«Н.П.ИВАНОВ доктор ветеринарных наук, профессор, академик НАН РК К.А.ТУРГЕНБАЕВ доктор ветеринарных наук, профессор А.Н. КОЖАЕВ кандидат ветеринарных наук ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ ЖИВОТНЫХ Том 3 Болезни жвачных животных, ...»

3. Клинические признаки заболевания.

4. Методы лабораторной диагностики.

5. Лечение животных при эмфизематозном карбункуле.

6. Иммунитет при эмфизематозном карбункуле.

7. Организация профилактических и оздоровительных мероприятий при эмфизематозном карбункуле.

ознакомить слушателей с паратуберкулезом и методами Цель занятия:

Паратуберкулез (Paratuberculosis, болезнь Ионе) – хронически протекающая инфекционная болезнь жвачных, характеризующаяся медленно развивающимся продуктивным энтеритом, периодической диареей и прогрессирующим исхуданием.

В 1895 г. X. Ионе и Г. Фротингем впервые обнаружили и описали возбудителя болезни в мазках из подвздошной кишки больной коровы.

больных животных, соскобов со слизистой оболочки пораженного участка кишечника и брыжеечных лимфоузлов, паратуберкулезные микобактерии расположены кучками, гнездами, редко одиночно и попарно. Являясь облигатным паразитом, возбудитель очень растет. В процессе роста в жидких питательных средах накапливается токсическое вещество – паратуберкулин, или йонин, вызывающее у зараженных животных паратуберкулеза непатогенны для лабораторных животных. Моделями для воспроизведения болезни служат экзотические Устойчивость. Возбудитель паратуберкулеза обладает значительной устойчивостью к воздействию факторов окружающей среды и различных дезинфицирующих средств. Он сохраняется в почве и навозе 10-12 мес, в кормах и воде непроточных водоемов-8 -10 мес. Микроб погибает при 85°С через 5 мин, в молоке, нагретом в закрытых сосудах до 63°С, через 30 мин, а при 80 °С - через 1-5 мин. Солнечный свет убивает его через мес. Лучшими дезинфицирующими веществами являются щелочной 3%-ный р-р формальдегида и 3%-ный р-р едкого натра; 20 %-ная взвесь свежегашеной извести, сулема в разведении 1:500, 5%-ная эмульсия ксилонафта. Некоторые противотуберкулезные синтетические соединения, сульфаниламидные препараты и антибиотики in vitro только задерживают рост культур М. paratuberculosis.

Эпизоотологические данные. Паратуберкулез – болезнь жвачных, преимущественно крупного рогатого скота и овец. Реже заболевают буйволы и верблюды, очень редко – козы, олени, яки. Единичные случаи болезни описаны у диких животных, содержащихся в зоопарках.

Болезнь проявляется в виде небольших вспышек, в последнее время часто спорадически. Молодняк крупного рогатого скота до 4-месячного возраста, верблюды в возрасте 2-3 лет более восприимчивы к возбудителю паратуберкулеза. Однако в связи с продолжительным инкубационным периодом и латентным течением клинически больные животные обнаруживаются чаще после 1-2-го отела. Неудовлетворительные условия содержания и неполноценное кормление (скармливание в большом количестве кислых кормов – барды, жома, силоса; минеральное голодание, глистная инвазия, переохлаждение или перегревание) снижают устойчивость организма и способствуют возникновению и распространению болезни. Интенсивное распространение паратуберкулеза наблюдается при акклиматизации ввозимых животных и содержании их в необычных для них условиях. Выделение возбудителя болезни с фекалиями начинается через 3 - 5 мес после заражения. Паратуберкулез регистрируют в любое время года, чаще в зонах с кислыми, заболоченными или солончаковыми почвами, где корма бедны солями фосфора и кальция.

Источник возбудителя инфекции – больное животное и микробоносители, постоянно выделяющие М. paratuberculosis с фекалиями, плодными водами, мочой и даже с молоком. Факторами передачи возбудителя болезни являются контаминированные им вода, предметы ухода. Животные могут заражаться и на пастбище, где ранее находился больной скот. Молодняк заражается при выпойке ему молозива или молока больных животных. Имеются данные о внутриутробном заражении телят (вертикальная передача возбудителя болезни). Летальность физиологического состояния животного характеризуется отставанием в росте, понижением упитанности и может затянуться на несколько лет. Ее диагностируют лишь аллергическим, серологическим и бактериологическим исследованиями. Переход бессимптомной стадии в клиническую зависит от степени резистентности организма. При клинической стадии вначале возникает вялость, животные много лежат, отстают от стада, худеют (несмотря на сохранение аппетита), кожа грубеет, взъерошивается шерсть, поносы чередуются с нормальными испражнениями, снижается удой. Затем появляются профузный понос, отеки век, в межчелюстном пространстве, в области подгрудка и нижней части живота, прогрессирует исхудание. Фекальные массы водянистые, зеленоватого или коричневого цвета с примесью слизи и крови, пузырьков газа, имеют зловонный запах.

Вследствие длительного поноса наступает сильное обезвоживание организма (глаза западают в орбиту, объем мышц уменьшается, особенно тазового пояса и задних конечностей), усиливается жажда. Иногда наблюдается паралич сфинктера ануса; выделение каловых масс происходит непроизвольно и струей, задняя часть тела животного запачкана испражнениями. У коров прекращается секреция молока.

Температура тела за весь период болезни в пределах нормы (перед смертью снижается). В крови уменьшается количество эритроцитов и гемоглобина, наблюдается лейкопения, нейтрофилия со сдвигом ядра влево. При быстро наступающем истощении животные погибают за 10-15 дней, а при проведении симптоматического лечения понос временно прекращается и общее состояние улучшается, но через некоторое время наступают рецидивы c упорным поносом. У старых животных болезнь протекает главным (образом бессимптомно. Паратуберкулез у овец протекает преимущественно в латентной форме (85%), реже отмечаются клинические признаки: снижается упитанность, появляются отеки в области межчелюстного пространства, шерсть у больных животных становится сухой и матовой, а у некоторых овец она выпадает, образуются обширные облысения. В клинической стадии болезни у овец иногда возникает диарея (кал чаще размягчен и не оформлен в шарики). Данная стадия болезни длится несколько дней и заканчивается летально. Клиническая стадия болезни наблюдается преимущественно у взрослых овец и баранов-производителей в возрасте 4-5 лет. Течение болезни у коз, оленей, верблюдов и буйволов такое же, как подвздошная кишки) и в мезентериальных лимфоузлах. Кишки обычно поражены не на всем протяжении. В этих местах стенки утолщены (в 5 - 20 раз), слизистая оболочка покрыта слизью, вязкой, густой серовато-белого цвета, собрана в плотные продольные и поперечные складки бледного цвета, напоминающие извилины. Мезентериальные лимфоузлы увеличены, на разрезе влажные, имеют ограниченные желтовато-белые саркомоподобные узелки. Иногда обнаруживают дегенеративные изменения в печени, почках, сердце, имеется выпот в брюшной и грудной полостях.

У овец изменения локализованы чаще в подвздошной, слепой и ободочной кишках. Посмертные изменения у буйволов, оленей такие же, как у крупного рогатого скота. У верблюдов, кроме того, отмечают бородавчатый эндокардит, нефроз, наличие плотных узелков в селезенке, на слизистой оболочке глотки, гортани, в лимфоузлах головы.

При патологогистологическом исследовании находят очаговые скопления и диффузную пролиферацию эпителиоидных, лимфоидных, гистоцитарных, гигантских клеток и макрофагов в апикальной части ворсинок. М. paratuberculosis чаще и легче можно обнаружить в гистологических срезах, окрашенных по Циль - Нильсену. Ворсинки деформированы, частично атрофированы. Интенсивное разрастание грануляционной ткани ведет к утолщению слизистой и подслизистой оболочек с последующим образованием продольных борозд и складок. Диагноз. Первичный диагноз на паратуберкулез крупного рогатого скота ставят на основании анализа эпизоотологических данных, характерных клинических признаков болезни (диарея, прогрессирующее истощение при сохраненном аппетите, отеки в области подчелюстного пространства, подгрудка, жажда, температура тела в пределах нормы). Диагноз обязательно подтверждают результатами патологоанатомического вскрытия убитых с диагностической целью больных животных, бактериоскопией и гистологическим исследованием патологического материала.

Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служат отрезки подозрительных участков кишечника с прилегающими мезентериальными лимфатическими узлами и обязательно отрезки подвздошной кишки, илеоцекальная заслонка и расположенные здесь лимфатические узлы, фекалии с комочками слизи и с полосками крови, соскобы со слизистой оболочки прямой кишки, а также кровь и сыворотка крови для серологического исследования.

Патологический материал исследуют бактериоскопически и гистологически, лишь в исключительных случаях – бактериологически.

