«РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ФАРМАКОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ КОМПОЗИТНЫХ ГЕЛЕЙ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ГИПЕРТРОФИЧЕСКИХ И КЕЛОИДНЫХ РУБЦОВ ...»

Межклеточные взаимодействия в период формирования грануляционной ткани помимо оксида азота и СЭФР обеспечиваются также различными сосудосуживающими агентами, оказывающими локальное действие, в частности эндотелином-1. При этом между данными вазоактивными веществами установлена метаболическая взаимосвязь: СЭФР активирует эндотелинпревращающий фермент и приводит к экспрессии эндотелиновой системы в условиях образования неоинтимы [90]. Эндотелин является одним из основных контрагентов NO и обладает мощными вазоконстрикторными и митогенными свойствами. В физиологических концентрациях он действует на эндотелиальные рецепторы, вызывая высвобождение факторов релаксации, а в более высоких – активирует рецепторы гладкомышечных клеток, вызывая их стойкую вазоконстрикцию и пролиферацию медии [90]. Считается, что повышенный уровень эндотелина связан с повреждением эндотелиоцитов и может считаться маркером эндотелиальной дисфункции [79]. Стоит отметить, что увеличение продукции эндотелина может происходить не только под влиянием СЭФР, но и под действием тромбина и цитокинов [65, 79]. «Порочный круг», о котором говорилось несколько выше, расширяется и замыкается на сосудистом эндотелии.

Что касается методов терапии, то на данном этапе развития медицины недостаточно эффективных методов профилактики появления патологических рубцов. Современные стратегии коррекции этого заболевания строятся на рациональном сочетании оперативных и консервативных вмешательств [56, 129, 158]. Широкую популярность приобрели физические и физиотерапевтические методы (использование окклюзивных повязок, компрессионной и лазерной терапии, криохирургии, электрофореза и т.д.), лучевая терапия с целью предотвращения рецидива, а также косметические процедуры, направленные на внешнюю коррекцию дефекта и не несущие какой-либо терапевтической цели (пилинг, мезотерапия, дермабразия) [106, 133, 141].

Учитывая тот факт, что хирургическое лечение келоидных рубцов (наиболее сложного варианта развития патологического рубцевания) в 50% -100% случаев приводит к еще более тяжелым рецидивам, особую роль приобретают методы их фармакологической коррекции [120, 127, 128].

Современный арсенал лекарственных средств, которые используются в терапии патологических рубцов, представлен препаратами различных фармакологических групп, воздействующих на конкретные звенья патогенеза рубцовой ткани [92, 150, 153].

Так, основой терапии на данный момент остается внутрирубцовое введение кортикостероидов, тормозящих синтез медиаторов воспаления и пролиферацию фибробластов, что уменьшает образование глюкозаминогликанов и коллагена в процессе заживления ран [122]. Наиболее частое применение находят гидрокортизон и его аналоги в виде инъекций, также широко используют топические кортикостероидные средства, которые наносятся ежедневно непосредственно на образование. В литературных источниках появились данные об эффективном клиническом применении кортикостероида - бетаметазона дипропионата: инъекций дипроспана и мази «Белосалик», наносимой под окклюзионную повязку [56].

Для лечения патологических рубцов кожи в настоящее время также активно рубцовоизмененных тканях с последующим восстановлением нормального состава и структуры внеклеточного матрикса. Классическим средством остаются препараты протеолитического фермента гиалуронидазы: «Лидаза» и «Ронидаза», а также новые: «Лонгидаза» (гиалуронидаза с полиоксидонием) и «Ферменкол»

[52, 54, 85].

За последние десятилетия было опубликовано большое число работ, показывающих положительное влияние препаратов силикона на состояние рубцов [136].

образование рубцов за счет равномерного давления, уменьшающего объем внеклеточного матрикса, способствуют параллельному расположению коллагеновых волокон [128, 130]. Доказана целесообразность использования для лечения и профилактики рубцов силиконовых гелей - препаратов «Дерматикс» и «Кело-кот» [51]. После высыхания они образуют тончайшее покрытие на поверхности кожи, которое защищает рубец от механических повреждений и испарения влаги, тем самым восстанавливая водный баланс в эпидермисе, дальнейшему разрастанию соединительной ткани [172]. Среди относительно новых препаратов на основе силиконового геля следует отметить самоклеящийся противорубцовый пластырь «СИКА-КЕА» [9].

использования в терапии келоидных рубцов препаратов из группы цитостатиков фторурацила и блеомицина [56, 129]. Данный метод предложен в качестве альтернативы инъекциям стероидов в плохо поддающихся лечению случаях и эффективность монотерапии келоидов 5-фторурацилом (антиметаболитом, угнетающим размножение фибробластов), показано преимущество использования комбинированным применением глюкокортикостероидов и криотерапии [130].

Блокатор кальциевых каналов (верапамил), вводимый в область рубца, по результатам трех клинических испытаний оказался перспективным средством для предупреждения рецидива после иссечения келоида. Ковалевский А.А. с соавторами (2008 г.) показали эффективность применения фонофореза с верапамиловой мазью для профилактики и лечения гипертрофических и келоидных рубцов у больных с ожоговой травмой. Механизм действия верапамила объясняют угнетением кальций-зависимых процессов, участвующих в синтезе внеклеточного матрикса, а также усилением его деградации (увеличение продукции коллагеназ) [55, 87, 132, 137].

В качестве средств симптоматической терапии, устраняющих зуд и жжение в области келоида, и с целью моделирования размера рубца предложено использование антигистаминных средств (блокаторов H1-гистаминовых рецепторов), что основано на том, что гистамин стимулирует синтез коллагена, способствуя образованию келоида [146].

патологических рубцов следует также отметить применение препаратов цитокинов. По современным представлениям, цитокин TGF-бета (transforming growth factor-бета) является одним из ведущих факторов роста в патогенезе келоидных образований [125]. TGF-бета1 и TGF-бета2 способствуют развитию патологии, а TGF-бета3, напротив, способствует физиологическому заживлению ран, что дает предпосылки к возможному использованию ингибиторов TGF-бета и TGF-бета2 и индукторов TGF-бета3 в терапии рубцов [125]. В частности, были опубликованы результаты клинических испытаний внутрикожного введения препарата «Авотермин» (рекомбинантный человеческий TGF-бета3), которые патологического рубцевания [157].

Особое внимание следует уделить еще одному новому и весьма перспективному методу лечения келоидных рубцов - терапии интерферонами, которые известны и антипролиферативными свойствами [101, 128, 148, 151].

Установлено, что интерферон-альфа2b уменьшает синтез коллагена типов и, основных структурных компонентов келоидной ткани. Согласно литературным данным, систематические инъекции интерферон-альфа2b намного эффективнее инъекций кортикостероидов [123, 150].

В качестве экспериментального метода лечения предложено использование витамина А и его производных (ретиноидов) путем нанесения на поверхность кожи или внутрикожных инъекций [145, 151, 157]. Ретиноиды ускоряют заживление ран, вызывают регрессию патологической рубцовой ткани, повышают пролиферацию клеток эпидермиса и угнетают пролиферацию фибробластов и отложение коллагена. Так, была показана достоверная эффективность третиноина в виде 0,05%-ного крема при лечении келоидных и гипертрофических рубцов в двойном слепом плацебо-контролируемом клиническом испытании [157].

Для нормализации процесса заживления раны возможным является применение антиоксидантов - веществ, действие которых направлено на нормализацию процессов перекисного окисления липидов, уменьшение окислительного стресса, улучшение микроциркуляции и восстановление функции эндотелия [112].

Так, была установлена эффективность местного применения витамина Е для профилактики образования келоида, а также улучшения косметических результатов после операции у детей в проспективном контролируемом исследовании: ни у одного пациента опытной группы не сформировался келоид, 96% пациентов отмечали заметный косметический эффект [117].

растительные полифенолы - флавоноиды, оксикоричные кислоты, дубильные вещества [115, 116, 162].

Некоторыми авторами отмечено, что кверцетин и кемпферол, вещества, входящие в экстракт репчатого лука, угнетают продукцию коллагена и фибронектина за счет ингибирования экспрессии 2, 3 и 4 SMAD-генов, участвующих в реализации сигналов фактора роста TGF-бета, тем самым воздействуя на патогенез рубцов [147, 160].

используемого для удаления неглубоких дефектов кожного покрова как в монотерапии, так и в сочетании с физиотерапевтическими процедурами, благодаря своим эндотелиопротекторным свойствам [16, 163]. Аналогичное компонентами которого являются сок листьев алоэ вера и экстракт лука (Cepalin) [164].

