На правах рукописи

СЕМИВОЛОС

СЕРГЕЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА МЕТОДОВ ВОССТАНОВЛЕНИЯ

ПЛОДОВИТОСТИ КОРОВ ПРИ НАРУШЕНИИ ФУНКЦИИ ЯИЧНИКОВ

06.02.06. - ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Краснодар - 2010 2

Работа выполнена на кафедре «Акушерство и хирургия животных»

ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Авдеенко Владимир Семенович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор Назаров Михаил Васильевич доктор ветеринарных наук, профессор Нежданов Анатолий Григорьевич

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет имени К.Д. Глинки», 394084, г. Воронеж, ул. Мичурина, 1.

Защита состоится в « 13 » часов « 25 » марта 2011 г. на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, РФ, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, РФ, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.

Отзывы на автореферат просим выслать по адресу: 350044, РФ, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.

Автореферат разослан « 24 » февраля 2011г. и размещен на сайте:

http:|//www. kubsau. ru.

Ученый секретарь диссертационного совета И.А. Родин

1.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Интенсивное развитие молочного скотоводства, сдерживается из-за широкого распространения среди коров маточного стада болезней репродуктивных органов, приводящих к бесплодию различной длительности, снижению молочной продуктивности и преждевременной выбраковке животных. По данным многих исследований ( В.Я. Никитин 1997, А.Г. Нежданов, 1983, 2008; Е.В. Ильинский, 1995; М.Г. Миролюбов, 1999; А.Ф.

Колчина, 1999; М.А. Багманов, 2002; Н.А. Галицкий, 2003; Т.Е. Григорьева, 2005; М.В. Назаров, Е.В. Громыко и др., 2009) более чем у 30% высокопродуктивных коров регистрируется акушерско-гинекологическая патология. К настоящему времени разработаны научные основы коррекции нарушений функциональной деятельности яичников у коров, однако нельзя считать, что все вопросы управления процессами размножения у животных решены. Актуальным остается разработка новых и совершенствование существующих способов терапии и профилактики функциональных нарушений яичников у высокопродуктивных молочных коров хозяйств с различными формами собственности. Разработанные и широко используемые в ветеринарной практике методы восстановления плодовитости при дисфункции гонад не всегда оказывают должный положительный эффект.

Поэтому, изучение сравнительной оценки методов восстановления половой цикличности, повышения оплодотворяемости коров при дисфункциональном состоянии яичников на основе особенностей гистогенеза при данном функциональном нарушении яичников, является актуальным направлением ветеринарной акушерской и гинекологической науки и практики.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является изучение степени распространения нарушений функции яичников у коров, морфологических изменений в половых органах, эффективности различных методов восстановления плодовитости у коров при дисфункциональном состоянии гонад. В соответствии с поставленной целью были поставлены следующие задачи:

установить частоту возникновения нарушений функции яичников у коров в хозяйствах с различными формами собственности Поволжского региона;

- исследовать гематологические и биохимические показатели крови у коров при дисфункции яичников;

- изучить морфологические изменения в яичниках при дисфункции гонад и в стадию уравновешивания полового цикла;

- определить терапевтическую и экономическую эффективность различных методов повышения плодовитости коров при дисфункции яичников.

Исследования выполнены в соответствии с планом научноисследовательских работ, утвержденных приказом ректора ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ им. Н.И. Вавилова».

Научная новизна. Изучена степень распространения нарушений функции яичников у коров в хозяйствах различных форм собственности Поволжского региона. Выявлены особенности гистогенеза в яичниках при гипофункциональном состоянии гонад. Установлена клиническая и ультразвуковая оценка методов биотехнологического контроля состояния репродуктивных органов у коров при функциональных нарушениях яичников.

Впервые изучена терапевтическая эффективность препарата моногестаген, а также дана сравнительная оценка различных методов коррекции дисфункционального состояния яичников у коров.