Бактериоскопия. При исследовании фекалий выбирают комочки слизи и растирают их между стеклами, рекомендуется делать не менее 10 мазков.

По способу Венота и Моро 2-4 г фекалий растирают в стерильной ступке, добавляют 25%-ный раствор поваренной соли до получения жидкой консистенции и фильтруют через двойной слой марли, сливают в центрифужную пробирку, прибавляют 1 мл петролейного эфира (бензин, лигроин), взбалтывают и 15- минут центрифугируют при 3000-5000 об/мин. Материал для мазков берут под нижней частью верхнего слоя.

Методы флотации. Фекалии разводят дистиллированной водой до жидкой консистенции, фильтруют через марлю. Полученным фильтратом наполняют высокую пробирку вместимостью 20 см3 (диаметром около 1,5 см); фильтрат не доливают до краев пробирки на 2,5 см. Затем в пробирку добавляют 2 см3 эфира, закрывают плотно пробкой и жидкость встряхивают в течение минуты, после чего сосуд оставляют в покое на несколько минут, а затем открывают для испарения эфира. Глазной пипеткой набирают небольшое количество жидкости с поверхности и делают препараты путем неоднократного нанесения и размазывания капель на стекле.

При исследовании соскобов мазки делают из кусочков слизи, извлеченных из кишечника.

При исследовании патологического материала мазки делают из слизистой и подслизистой оболочек кишечника и мезентериальных лимфатических узлов, обязательно из мест измененной ткани, если они видны на поверхности разреза.

Мазки окрашивают по Цилю - Нильсену. При обнаружении в мазках кислотоустойчивых бактерий, расположенных мелкими гнездами или глыбами, диагноз на паратуберкулез считают положительным. При наличии единичных бактерий результат исследования считают сомнительным.

Помимо световой микроскопии, проводят люминесцентную микроскопию согласно Методике обнаружения в патологическом материале возбудителей туберкулеза и паратуберкулеза методом люминесцентной микроскопии.

Бактериологическое исследование. Для выращивания возбудителя паратуберкулеза применяют модифицированную казеиновую среду Дюбо- Смита.

Модифицированная питательная среда Дюбо - Смита. Приготовляют синтетический раствор следующего состава: 1 г КН2РО4, 6,25 г Na2HPO4, 0,01 г MgSO4, 0,0005 г СаС12, 0,0001 г ZnS04, 0,0001 г CuSO4, 0,05 г лимоннокислого аммонийного железа, 1 г аспарагина, 80 см3 гидролиза казеина, 20 см3 спиртового экстракта из микобактерий флей (по Смиту). Ингредиенты сначала растворяют в определенном количестве дистиллированной воды и доливают ее до 1 л.

Устанавливают рН 6,5 соляной кислотой (около 1 см3 на 1 л), добавляют 15 г агар-агара, предварительно хорошо промытого и растопленного при 50-55°С.

Среду стерилизуют в колбах при 120°С в течение 20 минут. Перед употреблением добавляют 20% стерильной сыворотки крупного рогатого скота, предварительно прогретой при 50°С в течение часа, и пенициллин из расчета 50 ЕД на см3 среды. Готовую среду разливают в пробирки, скашивают, выдерживают при комнатной температуре в течение суток и помещают в термостат на 2-3 дня для проверки на стерильность. Среда должна быть прозрачной и содержать значительное количество конденсационной жидкости.

Приготовление гидролизата казеина. Нагревают до 28°С 1 л водопроводной воды. Добавляют 84 г казеина. Устанавливают рН 8,0. Подогревают на водяной бане в течение 3 часов при температуре 28°С. Снова доводят рН до 8,0. Добавляют 2 см3 панкреатина и 25 см3 хлороформа. Полученную смесь переливают в бутыль, закрывают резиновой пробкой и оставляют при комнатной температуре. Спустя 10 дней фильтруют через полотно, устанавливают рН 7,4 и стерилизуют при 120°С в течение 30 минут.

Приготовление спиртового экстракта поСмиту. Культуру микобактерий флей выращивают на ЛШБ, содержащем 4% пептона и 10% глицерина. Через 3недели при получении пышного роста культуру отделяют от жидкости путем фильтрации через двойной бумажный фильтр в стеклянной воронке. Отжатую культуру (в воронке) подвергают прогреванию при 80°С в течение 30 минут в аппарате Коха и высушивают в эксикаторе в чашках Петри над серной кислотой, а затем помещают в стерильную ступку и тщательно растирают в порошок; 20 г сухого порошка три раза экстрагируют, кипятят в спирте в течение 20 минут в колбе с обратным холодильником, употребляя каждый раз 150 см3свежего спирта. Надосадочную жидкость, полученную после каждой экстракции, фильтруют через бумажный фильтр и сливают в колбу, затем сгущают при пониженном давлении до образования вязкой красновато-оранжевой жидкости. Полученную таким образом жидкость смешивают с 80 см3 50 %-ного раствора глицерина, приготовленного на дистиллированной воде. Устанавливают рН 7,6. Жидкость прогревают в кипящей водяной бане в течение 10 минут. Горячую жидкость помещают в делительную воронку и оставляют на ночь. Отстоявшийся на поверхности жидкости слой жироподобных веществ отбрасывают, а остаток (светлую жидкость, рН 7,0) автоклавируют при 120°С в течение 20 минут и добавляют к среде. Экстракт можно хранить длительное время.

Отобранные для бактериологического исследования кусочки лимфатических узлов и кишечной стенки перед посевом обрабатывают серной кислотой по следующему упрощенному методу. Небольшие кусочки слизистой оболочки кишечника, отделенные от мышечного слоя, помещают в стерильную ступку, закрывают стерильной пергаментной бумагой и заливают 6%-ным раствором серной кислоты на 15-25 минут, в зависимости от степени загрязнения материала.

Затем кислоту отсасывают, а материал заливают стерильным физиологическим раствором. После этого жидкость снова отсасывают, а материал тщательно растирают, смешивают с небольшим количеством физиологического раствора и высевают на казеиновую среду и среду Петраньяни. Для обработки лимфатических узлов применяют 3%-ный раствор серной кислоты с экспозицией 10-15 минут.

Через 1-2 дня после посева пробирки парафинируют. Посевы инкубируют при 38°С и после 15 дней просматривают (через лупу) для учета начального роста раз в 5 дней. На казеиновой среде первичный рост обнаруживают через 18- дней при сильном обсеменении тканей и в более поздние сроки.(до трех месяцев) из слабо обсемененных тканей.

Первичные колонии микобактерий паратуберкулеза дифференцируют по характерным особенностям их внешнего вида: плоские колонии, с неровными (в виде ломаной линии) краями; при дальнейшем росте они принимают бугристый вид и становятся мало отличимыми от колоний других микобактерий. Если в посевах развивается сливающийся (диффузный) рост, то приходится отыскивать отличительные признаки среди мелких колоний по краям культуры.

Для идентификации получаемых культур, кроме морфологии колоний, учитывают характер и длительность роста, на элективной среде, отсутствие роста на среде Петраньяни в первичных посевах. Для достоверности идентификации делают одновременно первичный посев или высевают выделенную в одной-двух генерациях культуру на казеиновую среду с экстрактом из тимофеевских бактерий (фактор роста) и без него. Возбудитель паратуберкулеза размножается только в присутствии фактора роста.

Дифференциация бактерий паратуберкулезного энтерита от туберкулезных бактерий. Основные отличительные свойства возбудителя паратуберкулезного энтерита следующие: 1) внутриклеточное гнездное расположение бактерий, громадное число которых заполняет клетки пораженных тканей; 2) культивирование возбудителя из патологических тканей удается только на элективных средах с добавлением экстракта из бактерий тимофеевки; 3) невосприимчивость лабораторных животных при заражении в дозах, применяемых при изучении туберкулезных культур.

Гистологическое исследование. Срезы готовят из кусочков кишечника и брыжеечных лимфатических узлов на замораживающем микротоме, а также залитых в целлоидин или парафин, и окрашивают гематоксилин-эозином и по Цилю - Нильсену.

В начале болезни в кишечнике, в верхней трети ворсинок, обнаруживают очаговые скопления клеток эпителиоидного типа. Такие скопления хотя и напоминают гранулемы, однако их строение отличается от гранулем, описанных при туберкулезе, сапе и других инфекционных заболеваниях, протекающих по типу специфических воспалений. Вследствие пролиферации эпителиоидных клеток ворсинки увеличиваются, сильно деформируются и часто сливаются. Некоторые рядом расположенные ворсинки подвергаются атрофии. Происходит также атрофия либеркюновых желез. Солитарные фолликулы и пейеровы бляшки не изменены.

