добавляли по каплям при интенсивном перемешивании 24 мл триэтиламина. Смесь охлаждали льдом с солью до -5 °С, затем прикапывали одновременно 18 мл триэтиламина и 15 мл хлорангидрида метакриловой кислоты, поддерживая температуру не выше 0 °С.

Продолжали перемешивание при температуре: первый час -5 – -10 °С, второй час - – -20 °С, следующие три часа – 20-25 °С (комнатная температура), раствор упаривали на ротационном испарителе. Сухой остаток промывали хлороформом, сушили в вакууме и перекристаллизовывали из 500 мл этанола. Выход 24.6 г (72%) МАГ с Тпл = 197 – 198 °С (Тпл. лит. = 198 – 199 °С [40, 64]). Элементный анализ: найдено: N, 5.88 %, 5.84 %; C, 48.64 %, 48.57 %; H, 7.09 %, 7.02 %. Для C10H17NO6 вычислено: N, 5.7 %; C, 48.6 %; H, 6.9 %.

H ЯМР (D2O): (м.д.)=1.97 (3H, s, CH2=C(CH3)-), 5.5 (1H, sd, CHcisHtrans=C(CH3)-), 5.7 (1H, sd, CHcisHtrans=C(CH3)-), 3.44-3.57 (m, 5-H, 4-Н), 3.58-3.7 (m, 3-H), 3.72m, 2-H, 3-H, 6-H), 3.93 (5-H), 3.98 (dd, 2-H), 4.81 (d, 1-H), 5.25 (d, 1-H).

C ЯМР (D2O) (:=0.6:0.4, + аномер): (м.д.) = 18.55, 18.58 (–СН3 +), 55. (С2 ), 57.66 (С2 ), 61.39, 61.56 (С6 +), 70.74, 70.94 (С4 +), 71.33 (С3 ), 72.38 (С ), 74.54 (С3 ), 76.76 (С5 ), 91.63 (С1 ), 95.66 (С1 ), 121.88, 122.03 (=СН2 +), 139.86, 140.10 (–С= +), 173.33, 173.47 (С=О +).

Холестерилметакрилат (ХМАК), холестерилакрилат (ХАК) и холестерилкротонат (ХКК) синтезированы аналогично методике [117], реакцией холестерина с хлорангидридом метакриловой, акриловой или кротоновой кислот, соответственно.

3.86 г (0.01 моль) холестерина растворяли при перемешивании в 50 мл толуола, добавляли 15 мл триэтиламина и нагревали до кипения при постоянном токе аргона, затем к раствору по каплям прибавляли 0.019 моль хлорангидрида соответствующей кислоты. Через 3 ч добавляли 15 мл триэтиламина и продолжали реакцию 24 ч при 70-80 °С. Выпавший из реакционной смеси осадок отделяли, маточный раствор осаждали в 1.6 N НСl в метаноле (600 мл). Через 1.5 ч образовавшийся осадок отфильтровывали, промывали и сушили в вакууме. Полученные мономеры очищали двойным переосаждением метанолом из раствора хлороформа.

Характеристики полученных мономеров приведены в Таблице 3.

В ИК-спектрах ненасыщенных производных холестерина исчезает полоса валентных колебаний групп ОН при 3400 см1, появляются полосы сложноэфирной С=О и простой эфирной С-О-С групп при 1720 см1 и 1170 см1, а также непредельной группы С=С – 1640 см1.

Таблица 3 – Характеристики непредельных производных холестерина ХМАК: 1H ЯМР (СDСl3) (характерные сигналы): (м.д.) = 0.66 (3H, s, холестерин 18-Н3), 0.83 (3H, d, холестерин 26-Н3), 0.85 (3H, d, холестерин 27-Н3), 0.89 (3Н, d, холестерин 21-Н3), 1.01 (3H, s, холестерин 19-Н3), 1.9 (3H, s, CH2=C(CH3)-), 2.33 (2H, d, холестерин 4-Н2), 4.64 (1H, m, холестерин 3-Н1), 5.36 (1H, d, холестерин 6-Н1), 5. (1H, m, CHcisHtrans=C(CH3)-), 6.05 (1H, m, CHcisHtrans=C(CH3)-).

ХАК: 1H ЯМР (СDСl3) (характерные сигналы): (м.д.) = 0.66 (3H, s, холестерин 18-Н3), 0.84 (3H, d, холестерин 26-Н3), 0.85 (3H, d, холестерин 27-Н3), 0.89 (3Н, d, холестерин 21-Н3), 1.01 (3H, s, холестерин 19-Н3), 2.34 (2H, d, холестерин 4-Н2), 4. (1H, m, холестерин 3-Н1), 5.37 (1H, d, холестерин 6-Н1), 5.78 (1H, dd (J=1.7, 10.4 Гц), CHcisHtrans=CH-), 6.08 (1H, dd (J=1.7, 10.4 Гц), CHcisHtrans=CH-), 6.37 (1H, m, CH2=CH-).

