На правах рукописи

Лактюшина

Ольга Александровна

КЛЕЩЕВОЙ БОРРЕЛИОЗ СОБАК В ПРИРОДНЫХ ОЧАГАХ

ТРАНСМИССИВНЫХ ИНФЕКЦИЙ

НА ТЕРРИТОРИИ ОМСКОЙ ОБЛАСТИ (ЭПИЗООТОЛОГИЯ,

КЛИНИКО-МОРФОИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ,

ДИАГНОСТИКА И ТЕРАПИЯ)

06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учной степени кандидата ветеринарных наук

Омск –

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Плешакова Валентина Ивановна

Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Рудакова Светлана Анатольевна

Официальные оппоненты: Шкиль Николай Алексеевич, заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор, заместитель директора ГНУ «Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии»

Барышников Петр Иванович, доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий кафедрой микробиологии, эпизоотологии, паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ФГБОУ ВПО «Алтайский государственный аграрный университет»

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»

Защита состоится «26» декабря 2014 года в 13.00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.050.03 при ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П.А.

Столыпина по адресу: 644008, г. Омск, ул. Институтская площадь, д. 2; тел.

(3812) 24-15-35, факс (3812) 24-39-63.

E-mail: [email protected]

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П.А. Столыпина www.omgau.ru

Автореферат разослан: «» _ 2014 года

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук, доцент Лещва Надежда Алексеевна

1.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Трансмиссивные болезни собак – группа болезней, опасных для здоровья и жизни животных, переносчиками которых являются кровососущие насекомые – клещи, блохи, комары, москиты (Деконенко Е.П., 1996). Самыми распространенными и клинически значимыми у собак являются бабезиоз, клещевой боррелиоз, дирофиляриоз, лейшманиоз, бартонеллез и риккетсиозы (эрлихиоз, анаплазмоз), которые наносят непоправимый вред здоровью животного (Карташов С.Н. с соавт., 2010).

Иксодовый клещевой боррелиоз (болезнь Лайма, Лайм-боррелиоз) – представляет собой относительно новую группу природно-очаговых, трансмиссивных инфекционных болезней, вызываемых спирохетами из рода Borrelia. С момента ее описания как нозологической формы не прошло четырех десятилетий (Воробьева Н.Н, 1998; Рудакова С.А., 2005). Переносчиками возбудителя являются иксодовые клещи. Заболевание наносит значительный ущерб служебному, охотничьему и декоративному собаководству, включающий выбраковку и экономические затраты на лечение и реабилитацию животных.

Ежегодно в городах увеличивается численность мелких домашних животных, особенно бродячих, что создает условия для активизации природных очагов клещевого боррелиоза. Четко выраженная способность воспринимать, сохранять боррелий и служить источником заражения для клещей определяет существенное значение бродячих собак, как резервуара спирохет. Собаки участвуют в заносе клещей на садовые участки, в городские парки, скверы, чем способствуют возникновению новых очагов и существенно увеличивают риск заражения людей (Васильева И.С. с соавт., 1996; Appel M.J., 1993).

На территории Российской Федерации, несмотря на актуальность проблемы и наличие природно-климатических, биологических и эпизоотологических предпосылок для существования клещевого боррелиоза у собак, его изучению уделяется мало внимания (Васильева И.С. с соавт., 2003;

Наумов Р.Л. с соавт., 2006; Карташов С.Н., 2010).

В Омской области диагностика Лайм-боррелиоза у собак в большинстве случаев не проводится. В тоже время ветеринарная практика показывает, что довольно часто у взрослых собак регистрируются заболевания с клиническими признаками, характерными для клещевого боррелиоза, но из-за сложности дифференциальной диагностики и несовершенства лабораторных тестов указанная патология не диагностируется. Таким образом, многие вопросы, связанные с территориальной распространенностью природных очагов, особенностями клинического, морфоиммунобиологического проявления, лабораторной диагностики и лечения клещевого боррелиоза собак в Омской области до настоящего времени остаются неизученными.

Степень разработанности. Проблеме клещевого боррелиоза у собак в Российской Федерации посвящено мало исследований (Пустовит Н.С., 2003;

Перевозчикова М.А., Молотова Н.В., 2010). Изучена эпизоотологическая ситуация и особенности клинического проявления болезни Лайма у животных.

Однако многие аспекты патогенеза, морфоиммунобиологических показателей у собак недостаточно освещены в литературе. Предложены методы лабораторной диагностики клещевого боррелиоза, но они не используются в ветеринарной практики из-за дороговизны и трудоемкости. Большинство предложенных схем лечения Лайм-боррелиоза не применяются ветеринарными специалистами и не всегда эффективны (Лепехин А.В. с соавт., 1998; Лобзин Ю.В. с соавт., 2000;

Васильева И.С., Ришина Н.А., 2003; Golightly M.G. et al., 1990; Massarotti E. et al., 1992; Weber K. еt al., 1993; Kersten A. еt al., 1995; Steere A.C. et al., 1996).

Цель и задачи. Целью исследований явилось изучение особенностей эпизоотологического процесса, клинико-морфоиммунобиологического проявления, диагностики и терапии клещевого боррелиоза собак на территории Омской области.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Проанализировать современную эпизоотологическую ситуацию по клещевому боррелиозу собак на территории Омской области.

2. Установить у собак наличие антител к боррелиям, передающихся иксодовыми клещами.

3. Изучить особенности клинического проявления, гематологических, биохимических и иммунобиологических показателей при клещевом боррелиозе у собак при естественном и экспериментальном заражении.

4. Провести анализ случаев микстинфицированности собак боррелиями и бабезиями, а также их клинического проявления.