При паратуберкулезе недостаточно выражены альтеративные и экссудативные изменения, однако пролиферативные изменения выражены резко и определяют специфику болезни. Поэтому при паратуберкулезе крупного рогатого скота, овец и коз эпителиоидные пролифераты в кишечнике рассматривают как типичные, характерные для этой болезни. В результате пролиферации эпителиоидных клеток происходит диффузное поражение слизистой оболочки кишечника. При прогрессировании болезни процесс распространяется и на подслизистый слой. В процесс вовлекаются лимфатические сосуды, по которым возбудитель проникает в брыжеечные лимфатические узлы. В последних эпителиоидные гранулемы образуются преимущественно в краевых синусах коркового слоя. В тяжелых случаях лимфоидная ткань брыжеечных лимфатических узлов полностью замещается эпителиоидными клетками.

Наряду с эпителиоидными клетками встречаются клетки гистогенного и гематогенного происхождения, среди которых чаще обнаруживают лимфоидные и плазматические клетки, гистиоциты, фибробласты, нейтрофилы и эозинофилы, а также гигантские клетки типа Лангганса.

У овец и коз в брыжеечных лимфатических узлах развиваются очаговые некрозы казеозного типа. B казеозных очагах откладывается известь и вокруг них образуется соединительнотканая капсула.

Микобактерии паратуберкулеза в окрашенных по Цилю - Нильсену срезах из кишечника и брыжеечных лимфатических узлов обнаруживают не во всех случаях, и их наличие не всегда связано с тяжестью поражения органов.

Дифференциальный диагноз. При паратуберкулезе следует исключить туберкулез, алиментарные энтериты, глистные инвазии, кокцидиоз, отравление молибденом и недостаточность меди. Туберкулез исключают аллергическим исследованием; глистные инвазии и кокцидиоз - копрологическим исследованием.

При исключении алиментарных энтеритов учитывают результаты данных анамнеза и симптоматического лечения. При недостаточности меди отмечают выпадение волос вокруг глаз и связанность походки вследствие атаксии. Симптомы отравления молибденом и недостаточности меди исчезают после введения в рацион солей указанных элементов.

Лечение. Эффективных средств лечения больных паратуберкулезом животных не разработано.

Иммунитет. Организм животного отвечает на внедрение М. paratuberculosis иммунобиологическими реакциями, устанавливаемыми аллергически и серологически. Балле и Ренжер (1926) предложили живую вакцину против паратуберкулеза. Применение ее во Франции и Англии дало положительные результаты, однако она сенсибилизирует животных к туберкулину. Поэтому ее применять не рекомендуется.

Организация профилактических и оздоровительных мероприятий. В целях охраны ферм от заноса возбудителя паратуберкулеза не допускают ввоза в них животных и фуража из неблагополучных по этой болезни пунктов. Всех вновь поступивших в хозяйство животных содержат в течение 30 дней в профилактическом карантине. Необходимо обеспечить раздельный выпас разных кп дов животных, возрастных групп и скота личного пользования. Следует содержать в надлежащем ветеринарно-санитарном состоянии пастбища, места водопоя, животноводческие помещения.

При установлении паратуберкулеза хозяйство (отделение) объявляют неблагополучным, накладывают ограничения и проводят оздоровительные мероприятия.

В хозяйстве (ферме), неблагополучном по паратуберкулезу крупного рогатого скота, животных с клиническими признаками болезни, независимо от результатов аллергического и серологического исследования, изолируют и сдают для убоя на мясо. Остальных животных исследуют на паратуберкулез в следующем порядке:

— у животных старше 18 мес исследуют сыворотку крови в РСК. Животных с положительной РСК изолируют и через 15 — 20 дней исследуют повторно серологическим методом и двойной внутрикожной пробой альттуберкулином для птиц; животных, давших положительную реакцию (РСК и аллергическую), признают больными паратуберкулезом и сдают на убой; остальных животных оздоравливаемой фермы, не имеющих клинических признаков болезни и давших отрицательные результаты при серологическом и аллергическом исследованиях, оставляют в стаде; в последующем их исследуют серологическим и аллергическим методами два раза в год (весной и осенью);

— молодняк в возрасте 10—18 мес исследуют двойной внутрикожной пробой альттуберкулином для птиц; положительно и сомнительно реагирующих на туберкулин изолируют и через 30 — 45 дней повторно исследуют аллергически; животных, давших положительную или сомнительную реакцию, сдают на убой, остальных возвращают в общее стадо.

Телят, родившихся от больных паратуберкулезом коров, сдают для убоя на мясо. Телят, родившихся от здоровых коров неблагополучной фермы, выращивают изолированно от взрослых животных. Первые 5 дней их выпаивают молозивом, а затем пастеризованным молоком и обратом. В 10—12-месячном возрасте их исследуют на паратуберкулез двойной внутрикожной пробой альттуберкулином для птиц. Здоровых телят этой группы разрешают передавать в другие хозяйства.

В неблагополучных по паратуберкулезу хозяйствах запрещают перегруппировку животных, организуют ежедневное обеззараживание доильного оборудования, молочной посуды. Проводят механическую очистку скотных дворов и территории вокруг них; навоз обеззараживают биотермическим способом.

Молоко, полученное от коров с клиническими признаками болезни, уничтожают; от коров, положительно и сомнительно реагирующих на туберкулин, — кипятят или пастеризуют: от здоровых коров неблагополучной фермы — выпускают без ограничения. Туши мяса истощенных животных утилизируют, средней и хорошей упитанности - выпускают без ограничения; пораженный кишечник и увеличенные лимфоузлы утилизируют.

Текущую дезинфекцию проводят после каждого выделения больного животного и проведения плановых серологических и аллергических исследований.

Пастбищные участки, на которых выпасались больные животные, считают благополучными по истечении одного пастбищного сезона. Пастбищные участки с кислыми почвами подвергают известкованию. Хозяйство считают оздоровленным от паратуберкулеза через 3 года после последнего случая выделения больного животного и проведения заключительных ветеринарно-санитарных мероприятий.

Ликвидацию паратуберкулеза среди овец, коз, верблюдов и других животных осуществляют путем убоя больных животных и проведения комплекса ветеринарно-санитарных мероприятий.

Вопросы для самопроверки:

1. Определение болезни.

2. Характеристика возбудителя болезни.

3. Клинические признаки заболевания.

4. Методы лабораторной диагностики.

5. Лечение животных при паратуберкулезе.

6. Иммунитет при паратуберкулезе.

7. Организация профилактических и оздоровительных мероприятий при паратуберкулезе.

ознакомить слушателей с кампилобактериозом и методами Цель занятия:

Кампилобактериоз (Campylobacteriosis, вибриоз) – инфекционная болезнь, преимущественно крупного рогатого скота и овец, проявляющаяся поражением половых органов, частыми перегулами, бесплодием, массовыми абортами и рождением нежизнеспособного приплода.

Возбудитель болезни - Campylobacter fetus – полиморфный микроорганизм, имеющий вид короткой изогнутой палочки в виде запятой, летящей чайки или буквы S. Реже встречаются короткие спириллы в 2-5 завитков. Кампилобактерии имеют длину 0,5-5 мкм, ширину 0,2-0,8 мкм. Микробы подвижны, спор и капсул не образуют, грамотрицательные (в старых культурах при диссоциации могут быть грамположительными), хорошо окрашиваются всеми анилиновыми красками (фуксином Циля 1:5, генцианвиолетом, спиртовым раствором метиленовой синьки), по Романовскому-Гимза и серебрением по Морозову. При микроскопии обнаруживаются в висячей капле. Короткие формы имеют жгутики длиной от 5до 15-30 мкм на одном или обоих концах тела.

Кампилобактерии растут на питательных средах только при пониженном содержании кислорода (10 - 20% воздуха в эксикаторе замещают углекислотой).

Для культивирования микробов используют полужидкие и плотные питательные среды: полужидкий 0,15 -0,20 %-ный мясо-пептонный печеночный агар (ПЖА), 2 -3%-ный МППА, среду Китт-Тароцци без масла, агар Мартена, сафраниножелезоновобиоциновую среду (СЖН) А. В. Голикова и др. Для обогащения в питательные среды добавляют 5-10% дефибринированной крови крупного рогатого скота, овец, кроликов или сыворотки крови лошади; аминопептид-2, экстракт сухих дрожжей, тиогликолат натрия. При посеве на ПЖА через 36-48 ч в пробирке у самой поверхности среды появляется серовато-голубоватое кольцо. Никогда не бывает газообразования или помутнения среды. На плотных сре дах рост кампилобактерий наблюдается через 72-96 ч. По Бринеру и др. (1962), различают 4 формы колоний: S-форма (гладкие), М-форма (мукоидные), Rформа(шероховатые) и гладкостекловидные. Основные дифференциальнодиагностические характеристика видов сем. Spirillaceae представлены в таблице 60.

Основным возбудителем кампилобактериоза крупного рогатого скота является С. fetus subsp. fetus - облигатный паразит, вызывающий бесплодие и аборты у коров, передающийся половым путем. Его можно обнаружить во влагалищной слизи больных коров, в сперме и препуциальном мешке быков, в плаценте и тканях абортированных плодов. Микроб не размножается в желудочнокишечном тракте животных и человека.