Морфологическими исследованиями установлено, что при дисфункции яичников общее число первичных, вторичных и третичных фолликулов в гистологическом срезе составляет 103,44 ± 3,0 из которых 79,39 % - первичные, 8,9 % - вторичные и 11,71% - третичные. Значительная часть третичных фолликулов ( 61,68 % ), преимущественно мелких и средних размеров с диаметром 2406,4 ± 370,0 мкм, находятся в состоянии облитерационной атрезии, а у 28,16 % крупных фолликулов с диаметром 1353,43 ± 78,22 мкм отмечается кистозная атрезия. Клиническими исследованиями установлено, что после однократного применения препарата хорулон в дозе 1500 ИЕ стадия возбуждения полового цикла за 120 дней наблюдений проявилась у 76,67 % коров, а оплодотворение наступило у 60,0 % животных при индексе оплодотворения 2,4. Применение коровам с дисфункциональным состоянием гонад препарата овариовит в дозе 5 мл вызывает восстановление половой цикличности у 93,33% коров и оплодотворение 73,33% животных при индексе оплодотворения 2,2. Однократное введение моногестагена способствовало проявлению стадии возбуждения полового цикла за 120 дней наблюдений у 76,67 % коров и оплодотворению 73,33% животных, с индексом оплодотворения 1,4. Экономическая эффективность восстановления воспроизводительной функции у коров при дисфункциональном состоянии яичников с использованем моногестагена оказалась выше по сравнению с препаратами хорулон и овариовит в 1,2 и 3,3 раза соответственно.

Апробация и реализация результатов исследований. Основные положения диссертации доложены и одобрены на научно-практических конференциях ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ им. Н.И. Вавилова» 2008, 2009, 2010 гг.; на ХV Межрегиональной научно - практической гомеопатической конференции (г. Саратов, 12 ноября 2010 г.), опубликованы в открытой научной печати и включены: в «Рекомендации по прогрессивным методам диагностики, лечению и профилактике бесплодия у коров и телок (2009); в учебное пособие «Акушерство, гинекология и биотехника размножения животных» для студентов IV курса специальности «Ветеринария» (2009).

Публикация результатов исследований. Основные научные положения и выводы диссертации опубликованы в 9 печатных работах, в том числе одна работа опубликована в изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки Российской Федерации.

Объект и предмет исследования. Объектом исследований являлись коровы черно-пестрой и симментальской пород. Яичники и кровь, взятые от коров с различным функциональным состоянием гонад. Предметом исследований служили: препарат хорулон (фирма производитель - DEXLEER HOLLAND), препарат моногестаген (фирма производитель - ЗАО «Биоцентр»

РАН, г. Москва) и препарат овариовит (фирма производитель – ООО «Алекс Анн», Московская область), а также ультразвуковой диагностический прибор DRAMINSKI ANIMA рrofi (Польша).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 118 страницах компъютерного набора и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений и списка литературы, включающего 214 наименований, в том числе 36 иностранных авторов. Работа содержит 21 таблицу и 24 рисунка.

Основные положения, выносимые на защиту:

- анализ степени распространения, а также современных способов диагностики нарушений функции яичников у коров;

- гистогенез в яичниках и изменение морфобиохимических параметров крови у коров при дисфункциональном состоянии гонад;

- сравнительная оценка терапевтической и экономической эффективности различных методов повышения плодовитости коров при дисфункции яичников.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в 2008…2010 гг. кафедрах: «Акушерство и хирургия животных», «Морфология и патология животных», УНЦ «Ветеринарный госпиталь» ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ им. Н.И. Вавилова», а также диагностическом « Di центре». Материалом для исследований служили коровы симментальской и черно-пестрой пород средней упитанности с нарушением функции яичников 5…7 летнего возраста с продуктивностью 2800…4523 кг молока за лактацию, принадлежащих СПК колхоз «Красавский» Лысогорского, КФК «Климашина» Татищевского, ООО «Котоврас» Балашовского, СПК к-з им. К. Маркса Балаковского, АФ «Волга» и ЗАО ПЗ «Мелиоратор»

Марксовского районов Саратовской области.

Изучали распространение акушерско-гинекологической патологии коров по статистическим данным ветеринарной отчетности хозяйств, сведений книг учета работы операторов по искусственному осеменению животных.

Датированный материал фиксировали на основании акушерскогинекологической диспансеризации в обследуемых хозяйствах.

Диагноз на нарушение функции яичников ставили на основании анализа материалов первичного зоотехнического учета, а также 2-х кратного вагинального и ректального исследований с интервалом 10…12 дней.