ХKК: 1H ЯМР (СDСl3) (характерные сигналы): (м.д.) = 0.66 (3H, s, холестерин 18-Н3), 0.84 (3H, d, холестерин 26-Н3), 0.85 (3H, d, холестерин 27-Н3), 0.89 (3Н, d, холестерин 21-Н3), 1.01 (3H, s, холестерин 19-Н3), 2.3 (2H, d, холестерин 4-Н2), 4. (1H, m, холестерин 3-Н1), 5.35 (1H, d, холестерин 6-Н1), 1.85 (3H, dd, trans (CH3)CH=CH-), 2.11 (3H, dd, cis (CH3)CH=CH-), 5.74 (1H, dq (J=1.7, 11.4 Гц), cis (CH3)CH=CH-), 5.8 (1H, dq (J=1.7, 15.5 Гц), trans (CH3)CH=CH-), 6.28 (1H, dq (J=7.3, 11.4 Гц), cis (CH3)CH=CH-), 6.93 (1H, dq (J=7.3, 15.5 Гц), trans (CH3)CH=CH-).

Метилсульфатную соль N,N,N-триметиламиноэтилметакрилата (ТМАЭМ) и Nгидроксифталимидный эфир акриловой кислоты (ГФИАК), полученные, как описано в работах [154] и [155], соответственно, были предоставлены лабораторией гидрофильных полимеров ИВС РАН.

Радикальную сополимеризацию проводили в продутых аргоном запаянных ампулах, содержащих расчётное количество мономеров, инициатора и растворителя, при 60 °С в течение необходимого времени. Полученный полимер осаждали в диэтиловый эфир (МАГ-4ПК – в ацетон). Очистку от низкомолекулярных примесей осуществляли диализом против воды, в случае полимерных производных циелодекстрина сначала проводили диализ против раствора NaCl, а затем против воды. Использовали диализные мембраны Spectra/Por 7 фирмы Spectrum Lab. Inc.

(США), позволяющие удалять соединения с ММ 1000. Полимеры выделяли методом лиофильной сушки.

2.2.3.1 Синтез карбоксилсодержащих сополимеров Гомополимер МАГ и сополимеры МАГ с (М)АК получали радикальной сополимеризацией в растворе ДМФА, в качестве инициатора использовали ДИНИЗ, в случае 4ПК – растворитель – вода, инициатор – АИБА.

Сополимеры ВП с непредельными кислотами синтезировали в растворе 2пропанола, инициатор – ДИНИЗ. Сополимеры МВАА с АК и КК получали в растворе этанола, а в случае КК – этанола или бензола, инициатор – ДИНИЗ.

Использованные в работе исходные соотношения мономеров, концентрации мономеров и инициатора представлены в ГЛАВЕ 3 – раздел 3.1.1 (Таблица 4), раздел 3.1.2 (Таблица 9), раздел 3.1.3 (Таблица 10).

2.2.3.2 Синтез сополимеров, содержащих сложноэфирные активированные группы Реакцию карбоксилсодержащих сополимеров МАГ, ВП или МВАА с пнитрофенолом (НФ) проводили в растворе ДМФА в присутствии конденсирующего агента – N,N’-дициклогексилкарбодиимида (ДЦК) в течение 2 ч при –18 °С, а затем при +4 °С в течение 48 ч. Образовавшуюся N,N’-дициклогексилмочевину отфильтровывали, полимер выделяли осаждением в диэтиловый эфир, многократно промывали эфиром и сушили в вакууме.

Использовали мольные соотношения [СООН]:[НФ]:[ДЦК] = 1:1:1; 1:1.5:1.5; 1:2:2.

сополимеризацией в растворе ДМФА (10-15 масс. %) в присутствии ДИНИЗ (2 масс.

%) при 60 °С в течение 24 ч.

Данные по синтезу полимерных активированных эфиров приведены в ГЛАВЕ 3, раздел 3.1.4 (Таблица 11, 12).

2.2.4 Синтез полимерных производных -циклодекстрина 1. К раствору карбоксилсодержащего сополимера в ДМФА добавляли 6монодеокси-6-моноамино--циклодекстрин гидрохлорид (АЦД·НСl), эквимолярное количество триэтиламина (ТЭА), ДЦК. Реакционную смесь выдерживали в течение ч при 18 °С, а затем при +4 °С – 72 ч. В случае сополимеров МАГ – 2 ч при 18 °С, а затем – при комнатной температуре 72 ч. Выделившуюся в ходе реакции N,N’дициклогексилмочевину отфильтровывали.

2. Сополимеры, содержащие звенья активированных эфиров, растворяли в ДМФА и добавляли расчётное количество АЦД·НСl и ТЭА. Реакцию проводили при комнатной температуре, а в случае сополимеров на основе МАГ – при 40 °С. По окончании реакции для удаления непрореагировавших активированных сложноэфирных групп в реакционную смесь добавляли аммиак.

Данные по синтезу полимерных производных ЦД приведены в ГЛАВЕ 3, раздел 3.2 (Таблица 13).

2.2.5 Синтез полимерных производных холестерина Холестеринсодержащие полимеры получали радикальной сополимеризацией непредельных производных холестерина с соответствующими мономерами при использовании инициатора ДИНИЗ в течение 24 ч (в случае холестерилкротоната – ч) Для сополимеров МАГ-Х(М)АК, МАГ-ТМАЭМ-ХМАК, ТМАЭМ-ХМАК реакцию проводили в смеси ДМФА(ДМСО)/амиловый спирт(толуол) (70/30-80/20). Сополимер МАГ-ХМАК также был получен в смеси вода/амиловый спирт (85/15). Полученные полимеры промывали амиловым спиртом или хлороформом для удаления невступившего в сополимеризацию холестеринсодержащего мономера. Сополимеры ВП и МВАА с холестеринсодержащими мономерами, а также тройные сополимеры с ХКК и КК получали в смеси этанол/толуол (80/20 или 50/50). Так как эти сополимеры были растворимы в хлороформе, то очистку от холестеринсодержащего мономера осуществляли диализом против хлороформа, этанола и воды. Полимеры выделяли методом лиофильной сушки.