Таблица 60 - Дифференциально-диагностические характеристики видов сем. Spirillaceae venerealis, тип I) (V. fetus ovis, тип II) вызывая у них массовые аборты. Его можно изолировать из плаценты, содержимого желудка абортированного плода, из желудочно-кишечного тракта и желчи овцематки. Передается алиментарным путем.

Кампилобактерии патогенны также для свиней, коз, кур и человека, 7 -15дневных куриных эмбрионов, беременных морских свинок и крольчих, золотистых хомяков и белых мышей. Патогенные свойства их связаны с муциназной активностью и способностью выделять эндотоксин. Остальные виды бактерий не патогенны для животных.

Культуры С. fetus subsp. fetus выделяют каталазу, не образуют сероводород, не растут на ПЖА с 1 % глицина, 3,5 % хлорида натрия, 8 % глюкозы; не разлагают 0,2 %-ный селенит натрия, растут на ПЖА с 10% желчи; не ферментирует сахара и спирты, не свертывают молоко, не разжижают желатин, не развиваются на агаре в аэробных условиях, не дают реакцию Фогес - Проскауера.

Реакция на гидропероксидазу и индофенолоксидазу положительная. Основное биологическое отличие С. fetus subsp. intestinalis - способность расти на МПА с % глицина.

У кампилобактерий имеются О- и Н-антигены. Различие в антигенном строении используют для серологического и люминесцентно-серологического типирования их.

Устойчивость. С. fetus - нестойкий микроб, в воде, сене, навозе, почве погибает при 6 -20°С через 10 - 20 дней; в содержимом желудка, печени, котиледонах абортированного плода сохраняется до 20 - 50 дней. Чувствителен к высоким температурам и антибиотикам. Жизнеспособность кампилобактерий резко снижается при инфицировании плода Е. coli, E. paracoli, Bact. proteus, Bact.

pyocianeum, St. aureus, споровой и др. микрофлорой. 2%-ные р-ры фенола, креолина или формалина убивают возбудителя через 15 - 30 с, а раствор едкого натра за 1-2 мин. Раствор калия перманганата 1:1000 вызывает гибель микроба только через 30-40 мин.

Эпизоотологические данные. В естественных условиях заболевание наблюдается у крупного рогатого скота и овец, независимо от породы. Регистрируется в течение всего года, но чаще в стойловый осенне-зимний период.

Основной источник возбудителя инфекции при кампилобактериозе крупного рогатого скота – зараженные быки-производители, у которых микроб очень долго (фактически пожизненно) сохраняется в препуциальном мешке, семенниках, придатках и выделяется со спермой, препуциальной слизью и секретом предстательной железы. Опасны также больные коровы и нетели, выделяющие кампилобактерий в течение 3 - 10 мес с истечениями из половых органов, с мочой и молоком, а при аборте - с абортированным плодом, плодными оболочками и околоплодными водами.

Передача возбудителя инфекции происходит в основном половым путем при естественном спаривании или искусственном осеменении. Установлено, что при естественном спаривании заражаются 40-90%, а при искусственном осеменении-30 -70% животных.

Кампилобактерии могут попасть во влагалище коровы через подстилку, загрязненную выделениями больных. Определенную роль в передаче возбудителя играют непродезинфицированные акушерские инструменты, загрязненная выделениями одежда обслуживающего персонале и др. Неполовозрелые телки и даже, телята-молочники могут заболевать кампилобактериозом. Это указывает на возможность контактного и алиментарного заражения их от больных коров. В благополучные хозяйства возбудитель болезни заносится при ввозе зараженных животных или при искусственном осеменении коров спермой быковкампилобактерио-носителей (обработка спермы антибиотиками и другими антимикробными средствами не снижает угрозу заражения самок).

Источником возбудителя кампилобактериозной инфекции овец являются абортировавшие овцематки, у которых микробоносительство продолжается до - 1,5 года. Заражение здоровых животных происходит алиментарным путем - при употреблении корма или воды, загрязненных околоплодными водами, влагалищными истечениями. Передача возбудителя баранами при случке не доказана.

В неблагополучных отарах кампилобактерии сохраняются в желчи и печени баранов. В организме ягнят они могут сохраняться 4 мес (М. А. Лучко, 1972), однако роль ягнят в распространении болезни не ясна. Миграция С. fetus subsp.

intestinalis от крупного рогатого скота к овцам и наоборот не доказана.

Причиной возникновения кампилобактериоза овец обычно является ввод зараженных животных в благополучное хозяйство. Переносчиками возбудителя болезни могут быть свиньи, птицы, собаки, лисицы, поедающие инфицированные последы и плоды.

При эпизоотологическом обследовании свежего очага выявляется увеличение числа многократных осеменений, удлинение фазы покоя в половом цикле и продолжительности сервис-периода. Во время острого течения болезни временное бесплодие может быть у 20 - 55% коров и 60 -64% телок. Часть зараженных коров абортирует. Аборты кампилобактериозной этиологии составляют у них в среднем 10-12% (при широком распространении болезни в стаде - до 30 Указанные явления продолжаются обычно один сезон, затем животные выздоравливают, и болезнь как бы затухает. Это связано с появлением у животных неблагополучного стада иммунитета.

Коровы могут заражаться в 0,5 - 2% случаев С. fetus subsp. intestinalis. Однако болезнь не получает широкого распространения и регистрируется в виде спорадических случаев.

Клинические признаки. Кампилобактериоз крупного рогатого скота проявляется клинически в виде симптомокомплекса, в котором ведущими признаками являются вагиниты, задержание последов, эндометриты, сальпингиты и оофориты. Указанные явления обусловливают нарушение функции воспроизводства, что приводит к увеличению яловости.

Аборт может наступить в любой стадии стельности, но чаще (82,5 %) на 4м мес (А. В. Голиков, 1978). Бывают случаи прерывания беременности и в первые 2 мес беременности, что обычно не замечается обслуживающим персоналом.

Лишь повторная течка в отдаленные сроки после первого осеменения указывает на это. После аборта почти всегда задерживается послед, обостряется вагинит, появляются признаки метрита. Могут рождаться очень слабые телята, которые заболевают в первые 2 - 4 дня жизни и погибают на 3 -7-й день.

У некоторых коров и телок через 6-15 дней после заражения повышается температура тела, появляется беспокойство, отмечается набухание и покраснение слизистой оболочки влагалища, обильно выделяется слизь, возникает катаральный и катарально-узелковый вагинит. Животное стоит сгорбившись, хвост приподнят, на клиторе и нижней части влагалища скапливаются мутные, с примесью гноя клейкие выделения, которые засыхают в виде темно-бурых корочек.

Через 15 - 20 дней на стенке влагалища ближе к клитору, шейке матки обнаруживаются кровоизлияния размером от просяного зерна до горошины, у некоторых коров отмечается выделение слизи с кровью. Позднее, через 40 - 60 дней, на месте воспаления выявляют гранулярный вагинит (у 53 % коров и 75 % телок), вестибулит и цервицит. Через 3 - 6 мес клинические признаки воспаления исчезают.

У быков нет выраженных симптомов болезни, за исключением покраснения слизистой оболочки препуция и полового члена, а также выделений обильной слизи в течение первых 2 - 3 дней. В дальнейшем указанные признаки исчезают, но быки остаются пожизненными носителями кампилобактерий.

Главный признак кампилобактериоза овец – массовые аборты во второй половине суягности. У некоторых животных за 3 - 5 дней до выкидыша появляются анорексия, вялость, отечность и покраснение срамных губ, выделения из половых органов. Если занос возбудителя в отару происходит в предокотный период, то абортируют от 10 – 20 % до 60 – 70 % овцематок. После аборта часто отмечают повышение температуры тела до 41,2 -41,4 °С, истечение из влагалища коричневой жидкости, метрит. При наслоении вторичных инфекций в 3 – 10 % случаев возможен летальный исход.

Патоморфологические изменения при кампилобактериозе крупного рогатого скота и овец в общем аналогичные: матка отечная, в ее рогах – очаги воспаления. Карункулы увеличены, сочные, бледные, иногда с очагами воспаления легко отделяются от плодной плаценты.

Плацента отечная, покрыта желтоватыми хлопьями творожистой консистенции, которые легко смываются водой. Изредка на ней находяточаги некроза и кровоизлияния, кальцинацию, иногда разращения. Слизисто-гнойные массы могут быть и на коже плода.

У абортированных плодов обнаруживают отеки отдельных участков кожи, подкожной клетчатки и мышц, кровоизлияния в грудной и брюшной полостях и в паренхиматозных органах. Сосуды инъецированы. Иногда скапливается кровянистый выпот в грудной, брюшной и перикардиальной полостях, образуются фибринозные наложения на внутренних органах и стенках полостей. Содержимое сычуга плодов обычно разжиженное, мутное, коричневого цвета с примесью серовато-белых хлопьев. В печени имеются серо-желтые очаги некроза. Часть плодов мумифицирована.