5. Разработать и внедрить в ветеринарную практику эффективную схему лечения клещевого боррелиоза у собак.

Научная новизна. Впервые в условиях Омской области изучена эпизоотологическая ситуация по клещевому боррелиозу у собак с учетом результатов серологических и молекулярно-биологических исследований.

Установлены особенности клинического проявления, гематологических и биохимических показателей у собак с диагностически значимыми титрами антител к боррелиям. Изучены основные иммунологические показатели у больных собак до и после лечения. Зарегистрированы случаи сочетанного проявления у собак клещевого боррелиоза и бабезиоза, описаны особенности течения болезни. Разработана схема лечения болезни Лайма у собак с применением антибактериального препарата цефтриаксона, подтверждающая его терапевтическую эффективность.

Теоретическая и практическая значимость работы. Материалы диссертации вносят существенный вклад в решение актуальной проблемы борьбы с природно-очаговыми болезнями. Полученные результаты по изучению иксодового клещевого боррелиоза дополняют имеющиеся данные о функционировании природных очагов болезни, а также дают возможность прогнозировать развитие эпизоотологической ситуации. Проведенные исследования позволяют более эффективно осуществлять эпизоотологический надзор. Показана целесообразность проведения РНИФ с использованием корпускулярного антигена B. afzelii (штамма Ip-5215) и иммуноглобулина диагностического флюоресцирующего антивидового против иммуноглобулинов собаки производства ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН для диагностики клещевого боррелиоза домашних животных.

Предложен алгоритм лечения клещевого боррелиоза у собак.

Материалы научных исследований вошли в методические рекомендации «Диагностика и терапия Лайм-боррелиоза у собак» (рассмотрены и одобрены Ученым советом Института ветеринарной медицины и биотехнологии ОмГАУ им. П.А. Столыпина, 2014г.).

Результаты работы используются в учебном процессе в ФГБОУ ВПО Башкирский государственный аграрный университет на кафедре инфекционных болезней, зоогигиены и ветеринарно-санитарной экспертизы (2014 г.), ФГБОУ ВПО Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии (2014 г.), ФГБОУ ВПО Омский государственный аграрный университет им. П.А. Столыпина на кафедре ветеринарной микробиологии, инфекционных и инвазионных болезней (2014 г.), ФГБОУ ВПО Пермская государственная сельскохозяйственная академия им. академика Д.Н.

Прянишникова на кафедре инфекционных болезней (2014 г.) и ветеринарных клиниках г. Омска: ИП «Друг» и ИП «Петан».

Методология и методы исследования. Проведен анализ и синтез информации по проблеме иксодовых клещевых боррелиозов у собак, представленной в отечественных и зарубежных источниках литературы, а также полученной в экспериментальных условиях. Для достижения поставленной цели проведен эпизоотологический мониторинг клещевого боррелиоза у собак в Омской области, изучена и подтверждена эффективность цефтриаксона при лечении больных Лайм-боррелиозом собак. Определены основные иммунологические показатели собак при данной болезни.

эпизоотологический, бактериологические, клинические, гематологические, иммунологические, биохимические, молекулярно-биологический (ПЦР) и серологический (РНИФ).

Положения, выносимые на защиту.

1. Инфицированность иксодовых клещей и зараженность собак возбудителем клещевого боррелиоза свидетельствуют о наличии природных очагов болезни на территории Омской области.

2. Особенности клинического проявления, морфоиммунобиологических показателей при клещевом боррелиозе у собак при естественном и экспериментальном заражении.

3. Эффективная схема лечения клещевого боррелиоза у собак.

Степень достоверности и апробация результатов. Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной ветеринарии» (Краснодар, 2011 г.); научных конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов ИВМиБ ОмГАУ им.

П.А. Столыпина (Омск, 2012, 2013 гг.); межвузовской научно-практической конференции «Актуальные проблемы микробиологической диагностики зооантропонозных инфекций» (Омск, 2012 г.); научно-практической конференции аспирантов «Достижения молодых ученых – аграрному производству» (Омск, 2012г.); Всероссийском конкурсе научноисследовательских работ среди студентов и аспирантов в области биологических наук (Ульяновск, 2012 г.); Всероссийском конкурсе на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений Министерства сельского хозяйства РФ по Сибирскому федеральному округу (Омск, 2014 г.); ХI Международной научно-практической конференции «Тенденции современной науки» (Белгород, 2014 г.).

Объм и структура диссертации. Диссертация изложена на страницах компьютерного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, список использованной литературы, включающий 224 источника, в том числе иностранных авторов, и приложение. Работа иллюстрирована 17 таблицами и 28 рисунками.

Благодарности. Автор выражает сердечную благодарность д-ру мед.

наук, профессору Светлане Анатольевне Рудаковой за предоставление лабораторного оборудования, неоценимую помощь и постоянное внимание к работе, д-ру биол. наук, доценту Василию Сергеевичу Власенко за всестороннюю помощь в освоении методик работы.

Выражаю благодарность коллективу ветеринарной клиники «Друг», а также специалистам ряда ветеринарных клиник Омской области за помощь в сборе клинического материала и апробации результатов исследований.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Научная работа выполнена в период с 2011 по 2014 гг. на кафедре ветеринарной микробиологии, инфекционных и инвазионных болезней ФГБОУ ВПО «Омского государственного аграрного университета им. П.А.

Столыпина». Отдельные исследования проведены на материально-технической базе ФГУН Омского научно-исследовательского института природно-очаговых инфекций Роспотребнадзора, ГНУ ВНИИБТЖ Россельхозакадемии и частных ветеринарных клиник Омской области.