Данные по синтезу холестеринсодержащих полимеров приведены в ГЛАВЕ 3, раздел 3.3 (Таблица 14, 15).

2.2.6 Синтез люминесцентно меченых сополимеров Люминесцентную метку вводили в состав (со)полимеров двумя способами:

1. Меченые карбоксилсодержащие и холестеринсодержащие сополимеры на основе МАГ, а также их аналоги – не содержащие остатков холестерина сополимеры – синтезировали радикальной сополимеризацией соответствующих мономеров с 9антрилметилметакриламидом (9-АММА) в тех же условиях, в которых получали немеченые сополимеры.

2. Меченый сополимер ВП-КК и полимерное производное АЦД на его основе были получены взаимодействием карбоксилсодержащих звеньев с 9антрилдиазометаном в растворе N-диметилацетамида в течение 5 ч при комнатной температуре. Аналогично были получены люминесцентно меченые сополимеры ВПХКК-КК и МВАА-ХКК-КК.

Использовали мольное соотношение [звено полимера]:[метка] = 400 : 1.

Полимеры очищали многократным переосаждением в диэтиловый эфир.

Содержание люминесцирующих групп во всех случаях не превышало 0.3-0.5 мол. %.

Спектры ЯМР 1Н, С, 1H–13С HSQC, 1H–1H ROESY регистрировали на приборе Bruker AC-400 (400.1 MГц) относительно сигналов растворителя (ДМФА-d7 (2.72, 2.93 и 8.03 м.д.)), CDCl3 (7.24 м.д.) или D2O (4.8 м.д. (25 С), 4.3 м.д. (60 С)).

Для измерений поглощения в УФ и видимой областях спектра использовали спектрофотометр Specord UV VIS, а также отечественный спектрофотометр СФ- ЛОМО (Россия).

использованием отражательной микроприставки Pike в таблетках KBr.

Динамическое светорассеяние изучали на установке Photocor Сomplex (Россия), 632.8 нм.

Измерения поляризации люминесценции раствора люминесцентно меченого полимера проводили на установке, описанной в работе [156], совмещенной с люминесцентном спектрофотометре LS-100 (фирма PTI, Канада) в импульсном режиме.

Потенциометрическое титрование растворов сополимеров проводили на рН-метре рН-410 (Аквилон, Россия).

потенциометрического титрования водных растворов сополимеров 0.1 N раствором NaОН.

Содержание звеньев ТМАЭМ в сополимерах вычисляли по данным элементного анализа (по содержанию серы).

Количество звеньев активированных эфиров в сополимерах определяли в случае п-нитрофениловых эфиров (НФЭ) по полосе поглощения связанного НФ (макс= нм, = 9500 лмоль1см1) [157], а в случае ГФИАК по полосе при макс= 295 нм ( = 2100 лмоль1см1) [155].

Количество люминесцирующих меток в сополимерах оценивали по макс= 368 нм ( =10000 лмоль1см1) [158].

Определение содержания остатков циклодекстрина в полимерах В Н ЯМР спектрах для расчета количества связанного с полимером ЦД использовали сигнал семи аномерных протонов ЦД при = 5.1 м.д., т.к. он хорошо отделен от остальных сигналов [159].

В 1Н ЯМР спектрах полимерных производных ЦД на основе МАГ положение сигналов аномерного протона ЦД и -формы аномерного протона звена МАГ практически совпадают. Кроме того, в спектрах, снятых при комнатной температуре, сигнал от D2O совпадает с сигналом -формы аномерного протона остатка глюкозы в звеньях МАГ. Повышение температуры в процессе регистрации спектра позволяет улучшить разрешение и сместить сигнал D2O в область сильного поля, с 4.7 до 4. м.д., тем самым «освободив» сигнал -формы аномерного протона звена МАГ.

Поэтому, для расчёта количества введённых остатков ЦД в сополимеры МАГ 1Н ЯМР спектры снимали при повышенной температуре (60 °С). Интегральная интенсивность (ИИ) сигналов семи аномерных протонов ЦД и аномерного протона звена МАГ в области 4.7-5.1 м.д. определяли путем разделения полос и выделения из общего плохо разрешенного спектра сигнала аномерных протонов ЦД при 5.1 м.д. с помощью программы DMFIT [160]. Погрешность такого метода составляла примерно 10 %.

В остальных случаях Н ЯМР спектры полимерных производных ЦД регистрировали при 25 °С. В сополимерах ВП и МВАА, для определения содержания остатков ЦД, использовали интегральную интенсивность (ИИ) семи аномерных протонов ЦД и сигналы шести протонов CH2 групп ВП в области 1.0-2.5 м.д., а для полимерных производных МВАА – сигнал трёх протонов N-CH3 групп полимера в области 2.5-3.0 м.д.

Для подтверждения ковалентного связывания ЦД с полимерной цепью использовали метод диффузионно-упорядоченной спектроскопии (DOSY) в одномерном варианте. Проводили сопоставление относительных изменений интенсивностей сигналов ЦД и полимера при фиксированном времени диффузии и двух значениях величины амплитуды импульсных градиентов магнитного поля. Эти величины в наших экспериментах составляли 2% и 95% от максимального значения.

