«Разработан доступный метод спектрофотометрического количественного определения -аминокислот в лекарственном сырье, субстанциях и препаратах. Метод разработан на основании исследования спектральных характеристик ...»

Проведением анализа калибровочной смеси -аминокислот известного состава и известной концентрации при постоянных элютивных условиях определяют время задерживания ее отдельных компонентов и площадь их пиков. Под временем задерживания подразумевают, интервал времени от внесения образца до момента прохождения максимума данного компонента через детектор.

Качественный аминокислотный состав кислотного гидролизата определяют сравнением времени задерживания его отдельных пиков со временем задерживания компонентов калибровочной смеси -аминокислот [29].

Количественную оценку хроматограмм проводят с помощью электронного интегратора [29].

При калибровочных анализах интегратор, кроме времени задерживания, определяет площадь пика каждой -аминокислоты (в микровольтсекундах) при их известных концентрациях. Из калибровочных анализов для отдельных аминокислот рассчитывают среднюю площадь их пиков, приходящуюся на нМ по формуле:

где: К – константа отдельной -аминокислоты калибровочной смеси, т.е.

средняя площадь пика соответствующая 1 наномолю этой кислоты, Х1, Х2, Хn – площадь пика соответствующей -аминокислоты, определенная при 1-м, 2-м, n-м анализах калибровочной смеси, n – количество калибровочных анализов, Кол-во (нМ)- количество в наномолях указанной -аминокислоты, дозированной при калибровочных анализах.

Количество отдельных -аминокислот в образце ( нМ) рассчитывают по формуле:

где: Р – площадь пика отдельной -аминокислоты в образце, определенная интегратором, К – константа данной -аминокислоты калибровочной смеси.

Продолжительность аминокислотного анализа приготовленного гидролизата составила 90 мин, воспроизводимость анализа ± 3 % [29].

Установлено, что шрот яблок после кислотного гидролиза достаточно богат по аминокислотному составу, особенно в отношении кислот аспарагиновой, глутаминовой и аргинина, а суммарное содержание -аминокислот в сырье составляет 5,77 % (табл. 14).

Аминокислотный состав шрота яблок после кислотного гидролиза.

-Аминокислоты Содержание, мг % -Аминокислоты Содержание, мг % Суммарное содержание -аминокислот в сырье, % 5, Следует отметить, что несмотря на высокий выход -аминокислот, проведение кислотного гидролиза в данных условиях связано с воздействием повышенного давления на сырье, сложным аппаратурным оформлением процесса, а также со значительными временными затратами при подготовке гидролизата (более 20 ч), что ограничивает использование данной технологии в условиях промышленного производства. На этом основании, нами была поставлена цель:

оптимизировать условия кислотного гидролиза для повышения выхода аминокислот из сырья и разработать доступную методику его проведения. Оценку полноты гидролиза мы проводили путем количественного определения суммы аминокислот в пересчете на пролин с помощью нингидриновой реакции.

Нами изучено влияние концентрации раствора кислоты хлороводородной на выход суммы аминокислот. К 5 г высушенного шрота яблок добавляют мл воды и оставляют на 30 мин для набухания. Далее к сырью добавляют 65 мл раствора кислоты хлороводородной в концентрации от 0,45 М до 5,5 М и проводят гидролиз при температуре 80–90 С в течение 2 ч. Затем гидролизат отделяют фильтрованием, а сырье, для его более полного истощения, трехкратно экстрагируют водой (в соотношении 1:6) по 30 мин в аналогичном температурном режиме. Полученные извлечения фильтруют и объединяют с гидролизатом К объединенному гидролизату добавляют натрия гидрокарбонат до нейтральной реакции, переносят в мерную колбу вместимостью 250 мл и доводят водой до метки. В результате кислотного гидролиза образуется комплекс балластных веществ (в т.ч. и продукты частичного гидролиза ВМС), снижающих качество готового продукта. Для очистки от данных веществ, к 20 мл гидролизата добавляют трехкратный объем 96 % этанола и отстаивают в течение 10–12 ч при температуре 3–4 °С. Образующийся осадок отделяют центрифугированием, после чего извлечение сгущают до полного удаления этанола, переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят водой до метки.

Далее нами проведена нингидриновая реакция, как описано выше (при количественном анализе свободных -аминокислот шрота яблок) и установлено, что гидролиз шрота яблок 0,9 М раствором кислоты хлороводородной обеспечивает наиболее высокий выход суммы аминокислот – до 0,85 % в пересчете на пролин.