Анализ эпизоотической ситуации по клещевому боррелиозу собак проводили на основании данных первичной ветеринарной документации и результатов собственных исследований с учетом клинико-анамнестических данных и лабораторных исследований (бактериологических, гематологических, биохимических, иммунологических, серологического и молекулярнобиологического). Объектом исследований по изучению распространения клещевого боррелиоза и определения его сезонной динамики служили собаки (n=996) и снятые с животных клещи (n=1597).

Материалом служили пробы крови и сыворотки, взятые от животных.

Кровь для исследований получали натощак из подкожной вены предплечья по общепринятой методике. Для гематологического исследования использовали анализатор ABACUS junior 30 (Австрия), для биохимического – анализатор SCREEN MASTER (Италия), с использованием коммерческих реактивов фирм «Hospitex» и «Human» (Германия).

Пробы сыворотки крови собак для определения специфических антител к боррелиям исследовали при помощи РНИФ на люминесцентном микроскопе Axiostar plus (Германия), с использованием корпускулярного антигена B. afzelii (штамма Ip-5215) и иммуноглобулина диагностического флюоресцирующего антивидового против иммуноглобулинов собаки производства ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН (Москва).

Обнаружение B. burgdorferi s.l. как в организме клещей, так и крови собак осуществляли с использованием ПЦР по общепринятой методике. Также проводили изучение видового состава иксодовых клещей, их численности и сезонной активности. Клещей снимали с кожи животных, используя специальные приспособления для их удаления фирмы Tick Twister.

Определение видовой и половой принадлежности клещей проводили по Сердюковой Г.В. (1956), Филипповой Н.А. (1977). Собранных живых клещей исследовали с целью обнаружения возбудителя клещевого боррелиоза методом темнопольной микроскопии содержимого кишечника на бинокулярном оптическом микроскопе МБР-1 (АУ-12).

Определение кровепаразитов у собак после присасывания иксодовых клещей осуществляли методом окраски мазков периферической крови по Романовскому-Гимзе. Микроскопию проводили в иммерсионной системе светового микроскопа «BIOLAM».

Рентгенологическое исследование суставов больных собак проводили на стационарном аппарате EcoRay HF-525plus Vet (фирмы EcoVet-R). Для ультразвуковой диагностики использовали новую версию портативного чернобелого сканера DP-1100Plus (фирмы Mindray).

Для изучения патогенности выделенных спирохет нами были проведены два эксперимента. Бактериальную массу получали при культивировании B.

burgdorferi s.l. на специальной среде BSK (производство Sigma, США) при 33° С. В первом опыте использовали сирийских золотистых хомяков одного пола (самцы) и возраста (185 сут) с массой тела 120-150 г (n=10). Заражение проводили взвесью боррелий в дозе 1х106 КОЕ на физиологическом растворе подкожно в объеме 0,5 мл. Наблюдение за лабораторными животными осуществляли в течение шести месяцев. Кровь брали из хвостовой вены на 21-е, 52-е, 80-е, 94-е, 120-е, 140-е и 180-е сут после заражения с целью обнаружения специфических антител к B. burgdorferi s.l. и подсчета лейкоцитов в камере Горяева.

Для проведения второго опыта по принципу аналогов были подобраны шесть беспородных щенков, двух-трех-месячного возраста, разного пола ( кобеля и 3 суки), с массой тела от 2,5 до 6 кг. Животные были разделены на две группы (контрольная и опытная), в каждой по три щенка. Собаки являлись серонегативными по отношению к клещевому боррелиозу, что было подтверждено в РНИФ с различными геновидами. Собакам опытной группы культуру боррелий в дозе 1х106 КОЕ вводили внутрикожно в объеме 2,0 мл.

Кровь на наличие и динамику специфических антител к боррелиям брали из поверхностной вены предплечья на 21-е, 52-е, 80-е, 94-е, 120-е, 140-е и 180-е сут после заражения, одновременно проводили морфологические и биохимические исследования проб. Наблюдение за животными проводили в течение 200 сут.

Проведен опыт по изучению терапевтической эффективности схем лечения клещевого боррелиоза собак, включающий применение антибактериальных препаратов (цефтриаксона, оксивета и амоксициллина).

Под наблюдением находились девять больных собак, из которых по мере поступления в ветеринарные клиники были сформированы три группы по три особи в каждой. Животные отличались по массе (от 3 до 45 кг), возрасту (с мес. до 6 лет), полу (3 суки и 6 кобелей) и породе.

Животные опытной группы №1 (n=3) в дополнение к симптоматической терапии получали антибиотик цефтриаксон (в дозе 20 мг/кг, 1 раз в сут, 14- сут, внутримышечно), собакам группы №2 (n=3) вводили оксивет (в дозе 1- мл/10 кг, 1 раз в 48 ч, 7 инъекций, внутримышечно) и собакам группы № (n=3) применяли амоксициллин (в дозе 1 мл/10 кг, трехкратно с интервалом ч, внутримышечно или подкожно). Эффективность лечения определяли на основании ежедневного клинического осмотра и результатов серологических исследований.

С целью изучения иммунного статуса организма собак при клещевом боррелиозе и эффективности антибиотикотерапии проведен опыт на базе одной из ветеринарных клиник в условиях стационара. Было отобрано 10 собак, из которых пять клинически здоровых (контрольная группа) и пять больных (опытная группа). Животные выбраны по принципу аналогов – беспородные в возрасте до 8 месяцев, с массой тела от 2 до 10 кг. У собак обоих групп определяли гематологические и иммунологические показатели до введения антибиотика цефтриаксона и через пять суток после лечения.