Время диффузии – 50 миллисекунд, длительность градиентного импульса – 2. миллисекунды. В случае присоединения ЦД к полимеру, в отличие от механической смеси ЦД-полимер, коэффициенты диффузии всех компонентов должны быть одинаковы, и, соответственно, интенсивности сигналов ЦД и полимера должны изменяться в одинаковое число раз при изменении величины амплитуды импульсного градиента магнитного поля.

Определение содержания остатков холестерина Мольную долю холестеринсодержащих звеньев в сополимерах МАГ определяли, рассчитывая вклад в общую интегральную интенсивность сигналов в спектре ЯМР 1Н при 0.0-2.7 м.д., приходящуюся а) на протоны СH2 и CH3 групп основной цепи звеньев MАГ, ТМАЭМ и ХМАК и б) на протоны остатков холестерина. Например, в случае сополимера МАГ-ТМАЭМ-ХМАК в области 0.0-2.7 м.д. находятся сигналы пяти протонов СH2 и CH3 групп основной цепи звеньев MАГ, ТМАЭМ и ХМАК и сорока трёх протонов остатков холестерина (все протоны за исключением протонов в положениях 3 и 6 остатка холестерина). Интегральную интенсивность (ИИ), приходящуюся на один из сорока трёх протонов, определяли из ИИ сигнала трех протонов метильной группы молекулы холестерина в положении 18 (0.7 м.д.). ИИ сигналов протонов основной цепи и протонов остатков холестерина определяли путем аппроксимации формы сигнала в области 0.0-2.7 м.д. набором линий формы Лоренца с помощью программы DMFIT [160]. Из общего плохо разрешенного спектра выделяли сигнал протонов метильной группы в положении 18 при 0.7 м.д.

Погрешность такого метода составляла примерно 10 %.

Для сополимеров на основе ВП или МВАА мольную долю звеньев, содержащих холестерин, определяли, сравнивая ИИ сигналов протонов остатка холестерина в положениях 3 (4.77 м.д.) и 6 (5.38 м.д.), а также сигнала трех протонов метильной группы в положении 18 (0.7 м.д.) с ИИ сигнала протона CH группы основной цепи звена ВП в области 3.4-4.1 м.д., а в случае МВАА с ИИ сигнала трёх протонов N-СН групп в области 2.5-3.0 м.д.

2.3.3 Измерение характеристической вязкости Измерение характеристической вязкости [] полимеров проводили с использованием капиллярного вискозиметра Уббелоде при 25 °C. В качестве растворителей использовали следующие растворы: 0.2 N Na2SO4 и 0.2 N NaCl (для сополимеров МАГ); 0.1 M CH3COONa (для сополимеров ВП); 0.2 N NaCl (для сополимеров МВАА); 1 М NaNO3 (для сополимеров ТМАЭМ); ДМФА (для нерастворимых в воде полимеров).

Для расчёта молекулярных масс сополимеров, содержащих не менее 80 мол. % звеньев основного мономера, использовали зависимости Марка-Куна-Хаувинка:

сложноэфирные группы предварительно удаляли реакцией с аммиаком.

Кинетику сополимеризации МАГ с (М)АК, а также гомополимеризации МАГ и ненасыщенных кислот изучали дилатометрическим методом. Процесс (со)полимеризации проводили в ДМФА с исходной концентрацией мономеров в смеси 0.9 моль/л и концентрацией инициатора 0.03 моль/л в атмосфере аргона при 60 °С. Скорость процесса определяли на начальных стадиях превращения, которым соответствует линейный вид зависимости конверсии от времени.

2.3.5 Определение относительных активностей сомономеров Для определения относительных активностей МАГ, АК и МАК процесс сополимеризации проводили в продутых аргоном ампулах в растворе ДМФА в присутствии ДИНИЗ при 60 °С. Условия реакции: суммарная концентрация мономеров – 1.23 моль/л, инициатора – 1.6 мол. %, соотношение мономеров в исходной смеси варьировали от 10:90 до 90:10 мол. %. Выход сополимеров не превышал 10 %. Расчет значений r1 и r2 был проведен с использованием методов Файнемана-Росса [163], Келен-Тюдеша [164] и Езриелева-Брохиной-Роскина [165].

2.3.6 Кислотно-основные свойства сополимеров МАГ-(М)АК Для оценки кислотно-основных свойств синтезированных сополимеров проводили анализ их кривых потенциометрического титрования с использованием уравнения Гендерсона-Хассельбаха, описывающего титрование слабых поликислот [166]:

где pKкаж= рКо + рК; рКо – константа ионизации изолированной группы СООН в карбоксильных групп. Значения определяли как отношение концентрации карбоксильных групп. Концентрацию групп СОО считали равной концентрации NaOH, добавленной к титруемому раствору в данной точке. Член рК = 0.43Gel/RT характеризует влияние электростатического отталкивания заряженных групп СОО на ионизацию последующих групп.

2.3.7 Исследование внутримолекулярной подвижности макромолекул Наносекундные времена релаксации, характеризующие внутримолекулярную подвижность полимерных цепей, ВМП, определяли методом поляризованной люминесценции, измеряя поляризацию люминесценции Р раствора люминесцентно меченого полимера [167]:

где 1/Р0' – параметр, связанный с высокочастотными движениями люминесцирующей метки, определяется экстраполяцией зависимости 1/Р (T/) к T/ = 0, T – температура раствора, – вязкость растворителя. Величину T/ варьировали за счет изменения вязкости растворителя добавлением вязкой компоненты (сахарозы). ф – время жизни возбужденного состояния люминесцирующей метки.