используется также препарат схожего состава и типа действия - крем «Цикатрикс» Cicatrix. Активные вещества, экстракты Centella asiatica 1,0%, и Pinus silvestris 0,5%, содержащие флавоноиды, снижают воспалительную реакцию, уменьшая высвобождения провоспалительных веществ, подавляя гиперпролиферацию кератиноцитов, способствуют восстановлению связей между эпидермисом и дермой, участвуя в реорганизации внеклеточного матрикса [38, 94].

Исследования показали эффективность противорубцовой терапии геля эпигаллокатехин-3-галлат значительно улучшает качество заживления ран и экспериментах на животных (крысы), благодаря способности подавлять продукцию коллагена. Применение геля у больных, склонных к образованию гипертрофических и келоидных рубцов, позволило обеспечить нормальный вид рубца, ускорить исчезновение гиперемии и зуда [114].

«Траумель С», содержащей эссенции фитокомпонентов (календулы, гамамелиса, арники, тысячелистника, окопника и т.д.) в качестве дополнения к основному лечению келоидных рубцов. Исследования in vitro на первичных культурах дермальных фибробластов человека показали, что в присутствии препарата «Траумель С» нормализуется образование коллагена и восстанавливается функционирование внеклеточного матрикса [32, 107].

Таким образом, использование средств, содержащих в своем составе фитоэкстракты, в которых основными биологически активными веществами (БАВ) являются флавоноиды, в том числе топических препаратов на гидрогелевой основе, является важной составляющей лечения келоидов [17].

1.3 Ассортимент средств, используемых для лечения и профилактики профилактики рубцов, представленные на фармацевтическом рынке РФ, а также косметические средства аналогичной направленности действия [48, 63, 85, 89].

Номенклатура и состав противорубцовых средств приведены в таблице 1.

Таблица 1 – Номенклатура противорубцовых средств постакне» гель (Швейцария) ниацинамид, сорбет-30, PEG- угрей «ZERADERM» Рофил Медикал Полисилоксан, витамин Е, Для профилактики и Жидкий крем США, Скаргард Гидрокортизон, силикон и Рубцы, растяжки, Анализируя данные таблицы 1, следует отметить отсутствие отечественных средств, в составах противорубцовых средств представлены основные группы БАВ, традиционно используемые для лечения этого дефекта: полисилоксаны, гепарин, флавоноиды, кортикостероиды, витамин Е. Большая часть препаратов представляет собой комбинированные составы компонентов различной направленности действия.

фибринолитическое, противовоспалительное (экстракт лука), антитромботическое (гепарин) и кератолитическое действие (аллантоин). Похожий состав и механизм действия имеет препарат «Медерма», отличающийся тем, что в состав входит не гепарин, а экстракт алоэ вера [63, 85, 162, 170].

Крем «Келофибраза» также имеет комплексный состав - содержит мочевину, гепаринат натрия, камфору. Мочевина является регулятором влажности кожи, смягчает и увлажняет огрубевшую кожу рубца, повышает ее эластичность. Гепарин оказывает антитромботическое и противовоспалительное воздействие, ускоряет процессы рассасывания, уменьшает отечность тканей. Dкамфора оказывает анальгезирующее и противовоспалительное действие, способствует расширению кровеносных сосудов и улучшению трофики тканей рубца [89, 165].

Состав крема «МЭБО от рубцов» (MEBO Scar Ointment), входит оригинальный компонент - Cell Control Component (ССС), а также масло кунжута, пчелиный воск, экстракт кактуса. Основное действие, как заявлено, оказывает специальный запатентованный компонент CCC, регулирующий нормальное соотношение эпидермальных клеток и фиброцитов, соотношение I-III-IVколлагена, предотвращающий образование рубцов и способствующий их уменьшению [48, 51].

Гели косметические «Хирускар» и «Хирускар постакне» рекомендуется для профилактики возникновения грубых рубцов после травм и операций, угревой сыпи. Действие основано на сочетании ингредиентов – мукополисахаридов, алоэ вера, витамина Е и витамина В3 [49].

«Дерматикс» гель на основе композиции полисилоксанов и оксида кремния способствует поддержанию равномерной увлажненности кожи, улучшая внешний вид рубцов, обладает способностью сглаживать и смягчать выступающие рубцы, облегчает зуд и ощущение дискомфорта, уменьшать нарушение пигментации кожи на месте рубцов.

«Kelo-cote» (Кело-кот) гель и спрей, косметический жидкий крем «ScarGuard» и кремы «Zeraderm» (Зерадерм) и «Zeraderm ультра» (Зерадерм ультра) имеют в своем составе схожие комбинации действующих веществ (производных кремния) и аналогичный механизм действия [51, 89].

Состав «Зерадерм ультра» дополнен витамином Е, обеспечивающий устранение эритемы и восстанавливающим микроциркуляцию в капиллярах, коэнзимом Q10, способствующий регенерации клеток кожи, витамином К, уменьшающий существующую эритему рубцов.

Анализ патентной литературы показал наличие незначительного количества средств для профилактики и коррекции рубцов преимущественно в виде наружных лекарственных средств – эмульсий, мазей, гелей [72, 75].

Для лечения ран, в том числе и рубцов, запатентована композиция кальцитриола и клобетазол-17-пропионата в виде обратной эмульсии [71].

Для профилактики и лечения келоидных рубцов запатентовано средство, в состав которого входят касторовое масло, пергидроль, 25%-ный аммиак водный, глицерин, этиловый спирт, вода дистиллированная [75].

Имеются данные о средстве для профилактики и лечения гипертрофических и келоидных рубцов, образующихся после ожогов, дермабразии и операций в пластической хирургии. Средство включает коллализин (коллагеназа), оливковое и касторовое масло, глицерин, стеарин, ланолин, эмульсионные воски и др.

вспомогательные вещества[74].

Формы выпуска противорубцовых средств – гели, мази, спреи, растворы, из которых большую часть составляют гели на основе полисилоксанов, а также ксантана, поливинилового спирта и карбопола. Кремы представлены эмульсионными составами типа масло/вода и вода/масло (табл. 1).

В качестве консервантов в составе противорубцовых средств используются парабены, сорбиновая кислота, сорбит натрия, кватерниум-73, производные формалина.

Особый интерес в составе противорубцовых препаратов представляют пенетраторы – пропиленгликоли и полиэтиленоксиды. Их наличие в составе гелей обеспечивает проникновение действующих компонентов препарата (например, компонентов «Контрактубекса»).

1.4 Циклоферон. Препараты, фармакологическое действие, применение «Циклоферон» (СYCLOFERON) - препарат, активное вещество -меглумина акридонацетат в пересчете на акридонуксусную кислоту [85, 103].

иммуномодулирующий препарат. Индуктор синтеза интерферона.

Фармакологическое действие - иммуномодулирующее, противовоспалительное, противовирусное. Обладает широким спектром биологической активности (противовирусной, иммунокорригирующей, противовоспалительной) [85].

Препарат повышает биосинтез функционально полноценных антител, способствующих более эффективной терапии, нормализует показатели клеточного иммунитета. Противовоспалительная активность циклоферона обеспечивается за счет усиления функциональной активности нейтрофилов, активации фагоцитоза.

«Циклоферон» эффективен в отношении вируса герпеса, ЦМВ, ВИЧ, вируса папилломы и других вирусов (препятствует репродукции, подавляет размножение вирусов) [57, 89].

Интерес представляет наружная лекарственная форма «Циклоферона линимент 5%». Помимо циклоферона в линимент входят вспомогательные вещества: основа - пропиленгиколь Е 1520, активный пенетратор, компонент с противомикробными свойствами, консервант - бензалкония хлорид, эффективный в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий, спор и грибов [85].

В основе механизма действия «Циклоферона линимента 5%» лежит стимуляция эпителиальных клеток и лимфоидных элементов слизистой оболочки, продуцирующих интерферон в ответ на действие препарата [89, 103].

Общими показаниями к применению препарата являются - комплексная терапия герпетической инфекции кожи и слизистых оболочек, уретритов и баланопоститов неспецифической и специфической этиологии, неспецифических вагинитов и вагинозов, хронических пародонтитов [85, 89].

Эффективность препарата доказана клиническими исследованиями, позволившими дать подробные рекомендации по его использованию в медицинской практике.

Так, по данным исследований, применение «Циклоферона линимента 5%»

у больных хроническим пародонтитом позволило добиться клинической эффективности в 87,8% случаев. «Циклоферона линимент 5%» также был рекомендован для включения в терапию животных с хроническим пародонтитом, гингивостоматитом в качестве этиопатогенетического средства в виде аппликаций на десну [6, 103].