В следующей серии экспериментов нами изучено влияние продолжительности гидролиза на выход суммы аминокислот. Кислотный гидролиз проводили 0,9 М раствором кислоты хлороводородной в интервале времени от 1 ч до 12 ч Установлено, что наибольший выход суммы аминокислот из шрота яблок (1,71 % в пересчете на пролин) наблюдается при продолжительности гидролиза в течение 10 ч. На нейтрализацию полученного извлечения израсходовано 5 г натрия гидрокарбоната.

Данные по оптимизации условий проведения кислотного гидролиза шрота яблок приведены в табл. 15.

Влияние регулируемых факторов кислотного гидролиза № Концентрация раствора ки- Продолжительность Выход суммы п/п слоты хлороводородной, М гидролиза, ч аминокислот, % Таким образом, нами оптимизированы условия кислотного гидролиза:

к 5 г шрота яблок (точная навеска), высушенного до воздушно-сухого состояния, добавляют 35 мл воды очищенной и оставляют на 30 мин для набухания.

Затем к набухшему сырью добавляют 65 мл 0,9 М раствора кислоты хлороводородной и проводят гидролиз при температуре 80–90 С в течение 10 ч. Полученный гидролизат отделяют фильтрованием, а сырье трехкратно экстрагируют водой в аналогичном температурном режиме. Полученные извлечения фильтруют, объединяют с гидролизатом и проводят нейтрализацию добавлением 5 г натрия гидрокарбоната. Затем гидролизат переносят в мерную колбу вместимостью 250 мл и доводят водой до метки. Далее проводят очистку гидролизата от балластных ВМС добавлением 96 % этанола, как описано выше. Следует отметить, что разработанный метод кислотного гидролиза не связан с использованием дорогого оборудования, характеризуется простотой исполнения и относительно небольшой продолжительностью во времени.

С целью изучения влияния балластных веществ на содержание суммы -аминокислот в шроте яблок после гидролиза (в оптимизированных условиях), мы приготовили кислотный гидролизат без очистки от балластных веществ (образец 3) и гидролизат, очищенный от балластных веществ (образец 4) и затем провели нингидриновую реакцию (как описано выше). 2 мл каждого продукта разбавляли водой: до 10 мл (образец 3) и до 5 мл (образец 4).

Результаты количественного содержания суммы -аминокислот в шроте яблок после кислотного гидролиза и аналогичный показатель для образца, очищенного от балластных веществ приведены в табл. 16 и 17.

суммы -аминокислот в шроте яблок после кислотного гидролиза.

Результаты количественного определения суммы -аминокислот в шроте яблок, очищенном от балластных ВМС, после гидролиза Анализ данных табл. 10, 11 и 16, 17 показал, что содержание суммы -аминокислот в пересчете на пролин в исходном сырье составило 1,532 %, в сырье, очищенном от балластных ВМС, – 1,112 %. Аналогичный показатель для шрота яблок, подвергнутого кислотному гидролизу составил 1,539 % и 1,711 %, соответственно.

Статистическая обработка результатов анализа представлена в таблице 18, где номер каждого образца соответствует нумерации образцов при их подготовке к количественному определению суммы -аминокислот.

Статистическая обработка метода количественного определения суммы -аминокислот в шроте яблок относительно пролина Как видно из данных таблицы 18, разработанный метод характеризуется достаточно высокой точностью определения и воспроизводимостью. Относительная ошибка результата отдельного определения для всех образцов не превышает ±3 %. Кроме того, метод прост и доступен в исполнении, не требует дорогостоящего аппаратурного оборудования и может быть использован для количественного определения суммы аминокислот в растительном сырье.

Однако, исходное извлечение шрота яблок (образец 1) и гидролизат (образец 3) содержат вещества, реагирующие с нингидрином (пептиды и белки), влияющие на изменения значений оптической плотности. Это приводит к ошибкам результатов количественного содержания -аминокислот в сырье. Поэтому, для получения достоверных результатов, отражающих количественное содержание суммы -аминокислот в растительном сырье, необходимо проводить его очистку от сопутствующих ВМС, например, с помощью осаждения этанолом, как описано выше.

Таким образом, проведение кислотного гидролиза способствует увеличению содержания суммы -аминокислот в шроте яблок до 1,711 % в пересчете на пролин, что значительно превышает аналогичный показатель для исходного сырья – 1,112 %. Это позволит в дальнейшем разработать на основе кислотного гидролизата малотоксичные препараты широкого спектра фармакологической активности, обогащенные -аминокислотами.