Учитывали возраст животных, продуктивность, характер течения родов, характер проявления феноменов стадии возбуждения полового цикла, топографию, форму, размеры яичников. Клинические и диагностические исследования, а также анализ полевого материала проводили на 1239 коровах.

Устанавливали основные причины и предрасполагающие факторы возникновения нарушений функции яичников у коров, изучали условия кормления, содержания и эксплуатации животных, организацию искусственного осеменения. Для эхографического исследования использовали малогабаритный, ультразвуковой диагностичесий прибор DRAMINSKI ANIMA рrofi.

При изучении сравнительной оценки различных методов восстановления репродуктивной функции с функциональными нарушениями яичников у коров, по принципу аналогов сформировали три опытные и одну контрольную группы животных (n=15). Коровам первой опытной группы вводили препарат хорулон внутримышечно, однократно, в дозе 1500 ЕД. Коровам второй опытной группы применяли овариовит, который вводили 4-х кратно по 5 мл с интервалом дней, внутримышечно. Коровам третьей опытной группы применяли препарат моногестаген внутримышечно, в дозе 2 мл, однократно. Животные контрольной группы стимуляции половой функции не подвергались. Терапевтическую эффективность применяемых методов оценивали по продолжительности лечения, количеству выздоровевших животных, срокам проявления первой половой охоты после выздоровления, оплодотворяемости и продолжительности бесплодия.

Материалом для гистологических исследований служили яичники коров с дисфункциональным состоянием и в стадию уравновешивания полового цикла (n=4). Яичники фиксировали в 10% - ном растворе формалина, обезвоживали в спиртах нарастающей концентрации и заливали в парафин. На санном микротоме готовили срезы толщиной 5…8 мкм после чего окрашивали гематоксилин-эозином. Изучали препараты под микроскопом «Биолам» при 60, 120 и 240 кратном увеличении.

При изучении гистологических срезов яичников определяли характер изменения специфических клеточных структур гонад в процессе роста и созревания первичных, вторичных и третичных фолликулов, состояние желтых тел, устанавливали характер облитерационной и кистозной атрезии фолликулов. Морфометрические измерения проводились с помощью окуляра Гюйнеса АМ–11. При выполнении работы делали макро - и микрофотографии.

Для изготовления макрофотографий и микрофотографий использовали фотоаппарат Сanon Power Shot A 640, совмещенного с бинокулярным микроскопом «Unico» с последующим выводом на экран монитора ПК.

Для оценки состояния обмена веществ у коров в опыте были исследованы гематологические и биохимические показатели крови. Цельную кровь, стабилизированную гепарином, исследовали при помощи общепринятых в ветеринарной практике методов. Оценку морфологического состава крови по содержанию эритроцитов, тромбоцитов, гематокрита и лейкоцитов определяли с помощью гематологического анализатора РСЕ – 90 Vet (производства USA) посредством волюметрического метода подсчета, гемоглобин - по Сали.

Биохимический анализ сыворотки крови включал определение следующих показателей: уровень общего белка сыворотки крови биуретовым методом, белковые фракции методом электрофореза на бумаге, глюкозу методом Хагедорна, общий и прямой биллирубин с применением набора реагентов «Юни-Тест–биллирубин», концентрацию холестерина, общего кальция и неорганического фосфора при помощи наборов реактивов «Диакон ДС», каротин – колориметрическим методом по модифицированной методике Рачевского. Фолликулостимулирующий и лютеонизирующий гормоны определяли с использованием иммуноферментного анализа.

Расчет экономической эффективности применения различных методов лечения коров с гипофункциональным состоянием яичников проводили по «Методика определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий», утвержденной пмоль Департаментом ветеринарии и животноводства МСХ РФ (2007).