Лабораторная диагностика. Для бактериологического исследования на кампилобактериоз в ветеринарную лабораторию от коров, нетелей и овцематок направляют абортированный плод (целиком с плодовыми оболочками или от крупных плодов голову, желудок, печень, легкие), плаценту или часть ее. В случае непригодности плода, плодовых оболочек и плаценты для исследований в лабораторию направляют слизь из шейки матки, стерильно взятую в первые 3- дня после аборта (при отсутствии гнойных выделений из матки) или в период охоты. Слизь берут также от животных, у которых наблюдается расстройство полового цикла (в период охоты). От быков станций (пунктов) по искусственному осеменению животных направляют препуциальную слизь и сперму, а от быков, используемых для естественного спаривания – препуциальную слизь и секрет придаточных половых желез, взятые с соблюдением стерильности.

Сперму от быков берут при помощи искусственной вагины. Перед этим быка-донора моют или обтирают влажной суконной тряпкой, помещение и инструменты обеззараживают.

У быков, используемых для естественного спаривания, получают секрет придаточных половых желез путем массажа через прямую кишку. Перед получением спермы (секрета) и препуциальной слизи полость препуция предварительно не обрабатывают; от животных, убитых с диагностической целью, в лабораторию посылают влагалище, матку, лимфоузлы тазовой полости.

Для бактериологического исследования пробы слизи из половых органов животных берут стерильными марлевыми тампонами при помощи специальных инструментов конструкций Павловского, Жабоедова, Казеева, а также применяемого – при искусственном осеменении коров шприца-катетера или полистироловой пипетки, соединенной со шприцем.

Примечание. При исследовании быков обработку полости препуция бактерицидными средствами прекращают за 30 дней до исследования.

Взятый для исследования материал доставляют в ветеринарную лабораторию нарочным, обязательно в закрытой таре со льдом.

При этом плоды или их органы, плаценту доставляют в возможно короткий срок - в течение первых суток после аборта. В холодное время года плоды рекомендуется замораживать; из проб слизи половых органов, взятых от коров и быков в хозяйствах, ветеринарный врач делает на месте посевы на питательные среды с соблюдением стерильности. При невозможности высева на месте тампоны со слизью помещают в пробирки с 3-5 см3 стерильного физиологического раствора и доставляют в лабораторию не позднее чем через 6 часов после взятия;

на станциях (пунктах) по искусственному осеменению животных высевы из полученных от быков проб препуциальной слизи и спермы должен проводить на месте ветврач ветеринарной лаборатории.

Для серологического исследования на кампилобактериоз в ветеринарную лабораторию направляют пробы влагалищной слизи, полученной от телок, используемых для биопробы, а также от коров (в стадах – при подозрении на вибриоз), у которых наблюдается расстройство полового цикла. Слизь берут от животных, не имеющих патологических выделений из влагалища (гной, примесь крови и т. п.), в период полового покоя животных.

Для получения слизи используют прибор, состоящий из стеклянной хорошо отполированной с обоих концов трубки диаметром 1-1,4 см и длиной 40 см и марлевого тампона (используют прямоугольный кусок марли со сторонами 10- см), к середине которого привязывают прочную нитку длиной 60-70 см. Нитку пропускают через трубку и втягивают с ее помощью тампон внутрь трубки. Свободный конец нитки наматывают снаружи на трубку и оба отверстия трубки закрывают бумажными колпачками. Смонтированные приборы завертывают в бумагу по 10-15 штук, обвязывают шпагатом и стерилизуют в автоклаве в течение 30 минут при давлении 1 атм.

Перед введением тампона во влагалище наружную часть половых органов обмывают теплой водой с мылом. Трубку, освобожденную от обертки, осторожно вводят во влагалище до упора в его переднюю стенку. В трубку вводят металлический поршень, имеющийся в наборе, и с его помощью выталкивают тампон.

Трубку и поршень извлекают, а тампон с ниткой оставляют во влагалище на 40минут.

Через указанный срок тампон извлекают за нитку из влагалища, предохраняя его от загрязнения. Тампон сразу погружают на дно пробирки, в которую предварительно наливают 5 см3 стерильного формалинизированного (0,3%) 3%ного раствора хлористого натрия, а нитку отрезают. Пробирку закрывают резиновой стерильной пробкой и отправляют в лабораторию в тот же день или сохраняют на льду до утра следующего дня. Тампоны, загрязненные фекалиями, гнойными массами или кровью, для исследования непригодны.

Бактериологическая диагностика кампилобактериоза. Для постановки бактериологического диагноза на кампилобактериоз требуется выделение культуры возбудителя этой инфекции – Vibrio fetus venerealis или Vibrio vetus intestinalis.

Возбудитель кампилобактериоза подвижен, по Граму не красится, хорошо окрашивается всеми анилиновыми красками и весьма четко фуксином Циля в разведении 1:5 (1-2 минуты). В мазках из абортированных плодов и другого патматериала вибрионы имеют вид запятой, летящей чайки, S-образной формы.

При исследовании материала, полученного от давно инфицированных животных или после их лечения, могут быть обнаружены диссоциированные формы вибрионов в виде длинных спирилл, малоизвитых нитей и кокковидных форм, в 2- раза мельче обычных кокков.

Для получения культуры возбудителя кампилобактериоза используют полужидкие и плотные питательные среды, в том числе полужидкий 0,15-0,2%-ный мясо-печеночный пептоиный агар (ПЖА), 2-3%-ный мясо-печеночный пептонный агар (МППА), среду Китт - Тароцци без масла, агар Мартена и др. (при изготовлении ПЖА и МППА вместо мясного отвара используют экстракт мышцы сердца крупного рогатого скота).

Для обогащения в питательные среды добавляют 5-10% дефибринированной крови крупного рогатого скота, овец, кроликов или сыворотку крови лошади, аминопептид-2 (5-10%), экстракт сухих дрожжей (5 г на 1 л среды), тиогликолат натрия (0,5 г на 1 л среды).

При исследовании абортированных плодов посевы делают из содержимого сычуга, легких, печени, измененных участков плаценты, головного мозга, амниотической жидкости в 5 пробирок с ПЖА из каждого органа. Сперму или секрет придаточных половых желез от быков, слизь из шейки матки или препуция высевают в 5 пробирок с ПЖА (из каждой пробы). Рекомендуется также делать высевы и на плотные среды.

Первичные посевы из спермы (секрета), слизи проводят обычным способом или дробно (материал вносят в пробирку с ПЖА, перемешивают и из этой пробирки засевают 5 пробирок, которые инкубируют), или «с подсосом» (после внесения части материала на дно первой пробирки с ПЖА в пастеровскую пипетку с оставшимся материалом засасывают небольшое количество стерильной среды у другой стенки пробирки, пипетку извлекают и засевают таким же образом вторую пробирку и т. д.).

При обработке спермы (секрета), слизи в лаборатории материал перед посевом обрабатывают одним из следующих способов: а) центрифугированием в течение 10 минут при 1000 об/мин, с последующим высевом надосадочной жидкости; б) фильтрацией через мембранные фильтры № 5, № 2, № 5.

Мембранные фильтры готовят двумя способами.

Первый способ, фильтры стерилизуют кипячением в дистиллированной воде два раза-по 10 минут со сменой воды. Колбу Бунзена и фильтр Зейтца стерилизуют обычным способом. Мембранные фильтры закладывают в фильтр Зейтца в стерильных условиях в следующем порядке: № 5, № 2, № 5 (фильтр № 5 при этом способе стерилизации можно заменить стерильной фильтровальной бумагой).

Второй способ. Колбу Бунзена и фильтр Зейтца стерилизуют обычным способом, затем в фильтре Зейтца закладывают нестерильные мембранные фильтры и весь прибор (в перевернутом виде, погружая в воду мембранные фильтры) кипятят в дистиллированной воде дважды по 10 минут со сменой воды.

Посевы помещают в эксикатор или микроанаэростат и культивируют в условиях пониженного содержания термостате при 37°С в течение 6дней с просмотром через каждые три дня. При посеве «с подсосом» начиная с третьего дня пробирки, в которых отсутствует нежного мелкоросинчатого налета или отдельных голубоватых колоний (заметных через лупу).

При бактериологическом исследовании первичного материала выделенные культуры кампилобактерий часто бывают загрязнены посторонней микрофлорой. Получение чистой культуры является необходимым условием для дифференциации патогенных и сходных с ними других видов вибрионов.