Эффективность линимента при хроническом пародонтите обусловлена подавлением патогенных микроорганизмов, усилением синтеза иммуноглобулина в жидкости зубодесневых карманов, что приводит к улучшению гигиенического состояния полости рта, к уменьшению подвижности зубов, гиперемии и кровоточивости десен. Эффективность «Циклоферона линимента 5%» при пародонтите обусловлена и повышением микроциркуляции, улучшением кровоснабжения десны [37, 103].

Эффективность препарата циклоферон при наружном применении при простом герпесе также подтверждена клиническими испытаниями:

эффективность при простом герпесе «Циклоферона линимента 5%» и крема «Виролекс» сопоставима, а субъективные симптомы (боль, зуд, жжение) и признаки воспаления менее выражены при лечении линиментом «Циклоферона».

Результаты местного применения «Циклоферона линимента 5%» для лечения простого герпеса показали сокращение времени везикуляции и в терапии простого герпеса «Циклоферона линимент 5%» по клинической эффективности превосходит «Ацикловира мазь 5%» [42, 57].

Местная терапия опоясывающего герпеса «Циклоферона линиментом 5%»

сопровождается достоверным укорочением лихорадочного периода и общеинфекционного синдрома, уменьшением осложнений, что снижает вероятность присоединения вторичных инфекций [46].

противогерпетической активностью, обусловленной прямым противовирусным, иммунологическим действиями циклоферона, антисептическим действием консерванта, антиэкссудативным действием основы пропиленгликоля, Данные исследования применения линимента циклоферона в комплексном лечении больных с очаговой формой гнездной алопеции показали, что выздоровление или улучшение отмечалось у 70,4% пациентов. Отмечена положительная тенденция прекращения выпадения волос, активация их роста [82].

Значительная эффективность использования линимента циклоферона в комплексной терапии акне показана проведенными наблюдениями, что дало возможность рекомендовать этот препарат для лечения пустулезной формы вульгарных угрей, а так же для профилактики рецидива заболевания [7].

Помимо выпускаемого ООО «НТФФ «ПОЛИСАН»» «Циклоферона линимента 5%» субстанция «Циклоферона» входит в состав запатентованной фармацевтической композиции местного применения для лечения гнойнодеструктивных поражений слизистой и кожи, а также общесистемных заболеваний при иммунодефицитных состояниях. Композиция содержит помимо циклоферона целевую добавку (иммуномодулятор, витамин, антибактериальный компонент, антимикотик, анестетик, стимулятор репаративных процессов, биогенный элемент, или их смесь) и основу [67].

1.5 Масло шиповника. Использование в медицине и косметологии Масло шиповника (Oleum Rosae) – масло, получаемое из семян шиповника экстракцией органическим растворителем. В состав масла шиповника входят насыщенные и ненасыщенные жирные кислоты, каротиноиды, токоферолы [56, 81, 85].

Масло шиповника обладает дермапротективным действием за счет содержания ненасыщенных жирных кислот, вследствие этого ускоряет репарацию кератиноцитов, сокращая сроки восстановления кожного покрова. Благодаря комплексу жирных кислот и витамина Е масло шиповника регулирует метаболические процессы, а благодаря наличию каротиноидов обладает репаративным и антиоксидантным действием [64, 105].

Масло шиповника используется для внутреннего и наружного применения [85], показано для лечения экземы, псориаза, нейродермита, применяется при проблемах кожи, вызванных рентгенотерапией, ожогах, обморожениях, при гингивитах, стоматитах, при трещинах сосков, пролежнях, трофических язвах.

Применяется масло шиповника и как противорубцовое средство при всех типах рубцов: гипертрофических, гиперхромных, келоидных [4, 40].

Масло шиповника широко используется в косметологии в качестве регенерирующего, разглаживающего морщины средства. Особенно рекомендуется для раздраженной, шелушащейся, сухой и стареющей кожи [61].

Масло шиповника улучшает цвет и эластичность кожи, замедляет процессы старения, делает менее заметными пигментные пятна и растяжки. В косметологии масло шиповника также используется для уменьшения шрамов и рубцов [64].

Российской промышленностью выпускаются питательные косметические крема, в состав которых входит масло шиповника: «Natura Siberica» (бальзамы, шампуни для сухих, ослабленных волос, зимний крем для рук), «Cosmedica»

(крем ночной для сухой и нормальной кожи), «Чистая линия» (крем для сухой и чувствительной кожи), «Сто рецептов красоты» (бальзам для губ). Масло шиповника входит в состав кремов для проблемной кожи подростков.

Используется для обогащения кремов и базовых масел в домашних условиях [15, 64].

Исследования на самках белых крыс показали, что экстракционное масло шиповника достоверно снижает площадь раневой ожоговой поверхности.

Изучение активности экстракта масла шиповника при экспериментальном термическом ожоге крыс показало, что масло шиповника стимулирует процессы пролиферации и репарации. По результатам исследования масло шиповника снижало отек по сравнению с контролем [37].

Результаты исследования противовоспалительной активности масла шиповника при нанесении на раневую поверхность на модели асептического воспаления у крыс показали, что достоверно выражена противовоспалительная активность в подострый и субхронический период, когда происходит формирование утраченных или поврежденных клеток. Предполагается, что в основе механизма противовоспалительного действия масла шиповника лежит ингибирование пролиферативной фазы воспаления и способность моделизации физиологичной репарации [18].

1.6 Глицин в наружных лекарственных формах и косметических Фармакологическое действие препаратов глицина - метаболическое, нейропротективное, антиоксидантное. Глицин входит в состав лекарственных препаратов и биологически активных добавок (БАД) к пище [85].

Глицин, как и другие аминокислоты, используется в косметике в качестве увлажняющего и стимулирующего средства (в концентрации 3-5%). В последнее время возрос интерес к применению в составе косметических средств индивидуальных аминокислот в связи с их высокой гидратирующей способностью [89, 109].

В составе косметических средств глицин действует как увлажняющий агент, позволяя сохранить защитную функцию эпидермиса. Проникая в глубокие слои кожи, глицин улучшает микроциркуляцию крови, предотвращая развитие купероза, замедляет процессы преждевременного старения кожи, защищает клеточные мембраны от воздействия свободных радикалов [34, 138].

Глицин, наряду с мочевиной, входит в состав препарата «Уродерм», обладающий кератолитическим действием, смягчающий и увлажняющий кожу, повышающий ее эластичность [85].

Глицин входит в состав косметических средств для ежедневного ухода (кремы увлажняющие, питательные, омолаживающие для лица, например, компании «Лефарм») интенсивного ухода за кожей – масок увлажняющих для лица (компании «Корфф» и «Кора»), сывороток для кожи вокруг глаз и т.д. [15, 50, 85].

Запатентовано средство – крем для сухой кожи, содержащий комплекс витаминов и аминокислот, в том числе глицин в концентрации 0,015% [73].

Глицин находит применение в средствах по уходу за волосами – бальзамах, кондиционерах, лосьонах, как кондиционер и антистатик, входит в состав патентных формул [76].

1.7 Глицирам. Фармакологическое действие. Наружное применение Глицирам (Glycyram) – аммония глициринат, монозамещенная аммониевая соль глицирризиновой кислоты, выделенная из корней солодки голой [41, 45, 85].

Фармакологическое действие - отхаркивающее, противовоспалительное.

Показания к применению глицирама – бронхиальная астма, дерматиты, экземы.

Противовоспалительная активность глицирама, также как и глицирризиновой кислоты связана с кортизоноподобным действием [89, 118].

производных связывают с несколькими механизмами действия. Глицирризиновая кислота в опытах in vitro подавляет активные формы кислорода, вырабатываемые нейтрофилами и являющиеся потенциальными медиаторами воспаления в тканях, с этим связывают один из возможных противовоспалительных эффектов.

Глицирризиновая кислота и глицирретиновая кислота известны как ингибиторы фосфолипазы А2. Некоторые производные глицирритиновой кислоты показали индуцированной выработкой простогландина E2 (PGE2) нормальными дермальными фибробластами человека (NHDF) [58, 156].

Формы выпуска препарата – таблетки, гранулы для приготовления раствора (ООО «ВИФИТЕХ» (Россия), Фармцентр ВИЛАР (Россия)). Глицирам входит в состав зубного эликсира «Глисан». В стоматологической практике глицирам применяется для защиты от кариеса, для снятия воспаления полости рта и носа, для лечения гингивитов и стоматитов [85].

Глицирам обладает противовирусной активностью при местном и наружном применении [24, 85].

Среди зарубежных препаратов, аналогов глицирама, известен «Эпигенинтим», производства «Хеминова Интернасьональ С.А.», Испания (таблетки, спрей, крем, аэрозоль), который предназначен для лечения первичных форм и хронических вирусных заболеваний половых органов, а также дисбактериоза.

Крем назначается также при заболевании вирусом простого герпеса [89].