Материалы полученных данных обрабатывали методом вариационной статистики на персональном компъютере с использованием программ: «Microft Excel», STATGU1, XIS, а также биометрически, с использованием критериев Стьюдента, хи-квадрат.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Клиническая и ультразвуковая оценка методов биотехнологического контроля состояния репродуктивных органов у коров при функциональных нарушениях яичников Проведение акушерско – гинекологической диспансеризации позволило установить, что основной причиной бесплодия различной длительности у коров в 70% случаев являются функциональные расстройства гонад. Данные функциональные нарушения устанавливаются, как правило, клиническими методами исследований и, главным образом, ректальным методом. Для эхографического обследования использовали малогабаритный, ультразвуковой диагностический прибор DRAMINSKI ANIMA рrofi. Изучение сравнительной эффективности биотехнологического контроля состояния репродуктивных органов проводили методом УЗИ на 164 бесплодных коровах с функциональными нарушениями гонад. Точность постановки диагноза эхографическим методом контролировалась ректальным методом исследования по общепринятой методике.

Экспериментальные исследования показали, что из функциональных нарушений яичников наиболее четко диагностировались кисты различного происхождения и, прежде всего, фолликулярные. Клинически, фолликулярные кисты проявлялись у коров многократными стадиями возбуждения полового цикла и неплодотворными осеменениями. В 72,73 % случаев регистрировали одиночные и 27,27% случаев множественные фолликулярные кисты. При пальпации фолликулярные кисты яичников представляли собой тонкостенные, слегка флюктуирующей консистенции образования, имеющих диаметр на поверхности яичника от 1,5 до 3,0 см. Причем, после повторного исследования животных диагноз на фолликулярную кисту не подтвердился у 11,11% животных. На эхограммах фолликулярные кисты регистрировались как тонкостенные образования овально-округлой формы, с достаточно однородным анэхогенным содержимым.

Отмечено, что для одиночных фолликулярных кист более характерной была круглая (рис. 1) или овальная формы, тогда как множественные фолликулярные кисты имели всегда овальную или даже неправильную форму и значительно меньший диаметр по сравнению с одиночными.

Рис. 1. Эхограмма фолликулярной Рис. 2.Эхограмма рогов матки и кисты яичника. Кистозная яичников в состоянии гипофункции.

Так, если диаметр одиночных фолликулярных кист составлял в среднем 280,23 ± 0,68 мкм, то множественных - 246,76 ± 0,76 мкм. Во всех случаях мы регистрировали фолликулярные кисты только в одном из яичников. Кроме того, при эхографическом обследовании наблюдали зоны усиления эхосигнала в области различных участков кист без специфической их локализации.

Лютеиновые кисты встречались у 3-х (5,66 %) бесплодных коров.

Клинически проявлялись длительным отсутствием половой цикличности. При пальпации яичники были увеличены, отмечалась упругая консистенция в области центральной части яичника. На эхограммах лютеиновые кисты идентифицировались как жидкостные полости округлой формы. Диаметр лютеиновых кист колебался от 18 до 31 мм., составляя в среднем 200,67 ± 5, мкм. Лютеиновые кисты локализовались, как правило, в одном из яичников и только у одной коровы регистрировали наличие лютеиновой кисты одновременно в левом и правом яичнике. В лютеиновых кистах отчетливо наблюдали слой эхопозитивной ткани толщиной 3…7 мм. Только в одном из яичников, отмечали наличие кист желтого тела.

При кистах желтого тела половая цикличность была нарушена, стадия возбуждения полового длительно отсутствовала. Половые циклы проявлялись через 32…37 дней. При пальпации обнаруживается выступ в виде бугорка различной формы и величины на поверхности яичников. Консистенция упруго плотная. Кистозная полость в желтом теле и выступающая на поверхности яичника часть желтого тела имели эхопозитивную структуру.

При гипофункции яичников у коров отмечалась анафродизия различной длительности. При ректальном исследовании, которое проводили двукратно с интервалом в 10…12 дней, яичники у большинства коров были небольших размеров, упруго - плотной консистенции. На поверхности гонад отсутствовали желтые тела и фолликулы.

При эхографическом исследовании яичники с гипофункциональным состоянии не представляли собой однородного эхогенного образования (рис.2).

Манипуляции датчиком в области расположения яичников не приводили к усилению эхосигналов из-за отсутствия эхопозитивной ткани гонад. Поэтому, по сравнению с кистами яичников, особенно фолликулярного происхождения, сложнее установить форму, размеры яичников и их морфологические структуры, позволяющих ставить диагноз на гипофункцию яичников.

Исходя из анализа материалов проведенных исследований, можно прийти к заключению, что разрешающая способность ультразвукового сканирования оказалась достаточно информативной при диагностике функциональных нарушений яичников у коров.