Морфологические исследования крови проводили по общепринятым методикам. С целью оценки иммунного статуса в периферической крови щенков определяли содержание иммунокомпетентных клеток в абсолютном выражении (тыс./мкл): число Т-лимфоцитов с помощью спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-рок), Т-киллеров – непрямого глобулинового розеткообразования с эритроцитами быка (ЕА-рок) и Влимфоцитов – комплементарного розеткообразования с эритроцитами быка (Власенко В.С. с соавт., 2010). Уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) определяли методом осаждения полиэтиленгликолем (ПЭГ-6000) с последующим фотометрическим определением оптической плотности образовавшегося преципитата на проточном фотометре 5010V5+при =450 нм (Гриневич Ю.А., Алферов А.Н., 1981). Функциональную активность лейкоцитов оценивали в тесте с нитросиним тетразолием (НСТ-тест) фотометрическим методом в спонтанном и стимулированном вариантах с последующей фиксацией реакции с помощью многоканального иммунохимического анализатора «Fluorofot STD Less-486-M». Оценку концентрации образовавшегося диформазана (ДФ) в нейтрофилах определяли при =630 нм (Годков М.А., Зинкин В.Ю., 2003).

Лечение собак с ассоциативным проявлением клещевого боррелиоза и бабезиоза проводили по следующей схеме: неозидин М (в дозе 0,5 мл/10 кг, однократно, внутримышечно); димедрол с анальгином (в дозе 0,1 мл/кг и 0, мг/кг соответственно, в одном шприце, однократно, внутримышечно); 0,9% раствор натрия хлорида в объеме 100 мл на животное и 5% раствор глюкозы в объеме 20-50 мл на голову, внутривенно капельно, 1 раз в сут, в течение 3- сут; эссенциале (в дозе 0,2 мл/кг, внутривенно, 1 раз в сут, 5 инъекций);

гемобаланс (в дозе 0,5 мл/10 кг, внутримышечно, 1 раз в 48 ч); анандин (в дозе 0,2 мл/кг, внутримышечно, 1 раз в сут, 3-5 инъекций); цефтриаксон (в дозе мг/кг, внутримышечно, 1 раз в сут, 14-28 сут); римадил (в дозе 4 мг/кг, подкожно, двукратно с интервалом 24 ч; далее в той же дозе в форме таблеток ежедневно в течение 7 сут).

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием компьютерной программы Microsoft Excel 2010. Полученные в ходе работы цифровые данные обработаны программой Statistica 6.0.

2.2. Эпидемиологическая характеристика клещевого боррелиоза на Согласно эпидемиологическим данным Роспотребнадзора на всей территории Российской Федерации в последние годы возросло количество случаев заболеваемости людей клещевым боррелиозом. В зависимости от региона до 70% клещей в популяции являются переносчиками возбудителя. По Омской области это процент составляет 28-58%. В Омской области к неблагополучным по иксодовому клещевому боррелиозу районам относят Большереченский, Большеуковский, Знаменский, Горьковский, Колосовский, Крутинский, Муромцевский, Нижне-Омский, Омский, Саргатский, Седельниковский, Тарский, Тевризский, Тюкалинский и Усть-Ишимский.

Наиболее благоприятными для формирования природных очагов ИКБ оказались северные районы области, расположенные в зоне тайги, смешанных и широколиственных лесов. Высокие показатели заболеваемости зарегистрированы в Большереченском (5,56 на 100 тыс. населения), Большеуковском (10,75 на 100 тыс. населения), Знаменском (7,21 на 100 тыс.

населения) и Тарском (6,91 на 100 тыс. населения) районах. Минимальные показатели отмечены в южных районах, расположенные в степной зоне. Так заболеваемость в Исилькульском, Москаленском, Калачинском и Нововаршавском районах в среднем составила 0,31 на 100 тыс. населения.

Данные свидетельствуют о наличии напряженных природных очагов ИКБ на территории Омской области и их приуроченности к определенным природно-географическим условиям.

На протяжении 10-летнего периода (2004 - 2013 гг.) заболеваемость людей ИКБ в Омской области характеризовалась высокими показателями, но не превышающими среднероссийские (рисунок 1).

Показатель на 100 тыс. населения Рисунок 1 – Динамика заболеваемости населения иксодовым клещевым боррелиозом в г. Омске, Омской области и России (по статистическим данным При сравнительном изучении динамики заболеваемости по Омской области отмечена ее неравномерность по годам. Многолетний средний уровень заболеваемости в Омской области составил 1,23 на 100 тыс. населения. По интенсивности эпидемиологического процесса и распространению зараженных клещей ежегодно увеличивается значимость территории самого г. Омска. Но заболеваемость по городу не превышает средний областной уровень и составляет 0,91 на 100 тыс. населения.

2.3. Эпизоотологическая ситуация по клещевому боррелиозу собак в г. Омске и инфицированность спирохетой B. burgdorferi s.l. иксодовых клещей, снятых с Количество иксодовых клещей, снятых с собак, за 2011-2014 гг.

варьируют в разные годы от 139 до 547 экземпляров с пиком в мае и августе (рисунок 2). В остальном, сезонный ход активности клещей имел типичное течение: снижение их активности фиксировали в июне-июле, затем в сентябреоктябре. Прослеживается ежегодное увеличение числа случаев нападения клещей на животных. Например, в мае 2011 года количество напавших клещей составляло 31 (22,3%), а в мае 2014 года – уже 235 экз. (43%).

Количество клещей, шт.

Рисунок 2 – Динамика численности иксодовых клещей, снятых с собак, в Клещи были собраны с собак, проживающих на территориях Советского (САО), Центрального (ЦАО), Ленинского (ЛАО), Кировского (КАО) и Октябрьского административных округов (ОАО) г. Омска, а также Омском районе Омской области. Было установлено, что нападение клещей на собак происходило преимущественно на территориях САО, ЦАО г. Омска и Омского района Омской области.