Для очистки загрязненных посторонней микрофлорой культур применяют следующие методы: а) заражение беременных морских свинок путем введения им в брюшную полость или во влагалище 0,5 мл исследуемой полимикробной культуры с последующим высевом материала из абортированных плодов. Если в течение 10-12 дней аборта не происходит, свинок убивают и высевы делают из эмбрионов и полости матки; б) рассев загрязненной культуры на чашки Петри с плотной средой с последующим отсевом отдельных колоний возбудителя на ПЖА в пробирках; в) посев культуры в пастеровские пипетки под слой полужидкой питательной среды; г) посев культур на ПЖА «с подсосом»; д) заражение трех крупных небеременных самок белых мышей внутривлагалищно в течение двух дней подряд с последующим их убоем на восьмой день. Для посева на ПЖА используют кусочки рогов матки; заражение трех самок белых мышей внутрибрюшинно в дозе 0,5 см3 культуры с последующим убоем их на 3-4-й день и высевом крови из сердца, а также материала из печени, селезенки и рогов матки; е) фильтрацию смешанных культур через мембранные фильтры.

Для обнаружения кампилобактерий в патологическом материале и смешанных культурах, а также для определения принадлежности их к тому или иному типу применяют метод флуоресцентной микроскопии.

Дифференциацию вибрионов, выделенных от крупного рогатого скота, по видам и типам проводят по культуральным, биохимическим и серологическим свойствам возбудителя, пользуясь при этом таблицей. Для дифференциации пригодны только чистые культуры.

Для определения зараженности быков-производителей вибрионами проводят биопробу. На каждого быка, подвергавшегося лечению, в случаях, указанных в пунктах 7-11 инструкции, берут из благополучного по кампилобактериозу стада одну здоровую половозрелую не случавшуюся и не осеменявшуюся искусственно телку. Допускается использование телок из числа выбракованных, не имеющих племенной ценности. Тёлку предварительно исследуют на вибриоз двукратно с интервалом в две недели (по РАВС).

Для определения зараженности быков при вводе их в хозяйство и в случаях, указанных в пунктах 9 и 18 инструкции, допускается использование одной телки на 2-3 быка (групповая биопроба).

Для проведения биопробы берут у исследуемого быка с интервалом 6-8 часов две пробы спермы в одну колбу и три смыва из препуция в другую колбу.

Смыв из препуция делают путем вливания в препуциальный мешок 100-150 см стерильного физиологического раствора через сифон, с массажем заднего свода препуция.

Смывы из препуция центрифугируют до получения осадка, который добавляют к неразбавленной сперме.

Полученные на искусственную вагину пробы спермы и смывы из препуция хранят не более 24 часов в холодильнике при температуре 0-4°С, их используют для искусственного осеменения предназначенных для биопробы телок.

Сперму и смывы от быков берут через 30 дней после лечения. В этот период препуциальную полость быка не разрешается обрабатывать какими-либо бактерицидными препаратами.

Осеменение телок лучше проводить в период раскрытия шейки матки. При отсутствии течки ее вызывают искусственно путем введения телкам подкожно 2,5 тыс. ЕД СЖК или 2 см3 1%-ного синестрола.

Телок осеменяют смесью спермы и центрифугата смыва слизи из препуция в общем количестве 10-20 см3.

Биопробу проводят следующим образом: а) осемененную искусственно телку убивают на 12-15-й день после осеменения, а затем подвергают бактериологическому исследованию на кампилобактериоз шейку, тело и рога матки, а также яйцеводы и яичники. При получении отрицательного результата бактериологического исследования этих органов от убитой телки быка, от которого были взяты сперма и смыв из препуция, признают здоровым; б) у телок трижды, на 5, 15 и 25-й дни после осеменения берут слизь из шейки матки и исследуют ее бактериологическим методом. Кроме того слизь из шейки матки исследуют также в момент течки, если она возникает у телки в период исследований.

Если после осеменения телки проведенные исследования дают отрицательный результат, быка признают здоровым, а телку в этом случае возвращают в стадо.

При получении положительного результата бактериологического исследования цервикальной слизи телки признают быка больным, а телку подвергают убою.

Если получен положительный результат при постановке групповой пробы, то проводят индивидуальную проверку каждого быка в порядке, как указано выше.

Серологическая диагностика кампилобактериоза. Слизь для исследования РА берут из шейки матки от коров и половозрелых телок.

Пробирки с тампонами оставляют на 12-14 часов в холодильнике при температуре от 0 до 4°С и на льду. Затем тампоны хорошо отжимают пинцетом, полученную жидкость центрифугируют в течение 20-30 минут при 2500 об/мин или фильтруют через бумажные фильтры.

Реакцию ставят в четырех разведениях, при этом в пробирке второго, третьего и четвертого рядов предварительно наливают 3%-ный раствор поваренной соли по 0,5 см3, содержащий 0,3% формалина. Профильтрованный экстракт разливают в первую и вторую пробирки по 0,5 см3. Содержимое второй пробирки перемешивают и 0,5 см3 переносят в третью пробирку, а из третьей - в четвертую. Из последней пробирки 0,5 см3 смеси удаляют. Далее во все пробирки вводят по 0,5 см3 вибриозного антигена для PABС разведенного тем же раствором поваренной соли в соотношений 1:9, пробирки встряхивают и ставят в термостат при температуре 36-37°С на 24 часа.

Одновременно ставят контроли антигена: а) на самоагглютинацию – берут 0,5 см3 разведенного для реакции антигена в пробирку, добавляют в нее 0,5 см формалинизированного (0,3% формалина) 3%-ного раствора поваренной соли; б) на активность – 0,5 см3 разведенного антигена добавляют к позитивной сыворотке типа I в разведениях 1 : 50, 1 : 100, 1 :200, 1 :400; в) на специфичность – в пробирку вводят 0,5 см3 антигена в рабочем разведении и 0,5 см3 нормальной сыворотки в разведениях 1 : 100 и 1 : 200.

Через 24 часа пробирки извлекают из термостата, выдерживают 3 - 6 часов при комнатной температуре и учитывают реакцию. Вначале учитывают показания контролей антигена. Отрицательная реакция в контролях «а» и «в» и положительная в контроле «б» подтверждают правильность постановки реакции.

Учет результатов РАВС проводят по следующей схеме: + + + +, полное просветление столбика жидкости и образование осадка, при легком встряхивании разбивающегося на хлопья; + + + наличие слабой опалесценции жидкости и образование осадка, разбивающегося на хлопья при осторожном встряхивании; + + неполное просветление (50%) жидкости и. образование небольшого осадка, также разбивающегося на хлопья; + отсутствие или незначительное просветление жидкости при наличии небольшого осадка, при встряхивании которого заметны отдельные хлопья; - полное отсутствие просветления жидкости, может быть незначительный осадок, при встряхивании которого образуется равномерная муть.

Оценка реакций: положительная – агглютинация интенсивностью + + + + или + + + во всех пробирках или только в первой или второй; сомнительная – агглютинация интенсивностью + + или + в первой и во второй пробирках; отрицательная – отсутствие агглютинации во всех четырех пробирках или при наличии агглютинации только в первом разведении.

Кампилобактериозные агглютинирующие моноспецифические сыворотки используют для типирования штаммов кампилобактерий V. fetus venereallis, V.

fetus intestinalis, V. bubulus, выделенных от крупного рогатого скота и овец; для контроля антигена методом реакции агглютинации при исследовании влагалищной слизи и сыворотки крови абортировавших коров.

Кампилобактериозные агглютинирующие моноспецифические сыворотки имеют вид прозрачной, слегка опалесцирующей жидкости без осадка или с небольшим белым осадком, легко разбивающимся при встряхивании. Сыворотки фасуют в ампулы емкостью 1 см3. Ампулы, лишенные этикеток, с трещинами, посторонними примесями выбраковывают. Сыворотки могут быть использованы тольк в пределах срока годности, указанного на этикетке. Кампилобактериозные агглютинирующие моноспецифические сыворотки хранят в темном сухом помещении при температуре 4 – 8 оС.

Подготовка штаммов для типирования. Штаммы, выделенные из абортированного плода или другого материала, в целях адаптации к питательной среде пересевают в первых двух-трех генерациях каждые три дня, а при необходимости поддержания штамма пересевают в дальнейшем еженедельно.

Для культивирования штаммов используют среду следующего состава:

мясного отвара 25%, печеночного настоя 25%, воды 50%. К этому количеству добавляют пептона 1%, поваренной соли 0,5% и агара 0,2% с добавлением 10% аминопептида-2. При плохом росте культур рекомендуется добавлять в среду 0,03% тиоглеколевой кислоты, или 0,03% тиогликолата натра, или 0,02% Lцистеина. Рекомендуется также использовать полужидкую среду Мартена.

Культуры выращивают в термостате при 37°С в эксикаторах или микроанаэростатах с замещением 10% содержащегося в них воздуха углекислым газом. После загрузки посевов в микроанаэростаты из них предварительно откачивают воздух до отметки 0,7, а затем добавляют углекислоту до отметки 0,5.