3.2. Распространение акушерско-гинекологической патологии Анализ материалов клинических исследований и наблюдений, полученного от 1239 коров, принадлежащих шести хозяйствам с различными формами собственности Саратовской области, позволил выяснить степень распространения акушерско-гинекологических заболеваний у коров в зоне Поволжья. Проведенная акушерско – гинекологическая диспансеризация позволяет констатировать, что акушерско-гинекологическая патология у коров регистрируется в хозяйствах различных форм собственности не зависимо от уровня продуктивности, условий кормления, содержания и эксплуатации животных. Так, патология родов и послеродовые осложнения встречалась у 59,13…71,36 % в СПК колхоз «Красавский»; 92,45 % ЗАО ПЗ «Мелиоратор»;

88,51 % КФК «Климашина» и в среднем составляла 68,36 ± 9,79%. Различные формы острых послеродовых эндометритов возникали у 41,24 ± 6,96 % коров.

Причем, наиболее часто регистрировали хроническую форму, а это, свидетельствовало о том, что лечение острых послеродовых эндометритов ветеринарными специалистами хозяйств не доводилось до полного выздоровления животных. Субинволюция матки регистрируется у 25,67 ± 4,05% коров. Наиболее часто субинволюция матки возникала у коров с высокой молочной продуктивностью (ЗАО ПЗ «Мелиоратор», СПК колхоз «Красавский», КФК «Климашина»).

Клинические исследования показали, что гипофункция яичников встречается в среднем по хозяйствам у 27,98 ± 9,35% самок от числа обследованных коров (табл. 1). Чаще всего гипофункцию яичников регистрировали в АФ «Волга» (16,41 %), ООО «Котоврас» (19,88%), СПК колхоз «Красавский» (23,0 %), а в КФК «Климашина» - у 93,1 % коров.

Таблица 1- Сведения о степени распространения гипофункции яичников у коров в хозяйствах Саратовской области «Мелиоратор»

«Красавский»

«Красавский»

Персистентное желтое тело яичников установлено у 5,08 ± 0,21% обследованных коров, а вариабельность находилась в пределах 2,09…7,74%.

Кисты яичников установили у 1,29 ± 0,76 % обследованных животных, а максимальное распространение не превышало 5,66% (ЗАО ПЗ «Мелиоратор»).

Причем, в основном встречались одиночные фолликулярные кисты (65,78 %), у остальных животных отмечали множественные кисты, которые диагностировали при помощи эхографического исследования животных.

Данное обстоятельство на наш взгляд связано с фронтальной обработкой бесплодных животных гормональными гонадотропными препаратами без учета их физиологического состояния. От общего числа животных, которые были подвергнуты преждевременной выбраковке - 18,52% имели функциональные нарушения яичников. Следует отметить, что доминирующей в распространении функциональных нарушений гонад была гипофункция яичников(40,91%).

Причем, гипофункция гонад от количества обследованных бесплодных животных с использованием клинического и ультразвукового методов исследования встречалась у 60,38 % коров в ЗАО ПЗ «Мелиоратор», 39,34 % в СПК колхоз «им. К. Маркса», у 51,08 % коров ООО «Котоврас», 56,70…61, % в СПК колхоз «Красавский» и 96,55 % в КФК «Климашина» Саратовского района. В среднем функциональные нарушения яичников диагностировали у 55,11 ± 2,29 % бесплодных коров.

Исходя из широкого распространения функциональных нарушений яичников, мы провели анализ условий кормления и содержания коров (рис. 1и 2) по приведенным выше хозяйствам с целью выявления основных причин их возникновения. Установлено, что наиболее чувствительными к возникновению гипофункции яичников оказались животные, завезенные из Австрии.

Следовательно, резкое изменение климатических условий может служить не только существенным, но и даже доминирующим фактором возникновения гипофункционального состояния гонад у коров.

3.3. Гематологические и биохимические показатели крови у клинически здоровых и при гипофункциональном состоянии Экспериментальные исследования показали, что гематологические и биохимические показатели крови клинически здоровых (стадия уравновешивания полового цикла) и с гипофункциональным состоянием гонад коров были в пределах физиологической нормы. Однако их значения