Зараженность иксодовых клещей боррелиями служит одним из основных показателей степени эпидемиологической и эпизоотологической опасности территории природного очага инфекции.

В результате исследования имаго клещей (n=1597) методом темнопольной микроскопии и полимеразной цепной реакции, возбудитель ИКБ – B. burgdorferi s.l. – обнаружен в 28 особях на территории САО, ЦАО и КАО г. Омска и Омского района Омской области.

Установлено, что зараженность иксодовых клещей боррелиями в САО составила 2,2 (2011 г.) и 1,6 % (2013 г.); в ЦАО – 2,9 (2011 г.) и 0,6 % (2013 г.);

в КАО – 0,4 (2013 г.) и 0,4% (2014 г.); в Омском районе Омской области – 0, (2011 г.), 0,3 (2012 г.), 0,4 (2013 г.) и 0,4 % (2014 г.). В ЛАО и ОАО г. Омска инфицированных боррелиями клещей не выявлено. Таким образом, за последние четыре года на территории г. Омска и Омского района Омской области зараженность иксодовых клещей B. burgdorferi s.l. составила 1,8 %.

По результатам исследований в нашем регионе из 1597 экземпляров клещей - 24 экз. (1,5%) были отнесены к виду I. рersulcatus и 1573 экз. (98,5%) D. reticulatus. Из 28 инфицированных клещей 22 экз. (78,6%) принадлежат к виду D. reticulatus, остальные 6 экз. (21,4%) – I. persulcatus. Данное обстоятельство представляет особое значение, т.к. клещей вида D. reticulates ранее не рассматривали как основных источников боррелий.

В результате проведенных нами исследований по изучению численности и уровня зараженности самок и самцов иксодовых клещей установлено, что по количеству преобладали самки (87,5% - у I. persulcatus и 81,6% - у D.

reticulatus). Уровень зараженности у особей I. persulcatus приблизительно равный, у самок D. reticulatus уровень зараженности в два раза превышал таковой у самцов.

Зараженность иксодовых клещей Babesia canis и микстинфицирование их 2.4.

В результате проведенных исследований выявлено, что 313 клещей вида D. reticulatus заражены возбудителем бабезиоза собак – Babesia canis, и регистрируются на всех исследуемых территориях, включая неблагополучные по ИКБ.

Установлено, что в г. Омске и Омском районе зараженность клещей бабезиями составила в 2011 г. – 27,3%, 2012 г. – 42,2%, 2013 г. – 18,4% и 2014 г.

– 6,9%.

При сопоставлении данных инфицированности иксодовых клещей B.

burgdorferi s.l. и Babesia canis выявлено, что зараженность переносчиков бабезиями превышает зараженность их боррелиями.

Кроме того, нами установлено, что на территории г. Омска обнаружены клещи-переносчики, инфицированные одновременно боррелиями и бабезиями (n=6), то есть микстинфицированые (0,38%). Данные случаи зарегистрированы на территории Советского округа.

Таким образом, в пределах ареала D. reticulatus природные очаги ИКБ являются сочетанными с очагами бабезиоза за счет общего переносчика и его прокормителей.

Зараженность возбудителем клещевого боррелиоза собак на территории 2.5.

С целью оценки эпизоотологической ситуации по болезни Лайма в г.

Омске нами были отобраны сыворотки крови от 996 собак, в том числе от животных, с которых были сняты инфицированные боррелиями клещи. Каждая проба была исследована при помощи диагностического теста на ИКБ в РНИФ и ПЦР. Все собаки условно разделены на группы в зависимости от содержания, возраста, пола, пород и клинического состояния организма.

По данным таблицы 1 ежегодно регистрировались случаи заболевания собак клещевым боррелиозом.

Таблица 1 – Исследования крови собак на иксодовый клещевой боррелиоз Сыворотки крови (РНИФ) Положительных проб Пробы крови (ПЦР) Положительных проб При исследовании сывороток крови были выявлены специфические антитела к B. burgdorferi s.l. в 34 (3,4 %) пробах (в том числе 20 пробах от собак, с которых были сняты зараженные боррелиями клещи), в диагностически значимых титрах 1:40 (n=15), 1:80 (n=17) и 1:160 (n=2).

Полученные результаты подтверждены положительными тестами в ПЦР. В (96,6%) пробах антитела к антигенам возбудителя ИКБ не обнаружены.

Отсутствие антител у собак (n=8), которые подверглись укусам инфицированными клещами, можно объяснить тем, что, несмотря на присутствие в клещах возбудителя, заражение не произошло. Это зависит от вида клеща и времени кровососания. Только клещи с боррелиями в слюнных железах способны передавать их со слюной животным и человеку во время укуса.

При ПЦР-диагностике выявлено еще семь положительных результатов, но антитела к B. burgdorferi s.l. в крови этих собак не обнаружены, что может свидетельствовать о недавней зараженности животных (антитела появляются не раньше, чем на 14-21 сут после укуса клеща).

Среди инфицированных собак 11 сук (26,8%) и 30 кобелей (73,2%), что служит основанием вероятной предрасположенности кобелей к данной болезни.

Высокий титр специфических антител к боррелиям выявили у животных всех возрастов, начиная с 5 месяцев. Значительной разницы в частоте проявления ИКБ у собак разных возрастов не установлено.

Заболеваемость собак Лайм-боррелиозом не зависит от породной принадлежности животных.

Возбудитель ИКБ обнаружен в пробах крови животных преимущественно вольерного содержания (43,9%) и в свободном выгуле (56,1%), что объясняется большей вероятностью их контакта с клещами.