Адаптированные культуры вибрионов растут на мясо-печеночном полужидком агаре или на полужидкой среде Мартена (без добавления цистеина, аминопептида-2, тиогликолата натра или тиогликолевой кислоты) в виде серобелого кольца непосредственно под поверхностью среды без расслоения. После 2 - 3-суточного выращивания пробирки с культурами заливают парафином и хранят в темном шкафу при комнатной температуре.

Для получения антигена в количестве, требующемся для постановки РА с моноспецифическими сыворотками, адаптированные культуры исследуемого штамма высевают на чашки Петри на плотную среду следующего состава: мясной воды 25%, печеночного настоя 25%, воды 50%; в эту среду добавляют: пептона 1%, поваренной соли 0,5% и агара 2 - 3%. Среду стерилизуют при 115°С в течение 30 минут, охлаждают до 65 - 70°С, после чего к ней добавляют 20% стерильного обезжиренного молока или 1.0% аминопептида-2 или 10% дефибринированной стерильно взятой крови вола или барана.

Чашки Петри с указанной средой засевают 2 - 3-суточной культурой, выращенной на полужидкой среде в количестве 0,3 - 0,5 см3 и выдерживают в термостате в условиях, указанных в пункте 5, в течение 2 - 3 суток. Затем культуру проверяют на чистоту. Незагрязненный рост смывают формалинизированным (0,3%) стерильным физиологическим раствором. Смыв культуры дважды промывают на центрифуге при 3000 об/мин формалинизированным физиологическим раствором, суспензируют до концентрации 1 млрд микробных тел в 1 см по оптическому стандарту мутности и используют в качестве антигена для постановки РА с тремя моноспецифическими и двумя нормальными сыворотками кроликов.

Примечание. Антиген для типирования штамма может быть получен также путем использования культуры вибрионов на полужидкой среде. Для этого 2 - 3суточную культуру, выращенную в условиях, указанных в пункте 5, суспензируют в физиологическом растворе (в каждую пробирку с культурой вносят 1 - см3 физиологического раствора с 0,3% формалина) отсасывают в стерильную пробирку. Суспензию дважды промывают центрифугированием с использованием формалинизированного физиологического раствора, после чего микробный осадок разводят до концентрации 1 млрд. микробных тел в 1 см3.

Техника постановки реакции агглютинации в пробирках. Готовят последовательные разведения каждой из трех моноспецифических сывороток в 3%-ном растворе поваренной соли с добавлением 0,3% формалина: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200. Затем в каждую пробирку с указанными разведениями моноспецифических сывороток добавляют по 0,5 см3 одномиллиардной проверяемой антигенной суспензии кампилобактерий. Контролями реакции служат: нормальная кроличья сыворотка в разведениях: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200 с фабричным антигеном;

проверяемая суспензия, фабричный антиген с 3%-ным раствором поваренной соли, с содержанием 0,3% формалина.

После розлива компонентов пробирки тщательно встряхивают и помещают в термостат при 37°С до следующего дня, а затем их выдерживают 3 - 4 часа при комнатной температуре и учитывают результаты реакции.

При наличии положительной реакции с моноспецифичесхой сывороткой одного типа и отсутствии реакции с моноспецифическими сыворотками остальных двух типов исследуемый штамм относят к тому типу, с которым получен положительный результат. Для подтверждения оценки опыт повторяют с последовательно удваивающимися разведениями моноспецифической сыворотки, гомологичной проверяемому штамму, до ее предельного титра.

При получении положительной реакции с двумя моноспецифическими сыворотками, что может иметь место при выделении атипичных или диссоциированных штаммов, опыт повторяют с обеими моноспецифическими сыворотками, агглютинировавшими проверяемую суспензию вибрионов, применяя более высокие раз ведения с целью определения высоты титра каждой сыворотки. Типовая принадлежность проверяемого штамма устанавливается по той моноспецифической сыворотке, которая агглютинирует микробную суспензию в более высоком титре.

Результаты реакции признают специфическими, если в контрольных пробирках (нормальные сыворотки и 3%-ный раствор поваренной, соли с проверяемой суспензией и фабричным антигеном) агглютинация отсутствует.

Результаты реакции оценивают по степени просветления столбика жидкости и характеру образовавшегося осадка. В случае полного просветления столбика жидкости и образования рыхлого осадка, разбивающегося при осторожном встряхивании на мелкие хлопья, реакцию считают положительной. При неполном просветлении жидкостп и наличии оформленного осадка, разбивающегося при встряхивании в мелкие хлопья, реакцию считают сомнительной. При отсутствии просветления жидкости и осадка или образовании незначительного осадка, превращающегося при встряхивании в равномерную муть, реакцию считают отрицательной.

Техника постановки реакции агглютинации на стеклянной пластинке. Реакцию агглютинации на стеклянной пластинке применяют с целью ориентировочной идентификации проверяемого штамма. Для постановки реакции используют пластинку из чистого обезжиренного стекла размером 4x12 см. Восковым карандашом наносят на пластинку поперечные линии, отстоящие от края пластинки и друг от друга на 4 см. В первые три клетки вносят по капле моноспецифической сыворотки соответственно I, II и III типов в разведении 1:50 (в первую клетку сыворотку типа I, во вторую - сыворотку II типа и т. д.). В последнюю четвертую клетку вносят каплю физиологического раствора. Затем в каждую клетку добавляют по полной петле 2-суточной культуры проверяемого штамма, выращенной на полужидкой среде, пластинку слегка подогревают и просматривают в темном фоне.

Положительная реакция характеризуется появлением агглютинации в виде образования мелких комочков и хлопьев. При отрицательной реакции жидкость остается равномерно мутной.

Дифференциальный диагноз. Кампилобактериоз по клиническим признакам очень сходен с бруцеллезом и трихомонозом, при которых также отмечают увеличение количества бесплодных животных и вагиниты. Однако при бруцеллезе очень редко только ранние аборты и гнойные метриты у коров. Яловость при бруцеллезе и трихомонозе обычно связана с абортами, при кампилобактериозе очень часто бесплодными являются впервые осемененные телки.

При подозрении на кампилобактериоз овец необходимо исключить также сальмонеллез и хламидийный аборт. Принимают во внимание, что при сальмонеллезе бывают не только аборты у овцематок, но и заболевание ягнят, ярок и взрослых баранов с признаками поражения желудочно-кишечного тракта, легких и суставов. Хламидийный аборт наблюдают за 2 - 3 недели до окота. Отмечают рождение нежизнеспособного молодняка. В мазках из тканей плаценты, маточного секрета, перитонеальной или плевральной жидкости обнаруживают элементарные тельца.

Лечение. Быков, зараженных С.fetus subsp.fetus, лечат в 2 курса (по 4 дня) с интервалом 5— 6 дней. При первом курсе в препуциальный мешок после предварительной обработки антисептическими растворами вводят по 1 млн. ЕД стрептомицина и пенициллина, эмульгированных в 50—60 см3 растительного масла или рыбьего жира; внутримышечно — 2 раза в сутки пенициллин и стрептомицин на 0,5 % р-ре новокаина в дозе по 4 тыс. ЕД каждого антибиотика на кг массы животного. При втором курсе внутримышечно дважды в сутки вводят окситетрациклин в дозе 5 тыс. ЕД на 1 кг, а в препуциальную полость — 5 %ную эмульсию фуразолидона. Через месяц после окончания лечения сперму и препуциальную слизь быков трехкратно (с интервалом в 10 дней) исследуют бактериологическим методом. При отрицательном результате исследования быков признают здоровыми.

Больным коровам и нетелям ежедневно в течение 4 дней подряд вводят в полость матки по 1 млн. ЕД пенициллина и стрептомицина, внутримышечно — стрептомицин в дозе 4 тыс. ЕД на 1 кг в сутки. Дляспринцевания влагалища применяют растворы.фурациллина 1:5 000 или риванола 1:1000.

Для лечения телят А. И. Нефедьев и др. (1969) рекомендуют с первой дачей молозива задавать внутрь бигумаль по 0,15 г 2 раза в день, а последующие дня — раз в сутки. Одновременно вводят внутримышечно норсульфазол в виде 20 %-ного р-ра по 2 см3 3 раза в день.

Для местного лечения овец, больных кампилобактериозом, применяют стрептомицин, пенициллин, бициллин-3 и тетрациклин. В течение 3 — 5 дней в полости матки ежедневно вводят один из указанных антибиотиков, эмульгированных в стерильном растительном масле, из расчета 2 млн. ЕД антибиотика в см3 масла. С целью общего лечения внутримышечно овцам вводят стрептомицин или окситетрациклин по 4 тыс. ЕД на 1 кг массы животного 2 раза в день в течение 4 дней подряд.

Иммунитет. Выраженный приобретенный иммунитет установлен у овец.

После переболевания они заболевают второй раз очень редко. Это наблюдение послужило основанием для создания вакцины (М. А. Лучко, 1974). У крупного рогатого скота иммунитет слабее. Накопление агглютининов в диагностическом титре во влагалищной слизи и сроки их выявления подвержены значительным колебаниям.