Известна фармацевтическая композиция для местного применения, содержащая в качестве активных ингредиентов глицирризиновую кислоту или ее соли в сочетании с дезоксирибонуклеазой для лечения и профилактики вирусных инфекций, вызываемых ДНК-содержащими вирусами, такими как герпес, опоясывающий лишай, папиллома человека [24].

В косметической промышленности в качестве физиологически активного вещества используют нативный корень солодки, густой/сухой экстракты, химически чистую глицирризиновую кислоту и ее соль моноаммония [39, 69,139].

Широко используется в косметологии экстракт солодки голой, полученный спиртовой экстракцией, содержащий – глицирризиновую кислоту и флавоноиды, позиционируемые как антиоксиданты. Экстракт солодки обладает отбеливающим, депигментирующим, осветляющим, антивозрастным, увлажняющим, фотопротекторным действием, в косметологии используется также для снятия покраснений кожи и лечения акне [143, 167].

Проведены исследования аммония глициррината, заключенного в неосомы, показавшие выраженный противовоспалительный эффект на мышах [140].

Глицирринат аммония используется в косметологии как компонент, улучшающий структуру кожи, уменьшающий шелушение, преимущественно для сухой кожи. Рекомендуемая концентрация в составе косметических средств до 5%. Используется в средствах для ванны, средствах по уходу за волосами, в составе декоративной косметики. Глицирринат аммония применяется в составе зубных паст и эликсиров, предназначенных для профилактики болезней десен [69, 140, 167]. Широко применяется в различных составах по уходу за кожей лица и тела (очищающих, питательных, увлажняющих кремах, лосьонах, масках) [161].

Следует выделить использование глициррината аммония в средствах для загара и после загара, что связано с его выраженным фотопротекторным, противовоспалительным и отбеливающим действием [140, 161].

фармакологического лечения и профилактики келоидных и гипертрофических рубцов представляет актуальную медико-социальную проблему, так как традиционно используемые методы лечения зачастую приводят к отсутствию достижения ожидаемого косметического результата и возникновению рецидивов.

преимущественно наружными лекарственными средствами в виде гелей, мазей, кремов комбинированного состава (флавоноиды, витамины, стимуляторы обмена веществ и др.), направленными на коррекцию метаболизма и репарации раны или сформировавшегося рубца.

Учитывая роль эндотелиальной дисфункции в процессе патологического рубцевания, наряду с использованием протеолитических ферментов и стероидных гормонов, лекарственных форм на основе силикона и иммуностимуляторов, в стимуляторов репарации в составе противорубцовых средств.

Наличие у глицирама противовоспалительных и антиаллергических свойств патологического рубцевания.

Следует подчеркнуть, что глицин, как и другие аминокислоты, используется в косметических средствах в качестве увлажняющего и стимулирующего компонента. Глицин улучшает микроциркуляцию кожи и метаболизм в глубоких слоях, что также может использоваться в терапии рубцовых изменений.

В целом представляет интерес и является перспективным создание предотвращая образование рубцов.

ГЛАВА 2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на кафедрах фармацевтической технологии с курсом биотехнологии ГБОУ ВПО ОмГМА Минздрава России, технологии лекарств, аналитической химии, фармакологии и патологии ГБОУ ВПО Пятигорская государственная фармацевтическая академия федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию, г. Пятигорск, далее «Пятигорский медико-фармацевтический институт — филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России» в 2011-2013г.г.

В работе использованы образцы сырья, вспомогательных веществ и реактивы, соответствующие нормативной документации.

Циклоферон (ФСП 42-9316-08). Циклоферон – торговое название меглумина акридонацетата. Порошок от желтого до желто-зеленого цвета.

Светочувствителен. Гигроскопичен.

Глицин (42-12805-03). Белые кристаллы без запаха, сладкие на вкус.

Растворяются в воде в пропорциях 1:4 (одна часть глицина, 4 части воды), при нагревании растворимость значительно увеличивается.

Глицирам (ФСП 42-8145-06). Мелкокристаллический порошок от белого с желтоватым оттенком до желтого с коричневым оттенком цвета, сильно сладкого вкуса, без запаха. Медленно растворим в воде с образованием вязкого раствора, легко растворим в кипящей воде (при охлаждении раствор застудневает) легко растворим в растворах щелочей, практически не растворим в 95% этиловом спирте, хлороформе.

Масло шиповника (ФС 42-2067-95). Маслянистая жидкость бурого цвета с зеленоватым оттенком, горьковатого вкуса и специфического запаха.

Масло персиковое (ГФ Х, ст. 478).

Карбопол (ТУ 301-02-143-90).

Ксантановая камедь (CAS 11138-66-2).

Метилцеллюлоза (ТУ 6-05-1857-78).

Натрий-карбоксиметилцеллюлоза очищенная (ТУ 6-55-39-90).

Натальгин (ТУ 928-030-00462769).

Аэросил А200 (ГОСТ 14922-77).

Нипагин и нипазол (ФС 42-1460-80).

Бензалкония хлорид (CAS 8001-54-5).

Хлоргексидина биглюконат (20% раствор ФС 42-2761-98).

Декабен метилпарабен, этилпарабен, пропилпарабен, бутилпарабен, изобутилпарабен с фенилэтанолом 0,3-1,0%.

Полиэтиленоксид 400 (ФС 42-1242-79).

Пропиленгликоль (CAS 57-557-6).

Глицерин (ГОСТ 6824-76).

- триэтаноламин ТУ 6-09-2448-86, - калия дихромата х.ч. ГОСТ 4220-75, - натрия гидроксид х.ч. ГОСТ 4328-77, - вода очищенная ФС 42-2619-97, - спирт этиловый ТУ 6-09-1710-77, - кислота уксусная ледяная х.ч. ГОСТ 61-75, - ацетилхолин (АЦХ) (Acros organics, США), - L-аргинин (L-arg) (Acros organics, США), - нитроглицерин (НТГ) (МТХ, Москва), - нитро-L-аргинин (нLа) (Acros organics, США), - бутанол х.ч. для хроматографии ТУ 6-09-1708-77, - концентрированный раствор аммиака х.ч. ГОСТ 3760-79, - сурьмы хлорид ч.д.а. по ТУ6-09-636, - ацетон х.ч. ТУ 2633-017-44493179-98, - нингидрин ТУ 6-09-10-1384-79, - калия дигидрофосфат (KH2PO4), категория «х.ч.», ГОСТ 4198-75, - набор для определения фактора Виллебранда (производство НПО РЕНАМ, Россия), Хроматографические пластинки марки «Sorbfil ПТСХ-АФ-В-УФ» размером 10х15 см.

Аппаратура, использованная в ходе исследований Для выполнения настоящей работы использовались следующие приборы и оборудование:

весы лабораторные ВЛТЭ-150, II класс точности по ГОСТ 24104-2001, весы ручные ВР-20, термостат ТС-80М-2, спектрофотометр СФ- –2000, центрифуга УЛР-1, планшетный сканер hp scanjet 3670, ротационный вискозиметр Брукфильда (модель RVDV II+Pro), лазерный анализатор агрегации тромбоцитов (модель 220 LA) научнопроизодственной фирмы "Биола" (г. Москва, Россия), ультразвуковой допплерограф, датчик УЗОП-010-01 с рабочей частотой 25МГц и рабочая компьютерная программа ММ-Д-К-Minimax Doppler v.1.9. (Санкт – Петербург, Россия), ветеринарный автоматический гематологический анализатор BC 2800vet фотоаппарат Nikon Coolpix S3300.

Термостабильность исследовали согласно известной методике [26]. При нагревании 10,0 геля в хорошо закрытой пробирке в термостате при 37±1C в течение суток (24 часа) не должно быть расслоений (отсутствие коагуляции, уплотнения, помутнения, разжижения). При замораживании навески геля в пробирке до – 20C и последующем постепенном оттаивании при комнатной температуре не должно быть расслоений.

Определение водородного показателя гелей вели по методике изложенной в ГОСТ 29188.2-91. Из геля готовился 10% раствор, водородный показатель которого измерялся потенциометрически согласно ГФ XI (Вып. 1, 45с. 114) [30].

За окончательный результат испытания принимали среднее арифметическое двух параллельных определений, допускаемое расхождение между которыми не превышало 0,1 единицы pH.

Определение микробиологической чистоты гелей проводилось в соответствии с методиками ГФ ХII изд., вып. 1 [28].

Изучение упруго-вязко-пластичных свойств гелей проводили на программируемом вискозиметре Брукфильда (модель RVDV II+Pro). Вискозиметр допущен к применению в РФ (Сертификат № 7334 Госстандарта России о регистрации в Государственном реестре средств измерений за № 19122-99).

Свидетельство регистрации №821, 21.10.2003 г.