При серологическом исследовании было выявлено 12 положительных проб у клинически здоровых собак (29,3%), 28 у собак с признаками поражения опорно-двигательного аппарата (68,3%) и одна проба (2,4%) у собаки с клинической картиной болезни почек. Выявление специфических антител у здоровых животных согласуется с литературными данными о возможном латентном течении болезни.

При повторном обследовании 34-х собак в динамике через четыре недели результаты оставались неизменными. У семи животных, в пробах крови которых были обнаружены ДНК боррелий, появились специфические антитела, титр которых колебался от 1:20 до 1:40, что является доказательством недавнего контакта собак с зараженными клещами.

Таким образом, выявление в популяции собак инфицированных (1,2%) и больных животных (2,9%) свидетельствует о наличии природных очагов клещевого боррелиоза в г. Омске.

Клинические симптомы клещевого боррелиоза у собак Проведено клиническое исследование 41 животного, у которых в сыворотки крови выявлен высокий титр специфических антител к B. burgdorferi s.l. Острое течение болезни было зарегистрировано у 20-ти (48,8%) собак, хроническое – у девяти (22,0%) и латентное – у 12 (29,2%) животных. По результатам опроса владельцев установлено, что у всех животных была клещевая инвазия за 3-8 недель до появления первых симптомов болезни.

Таким образом, инкубационный период колебался в пределах 1-2 месяцев. Все собаки были разного пола, породы и возраста.

При остром течении Лайм-боррелиоза чаще наблюдали угнетенное состояние, отсутствие аппетита и обезвоживание организма, общую слабость.

Животные с трудом поднимались на лапы, походка была шаткая. Температура тела повышалась до 39,5-41,0°С. Отмечали хромоту опирающейся конечности разной степени интенсивности. У восьми (40,0%) собак регистрировали хромоту на задние конечности, у четырех (20,0%) – на правую заднюю лапу, у трех (15,0%) – на левую заднюю конечность, у трех (15,0%) – на правую переднюю и правую заднюю конечность и у одного (5,0%) животного – на передние конечности.

У 25% животных при визуальном осмотре выявлена анемия видимых слизистых оболочек и кожи.

Наблюдали выраженный отек и болезненность при пальпации в области лучезапястных (15,0 %), коленных (20,0 %) и голеностопных суставов (35,0 %), в меньшей степени проявлялась сильная болевая реакция в крупных суставах, таких как тазобедренные и плечевые. Диагноз на остеоартриты и артрозы подтверждали результатами рентгенологических исследований.

Рентгенологическими признаки структурных поражений суставов являлись расширение суставной щели, разрежение костной ткани, изменение рельефа суставных поверхностей, уплотнение тканей суставных связок.

Каких-либо изменений со стороны кожного покрова, в частности в местах укусов клещей, характеризующихся расчесами, аллопециями, покраснениями, изъязвлениями, шелушением, кровоизлияниями, не выявлено.

Болезнь сопровождалась увеличением регионарных лимфатических узлов в 30,0 % случаев – подчелюстных, в 20,0 % – паховых, в 5,0 % – околоушных, при пальпации которых отмечали болезненность и повышение местной температуры.

В ряде случаев наблюдали учащенное дыхание и сердцебиение, тошноту и рвоту, расстройство акта дефекации (поносы или запоры).

У трехлетнего кобеля породы такса выявлены признаки острого нефрита, а именно субфебрильная лихорадка, одышка, тахикардия, рвота, повышенная жажда, анемия видимых слизистых оболочек. При пальпации болезненность и увеличение в размере левой почки. Частые позывы к мочеиспусканию, олигоурия или анурия. Диагноз был подтвержден ультразвуковым исследованием почек и лабораторными анализами мочи (протеинурия, гематурия, лейкоцитурия).

У собак с хроническим течением болезни Лайма наблюдали снижение физической активности и аппетита, быструю утомляемость, перемежающую лихорадку. У шести (66,7 %) животных отмечали периодическую хромоту, проходящую без медикаментозного вмешательства.

Таким образом, основным клиническим проявлением ИКБ у собак, как при остром, так и хроническом течении, является поражение опорнодвигательного аппарата (86,2 % случаев), проявляющееся хромотой, болезненностью в суставах и изменением походки.

Гематологические и биохимические показатели у собак с острым и хроническим течением клещевого боррелиоза При морфологическом исследовании крови у больных собак с острым течением регистрировали увеличение количества лейкоцитов (22,19±2,14х109/л) в сравнении с показателями физиологической нормы (8,15±1,32х10 9/л).

Отмечали снижение количества эритроцитов до 4,9±0,75х1012/л (при норме 7,37±0,75х1012/л) и гемоглобина до 147,7±9,17 г/л (при норме 153,3±8,37 г/л).

На лейкограмме регистрировали увеличение числа палочкоядерных нейтрофилов до 6,8±0,12% (при норме 3,54±1,23%) и лимфоцитов до 37,8±0,69% (при норме 23,70±4,25%), при одновременном снижении уровня сегментоядерных нейтрофилов до 47,8±0,57% (при норме 64,19±0,27%).

Установили достоверное увеличение показателя СОЭ до 27,1±1,15 мм/ч (при норме 18,23±2,45 мм/ч).

У собак с хроническим течением болезни количество лейкоцитов в крови снижалось (15,12±1,18х109/л) в сравнении с острым (22,19±2,14х109/л).

Установлено повышенное содержание лимфоцитов 32,1±0,57% (при норме 23,70±4,25%) и эозинофилов 3,85±1,21% (при норме 2,15±1,03%), а также понижение количества сегментоядерных нейтрофилов (55,72±0,37% при норме 64,19±0,27%), хотя в сравнении с показателями больных, они увеличились.