Концентрацию сополимера в растворе варьировали от 0.1 до 1 мг/мл.

Константы связывания (Ксвяз) низкомолекулярного лиганда акридинового оранжевого (АО) сополимером рассчитывали, используя уравнение Скэтчарда:

где ссвяз= сАО·АО, ссвоб = (сАО – сАО·АО) – концентрации связанного и свободного лиганда, соответственно, N – число мест связывания на полимере.

Долю связанного АО (АО) определяли из значений обратной величины поляризации люминесценции раствора [168], содержащего «темновой» (немеченый) сополимер и АО, согласно соотношению:

в котором 1/Р, 1/Рсвоб, 1/Рсвяз – обратные величины поляризации люминесценции исследуемого раствора, содержащего свободные и полностью связанные ионы АО, соответственно.

Концентрацию АО (сАО) варьировали от 0.5·106 до 3·106 моль/л.

Изучение взаимодействий в системах полимер – низко или высокомолекулярное соединение проводили по изменению ВМП меченого полимера А* при добавлении к его раствору немеченого («темнового») низко- или высокомолекулярного соединения В: А* +В = (А*– В) или, наоборот, В*+А = (В*– А).

2.3.8 Исследование образования комплексов включения Образование комплексов включения между холестеринсодержащим полимером и низкомолекулярным -циклодекстрин подтверждали методами одномерной и двумерной ЯМР спектроскопии в D2O. 1Н ЯМР: К раствору сополимера МАГ-ХМАК (95:5 мол.%) с концентрацией 8 мг в 0.5 мл добавляли низкомолекулярный ЦД двумя порциями (4 и 10 мг). Мольное соотношение [ХЛ]:[ЦД] = 1:2 и 1:6. На каждом этапе снимали спектр и следили за изменением интенсивности сигналов протонов холестерина в области 0.8-0.9 м.д. (группы СH3 в положениях 21, 26, 27) и ~ 5.4 м.д.

использованием эффекта Оверхаузера во вращающейся системе координат (ROESY), которая позволяет определить протоны, расположенные на расстоянии менее 0.5 нм и связанные диполь-дипольным взаимодействием. Использовали сополимер МВААХКК (97:3 мол. %) (концентрация – 26 мг/мл) и низкомолекулярный ЦД (концентрация – 8 мг/мл), мольное соотношение [ХЛ]:[ЦД] = 1:1. Размер матрицы 8192х256 (F2хF1). Спектры сняты в фазочувствительном режиме с подавлением сигнала воды. 90-градусный импульс – 7 микросекунд. Время смешивания миллисекунд, мощность радиочастотного поля лока 2 КГц.

2.3.9 Исследование адсорбции холестерина на монолитных колонках 2.3.9.1 Синтез макропористого сорбента монолитного типа Синтез монолитного сорбента осуществляли радикальной сополимеризацией глицидилметакрилата и этиленгликольдиметакрилата (объёмное соотношение мономеров ГМА:ЭДМА = 60:40) в присутствии порообразующих растворителей:

додеканол, циклогексанол, толуол (объёмное соотношение мономеры : порогены = 40:60, [додеканол]:[циклогексанол]:[толуол]= 6:2.5:1.5) и концентрации инициатора масс. % ДИНИЗ в колонке, заполненной полимеризационной смесью, погружённой в водный термостат при 70 °С в течение 8 ч. После завершения полимеризации полученный сорбент промывали последовательно этанолом, смесью этанол:вода (1:1) и водой.

Значения проницаемости, пористости и среднего размера пор рассчитывали по методике [169]. Средний размер пор полученных сорбентов составлял 1.9 мкм, проницаемость – 0.46·1013 м2, общая пористость – 43 %.

2.3.9.2 Окисление ПМАГ и сополимера МАГ-ХМАК 0.1 г (0.0004 моль) ПМАГ растворяли в 16 мл дистиллированной воды, полученный раствор охлаждали до 4 °С и добавляли при сильном перемешивании мета-периодат натрия. Мольное соотношение [МАГ]:[NaIO4] = 0.5. Реакцию проводили в течение 24 ч в темноте при 4 °С, затем продукт очищали диализом против воды и лиофильно высушивали. Периодатное окисление сополимера МАГХМАК проводили аналогичным способом. Количество введенных в полимеры альдегидных групп определяли с использованием высокочувствительного реагента Шиффа (фуксисернистая кислота) и ацетальдегида в качестве стандарта.

альдегидсодержащего соединения объемом 0.5 мл добавляли 2.5 мл реагента Шиффа и через 40 мин измеряли интенсивность поглощения окрашенного комплекса при длине волны = 550 нм. Полученные полимеры ок.-ПМАГ и сополимер МАГ-ХМАК (ок.-МАГ-ХМАК) содержали по 28 мол. % окисленных звеньев МАГ, т.е. 56 мол. % групп СНО.

2.3.9.3 Иммобилизация окисленных полимеров на монолитные колонки Для ковалентного присоединения окисленных сополимеров к монолитной матрице сначала проводили аминирование сорбента обработкой колонки 25 % водным раствором аммиака с целью введения первичных аминогрупп. Колонку выдерживали 5 ч при 40 °C, затем промывали последовательно дистиллированной водой, 2 М раствором NaCl, снова большим объёмом воды и, наконец, 0.01 M натрийфосфатным буфером, рН 7.0.