Для измерения реологических параметров использовали дисковые шпиндели различных номеров (RV02-07). Измерения проводили при температуре образца 20С. Шпиндели вращали в исследуемом образце при 12 последовательно увеличивающихся скоростях, при этом регистрировались показания (среднее значение 4 показания в сек) – напряжение сдвига, скорость сдвига, вязкость, температура.

Разрушение структуры проводили при максимальной скорости в течение минут, после чего, остановив вращение прибора на 10 минут, регистрировали показания прибора на каждой из 12 скоростей сдвига при их уменьшении. Для оценки консистентных свойств мазей строились реограммы течения в диапазонах скоростей сдвига [108]. Для этого строили графики зависимости скорости сдвига от напряжения сдвига, соответственно для возрастающих и убывающих значений скоростей сдвига.

В эксперименте использовали 60 нелинейных белых крыс мужского пола массой 220-250 г.

Животные получены из питомника Санкт-Петербурга «Раполово», прошли двухнедельный карантин и содержались в стандартных условиях вивария ПМФИ – филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, при естественном освещении.

Во время эксперимента животные содержались в контролируемых условиях: температура окружающего воздуха 22±2С, относительная влажность 65±5%. Для размещения животных применялись макролоновые клетки для крыс, оборудованные стальными решетчатыми крышками, с кормовым углублением. В качестве подстилочного материала применяли контактные автоклавированные древесные опилки нехвойных пород древесины. Кормление выполнялось в фиксированное время. Вода водопроводная подавалась в стандартных питьевых бутылочках (250 мл).

еженедельно, мылись и дезинфицировались. В помещениях содержания животных проводилась ежедневная влажная уборка с дезсредствами, ежемесячно – полная санобработка.

Животные были разделены на группы (табл. 2).

Таблица 2 – Группы экспериментальных животных Группы Контроль экспериментальный Группа 1 ЭПР+Контрактубекс На 100 г Группа 2 ЭПР+Хондроксид На 100 г Позитивный контроль (интактные) Таблица 3 – Дизайн фармакологических исследований исследований 1. Формирование групп, забор крови для клинического анализа 1 раз в неделю Забор крови для клинического анализа 14 день Макроскопическое исследование 1. Оценка влияния исследуемых гелей на вазодилатирующую функцию 2. Оценка влияния исследуемых гелей на тромбоцитарный компонент гемостаза (индекс и скорость дезагрегации, фактор фон Виллебранда), 3. Макроскопическое исследование, гистоморфологическое исследование Моделирование экспериментального патологического рубца проводили у животных, наркотизированных хлоралгидратным наркозом (350 мг/кг), после чего выстригали участок шерсти на спине. Затем делали надрез кожного лоскута 4х см и отделяли лоскут кожи от нижележащих тканей, оставляя одну из сторон.

Осуществляли подшивание кожного лоскута, подворачивая по 0,3 см кожного лоскута внутрь, хлобчатобумажной стерильной нитью.

На следующий день и в течение 45 дней на спину животным наносили исследуемые составы 2 раза в день.

Оценка влияния исследуемых гелей на вазодилатирующую функцию Вазодилатирующую функцию эндотелия оценивали по реакции сосудов кожи в условиях модификации синтеза эндогенного оксида азота при внутривенном введении анализаторов следующим образом: ацетилхолин (АЦХ) (Acros organics, США) в дозе 0,01 мг/кг; L-аргинин (L-arg) (Acros organics, США) в дозе 300 мг/кг; нитроглицерин (НТГ) (МТХ, Москва) в дозе 0,007мг/кг и нитроL-аргинин (нLа) (Acros organics, США) в дозе 10 мг/кг. Каждое введение анализатора осуществлялось после возвращения скорости кровотока до исходного уровня. Регистрацию скорости кровотока осуществляли на участке кожи возле рубца в центре его нижнего участка с помощью ультразвукового допплерографа, датчика УЗОП-010-01 с рабочей частотой 25МГц и рабочей компьютерной программы ММ-Д-К-Minimax Doppler v.1.9. (Санкт – Петербург, Россия) [95, 97, 99].

Можно предположить, что один и тот же датчик, размещенный над тканью органа, регистрирует кровоток в определенной, сопоставимой по массе ткани, а не во всем органе. Поэтому кровоток фиксировался в условных единицах (ус.ед.).

При введении анализатора регистрировали изменение скорости кровотока по отношению к исходному, и, таким образом, по увеличению/уменьшению скорости кровотока в % по отношению к исходному уровню судили о расширении или сужении сосудов и косвенно об участии системы NO в регуляции тонуса сосудов и кровообращения исследуемого участка кожи.

В условиях эндотелиальной дисфункции в ответ на введение НТГ, L-arg, АЦХ, а также блокатора синтеза нитрооксида нLа оценивали степень нарушения вазодилатирующей функции эндотелия, а также эндотелиопротективные свойства исследуемых композиций.

Оценку влияния экспериментальных образцов на стабильность и мощность NO-синтазной ацетилхолина, при этом основным фактором являлся процент прироста скорости кровотока к исходному значению.

Оценка влияния исследуемых гелей на тромбоцитарный компонент гемостаза (изменения агрегатного состояния крови) Влияние веществ на агрегацию тромбоцитов исследовали на двухканальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов (модель 220 LA) научнопроизводственной фирмы «Биола» (г. Москва) по методу Born G. (1962) в модификации Габбасова З.А. и соавторов (1989) [21, 126]. Метод основан на регистрации степени изменений светопропускания богатой тромбоцитами плазмы при добавлении веществ, индуцирующих агрегацию, в условиях постоянного перемешивания, а также на анализе флюктуаций светопропускания, вызванных случайным изменением числа частиц в оптическом канале. В процессе эксперимента в кювету агрегометра помещали 0,3 мл плазмы, выдерживали при температуре 37С в течение 2 минут. После инкубации вносили индуктор агрегации динатриевую соль аденозин-5-дифосфорной кислоты (АДФ) («Reanal», Венгрия) в конечной концентрации 5 мкM. Используя графическую регистрацию процесса агрегации кровяных пластинок (в течение пяти минут) строили кривые, которые показывали падение оптической плотности плазмы, обогащнной тромбоцитами. По значению максимальной амплитуды агрегатограммы оценивали интенсивность агрегации.

Определение фактора фон Виллебранда (fvW) - проводилось с помощью «набора для определения фактора Виллебранда» (производство НПО РЕНАМ, Россия) на двухканальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов (модель 220 LA) научно-произодственной фирмы «Биола» (г. Москва, Россия).

Оценка влияния исследуемых гелей на вязкость крови Для изучения гемореологических параметров наиболее доступным и информативным показателем является вязкость крови. Повышение значений этого параметра свидетельствует об изменениях мембраносвязанных функций эритроцитов. Вязкость крови оценивали с помощью анализатора крови реологического АКР-2 (Россия). В основе действия прибора лежит метод ротационной вискозиметрии со свободно плавающим цилиндром-ротором [2].

Движение статора создает магнитное поле, которое приводит к вращению плавающий ротор. Показатель вязкости крови является производным от скорости вращения ротора в изучаемом образце крови. Анализатор обеспечивает измерение вязкости крови в диапазоне скоростей сдвига от 5 с-1 до 300 с-1. Для определения вязкости пробу крови объемом 0,8 мл мерной пипеткой вносили в измерительную кювету, куда помещался ротор-поплавок. Далее кювета устанавливалась на минут в термостат. После термостатирования кювету перемещали в ячейку для измерений. Результаты анализа фиксировали с цифрового табло после установления показаний (неизменное значение в течение 40 секунд после его последней смены) [2].

Оценка влияния исследуемых гелей на показатели периферической крови Гематологические показатели (количество эритроцитов, цветовой показатель, уровень гемоглобина, количество тромбоцитов, количество лейкоцитов, лейкоформула) определяли с использованием системы ветеринарного автоматического гематологического анализатора BC 2800vet (Mindray).

Принцип определения основан на методе импеданса, который заключается в определении количества и размера клеток в зависимости от изменения электрического сопротивления, когда частица (клетка) в токопроводящей жидкости проходит через маленькую апертуру. Каждая клетка при этом вызывает изменение импеданса проводящей суспензии клеток крови. Эти изменения регистрируются как увеличение напряжения между электродами. Количество импульсов определяет количество клеток. Амплитуда импульса пропорциональна объему клетки. Импульсы подсчитываются только в границах, которые находятся (дискриминаторами).

лизированном разведении 1:196 цианметгемоглобиновым методом. Реагент лизирует эритроциты, при этом высвобождается гемоглобин. Железо гемоглобина окисляется из двухвалентного в трехвалентное, формируя метгемоглобин, который реагирует с цианидом калия с образованием стабильного цианметгемоглобина или гемоглобинцианида. Затем концентрация гемоглобина измеряется фотометрически.