Значения показателей эритроцитов, гемоглобина и СОЭ варьировали, но оставались в пределах физиологической нормы.

При биохимическом исследовании проб сыворотки крови выявлено повышение креатинина на 18,5% и мочевины на 45,2% у больных с острым течением, эти данные косвенно свидетельствуют о том, что Лайм-боррелиоз протекает на фоне патологии почек. У собак с хроническим течением установлено незначительное снижение содержания общего белка до 55,21±2, г/л (при норме 63,97±3,11 г/л). При определении белковых фракций отмечено как при остром, так и при хроническом течении снижение альбумина на 31,0 % и 38,5 % соответственно, увеличение гамма-глобулинов в 1,5 раза и увеличение альфа-глобулинов на 39,6 % и 48,6%, соответственно.

Экспериментальное заражение лабораторных животных культурой Заражение сирийских хомяков (n=10) проводили культурой боррелий, выращенной на питательной среде BSK, подкожно в дозе 1х106 КОЕ в объеме 0,5 мл.

Взятие крови для гематологических и серологических исследований проводили на 21-е, 52-е, 80-е, 94-е, 120-е, 140-е и 180-е сут после заражения.

В результате проведенных морфологических исследований установлено, что у всех хомяков на 21-е сут после заражения возбудителем боррелиоза отмечен лейкоцитоз – увеличение показателей лейкоцитов в среднем до 10, тыс./мкл (при норме от 6,5 до 9,5 тыс./мкл). На 52-е сут после заражения наблюдали лейкопению в среднем до 5,52 тыс./мкл, к 120-и сут этот показатель увеличился в среднем до 6,88 тыс./мкл.

Одновременно, исследуя эти сыворотки в РНИФ, во всех пробах на 52-е сут обнаружили титры специфических антител к B. burgdorferi s.l., значение которых варьировало от 1:20 до 1:40. На 120-е и 140-е сут антитела не были зарегистрированы.

На 180-е сут после заражения хомяки были подвергнуты эвтаназии, при этом видимых патологоанатомических изменений во внутренних органах не установлено. При посеве биоматериала, полученного при вскрытии зараженных хомяков, на питательную среду BSK рост возбудителя отсутствовал.

Экспериментальное заражение собак культурой B. burgdorferi s.l.

Клиническое обследование собак опытной группы (n=3), зараженных культурой эпизоотического штамма B. burgdorferi s.l. в дозе 1х106 КОЕ в объеме 2,0 мл, осуществляли ежедневно утром и вечером. У всех животных в течение первой недели после введения возбудителя Лайм-боррелиоза отмечали повышение температуры тела до 39,8°С и снижение физической активности, аппетит и жажда при этом были умеренными. Воспалительной реакции на месте введения культуры возбудителя у инфицированных собак не выявлено.

При серологическом исследовании проб сыворотки крови в РНИФ от животных опытной группы титр антител в разведении 1:40 был зарегистрирован на 94-е и 120-е сут. Несмотря на зараженность собак, что подтверждено серологически, каких-либо других клинических проявлений болезни в течение всего периода наблюдения (200 сут) не было. На 140-е сут антител не обнаружено. У животных контрольной группы результаты серологических исследований были отрицательные.

При морфологических исследованиях у собак опытной группы отмечали увеличение количества лейкоцитов, лимфоцитов и СОЭ, снижение показателей сегментоядерных нейтрофилов на 80-е, 94-е и 180-е сутки. Так, количество лейкоцитов составили 10,59±2,67х109/л; 16,12±2,99х109/л и 18,44±3,64х109/л соответственно, в сравнении с животными контрольной группы (8,03±1,34х109/л; 9,15±1,32х109/л и 8,65±1,82х109/л).

В этой же группе на 80-е сут регистрировали снижение количества эритроцитов на 9,3% и гемоглобина на 1,7%. Незначительный рост числа моноцитов фиксировали на 94-е и 180-е сут наблюдения (6,31±0,99% и 6,55±1,69% при норме 4,92±0,13% и 4,68±1,02%, соответственно).

К 180-и суткам наблюдали тенденцию восстановления количества нейтрофилов и лимфоцитов до физиологической нормы. Однако показатели лейкоцитов и моноцитов у животных опытной группы превышали таковые у собак контрольной группы.

Значения биохимических показателей сыворотки крови у собак опытной группы не отклонялись от показателей контрольной группы.

2.10. Клинико-морфобиохимические показатели сочетанного проявления В ходе исследований клиническому осмотру было подвергнуто четыре собаки пород американский коккер-спаниель, такса, немецкая овчарка и лабрадор в возрасте 1,5; 2; 3 и 5 лет, соответственно. Все животные привиты поливакцинами против чумы плотоядных, парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции, лептоспироза и бешенства. При первичном осмотре у собак наблюдали апатию, снижение массы тела, слабость на задние конечности, повышение температуры тела до 39,8-40,2С и анемию видимых слизистых оболочек. У двухгодовалого кобеля таксы отмечали болезненность при пальпации живота, напряженность брюшной стенки и одышку. При сборе анамнеза выяснили, что у двух собак (немецкая овчарка и лабрадор) в течение последних суток наблюдалась видимая гематурия, у таксы – многократная рвота. С тела лабрадора и коккер-спаниеля владельцы снимали клещей.