Количественное определение суммы -аминокислот Поиск и создание новых эффективных гепатопротекторных средств, благоприятно влияющих на функционирование системы желудочно-кишечного тракта, является одной из актуальных проблем современной медицины.

Какаовелла – отход кондитерской промышленности, применяющийся в качестве заменителя порошка какао, для получения алкалоида теобромина. В настоящее время предложена паста из какаовеллы в качестве пищевой добавки в кондитерские изделия [3].

Приказом МЗ РФ № 335 (14.11.97.) разрешено к медицинскому применению лекарственное средство кавехол (регистр. № 97/335/10) в виде гранул, получаемое из какаовеллы, содержащее в своем составе аминокислоты, в том числе и все незаменимые, углеводы (2–2,5 %), белки (8–9 %), алкалоиды (0,5–1 %), полифенольные соединения, в том числе катехины и эпикатехины, фенолокислоты, в том числе производные коричной кислоты, микроэлементы, обладающее антиоксидантным, желчегонным, гепатопротекторным, радиопротекторным и энтеросорбционным действием [38].

Нами изучен аминокислотный состав какаовеллы после кислотного гидролиза (табл. 19) с использованием аминокислотного анализатора (по методике, описанной на с. 76–78) [29, 34].

-аминокислот в сырье, % Анализ данных табл. 19 показывает, что после кислотного гидролиза суммарное содержание -аминокислот в какаовелле составляет 14,23 %, что значительно превышает аналогичный показатель для шрота яблок (5,77 %). Полученные данные говорят о том, что какаовелла является перспективным источником получения лекарственных средств широкого спектра фармакологической активности, обогащенных -аминокислотами.

С этих позиций представляет интерес разработать на основании нингидриновой реакции доступную точную методику количественного определения суммы -аминокислот какаовеллы, а также оптимизировать условия повышения их выхода.

Ранее нами установлено, что пролин в условиях проведения нингидриновой реакции дает наиболее стабильные результаты светопоглощения. Поэтому, как и в случае шрота яблок, содержание суммы -аминокислот в какаовелле определено в пересчете на РСО пролина.

На первом этапе исследований нами проведена количественная оценка содержания свободных -аминокислот в сырье.

С целью изучения влияния балластных веществ на количественное содержание -аминокислот в какаовелле, нами приготовлены водное извлечение нативное (образец 1) и подверженное очистке (образец 2).

Приготовление образца 1. К 10,0 г сырья какаовеллы (точная навеска), высушенного до воздушно-сухого состояния (остаточная влажность – 9,24 %) добавляют 70 мл воды очищенной и оставляют на 30 мин для набухания. Затем к набухшему сырью добавляют еще 100 мл воды и проводят экстрагирование при температуре 80–90 С в течение 1 ч. Данную операцию повторяют четыре раза. Полученные извлечения фильтруют, объединяют, переносят в мерную колбу вместимостью 500 мл и доводят водой до метки.

Приготовление образца 2 проводят, как описано выше (с. 71).

Далее нами проведена количественная оценка содержания свободных -аминокислот, основанная на спектрофотометрическом анализе продуктов нингидриновой реакции, в пересчете на пролин (по методике, оптимизированной для шрота яблок, с. 73). При этом 4 мл каждого из продуктов исследуемых образцов разбавляли водой до 5 мл.

Установлено, что нативная какаовелла и сырье, очищенное от балластных веществ содержат незначительные суммарные количества -аминокислот – 0,432 % и 0,44 % в пересчете на пролин соответственно (табл. 20–21).

Результаты количественного определения суммы свободных -аминокислот в какаовелле, очищенной от балластных ВМС.

С целью повышения выхода суммы -аминокислот из какаовеллы нами оптимизированы условия проведения кислотного гидролиза (табл. 22). Методика оптимизации гидролиза какаовеллы совпадает с таковой для шрота яблок (с. 81–84). После отделения гидролизата фильтрованием, сырье, для более полного истощения, 3-кратно экстрагируют водой при температуре 80–90 С. Полученные извлечения фильтруют, объединяют с гидролизатом, добавляют натрия гидрокарбонат до нейтральной реакции и доводят водой до 500 мл.

Для удаления из гидролизата балластных веществ проведена очистка с помощью осаждения этанолом (с. 82).