Определение проводили 1 раз в неделю. Забор крови осуществляли из подъязычной вены.

Оценка макроскопической картины процесса заживления На 14 и 45 дни проводили макроскопическое исследование состояния ран, фиксировали фотоаппаратом Nikon Coolpix S3300. По внешним проявлениям оценивали в баллах интенсивность процесса в соответствии с таблицей 4, которая учитывает следующие критерии: заживление первичным натяжением в % от общей протяженности рубца, покраснение или его отсутствие, наличие полостей с гноем (оценивается при вскрытии), наличие на рубце струпа в % от общей протяженности рубца, наличие ровного, без деформаций – нормотрофического рубца в % от общей протяженности рубца.

Таблица 4 - Критерии оценки заживления раны по внешним проявлениям 2 Признаки воспаления - нет Слабое сильное Покраснение (нормотрофический) Патоморфологические исследования рубцов животных Для проведения патоморфологических исследований забой животных производили под эфирным наркозом. После декапитации участок рубца фиксировали в 10% нейтральном формалине и заливали парафином. Затем готовили срезы, которые окрашивали гематоксилин-эозином и просматривали под микроскопом, описывая гистологическую картину. Срезы проводили на санном микротоме. Микрофотографические снимки производили на микроскопе «БИОЛАМ» совмещенным с цифровой камерой и компьютером.

ГЛАВА 3 ОБОСНОВАНИЕ СОСТАВА ПРОТИВОРУБЦОВЫХ

СРЕДСТВ

Отмечено, что ускоренная эпителизация является обязательным фактором для предотвращения образования рубцов, а замедленная (свыше 10-14 дней) значительно увеличивает частоту гипертрофического рубцевания. Имеются сведения, что предпосылки для формирования рубца возникают на второй и третьей стадиях раневого процесса, соответственно фазах грануляции и ремоделирования [10, 116, 155].

На 3-ей стадии раневого процесса рекомендованы к применению наружные лекарственные средства для улучшения обменных процессов и регенерации тканей, антиоксиданты, противовоспалительные препараты [1, 3, 10, 83]. Это витамины, нестероидные анаболические средства, иммуномодуляторы, биогенные стимуляторы, неспецифические стимуляторы регенерации (масло облепихи, масло шиповника, апилак, актовегин, солкосерил и др.) [84, 85].

Исходя из специфики течения раневого процесса, способствовать профилактике образования рубца будут мази комплексного состава, обладающие противовоспалительным, антиоксидантным, иммуностимулирующим, ранозаживляющим действием, позволяющие оказывать сочетанное действие на все звенья процесса заживления раны.

Обобщая данные о средствах, применяемых для лечения и профилактики рубцов, а также репаративных средствах, используемых для ускорения заживления раны, очевидным становится выбор для составов разработанных гелей в качестве действующих компонентов индуктора интерферона циклоферона, анаболических средств - глицина и глицирама, неспецифического стимулятора репарации - масла шиповника.

Использование индукторов интерферона, в частности отечественного препарата «Циклоферон», представляет интерес исходя из того, что доказана эффективность циклоферона и как иммуномодулятора, и как препарата, положительно влияющего на тканевое дыхание, стимулирующего репарацию тканей в условиях гипоксии. Препарат оказывает ингибирующее влияние на синтез провоспалительных цитокинов, стимулирует продукцию противовоспалительного цитокина, что еще раз подчеркивает целесообразность его применения в терапии рубцов, так как хроническое воспаление является стимулирующим фактором роста келоидов [85, 101]. Кроме того, имеются данные о перспективности использования для профилактики и лечения рубцов индукторов интерферона (мази имиквимода 5%) [121, 156].

Способность глицирама регулировать работу NO-синтетаз, а также его антиоксидантные свойства позволяют использовать препарат для нормализации функционального состояния эндотелия при профилактике патологического рубцевания. Кроме того, глицирризиновая кислота, обладает противовоспалительным и антиаллергическим действием [58, что подчеркивает перспективность и целесообразность применения глицирама в терапии келоидных и гипертрофических рубцов.

Метаболическое средство – аминокислота глицин, широко используется для стимуляции обмена веществ кожи в составе косметических средств [76]. В пользу глицина как компонента противорубцовых средств говорит и то, что такие увлажняющие компоненты как гидролизаты белков, мочевина, аллантоин, аминокислоты способствуют поддержанию оптимального уровня влажности на поверхности рубца, препятствуя избыточному росту и фиброзу [85, 96].

Процесс регенерации стимулирует группа масляных препаратов, содержащих ненасыщенные и насыщенные жирные кислоты, каротиноиды (провитамин А), токоферолы, витамины группы В, С, Р (вещество флавоноидной природы) и др. – масло шиповника, масло облепихи, каротолин [85]. На основании данных о фармакологической активности нами было выбрано масло шиповника, известное как репаративное и противорубцовое средство.

Таким образом, на основании анализа литературных источников для разработки противорубцовых гелей были выбраны – базовый компонент циклоферон (5%), дополнительные компоненты: глицирам 5% (максимальная используемая концентрация) – противовоспалительный, компонент глицин (1%), увлажняющий компонент, метаболическое средство, стимулятор репарации – масло шиповника [36].

3.1 Исследования по выбору оптимальной основы Основные требования к мазям, применяемым во II и III фазе, являются эффективная защита грануляционной ткани, профилактика вторичного инфицирования раны, ускорение эпителизации [83, 84]. Эти требования предполагают не только подбор фармакологически активных веществ, но и выбор соответствующей мазевой основы.

На этой стадии не применяют мази, обладающие сильными осмотическими свойствами. Следует отметить, что большая часть составов для профилактики и лечения рубцов представлена гелями на основе различных полимеров – полисилоксанов, карбомера и др. [49, 51, 72, 89].

Гели, в отличие от кремов или мазей на гидрофильной основе не обладают дегидратирующим воздействием и гиперосмолярными свойствами. Они, как правило, напротив, увлажняют очаг воспаления, верхние слои кожи или слизистой оболочки, защищая рану от пересыхания [83].

В основе механизма действия противорубцовых гелей полисилоксанов лежит способность образовывать прозрачную защитную пленку, предохраняющую от механического повреждения, улучшающую эластичность и создающую условия, при которых рост рубца останавливается [51, 136].

Исходя из сказанного, при выборе основы для противорубцового средства были использованы гелевые и мазевые составы в соответствии с данными источников литературы (табл. 5) [47, 80, 91]. С учетом термолабильности каротиноидов, входящих в масло шиповника, выбирали составы, не требующие дополнительного нагревания при приготовлении. Составы представлены в таблице 5.

Таблица 5 – Составы основ противорубцовых средств 3.1.1 Исследование совместимости компонентов и основ циклоферона, а также ограниченных сведений о его совместимости с другими веществами на первом этапе проведены исследования совместимости циклоферона с глицирамом и глицином.

получаемого смешиванием акридонуксусной кислоты с N-метилглюкамином. По химическому строению акридонуксусная кислота представляет собой плоскую трициклическую гетероароматическую систему с N-карбоксиметильным заместителем. N-метилглюкамин - соединение, используемое для солюбилизации и стабилизации различных биологических соединений, производное линейного полиспирта (Д-сорбита). Промышленностью выпускаются водные растворы и линимент циклоферона на пропиленгликоле [85, 103, 104].

Глицирам (Glycyram) – аммония глициринат, монозамещенная аммониевая соль глицирризиновой кислоты, тритерпенового сапонина, выделяемого из корней солодки. Медленно растворим в воде с образованием вязкого раствора, практически не растворим в липофильных растворителях [85].

Глицин – аминоуксусная кислота, вещество с амфотерными свойствами.

Растворяется в воде в пропорциях 1:4 (одна часть глицина, 4 части воды) [43].

Для изучения совместимости проводили реакции между 5% водным раствором циклоферона и 5% водным раствором глицирама; 5% водным раствором циклоферона и 1% водным раствором глицина.

Никаких признаков химической реакции (изменения окраски, образования осадка, выделения газа и т.д.) при совместном присутствии компонентов в растворе обнаружено не было.

Исследование совместимости компонентов геля с основами разрабатываемого геля с основами готовили образцы основ и вводили 5% циклоферона, 5% глицирама и 1% глицина в индивидуальном порядке.

Циклоферон во все основы вводили в виде раствора, в олеогель по типу суспензии.

стабильности после приготовления (оценивалась визуально, отмечалось выпотевание воды на поверхности мази, наличие осадка, расслоение эмульсии) и особенностям распределения на коже.

Результаты предварительной оценки совместимости циклоферона с выбранными основами представлены в таблице 6.