При анализе полученных результатов гематологического исследования у всех животных установлено увеличение содержания лейкоцитов (в среднем до 22,7±0,15х109/л) в сравнении с показателями нормы (14,1±1,23х109/л), палочкоядерных нейтрофилов (до 6,75±0,59% при норме 3,6±0,44%) и СОЭ (до 25,01±2,13 мм/ч при норме17,9±2,66 мм/ч); достоверное снижение количества эритроцитов (4,65±0,48х1012/л при норме 7,8±0,54х1012/л) и гемоглобина (97,5±4,12 г/л при норме 154,4±2,62 г/л). При биохимическом исследовании проб сывороток регистрировали повышение количества АсАТ (на 30,1%) и ГГТ (на 20,8%), снижение количества АлАТ (на 12,3%), креатинина (на 28,9%), мочевины (на 6,4%), общего белка (на 31,8%) и глюкозы (на 37,9%).

В мазках крови у всех собак были обнаружены Babesia canis.

На основании полученных результатов был установлен бабезиоз.

Больным собакам назначено комплексное лечение по схеме:

противопаразитарный препарат неозидин М, анальгин с димедролом, эссенциале, анандин, гемобаланс и внутривенные инфузии 0,9% раствора натрия хлорида и 5% раствора глюкозы.

В результате проведенного лечения на вторые сутки наступило улучшение клинического состояния у собак породы немецкая овчарка и лабрадор. Они стали больше двигаться, появился аппетит, моча без видимой гематурии, температура тела снизилась в среднем до 39,0°С. У остальных животных положительная динамика стала развиваться на третьи сутки, на пятые несмотря на симптоматическое лечение клиническое состояние у всех собак вновь ухудшилось: поднялась температура тела до 39,5°С, снизился аппетит, у трех при ходьбе наблюдали хромоту на задние конечности, у лабрадора на правую переднюю конечность. У таксы развился диарейный симптомокомплекс и увеличились паховые лимфатические узлы.

При повторном исследовании мазков крови на выявление бабезий был получен отрицательный результат. Серологическое исследование крови на клещевой боррелиоз показало наличие специфических антител к B. burgdorferi s.l., титр которых составил у двух собак 1:40, у остальных - 1:80.

Больным собакам было назначено дополнительное антибактериальное лечение цефтриаксоном в дозе 20 мг/кг массы тела, внутримышечно, 1 раз в сут, в течение 14-28 сут; 5% раствором римадила в качестве обезболивающего и противовоспалительного средства в дозе 4 мг/кг массы тела, подкожно, двукратно с интервалом 24 часа.

На третьи сутки после начала антибиотикотерапии состояние животных улучшилось: температура тела снизилась до 38,2-38,9°С, прошла хромота, восстановился аппетит и дефекация. На 30-е сут собаки клинически были здоровы, титр специфических антител к B. burgdorferi s.l. снизился у трех животных до 1:20 и у одной собаки до 1:40. При повторном исследовании морфологические и биохимические показатели крови соответствовали норме.

Таким образом, у собак установлено сочетанное течение клещевых инфекций, что обязывает ветеринарных специалистов проводить более тщательную лабораторную диагностику при подозрении на клещевую инвазию.

При лечении клещевого боррелиоза у собак сравнили эффективность трех антибиотиков разных фармакологических групп – цефтриаксона, оксивета и амоксициллина.

Исследование было проведено на собаках с острым течением Лаймборрелиоза (3 группы). В схему лечения включали: римадил, фоспренил, рибоксин, витам, внутривенные инфузии 0,9% раствора натрия хлорида. Кроме того, собакам первой опытной группы (n=3) назначили антибиотик цефтриаксон, второй (n=3) – оксивет, а третьей (n=3) – амоксициллин.

Клиническое состояние животных оценивали ежедневно в течение 14 сут.

При поступлении у больных собак выявляли повышение температуры тела до 39,5-41,0С, отсутствие аппетита, угнетение и общую слабость. У восьми животных наблюдали изменение походки (88,9%), у трех хромоту на задние конечности (37,5%), у двух на переднюю правую лапу (25%), у остальных одновременно на правую переднюю и правую заднюю конечности (37,5%). При пальпации только у двух собак (20%) выявили сильную болевую реакцию в тазобедренных суставах.

В результате назначенной терапии видимое улучшение клинического состояния (увеличение физической активности, снижение болезненности в суставах, нормализация температуры тела и аппетита) у собак первой группы наблюдали уже на следующий день, во второй группе – после второй инъекции антибиотика, то есть на четвертые сутки. У животных третьей опытной группы улучшения не было. Через 14 сут от начала лечения животные первой и второй опытных групп были клинически здоровы. У собак группы № 3 при температуре тела 38,9-39,1°С сохранялась хромота и низкий аппетит. После курса лечения титр антител у всех собак группы № 1 снизился до 1:40 (вместо 1:160), в опытной группе № 2 – у одного животного до 1:40 (вместо 1:80), у двух особей до 1:80 (вместо 1:160), в группе № 3 –титр антител сохранился прежним и составил 1:80. Полученные результаты клинического и серологического исследования свидетельствуют о преимуществе цефтриаксона перед оксиветом и амоксициллином.

2.11.1. Гематологические и иммунологические показатели у собак при клещевом боррелиозе до и после лечения цефтриаксоном По результатам гематологических исследований, при болезни Лайма у собак изменения крови характеризуются снижением числа эритроцитов до 5,9±0,75 х 1012/л (при норме 7,37±0,75 х 1012/л), гемоглобина до 147,7±9,17 г/л (при норме 153,3±8,37 г/л), выраженной лейкопенией (до 6,16±0,15 тыс./мкл при норме 11,68±0,06 тыс./мкл) и лимфоцитозом (2,78±0,19 тыс./мкл при норме 1,99±0,01 тыс./мкл). Достоверной разницы в количестве базофилов, эозинофилов и моноцитов не установлено.

При оценке иммунного статуса больных собак опытной группы до лечения отмечено увеличение числа Т-киллеров и В-лимфоцитов, при этом концентрация в крови последних достигает достоверной разницы (0,41±0,07;