Содержание суммы -аминокислот в какаовелле определяли спектрофотометрическим анализом продуктов нингидриновой реакции, в пересчете на пролин, так же как и в шроте яблок. Установлено, что наибольший выход очищенной суммы -аминокислот из какаовеллы наблюдается при проведении гидролиза 0,9 М раствором кислоты хлороводородной в течение 10 ч (табл. 22).

При этом оптимальные параметры кислотного гидролиза какаовеллы и шрота яблок полностью совпадают (табл. 15 и 22, с. 83–84).

Влияние регулируемых факторов кислотного гидролиза № Концентрация раствора кисло- Продолжитель- Выход суммы С целью изучения влияния балластных веществ на суммарное количественное содержание -аминокислот в какаовелле после гидролиза в оптимизированных условиях, мы приготовили кислотные гидролизаты без очистки (образец 3) и очищенный от сопутствующих ВМС (образец 4) и затем провели нингидриновую реакцию (как описано выше). 2 мл каждого продукта разбавляли водой: до 10 мл. Результаты анализа приведены в табл. 23 и 24.

Установлено, что сырье после кислотного гидролиза содержит 3,11 % суммы -аминокислот в пересчете на пролин. Аналогичный показатель для какаовеллы, подверженной кислотному гидролизу с последующей очисткой от балластных ВМС, составил 2,823 %.

суммы -аминокислот в какаовелле после кислотного гидролиза.

Результаты количественного определения суммы -аминокислот в какаовелле, очищенной от ВМС, после кислотного гидролиза В табл. 25 приведена статистическая обработка результатов количественного определения суммы -аминокислот в какаовелле относительно пролина, где номер каждого образца соответствует нумерации образцов при их подготовке к анализу. Методика характеризуется достаточно высокой точностью определения и воспроизводимостью, ошибка отдельного определения для каждого образца не превышает 3 %. Водное извлечение и гидролизат какаовеллы с нингидрином образуют стабильные продукты (за период 1–1,5 ч после начала реакции интенсивность светопоглощения снижается на 1–1,4 % ).

Статистическая обработка метода количественного определения суммы -аминокислот в какаовелле относительно пролина Следует отметить, что как и в случае анализа шрота яблок, для получения достоверных результатов количественного содержания -аминокислот в какаовелле, необходимо подвергать образцы очистке от балластных ВМС, как описано выше.

Анализ данных табл. 25 показывает, что в кислотный гидролиз способствует значительному повышению содержания очищенной фракции -аминокислот с 0,441 % до 2,832 %, что обусловливает перспективность какаовеллы, как ценного источника получения суммарных лекарственных средств, обогащенных -аминокислотами, для профилактики и лечения заболеваний гепатобиллиарной системы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, на основании исследования спектральных характеристик продуктов реакции -аминокислот с нингидрином в различных растворителях установлены единые максимумы поглощения для большинства -аминокислот:

в УФ- (в диапазоне длин волн 220–260 нм) и видимой областях спектра (при длине волны 400±2 нм, а также в диапазоне длин волн 560–570 нм).

Оптимизация условий проведения нингидриновой реакции показала, что продукты реакции -аминокислот с водным раствором нингидрина характеризуются наибольшей стабильностью во времени и имеют единый максимум поглощения при длине волны 400±2 нм. Поэтому, наиболее целесообразно проводить нингидриновую реакцию с водным раствором нингидрина, с последующим спектрофотометрическим определением продуктов при длине волны 400 нм.

На этом основании разработаны методы количественного определения -аминокислот в лекарственных препаратах и растительном сырье, основанные на реакции с 0,2 % водным раствором нингидрина. Разработанные методы отличаются достаточной точностью (относительная ошибка результата отдельного определения для всех образцов не превышает ±3 %) и доступностью.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Аминокислотный и минеральный состав надземной части Atragene Speciosa / И.В. Шилова, Е.А. Краснов, Н.В. Барановская и др. // Хим.-фарм. журн. – 2002. – Т. 36, № 11. – С. 36–38.

2. Аникина Н.В. Спектрофотометрическое определение цистина / Н.В. Аникина, М.Е. Пудель // Хим.-фарм. журн. – 1983. – Т. 17, № 2. – С. 244–245.

3. Балаховский И.С. Определение суммарного количества аминокислот в крови и других биологических жидкостях / И.С. Балаховский, В.А. Варфоломеев // Лаб. дело. – 1977. – № 4. – С. 213–216.