Таблица 6 - Характеристика совместимости циклоферона с основами Номер Описание образца Стабильность Характеристика нанесения образца Номер Описание образца Стабильность Характеристика нанесения образца Примечание: «+» - стабилен, «-» - не стабилен.

Анализ показал, что введение циклоферона не влияло на стабильность основ, за исключением составов на основе карбопола. Разжижение крема и геля на основе карбопола возможно связано с несовместимостью циклоферона с основой из-за изменения рН среды в процессе введения вещества или с взаимодействием препарата с основой.

глицирамом (5%) и глицином (1%) (табл. 7, 8).

Таблица 7 - Характеристика совместимости глицирама с основами Номер Описание образца Стабильность Характеристика нанесения образца Примечание: «+» - стабилен, «-» - не стабилен.

Анализ данных таблицы 7 показал, что часть основ после введения глицирама оставалась стабильной, другая - составы на основе альгината натрия и карбопола изменяли свои характеристики - основы с карбополом разжижались, альгинатная основа затвердевала, превращаясь в эластичную упругую массу, не распределяющуюся на коже, что свидетельствует о физико-химических взаимодействиях глицирама с альгинатом натрия и полимеризации массы.

Таблица 8 - Характеристика совместимости глицина с основами Примечание: «+» - стабилен.

Результаты исследований (табл. 8) показали, что полученные образцы основ с глицином представляли собой стабильные составы, легко распределяющиеся на коже, с приемлемыми органолептическими характеристиками.

Таким образом, по причине несовместимости из дальнейших исследований были исключены мазевые основы на базе карбопола и альгината натрия.

3.1.2 Исследование термо- и коллоидной стабильности шиповника. Видимой несовместимости основ с маслами не выявляется, они являются традиционным компонентом многих из них. В косметологии масло шиповника используется в концентрации до 20%, в медицине в чистом виде.

Однако, при введении большого количества масла в гидрофильную гелевую основу возможно расслоение системы. По данным литературы максимально эмульгируемая (стабилизируемая) производными метилцеллюлозы, ксантаном концентрация масляной фазы – 20% [80, 166]. Исходя из этого, для дальнейших исследований готовили образцы гелей на основе Na-КМЦ, метилцеллюлозы и ксантана с маслом шиповника в концентрации 20%. В геле на основе аэросила заменяли 20 г персикового масла маслом шиповника.

Полученные образцы были подвергнуты испытаниям на термо- и методике [26].

определяли центрифугированием (центрифугировании в течение 5 мин при скорости 6000 об/мин). Результаты представлены в таблице 9.

стабильности составов Примечание: образец 1 – составы с комбинацией циклоферон+глицирам+масло шиповника; образец 2 – составы с комбинацией циклоферон+глицин+масло шиповника В ходе исследований происходили изменения с составами 2, 5 и 6.

Расслоение этих гелей обусловлено, вероятно, большим количеством масляной фазы, т.к. данные о стабильности основ имелись для вязкого масла – касторового.

Таким образом, введение масла шиповника в концентрации 20% и более не представляется возможным. Наибольшую стабильность показывает олеогель на основе аэросила. Исходя из полученных данных, для дальнейших исследований был отобран состав 7 на его основе.

Аэросил, как компонент основы, имеет целый ряд преимуществ обеспечивает гелям желаемую консистенцию; препятствует разделению компонентов, что в случае высокого содержания дисперсной фазы (более 5%) является положительным фактором. Аэросил также позволяет использовать большое количество масляной фазы, в нашем случае – одного из действующих компонентов в составе геля. Кроме того, аэросил является одним из компонентов выпускаемых противорубцовых препаратов [51, 85, 86].

Для достижения более полного высвобождения действующих веществ из выбранной основы, а также улучшения их проникновения в кожные покровы, нами были проведены исследования по выбору оптимального пенетратора. В состав противорубцовых препаратов входят пенетраторы – пропиленгликоль и полиэтиленоксиды. Их наличие обеспечивает проникновение действующих компонентов препарата в глубокие слои кожи (например, высвобождение гепарина из «Контрактубекса»). В составе «Циклоферона линимента 5%»

используется пропиленгликоль для улучшения проникновения действующего вещества [85, 86].

Для оценки эффективности высвобождения использовали метод диффузии.

Так как циклоферон и глицин не показали чувствительности при предварительном исследовании в агаровый гель с 2% раствором нингидрина, а на глицирам нет подходящей качественной реакции, оценку эффективности высвобождения из основ проводили по окрашенным веществам - каротиноидам, входящим в масло шиповника [47, 91].

В качестве модельной среды использована система, состоящая из равных частей эмульсий прямого (глицерилмоностеарата 8,0; масла подсолнечного 10,0;

воды до 100,0) и обратного типа (воска пчелиного 7,0; цетилового спирта 8,0;

масла подсолнечного 8,0, воды до 100) [47].

Оценку высвобождения проводили визуально (окрашенная желтоватокоричневая зона высвобождения каротиноидов масла шиповника). В сформировавшемся пласте металлическим цилиндром (d=8мм) вырезали лунки, в которые помещали исследуемые образцы гелей (0,3г). Готовую систему оставляли на одни сутки, после чего определяли размеры окрашенных в интенсивнокоричневый цвет зон вокруг каждой выемки соответствующего геля с помощью миллиметровой бумаги. Зону высвобождения каротиноидов измеряли в миллиметрах по величине распространения окрашенной зоны от границ пробы лекарственной формы (рис. 2).

Рисунок 2 – Влияние пенетраторов на высвобождение каротиноидов из Наибольшее высвобождение наблюдалось из состава с пропиленгликолем.

Таким образом, пропиленгликоль в концентрации 1,5% был выбран в качестве пенетрирующего компонента для последующего использования в составе гелей.

3.3 Выбор консерванта для гелей противорубцовых В фармацевтическом производстве в состав выпускаемых лекарственных препаратов, особенно содержащих компоненты природного происхождения (экстракты, масла) включаются разнообразные консерванты для повышения микробиологической стабильности.

В качестве консервантов в составе противорубцовых средств используются парабены, сорбиновая кислота, сорбит натрия, кватерниум-73. Парабены зарекомендовали себя как консерванты, обладающие положительным влиянием на процесс регенерации эпителия. Бензалкония хлорид используется в составе линимента циклоферона 5%. С учетом данных литературы нами были выбраны для исследования влияния на микробиологическую стабильность консерванты бензалкония хлорид 0,05%, хлоргексидина биглюконат 0,02%, нипагин:нипазол 2:1 0,5%, декабен С 0,02% [33, 85].

По показателю микробиологическая чистота лекарственные формы для наружного применения должны соответствовать требованиям ГФ XII, кат. 2А.

Результаты исследования влияния консервантов на микробиологическую чистоту гелей противорубцовых представлены в таблицах 10 и 11.

Таблица 10 – Влияние консервантов на микробиологическую чистоту геля противорубцового с циклофероном, глицирамом и маслом шиповника Таблица 11 – Влияние консервантов на микробиологическую чистоту геля противорубцового с циклофероном, глицином и маслом шиповника Результаты исследования показали, что наибольшую эффективность в отношении всех видов микроорганизмов проявил декабен С, выбранный нами как консервант для исследуемых гелей.

При выборе окончательного состава провели увеличение концентрации масла шиповника до 40-45%. Использование только масла шиповника сочли не целесообразным, так как препараты, содержащие каротиноиды, нестабильны при хранении (снижается содержание действующих веществ – токоферолов, каротиноидов, появляются перекисные соединения, меняются органолептические характеристики масла) [105]. Кроме того, масло персиковое широко используется для наружного применения как смягчающее средство, входит в состав косметических препаратов, относясь к группе «дерматопротекторов». Являясь «невысыхающим» маслом, оно характеризуется большей стабильностью при хранении.

Таким образом, на основании проведенных исследований предложены следующие составы гелей противорубцовых:

3.5 Разработка технологической схемы производства противорубцовых Для составов нами была разработана оптимальная технология производства гелей противорубцовых в промышленных условиях (рис. 3). Технологическая схема, представленная на рисунке 3, включает традиционные стадии получения олеогелей и мазей-суспензий.

Технологический процесс состоит из следующих технологических стадий:

Производство геля включает следующие стадии:

ВР.1. Подготовка сырья и материалов;

ВР.2. Подготовка ингредиентов;

ТП.3. Получение противорубцового геля;

УМО 4. Фасовка и упаковка продукции.

ВР 1.1. Санитарная обработка помещений ВР 1.2. Санитарная обработка помещения и оборудования ВР 1.3. Подготовка воздуха ВР 1.4. Подготовка персонала ВР 2.1. Отвешивание, измельчение, просеивание действующих веществ ВР 2.2.Отвешивание вспомогательных веществ ТП 3.1. Приготовление концентрата геля ТП 3.2. Разбавление концентрата ТП 3.3. Гомогенизация Рисунок 3 – Технологическая схема производства противорубцовых ВР 2. Подготовка ингредиентов гелей предусматривает их измельчение (глицирам и глицин как кристаллические вещества), просеивание.