Далее через колонку пропускали 1.5 мл раствора ок.-МАГ-ХМАК (или ок.-ПМАГ в качестве сравнения) в 0.01 M натрий-фосфатном буфере, рН 7.0, с концентрацией 2.5 мг/мл. Иммобилизацию проводили в течение 2 ч при 35 °C. После завершения реакции колонку промывали вышеуказанным буфером и дистиллированной водой.

Восстановление образовавшихся иминных связей осуществляли обработкой колонки водным раствором боргидрида натрия (концентрация 2 мг/мл) в течение 1 ч при °C. Затем колонку промывали дистиллированной водой. Количество иммобилизованого (со)полимера определяли по разности концентраций альдегидных групп в исходном растворе и промывных фракциях, вычисленных с помощью реакции с реагентом Шиффа.

2.3.9.4 Исследование адсорбции литиевой соли моносукцината холестерина Исследование адсорбции литиевой соли моносукцината холестерина с концентрацией 0.06 – 2.40 мг/мл и объёмом 0.1-2.0 мл проводили в динамических условиях при использовании 0.01 М натрий-фосфатного буферного раствора, рН 7.4.

Все растворы предварительно фильтровали через фильтр Millipore Iso Disk с размером пор 0.2 m.

Изучение адсорбционных свойств сорбентов проводили с помощью хроматографической системы низкого давления, состоящей из перистальтического насоса Pharmacia Pump P-1, УФ-детектора LKB Uvicord 2238 SII LKB (Bromma, Sweden) с установленным фильром = 206 нм и самописца Pharmacia.

Количество адсорбированной на колонке МСХ-Li определяли по разности ее концентраций в исходном растворе и промывных фракциях с помощью реагента Златкиса-Зака.

Определение концентрации холестерина в растворах осуществляли следующим образом: к 2.5 мл реагента Златкиса-Зака медленно добавляли 0.2 мл анализируемой пробы и через 15 мин измеряли поглощение окрашенного комплекса при длине волны = 563 нм. В качестве раствора сравнения для построения калибровочной зависимости использовали водный раствор МСХ-Li.

ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

гидрофобных биологически активных веществ разрабатывали методы синтеза гидрофильных полимеров, несущих высокореакционноспособные функциональные группы или лиганды, выступающие в роли «хозяина» и обеспечивающие нековалентное связывание гидрофобных БАВ.

Данный раздел посвящен синтезу водорастворимых полимеров-носителей, содержащих карбоксильные или активированные сложноэфирные группы, варьируемого состава и молекулярных масс, исследованию процесса сополимеризации 2-деокси-2-метакриламидо-D-глюкозы (МАГ) с акриловой и метакриловой кислотами.

3.1.1 Сополимеризация МАГ с акриловой и метакриловой кислотами Сополимеры МАГ с акриловой (АК) и метакриловой (МАК) кислотой получали методом свободнорадикальной сополимеризации (Рисунок Образование сополимеров подтверждали методами ИК и ЯМР спектроскопии.

R = H, CH Рисунок 17 – Схема синтеза сополимеров МАГ с акриловой и метакриловой кислотами методом радикальной сополимеризации.

На Рисунке 18 представлены ИК спектры гомополимера МАГ (ПМАГ) и сополимеров МАГ-АК и МАГ-МАК, содержащих 40 мол. % карбоксильных групп.

Видно, что в спектрах сополимеров наблюдается появление полосы валентных колебаний карбоксильной группы при 1703 см1 (для МАК) и 1710 см1 (для АК), а также для сополимера МАГ-МАК – характерной полосы колебаний для СН3 группы звена МАК при 2990 см1.

Рисунок 18 – ИК-спектры ПМАГ (1), а также сополимеров МАГ-АК (2) и МАГ-МАК (3), содержащих 40 мол. % звеньев кислоты.

На Рисунке 19 приведены 1Н ЯМР спектры гомополимеров МАГ, АК и МАК, а также сополимеров МАГ-АК и МАГ-МАК (см. Рисунок 17) в D2O (60 °С).

Рисунок 19 – 1Н ЯМР спектры в D2O (60 °С) ПАК (1), ПМАГ (3), и ПМАК (5), а также сополимеров МАГ-АК (2) и МАГ-МАК (4), содержащих 40 мол. % звеньев кислоты.

В спектре сополимеров наблюдаются сигналы, характерные как для звеньев МАГ, так и для звеньев кислоты. При этом форма сигналов протонов гликозильного кольца МАГ (3.33.9 м.д., 4.65.2 м.д.) изменяется, что, по-видимому, связано с различием в микроокружении звеньев МАГ в гомополимере и сополимерах (Рисунок 19, ср. 2, 3 и 4). Сигналы протонов (0.92.4 м.д.) при атомах углерода основной цепи звеньев МАГ и кислот, а также сигналы метильных групп МАГ и МАК перекрываются.

Условия синтеза и характеристики сополимеров МАГ с непредельными кислотами, полученных за 24 ч при использовании различных концентраций мономеров и инициатора в исходной смеси, представлены в Таблице 4.

При всех используемых соотношениях мономеров при сополимеризации МАГ с обеими кислотами выходы сополимеров составляют 90-95 %. Как можно видеть из данных Таблицы 4, изменение концентрации мономеров и инициатора позволяет варьировать значения характеристической вязкости полученных полимеров (Таблица 4, № 1 и 3, 4 и 5, 7 и 8, 25 и 26). Оценку значений молекулярных масс (ММ) сополимеров, содержащих менее 20 мол. % звеньев кислоты, проводили по уравнению Марка-Куна-Хаувинка, найденному для гомополимера МАГ в работе [63].