4. Бестужева С.В. Разделение и количественное определение свободных аминокислот в сыворотке крови на пластинах Фиксион 50 х 8 / С.В. Бестужева // Лаб. дело. – 1977. – № 3. – С. 133–136.

5. Бондаренко Б.Н. Количественное определение аминокислот при хроматографии в тонком слое / Б.Н. Бондаренко // Лаб. дело. – 1984. – № 2. – С.

118–120.

6. Бородина В.Л. Экспресс-метод количественного определения аминокислот с помощью газожидкостной хроматографии / В.Л. Бородина, А.И. Крылов, В.А. Рогозкин // Лаб. дело. – 1984. – № 7. – С. 395–397.

7. Бубенчикова В.Н. Лабазник шестилепестный: аминокислотный и минеральный состав / В.Н. Бубенчикова, Ю.А. Сухомлинова // Фармация – 2005.

8. Великанова О.Ф. Спектрофотометрический метод определения суммарного количества аминокислот в сыворотке крови / О.Ф. Великанова, Ю.В. Галаев // Лаб. дело. – 1981. – № 11. – С. 701–702.

9. Глицин таблетки сублингвальные 0,1 г.: ФСП 42-0025265-02-99. – 07.06.2002.

10. Государственная фармакопея СССР. – XI – изд. – М.: Медицина, 1989. – 11. Граник В.Г. Метаболизм L-аргинина (обзор) / В.Г. Граник // Хим.-фарм.

журн. – 2003. – Т. 37, № 3. – С. 3–20.

12. Грин Н. Биология: В 3-х Т. / Н. Грин, У. Стаут, Д. Тейлор: Пер. с англ. Е.Р.

Наумовой, М.С. Морозовой, О.В. Протасовой. – М.: Мир, 1996. – Т. 1. – 13. Даниляк И.Г. Аевит и глутаминовая кислота в лечении больных бронхиальной астмой / И.Г. Даниляк, А.Х. Коган, С.В. Болевич // Клинич. медицина. – 1995. – № 5. – С. 50–53.

14. Доссон Р. Справочник биохимика / Р. Доссон, Д. Эллиот – М.: Мир, 1991. – 15. Защечная (трансбуккальная) фармацевтическая композиция, включающая аминоуксусную кислоту: Пат. 2253442 РФ, МКИ А61 К31/198. – № 2003133180/15 / ЗАО «Канонфарма продакшн»; Заявлено 14.11.2003 // Изобретения полезные модели. – 2005. – № 16. – С.. 1085.

16. Зенкова Е.А. 1,2,3,4-тетрагидро-1,4-диоксо-2,2,3,3-тетрагидроксинафта-лин как реагент для обнаружения биогенных аминов методом ТСХ и источник получения нингидринового реактива / Е.А. Зенкова, Е.В. Дегтярев // Хим.фарм. журн. – 2000. – Т. 34, № 2. – С. 46–48.

17. Зенкова Е.А. Оптимизация получения нингидринового реактива из 1,2,3,4тетрагидро-1,4-диоксо-2,2,3,3-тетрагидроксинафталина (оксолина) и возможности его применения / Е.А. Зенкова, Е.В. Дегтярев // Хим.-фарм. журн.

– 2000. – Т. 34, № 3. – С. 31–33.

18. Ивановская А.М. Полярографическое определение метионина при анодной поляризации // А.М. Ивановская, Ю.Е. Орлов, В.А. Агилов // Фармация – 1992. Т. 41, № 1. – С. 72–73.

19. Изучение аминокислотной фракции экстракта мумие сухого / Т.Л. Киселева, Л.Н. Фролова, Л.А. Баратова и др. // Хим.-фарм. журн. – 1998. – Т. 32, 20. Изучение компонентного состава аминокислот в гомеопатических матричных настойках арники горной / Е.В. Яковлева, З.П. Костенникова, Л.А. Баратова и др. // Фармация – 2002. – Т. 51, № 5. – С. 11–14.

21. Качественное и количественное определение аминокислот в зерновых культурах методом капиллярного электрофореза / В.Ф. Семенов, Н.Ю.

Страшилина, А.В. Калач и др. // Сорбц. и хроматограф. процессы. – 2004. – 22. Кислота глютаминовая: ВФС 42-2722-96. – 25.04.96.