Организация профилактических и оздоровительных мероприятий.

Племенных животных, особенно быков-производителей, следует приобретать только в заведомо благополучных по кампилобактериозу хозяйствах. В период 30-дневного профилактического карантина быков трехкратно (с интервалом дней) проверяют бактериологически. На станциях искусственного осеменения быков исследуют на кампилобактериоз один раз в 6 мес, а сперму обрабатывают антибиотиками.

Если болезнь установлена, то станцию (племпредприятие) и хозяйство (ферму, стадо) объявляют неблагополучным по кампилобактериозу. Запрещают ввод и вывод скота, обеспечивают изолированное содержание молодняка.

Клинически больных коров, телок и быков лечат. Абортировавших животных изолируют. Плоды, последы и загрязненную подстилку сжигают. Помещение дезинфицируют 2 %-ными р-рами формальдегида, едкого натра и др. Навоз обеззараживают биотермически.

Коров и телок осеменяют только искусственно, причем с целью профилактики заболевания через 10—12 ч после второго осеменения в матку вводят по 100 тыс. ЕД стрептомицина и пенициллина в 10 — 20 см3 теплого физиологического раствора. Для предупреждения абортов коровам и нетелям внутрь дают по 250 — 300 см3 водного раствора бигумаля (1:1000), ежедневно один раз в течение 5 дней. А. В. Голиков рекомендует вводить дибиомицин или бициллин-5 в дозе 25 — 30 тыс. ЕД на 1 кг массы животного.

Станцию искусственного осеменения объявляют благополучной, если получены отрицательные результаты бактериологического исследования леченных быков, удалены выбракованные животные и проведен полный комплекс ветеринарно-санитарных мероприятий. В течение года после снятия ограничений исследования быков проводят раз в квартал. Хозяйство (ферму, стадо) объявляют оздоровленным, если в течение 12 мес после последнего случая выявления больных кампилобактериозом животных не выделена культура С. fetus subsp. fetus и проведен весь комплекс ветсанмероприятий.

При вспышке кампилобактериоза овец абортировавших животных изолируют и лечат, а остальных переводят на другой участок пастбища (инфицированные выпасы можно использовать через 2 мес). Для предупреждения абортов за 1,5 — 2 мес до окота суягным овцам дают с кормом хлортетрациклин из расчета 5 — 8 мг на 1 кг массы животного, ежедневно в течение 10—12 дней, или бигумаль (с кормом) по 0,5 г на животное в течение 3 дней подряд. Баранов, используемых для до-крытия овец в неблагополучной отаре, подвергают 4дневному курсу обработки: 2 раза в день внутримышечно им вводят стрептомицин и пенициллин на 0,5 %-ном р-ре новокаина из расчета по 4 тыс. ЕД каждого антибиотика на 1 кг массы животного. Отару признают благополучной при отсутствии у овец в течение 2 лет абортов кампилобактериозного происхождения.

Вопросы для самопроверки 1. Определение болезни.

2. Характеристика возбудителя болезни.

3. Клинические признаки заболевания.

4. Методы лабораторной диагностики.

5. Лечение животных при кампилобактериозе.

6. Иммунитет при кампилобактериозе.

7. Организация профилактических и оздоровительных мероприятий при кампилобактериозе.

23.4 КОНТАГИОЗНАЯ ПЛЕВРОПНЕВМОНИЯ

КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Контагиозная плевропневмония крупного рогатого скота (Pleuropneumonia contagiosa bovum, повальное воспаление легких, ПВЛ) - высококонтагиозная инфекционная болезнь, протекающая в виде крупозной пневмонии и плеврита с последующим развитием анемических некрозов (секвестров) в легких.

Возбудитель болезни - Mycoplasma mycoides - относится к роду Mycoplasma, класса Mollicutes. Микроорганизм весьма полиморфный, имеет кокковую, диплококковую, нитевидную, ветвящуюся и звездчатую формы. Размер микоплазм - в пределах 0,2 - 0,8 мкм. Микроб способен проходить через бактериальные фильтры. Полиморфизм связан с тем, что микоплазмы лишены ригидной клеточной стенки и окружены лишь трехслойной цитоплазматической На мартеновском бульоне с 8 % сыворотки крупного рогатого скота отмечают вначале легкую опалесценцию, затем нежное помутнение. На сывороточном агаре образуются колонии, похожие на капли росы с вросшим в агар центром и ровными краями. Удается культивировать этот микроб на куриных эмбрионах.

Возбудитель ПВЛ неподвижен, аэроб, по Граму окрашивается отрицательно, хорошо красится по Романовскому - Гимза. Все известные штаммы возбудителя ПВЛ в антигенном отношении идентичны.

Устойчивость возбудителя к воздействию различных факторов внешней среды и дезинфицирующих средств незначительная. Высушивание и солнечный свет убивают через 5 ч, нагревание до 58 °С - через час. В гниющем материале микроб сохраняется 9 дней. В замороженных кусках легкого остается жизнеспособным в течение года. Дезинфицирующие средства (серно-карболовая смесь, хлорамин, хлорная и свежегашеная известь) в принятых концентрациях надежно обезвреживают возбудителя болезни.

Эпизоотологические данные. В естественных условиях к ПВЛ восприимчив крупный рогатый скот, в том числе буйволы, яки, бизоны, зебу. Экспериментально можно заразить овец, коз, верблюдов и северных оленей.

Подкожное введение лимфы, полученной от больных животных, вызывает на месте введения обширное воспаление подкожной соединительной ткани (флегмону), протекающее с поражением регионарных лимфоузлов и общей интоксикацией организма. Телята гибнут на 17-й день после заражения.

Подкожное заражение в область кончика хвоста вызывает незначительную местную реакцию. Иногда наблюдается некроз и отпадение хвоста, гибель животного. Другие способы заражения (скармливание, внутривенное, внутритрахеальное, внутрипульмональное введение культуры) не вызывают типичной картины ПВЛ. Внутриплевральное заражение приводит к экссудативному плевриту без поражения легких. Вызвать заболевание, соответствующее естественной картине ПВЛ, удалось только Шово и Нокару путем соединения с помощью мешка голов здорового и больного животного.

Источником возбудителя инфекции при ПВЛ являются больные животные, особенно с хроническим течением болезни. Эта категория животных очень опасна, ибо у них могут отсутствовать типичные клинические признаки болезни. Заражение происходит при совместном содержании больных и здоровых животных, причем достаточно кратковременного контакта.

Возбудитель болезни выделяется из организма больного животного с истечением из носа, с каплями слизи при кашле, реже с мочой, молоком и околоплодной жидкостью. Респираторный путь распространения ПВЛ является наиболее вероятным.

Возбудитель ПВЛ длительное время (до 12 - 14 мес) (П. С. Лазарев, 1939) сохраняет свою жизнеспособность в инкапсулированных легочных очагах. Обострение процесса может послужить причиной выделения возбудителя болезни во внешнюю среду.

Восприимчивость крупного рогатого скота к контагиозной плевропневмонии различная. В зонах, где болезнь регистрируют длительное время, местный скот значительно устойчивее завозимого из благополучной местности. В стаде поражаются не все животные. У некоторых из них (до 25 % поголовья) обнаруживают лишь лихорадку и положительные серологические реакции. Поражения легких при этом не происходит.

Эпизоотия ПВЛ имеет медленное течение и может длиться годами. Перезаражениб происходит быстрее, если животных содержат, в тесных, плохо вентилируемых помещениях. Заболеваемость достигает 70%, летальность - свыше 20 %.

Клинические признаки. Инкубационный период 2 - 4 нед (иногда 4 - мес). Различают сверхострое, острое, подострое и хроническое течение, а также атипичную форму болезни. При сверхостром течении болезни резко выражены признаки поражения плевры (экссудативный плеврит) или легких. Дыхание затруднено, прерывистое, возникает кашель. Температура тела выше 41 °С. Аппетит отсутствует, жвачка прекращается, развивается диарея. Животные погибают на 2 - 8-й день болезни.

Острому течению болезни предшествует период, характеризующийся кашлем, невысоким подъемом температуры тела. Затем температура тела поднимается до 42 °С; лихорадка, как правило, постоянного и реже ремитирующего типа.

Животное старается не двигаться, стоит с широко расставленными передними конечностями, выгнутой спиной, вытянув шею и открыв ротовую полость. Дыхание учащенное, поверхностное. Сердечный толчок стучащий, пульс слабый.

Животное болезненно реагирует на надавливание в области межреберных промежутков и позвоночника. Общее состояние его ухудшается, отмечается потеря аппетита, снижается удой. Кашель, вначале сухой, короткий, болезненный, становится сильным, глухим, влажным. Перкуссией выявляется притупление, при аускультации не обнаруживают дыхательных шумов.