сказывается на характеристиках образующихся сополимеров (Таблица 4, № 1 и 2), а проведение сополимеризации в водном растворе приводит к повышению значений вязкости [] и молекулярных масс (ММ) сополимера (Таблица 4, № 19 и 20).

Pages: |

| 2 | 3 |

Главная >> Диссертации - все темы

[ СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТА .pdf ]

Похожие работы:

«Раджкумар Денсинг Самуэл Радж ФАРМАКОТЕРАПИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ОСТЕОПОРОЗА И НАРУШЕНИЙ КОНСОЛИДАЦИИ ПЕРЕЛОМОВ НА ЕГО ФОНЕ L-АРГИНИНОМ И ЕГО КОМБИНАЦИЯМИ С ЭНАЛАПРИЛОМ И ЛОЗАРТАНОМ 14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология Диссертация на соискание ученой степени кандидата...»

«ОБОСНОВАНИЕ СОВРЕМЕННЫХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ПАЦИЕНТОВ С АСИММЕТРИЕЙ ЗУБНЫХ ДУГ ОБУСЛОВЛЕННОЙ ОДНОСТОРОННИМ ОТСУТСТВИЕМ ПРЕМОЛЯРА 14.01.14 стоматология Иванова Ольга Павловна Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель : доктор...»

«Мизандронцева Марина Вячеславовна УПРАВЛЕНИЕ РАЗВИТИЕМ ПОЛИКОММУНИКАТИВНОЙ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ 13.00.01 – общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени...»

«Едранов Сергей Сергеевич АПОПТОЗ И ОКСИД АЗОТА В РЕГЕНЕРАЦИИ ТРАВМИРОВАИНОИ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ВЕРХНЕЧЕЛЮСТНОГО СИНУСА 03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант доктор медицинских наук,...»

«vy vy из ФОНДОВ РОССИЙСКОЙ ГОСУДАРСТВЕННОЙ БИБЛИОТЕКИ Волошин, Юрий Константинович 1. Обшз>1Й американский с л е н г 1.1. Российская государственная библиотека diss.rsl.ru 2005 Волошин, Юрий Константинович Общий американский сленг [Электронный ресурс]: Дис.. д-ра филол. наук : 10.02.19 - М.: РГБ, 2005 (Из фондов Российской Государственной Библиотеки) Общее языкознание, социолингвистика, психолингвистика Полный текст: littp://diss.rsl.ru/diss/02/0004/020004001.pdf Текст воспроизводится по...»

«ВАВИЛОВА Татьяна Александровна НЕПСИХОТИЧЕСКИЕ ПСИХИЧЕСКИЕ РАССТРОЙСТВА У ПОДРОСТКОВ С КОМОРБИДНОЙ ХРОНИЧЕСКОЙ СОМАТИЧЕСКОЙ ПАТОЛОГИЕЙ Специальность 14.01.06 – психиатрия Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель : доктор медицинских наук Макаров Игорь Владимирович Санкт-Петербург...»

«РАДЬКО Сергей Иванович РАЗРАБОТКА И ИССЛЕДОВАНИЕ ЭЛЕКТРОТЕХНОЛОГИЧЕСКОГО ОБОРУДОВАНИЯ ДЛЯ ПЕРЕРАБОТКИ ТЕХНОГЕННЫХ ОТХОДОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПАРОВОДЯНОГО ПЛАЗМОТРОНА Специальность: 05.09.10 – Электротехнология Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук Научный руководитель – доктор технических наук,...»

«Боташова Асият Казиевна ПОЛИТИЧЕСКИЙ ТЕРРОРИЗМ: ДЕТЕРМИНАЦИЯ И ФОРМЫ ПРОЯВЛЕНИЯ Специальность 23.00.02 - Политические институты, этнополитическая конфликтология, национальные и политические процессы и технологии Диссертация на соискание ученой степени кандидата политических наук Научный руководитель : доктор философских наук, профессор Н.П.Медведев Ставрополь - 2004 СОДЕРЖАНИЕ...»

«Попов Евгений Николаевич Исследование поляризационных свойств систем квантовой оптики при вырождении энергетических уровней 01.04.21 Лазерная физика Диссертация на соискание учёной степени кандидата физико-математических наук Научный руководитель : Решетов Владимир Александрович, доктор физико-математических наук, доцент. Саратов...»

«УРМАНЦЕВ МАРАТ ФАЯЗОВИЧ ВЫБОР ТАКТИКИ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ МЫШЕЧНОНЕИНВАЗИВНЫМ РАКОМ МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ ПРОМЕЖУТОЧНОГО РИСКА 14.01.23 - урология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель : доктор медицинских наук, профессор В.Н. Павлов Саратов – ОГЛАВЛЕНИЕ...»

«Колосовская Юлия Евгеньевна ОСНОВЫ СОЗДАНИЯ ПЛАНТАЦИЙ СОСНЫ КЕДРОВОЙ СИБИРСКОЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СЕМЕННОГО И ВЕГЕТАТИВНОГО ПОТОМСТВА (ЮГ КРАСНОЯРСКОГО КРАЯ) 06.03.01 – Лесные культуры, селекция, семеноводство Диссертация на соискание учёной степени кандидата...»