23. Количественное определение аминокислот в пыльце (обножке) / И.В. Духанина, А.Ю. Айрапетова, Г.Д. Лазарян. и др. // Хим.-фарм. журн. – 2006. – 24. Количественное определение L-лизина, L-гомосерина и -треонина в культуральных жидкостях методом хроматоденситометрии на отечественных пластинках «Сорбфил» / Е.В. Дегтярев, В.Ф. Панфилов, А.П. Тарасов и др.

// Хим.-фарм. журн. – 1992. – Т. 26, № 9–10. – С. 121–123.

25. Количественное определение L-триптофана методом хроматоденситометрии пластинок / Е.В. Дегтярев, В.Г. Дегтярь, А.Ф. Вайсбург и др. // Хим.фарм. журн. – 1994. – Т. 28, № 4. – С. 52–55.

26. Колориметрические методы анализа азотистых соединений: Метод. реком. / Волгогр. сельхоз. ин-т, кафедра химии; Сост. В.А. Храмов. – Волгоград, 27. Копытко Я.Ф. Аминокислоты и жирные кислоты настоек Парнасия (Белозора болотного) гомеопатических матричных / Я.Ф. Копытко // Хим.-фарм.

журн. – 2003. – Т. 37, № 7. – С. 12–14.

28. Коробейникова Э.Н. Определение содержания свободных аминокислот в сыворотке и моче здоровых детей / Э.Н. Коробейникова, Г.В. Мещеринова // Лаб. дело. – 1980. – № 5. – С. 221–223.

29. Крищенко В.П. Комплексная методика определения аминокислот в различных фракциях азотного комплекса растений / В.П. Крищенко // Изв. АН СССР. Сер. Биология. – 1978. – № 3. – С. 327–331.

30. Лазарян Д.С. Сравнительное изучение аминокислотного состава расплода пчел / Д.С. Лазарян // Хим.-фарм. журн. – 2002. – Т. 36, № 12. – С. 42–44.

31. Лукманова К.А. Аминокислотный и минеральный состав фитопрепарата люцерон / К.А. Лукманова, В.А. Рябчук, Н.Х. Салихова // Фармация – 2000. Т. 49, № 2. – С. 25–26.

32. Мансурова И.Д. Определение количества оксилизина и лизина в сыворотке крови / И.Д. Мансурова, Е.Н. Набиджанова // Лаб. дело. – 1982. – № 8. – С.

459–461.

33. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: В 2-х Т. – 14-е изд. перераб. и доп. – М.: Новая волна, 2000. – Т. 1–2.

34. Методы биохимического исследования растений / Под ред. А.И. Ермаковой.

– Л.: Химия, 1977. – 540 с.

35. Непрямое полярографическое определение триптофана, триптамина и серотонина в водно-органических растворах формальдегида / И.И. Левина, Г.В.

Чечекин, А.П. Арзамасцев и др. // Хим.-фарм. журн. – 1997. – Т. 31, № 10. – С. 50–51.

36. Одновременное определение аминокислот в пищевых продуктах методом капиллярного электрофореза при косвенном детектировании в УФ-лучах / Chen Bing, Li Xiaoge, He Ping et al // РЖ 19. Химия. Сводн. т. / ВИНИТИ. – 2004. – № 22. – Р.1.19.

37. Определение аминокислот и глюкозы в аминокислотных инъекционных растворах методом анионообменной хроматографии с интегрированным импульсным амперометрическим детектированием / Yu Hong, Ding Yong Sheng et al // РЖ 19. Химия. Сводн. т. / ВИНИТИ.– 2003. – № 4. – Г.294.

38. Определение следовых количеств аминокислот нейротрансмиттеров в плазме крови крыс методом капиллярного электрофореза в сочетании с детектированием флуоресценции, индуцированной диодным лазером / Fu Min, Zhang Dongming, Ma Wanyan et al // РЖ 19. Химия. Сводн. т. / ВИНИТИ.– 2003. – № 20. – Г.322.

39. Островский С.Ю. Изучение роли гистидина в неферментативной инактивации ацетальдегида / С.Ю. Островский, В.И. Кондаков // Хим.-фарм. журн. – 1987. – Т. 21, № 9. – С. 1034–1037.

40. Половодова Н.В. Разработка спектрофотометрической методики определения кислоты аспарагиновой на основе реакции с нингидрином / Н.В. Половодова // Молодежная наука Прикамье – 2002: Тез. докл. Обл. науч. конф.

молодых ученых, студентов и аспирантов, Пермь, 6–9 декабря 2002 г. – Пермь, 2002. – С. 162.