Стадия ТП 3. состоит из трех этапов:

ТП 3.1. Приготовление концентрата геля ТП 3.2. Разбавление концентрата геля маслом ТП 3.3. Гомогенизация геля Стадии ТП 3.1. происходит приготовление концентрата геля, на стадии ТП 3.2. – разбавление концентрата, стадия ТП 3.3. – гомогенизация гелей.

противорубцовых. Концентрат можно готовить в реакторе с механической мешалкой. Для этого в реактор загружают персиковое масло, затем при постоянном перемешивании циклоферон, глицирам (состав 1), глицин (состав 2).

Перемешивание ведут 30-40 минут. К полученному концентрату в РПА или роторном гомогенизаторе добавляют масло шиповника, вводят порциями аэросил, далее добавляют декабен и пропиленгликоль и проводят гомогенизацию гелей (ТП 3.3.) в течение 20-30 мин.

УМО 4. Фасовка и упаковка готового продукта.

Готовую продукцию фасуют в алюминиевые тубы по 25, 50 г.

При проведении на производстве валидации технологического процесса, представляющей собой системный подход к определению качества продукта, контроль технологического процесса, способный обеспечить качество продукта в соответствии со спецификацией, составлена примерная схема с перечнем критических стадий и параметров, которые подлежат валидационной оценке.

Критические стадии процесса производства разработанных гелей приведены в таблице 12.

Таблица 12 – Перечень критических стадии процесса производства гелей противорубцовых технологической стадии параметра ВР 2.1. Отвешивание, Степень Снижение стабильности измельчение, просеивание измельчения структуры, уменьшение ТП 3.1. Приготовление Стабильность Нарушение показателя ТП 3.3. Гомогенизация Однородность и Может привести к К критическим параметрам процесса производства гелей противорубцовых, подлежащим контролю, относятся: степень измельчения, стабильность гелевой основы, однородность геля [27, 47, 66].

3.6 Реологические исследования противорубцовых гелей Далее проводили реологические исследования разработанных гелей.

Сравнительное определение пластично вязко-упругих свойств геля значения предельного напряжения сдвига (касательного напряжения) и эффективной вязкости исследованной гелевой композиции. Результаты, представленные на рисунке 4 для состава геля циклоферона с глицирамом аналогичны для геля с глицином, что обусловлено однотипным составом основы – сочетанием масел с аэросилом.

Рисунок 4 - Реограмма течения геля противорубцового с циклофероном, Установленная зависимость величины эффективной вязкости от скорости сдвига для изучаемого геля показала, что вязкость композиции падает с возрастанием скорости сдвига. Такая зависимость свидетельствует о структурируемости изучаемой системы (рис. 4).

Таким образом, гели представляют собой тиксотропную систему, достаточно стабильную и пластичную, способную намазываться на кожу, выдавливаться из туб и обеспечивать необходимую стабильность в процессе технологических операций [108].

1. Теоретически обосновано использование основных действующих веществ гелей противорубцовых – циклоферона, глицирама, глицина и масла шиповника.

2. На основании результатов технологических и биофармацевтических исследований in vitro был осуществлен выбор наиболее предпочтительной основы гелей противорубцовых – олеогель на основе аэросила и пенетратор пропиленгликоль.

3. По данным микробиологических исследований выбран консервант для разрабатываемых гелей – декабен С.

4. Разработана технологическая схема производства гелей противорубцовых, даны рекомендации по стадиям технологического процесса.

5. Изучение структурно-механических свойств показало, что гели обладают упруго-вязко-пластичными свойствами, что обеспечивает их технологичность при производстве, хранении и применении.

ГЛАВА 4 ИССЛЕДОВАНИЯ ПО РАЗРАБОТКЕ НОРМ КАЧЕСТВА И

СТАБИЛЬНОСТИ ПРИ ХРАНЕНИИ ГЕЛЕЙ ПРОТИВОРУБЦОВЫХ

4.1 Разработка норм качества геля циклоферона с глицирамом и Описание. Полученный в лабораторных условиях гель представлял собой однородную массу вязкой мягкой консистенции, желто-коричневого цвета с характерным запахом. Желто-коричневый цвет и характерный запах были обусловлены наличием циклоферона, глицирама и масла шиповника.

Определение рН водного извлечения. Кроме определения подлинности и количественного определения анализируемых веществ, важным параметром для наружных лекарственных средств является показатель рН.

Методика: 10 г геля растворяют в 90 мл воды очищенной. Водородный показатель раствора измеряется потенциометрически согласно ГФ XI (Вып. 1, с. 114).

рН раствора геля составило 5,0 – 6,0.

Размер частиц. В соответствии с методикой ГФ XI, т.2, ст. «Мази» [31]. В результате анализа в качестве предельного параметра выбран максимальный размер 80 мкм.

4.1.1 Определение подлинности компонентов геля циклоферона с Нами были проведены исследования по определению подлинности компонентов геля.

Циклоферон, глицирам и масло шиповника имеют близкие максимумы светопоглощения в УФ области [20, 29, 102, 103], поэтому непосредственно каждое лекарственное вещество методом УФ-спектрофотометрии идентифицировать и количественно определить не представлялось возможным.

Идентификация циклоферона в геле противорубцовом А. Идентификация методом УФ-спектрофотометрии У циклоферона имеются еще и максимум в видимой области спектра при 408 нм, поэтому для определения подлинности циклоферона использовали спектрофотометрию водных растворов в видимой области. Спектры поглощения растворов препарата в 0,1М растворе натрия гидроксида и стандартного образца (СО) циклоферона, приготовленных для количественного определения (см. ниже), имели совпадающие со СО циклоферона максимумы и минимумы (рис. 5).

Присутствующие другие лекарственные и вспомогательные вещества не мешали определению циклоферона в геле.

Рисунок 5 – Спектр поглощения 0,002% раствора циклоферона в 0,1 М Предварительно были измерены спектры поглощения СО раствора циклоферона (в 0,1М растворе натрия гидроксида), приготовлена серия стандартных растворов и построен градуировочный график.

Около 0,05 г (точная масса) СО циклоферона помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли в 40–50 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида и доводили объем раствора в колбе тем же растворителем до метки (раствор В). В мерные колбы вместимостью 100 мл помещали 2,0; 2,5; 3,0; 4,0; 6,0; 8,0; 10,0; 12, мл раствора В, доводили объем раствора в колбах 0,1 М натрия гидроксидом до метки, перемешивали и измеряли их оптическую плотность на спектрофотометре СФ–2000 при 408 нм относительно раствора сравнения, в качестве которого использовали 0,1 М раствор натрия гидроксида. Градуировочный график циклоферона представлен на рисунке 6.

Используя значения полученных оптических плотностей были рассчитаны значения удельного показателя поглощения циклоферона (табл. 13).

Рисунок 6 – Градуировочный график циклоферона циклоферона в 0,1 М растворе натрия гидроксида Б. Идентификация по характерной люминесценции Раствор препарата, приготовленный для количественного определения циклоферона, имел характерную фиолетово-синюю люминесценцию при толщине слоя не менее 1 см. Определение проводили визуально. Люминесценция свидетельствовала о соединениях акридонового ряда, к которым относится циклоферон. Это также являлось подтверждением подлинности циклоферона.

Разработка методики идентификации масла шиповника Для установления подлинности масла шиповника использовали реакцию с раствором сурьмы хлорида. Появлялось быстро исчезающее зеленовато-синее окрашивание, что свидетельствовало о наличии каротиноидов.

При разработке методики количественного определения масла шиповника за основу была взята ФС 42-2067-95 «Масло шиповника» [102]. Вместо смеси ацетонового раствора препарата, приготовленного для количественного определения, в области от 430 нм до 500 нм имел максимумы при 450±2 нм и 471±2 нм (рис. 8).

4.1.2 Разработка и валидация методики количественного определения Любая разрабатываемая или модифицируемая аналитическая методика должна проверяться по показателям: специфичность, линейность, правильность и воспроизводимость, т.е. должна быть валидна [11-14].

При разработке методики количественного определения использовали уже зарегистрированных лекарственных препаратов 103, 104.

Определение специфичности. Для определения количественного содержания циклоферона в геле использовали спектрофотометрию (ФСП 42-0320Циклоферон, линимент 5%, ООО «НТФФ «ПОЛИСАН»).

1702- Валидационную оценку методики проводили на модельном геле с точно известной концентрацией определяемого вещества и всех компонентов основы.