«УДК 591.15:575.17-576.3 04200952266 БЛЕХМАН Алла Вениаминовна ВНУТРИПОПУЛЯЦИОННАЯ И ГЕОГРАФИЧЕСКАЯ ИЗМЕНЧИВОСТЬ ШИРОКОАРЕАЛЬНОГО ВИДА HARMONIA AXYRIDIS PALL. ПО КОМПЛЕКСУ ПОЛИМОРФНЫХ ПРИЗНАКОВ 03.00.15 - генетика Диссертация на соискание ученой степени V кандидата биологических наук Научные руководители: доктор...»

«РОДИНА НАТАЛИЯ ВЛАДИМИРОВНА УДК: 159.922 – 057.175 36 ИНДИВИДУАЛЬНО-ЛИЧНОСТНЫЕ ОСОБЕННОСТИ МЕНЕДЖЕРОВ СРЕДНЕГО ЗВЕНА В КРИЗИСНЫХ СИТУАЦИЯХ: ПСИХОДИНАМИЧЕСКИЙ ПОДХОД 19.00.01 – Общая психология, история психологии Диссертация на соискание ученой степени кандидата психологических наук Научный руководитель : Белявский Илья Григорьевич доктор психологических наук, профессор Одесса - СОДЕРЖАНИЕ...»

«Махлаев Александр Викторович Метаморфозы русского национального сознания в условиях острого политического кризиса Специальность 23.00.02 – Политические институты, этнополитическая конфликтология, национальные и политические процессы и технологии Диссертация на соискание ученой степени кандидата политических наук Научный руководитель – кандидат исторических наук, доцент М.Ф. Цветаева Москва 2006 -2Оглавление. стр. Введение.....»

«УДК 620.179.16 Ткаченко Андрей Акимович Развитие методов, разработка оборудования и технологии ультразвукового контроля электросварных труб в процессе производства Специальность 05.11.13 - Приборы и методы контроля природной среды, веществ, материалов и изделий Диссертация на соискание учёной степени доктора технических наук Научный консультант : доктор технических наук, профессор Бобров В.Т. Москва - 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ Список сокращений и основных обозначений Введение Глава 1....»

«УДК: 616.379-008.64-577.17.049.053.5 БАДАЛОВА СИТОРА ИЛЬХОМОВНА СОДЕРЖАНИЕ ЭССЕНЦИАЛЬНЫХ МИКРОЭЛЕМЕНТОВ У ДЕТЕЙ И ПОДРОСТКОВ, БОЛЬНЫХ САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ 1ТИПА И ОЦЕНКА ИХ ФИЗИЧЕСКОГО РАЗВИТИЯ 5А 510102 - Эндокринология Магистерская диссертация на соискание академической степени магистра Научный руководитель Доктор медицинских наук, профессор ХАМРАЕВ Х.Т. Самарканд ОГЛАВЛЕНИЕ...»

«Бондаренко Валентина Евгеньевна ОСНОВАНИЕ УГОЛОВНО-ПРАВОВОЙ ОХРАНЫ И ЕЕ ПРЕКРАЩЕНИЕ 12.00.08 - уголовное право и криминология; уголовно-исполнительное право Диссертация на соискание ученой степени кандидата юридических наук Научный руководитель : доктор юридических наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ Разгильдиев...»

«Файзлиев Алексей Раисович МАТЕМАТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ И МОДЕЛИ АНАЛИЗА ПРОСТРАНСТВЕННОЙ СТРУКТУРЫ СИСТЕМЫ ГОРОДСКОЙ ТОРГОВЛИ Специальность 08.00.13 — Математические и инструментальные методы экономики Диссертация на соискание ученой степени кандидата экономических наук Научный руководитель доктор физико-математических наук, профессор Гусятников Виктор Николаевич Волгоград 2014 Оглавление Введение.. Глава I. Методы...»

«ГРЕБЕНКИНА ОЛЬГА СЕМЕНОВНА КОММУНИКАТИВНО-ПРАГМАТИЧЕСКАЯ ИНТЕРПРЕТАЦИЯ МНОГОЗНАЧНОГО ВЫСКАЗЫВАНИЯ С ПОЗИЦИЙ КОНТРАДИКТНО-СИНЕРГЕТИЧЕСКОГО ПОДХОДА Специальность 10.02.19 - теория языка ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата филологических наук Научный руководитель : доктор филологических наук, профессор Н.Л.Мышкина ПЕРМЬ - СОДЕРЖАНИЕ Введение Глава 1. Теоретические основы исследования полисемантов в языке и...»

«Боранукова Назират Олиевна Педагогические условия творческого саморазвития обучающихся в образовательной среде профессионального лицея 13.00.01 – общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научный руководитель – доктор педагогических наук, профессор Л.Н. Кубашичева МАЙКОП 2014 2 Содержание Введение.. Глава 1. Теоретические основы творческого...»

наверх

<< ГЛАВНАЯ | КОНТАКТЫ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА (Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

«ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ВОДОРАСТВОРИМЫЕ ПОЛИМЕРЫ-НОСИТЕЛИ ГИДРОФОБНЫХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ...»

НАУКИ ИНСТИТУТ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ СОЕДИНЕНИЙ

РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК

ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ВОДОРАСТВОРИМЫЕ ПОЛИМЕРЫ-НОСИТЕЛИ

ГИДРОФОБНЫХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

ДИССЕРТАЦИЯ

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 2 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)