41. Производные природных аминокислот в роли радиопротекторов / С.А. Казарян, К.П. Григорян, С.Н. Айрапетян и др. // Хим.-фарм. журн. – 1995. – Т.

42. Раевский К.С. Медиаторные аминокислоты / К.С. Раевский, В.П. Геор- гиев – М.: Медицина, 1986. – 240 с.

43. Разводовский Ю.В. Влияние L-триптофана на содержание свободных аминокислот и биогенных аминов в головном мозге крыс при субхронической интоксикации фенобарбиталом / Ю.В. Разводовский, Е.М. Дорошенко // Хим.-фарм. журн. – 2003. – Т. 37, № 1. – С. 6–7.

44. Разделение аминокислот методом капиллярного электрофореза с использованием 9-(2-карбазол)-этилхлорформиата (CEOC) в качестве дериватизирующего агента / Ming Yong-fei, Sun Yu-xi, Shi Yun wei et al // РЖ 19. Химия. Сводн. т. / ВИНИТИ.– 2006. – № 8. – Б2.542.

45. Россихина А.В. Разработка способа определения калия аспарагината в препарате «Аспаркам» / А.В. Россихина // Молодежная наука Прикамье – 2002:

Тез. докл. Обл. науч. конф. молодых ученых, студентов и аспирантов, Пермь, 6–9 декабря 2002 г. – Пермь, 2002. – С. 163.

46. Способ количественного определения алифатических аминокислот: Пат.

2167410 РФ МКИ G 01 N 21/78. – № 99116880/28 / Т.И. Ярыгина, А.В. Захаров, В.А. Дубовик; Заявлено 03.08.1999 // Изобретения полезные модели.

– 2001. – № 14. – С.478.

47. Способ получения пищевой добавки из какаовеллы для кондитерских производств: А.С. 1679679 СССР МКИ А 23 G 1/00. / Э.Т. Оганесян, А.В. Симонян и др.; Заявлено 15.08.88. Зарегистрировано 22.05.91.

48. Способ получения средства, обладающего гепатозащитным, желчегонным и антиоксидантным действием: Пат. 2033176 РФ МКИ А 61 К 35/78. – № 4934925/14 / Э.Т. Оганесян, А.В. Симонян и др.; Заявлено 07.05.91 // Изобретения (заявки и патенты) – 1995. – № 11. – С.113.

49. Стандартизация лекарственных форм фенибута / Т.И. Ярыгина, Л.А. Чекрышкина, Г.Г. Перевозчикова и др. // Фармация – 2004. – Т. 53, № 5. – С.

50. Стандартизация рогов и пантов северного оленя. 1. Количественное определение нингидринактивных веществ в порошке рогов северного оленя / В.П. Пахомов, Т.В. Максимова, И.Н. Никулина и др. // Хим.-фарм. журн. – 1997. – Т. 31, № 4. – С. 53–54.

51. Тихонов Б.Б. Применение метода капиллярного электрофореза для исследования аминокислотного состава белков амаранта / Б.Б. Тихонов // Вестн.

Тверск. гос. техн. ун-та. – 2002. – № 2. – С. 128–130.

52. УФ-спектрофотометрическое определение ароматических аминокислот / Е.Р. Рошаль, В.Н. Сенаторова, А.Ф. Шолин и др. // Хим.-фарм. журн. – 1991. – Т. 25, № 4. – С. 80–83.

53. Химия биологически активных и природных соединений / Под ред. Н.А.

Преображенского, Р.П. Евстигнеевой. – М.: Химия, 1970. – 512 с.

54. Цистеин: ВФС 42-2633-96. – 20.02.96.

55. Чернобровкин М.Г. Определение аминокислот в препарате «Элтацин» / М.Г. Чернобровкин, Н.В. Кольцова, Б.Н. Шепелев // Фармация – 2004. Т.

56. Чистякова А.М. Влияние некоторых аминокислот на показатели липидного обмена в эксперименте / А.М. Чистякова, В.Н. Мирошкина // Вопросы питания. – 1990. – № 1. – С. 40–41.

57. Шайдарова Л.Г. Концентрирование и электрокаталитическое определение некоторых серусодержащих аминокислот на электродах, модифицированных металлофталоцианинами / Л.Г. Шайдарова, С.А. Зиганишина, Г.К.

Будников // Разделение и концентрирование в аналитической химии: Материалы международного симпозиума, посвященного юбилею академика Ю.А. Золотова, Краснодар, 6–11 октября 2002 г. – Краснодар, 2002. – С.

122–123.

58. Шпак А.В. Электрофоретические методы определения аминокислот / А.В.

Шпак, А.В. Пирогов, О.А. Шпигун // Международный форум «Аналитика и аналитики»: Каталог рефератов и статей. Т. 1. Воронеж, 2–6 июля 2003 г. – Воронеж, 2003. – С. 192.

59. Яханбахшт Гасеми. Одновременное спектрофотометрическое определение аскорбиновой кислоты и L-цистеина в фармацевтических препаратах с использованием метода двух скоростей реакций и дифференциальнокинетического метода / Яханбахшт Гасеми, Шахзад Наеби // Хим.-фарм.

журн. – 2006. – Т. 40, № 1. – С. 41–48.

60. Abbaspour A. Determination of L-histidine by modified carbon paste electrode using tetra-3,4-pyridinoporphirazinatocopper (II) / A. Abbaspour, A. Ghaffarinejad, E. Safaei // Talanta. – 2004. – VОL. 64, № 4. – Р. 1036–1040.

61. A MRI contrast medium composition: Пат. 1350524 ЕПВ, МКИ А61 К 49/06 / Henrik Thomsen // РЖ 19. Химия. Сводн. т. / ВИНИТИ. – 2005. – № 4. – О.283П.

62. Compositions and methods for lowering plasma lipoprotein A and risk factors of cardiovascular diseases: Пат. 6693129 США, МКИ А61 К 31/34 / Matthias Rath, Rath Matthias // РЖ Химия: Сводн. т. / ВИНИТИ – 2005. – № 2. – О.265П.

63. Dimova N. RP-HPLC analysis of amino acids with UV-detection / N. Dimova // Докл. Болг. АН. – 2003. – Т. 56, № 12. – С. 75–78.

64. Enterae formulation: Пат. 6864242 США, МПК7 А61 К 31/70 / Ernest Stephen // РЖ 19. Химия. Сводн. т. / ВИНИТИ. – 2005. – № 21. – О.188П.

65. Garcia-Willar N. Liquid chromatographic determination of lysine by potentiometric detection with biosensor / N. Garcia-Willar, Hernandes-Cassou // Anal.

Lett. – 2002. – № 8. – Р. 1313–1323.

66. Gatte R. Phanquenone: a useful fluorescent pre-chromatographic derivatization reagent for liquid chromatographic analyses of aminoacid dosage form / R.

Gatte, M.G. Gioia, A.M. Di Pieta // Anal. chem. acta. – 2002. – № 1–2. – Р. 11– 67. Infant formula with free amino acids and nucleotides: Пат. 6511696 США, МПК7 А23 L 1/305 / Gohman Sharon, Lowry Carol J.O. // РЖ 19. Химия.

Сводн. т. / ВИНИТИ. – 2003. – № 16. – Р1.33П.

68. Khan A.A. Studies of the kinetics and mechanism of interaction of -aminoacids with ninhydrin // J. Indian Chem. Soc. – 1989. – VOL. 66, № 7. – P. 454–456.

69. Kuryt T. Quantitative analysis of amino acids in biological fluids by gas chromatography with flame ionization detection / T. Kuryt, D. Sawnor–Corszynska // Acta chromatogr. – 2000. – № 10. – Р. 97–103.

70. Natural composition for the treatment of circularly conditions: Пат. США, МПК7 А61 К 35/78 / Duckett Melvin J., Moore Kyle // РЖ 19. Химия.

Сводн. т. / ВИНИТИ. – 2003. – № 1. – О.273П.

71. Novatchev N. Evaluation of the impurity profile of amino acids by means of CE.

/ N. Novatchev, U. Holzgrabe // J. Pharm. and biomed. Anal. – 2001. – VOL. 26, № 5–6. – P. 779–789.

72. Sequential injection analysis system for on-line monitoring of 1-cysteine concentration in biological processes / Lee Seung-Hyun, Sohn Ok-Jae, Yim Yong-Sik et al // Talanta. – 2005. – VОL. 65, № 2. – Р. 187–192.

73. Therapeutic agent for primary biliary cirrhosis: Пат. 6339104 США, МПК7 А К 31/195 / Nishiguchi Shuhei, Sounaka Ichirou // РЖ 19. Химия. Сводн. т. / ВИНИТИ. – 2003. – № 1. – О.250П.