WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА

РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Федеральное государственное бюджетное

образовательное учреждение высшего

профессионального образования

КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРА РНЫЙ

УНИВЕРСИТЕТ

Кафедра микробиологии, эпизоотологии и вирусологии

Государственное управление ветеринарии

Краснодарского края Государственное учреждение Краснодарского края «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория»

А.А. ШЕВЧЕНКО, О. Ю. ЧЕРНЫХ, Л.В. ШЕВЧЕНКО, Г.А. ДЖАИЛИДИ, Д.Ю. ЗЕРКАЛЕВ, А.Р. ЛИТВИНОВА, Т.В. ЛЕВЧЕНКО, А.В. СКОРИКОВ, Е.В. ЯКУБЕНКО

ДИАГНОСТИКА ЭШЕРИХИОЗА ЖИВОТНЫХ

Учебное пособие г. Краснодар,

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА

РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования

КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ

АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

Кафедра микробиологии, эпизоотологии и вирусологии Государственное управление ветеринарии Краснодарского края Государственное учреждение Краснодарского края «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория»

А. А. ШЕВЧЕНКО, О. Ю. ЧЕРНЫХ, Л.В. ШЕВЧЕНКО, Г.А. ДЖАИЛИДИ, Д.Ю. ЗЕРКАЛЕВ, А.Р. ЛИТВИНОВА, Т.В. ЛЕВЧЕНКО, А.В. СКОРИКОВ, Е.В. ЯКУБЕНКО

ДИАГНОСТИКА ЭШЕРИХИОЗА ЖИВОТНЫХ

Учебное пособие Для студентов высших учебных заведений факультета ветеринарной медицины по направлению подготовки «Ветеринария»

КРАСНОДАР, Авторы: А. А. Шевченко, О. Ю. Черных, Л.В. Шевченко, Г.А. Джаилиди, Д.Ю. Зеркалев, А.Р. Литвинова, Т.В. Левченко, А.В. Скориков, Е.В. Якубенко Учебное пособие «Диагностика эшерихиоза животных».

Краснодар: КубГАУ, 2013. 22 с.

В учебном пособии изложены основные свойства возбудителей эшерихиоза животных; описаны бактериоскопические, бактериологические, биохимические, биологические и серологические методы диагностики и дифференциальной диагностики заболевания.

РЕЦЕНЗЕНТЫ:

Лысенко А.А. – доктор ветеринарных наук, профессор, декан факультета ветеринарной медицины КубГАУ.

Куриннов В.В. – доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий лабораторией Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии.

Рекомендовано методической комиссией факультета ветеринарной медицины КубГАУ протокол №3 от 19 ноября года.

© Кубанский государственный аграрный университет 350044, Краснодар, ул. Калинина, Диагностика эшерихиоза животных Цель занятия: изучить правила отбора патологического материала и отправки в ветеринарную лабораторию, основные свойства возбудителей эшерихиоза животных, методы лабораторной диагностики.

Диагностика эшерихиоза животных проводится комплексно, учитывают эпизоотологические данные, клинические признаки, патологоанатомические изменения и лабораторные исследования.

Практически важное для ветеринарии значение имеет один вид — Е. coli. Естественным местом обитания Е. coli является толстый отдел кишечника человека, млекопитающих животных, птиц, многих пресмыкающихся, рыб и насекомых. С испражнениями эшерихии попадают во внешнюю среду (почва, вода, пищевые продукты и др.), где могут сохраняться в течение нескольких месяцев.

Являясь представителями резидентной (постоянной) микрофлоры кишечника, эшерихии у здоровых животных старше 20-30, дневного возраста не превышают 1-2% от общей численности бактерий кишечника. Из-за особенностей становления кишечной микрофлоры у новорожденных животных первых дней жизни и до 2-3, недельного возраста число эшерихии может достигать 50% и более.

Если среди них преобладают энтеропатогенные, токсигенные варианты, а животные имеют недостаточную иммунную защиту (что часто бывает у молодняка), то развиваются кишечные инфекции эшерихиозной этиологии: колибактериоз телят, поросят, ягнят, кроликов, нутрий, собак, птиц; у поросят отечная форма. Транслокация эшерихий из кишечника в кровяное русло является причиной развития у разных животных септицемии, у свиноматок симптомокомплекса ММА (метрит-мастит-агалактия), у коров и других животных мастита, может стать причиной воспаления слизистых оболочек урогенитального, респираторного тракта, осложнять раневые инфекции и т.д.

Эшерихиоз (колибактериоз) — остропротекающая инфекционная болезнь молодняка животных всех видов, включая птиц. Протекает в септической, энтеритной (колидиарея), токсикосептической формах, у поросят-отъемышей — еще и в форме энтеротоксемии (отечная форма), у птиц — в виде септицемии, реже — в виде сальпингита и колигранулематоза. Возбудителем болезни являются патогенные эшерихии вида E. coli.

Лабораторная диагностика эшерихиоза основана на результатах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование включает:

- обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, - выделение чистой культуры, - идентификацию возбудителя на уровне вида, - определение его принадлежности к группе патогенных вариантов.

Бактериологическое исследование Для исследования используют свежие трупы мелких животных и птиц целиком, трубчатая кость, доля печени с желчным пузырем, селезенка, почка, сердце, перевязанное лигатурой у аорты, брыжеечные лимфоузлы, отрезок тонкого кишечника, перевязанный с двух сторон. При направлении трупов целиком в лаборатории, помимо указанного материала, исследуют еще и головной мозг.



Для прижизненной диагностики в лабораторию могут направляться фекалии, кровь.

Микроскопическое исследование исходного материала Из поступившего материала готовят мазки-отпечатки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Эшерихий являются мелкими (1,0-3,0х0,3-0,6 мкм) прямыми палочками. Грамотрицательные.

Выделение и идентификация культур патогенных эшерихий Культивирование. Эшерихии — факультативные анаэробы, обладающие дыхательным и бродильным типами метаболизма. Оптимальная температура роста 37- 38° С, рН среды 7,0-7,2, хорошо растут на всех широко используемых в лабораторной практике питательных средах.

Исследуемый материал высевают на плотные селективнодифференциальные среды Эндо, или Левина, или Мак-Конки и среду с сорбитом. Посевы инкубируют при 37° С в течение 18-24 часов. По истечении этого срока посевы просматривают и отбирают 10 колоний (5, выросших после посева фекалий или соскобов со слизистой кишечника, и 5 - из других органов, в т.ч. брыжеечных лимфатических узлов), типичных для эшерихий, которые пересевают в МПБ, на МПА и среду Минка (при наличии колоний слизистой консистенции, т.е. тянущихся за петлей, их обязательно отсевают на среду Минка) в чашках, разделенных карандашом для стекла на 10 секторов (каждую колонию на 2 среды в отдельный пронумерованный сектор). При подозрении или целенаправленном исследовании на отечную болезнь поросят (энтеротоксемию) дополнительно пересевают несколько колоний на кровяной агар в чашке, разделенной на соответствующее количество секторов. С чашек с культурами на среде с сорбитом отсевают 3-4 колонии Sформы серовато-белого цвета в пробирки со скошенным МПА.

Культуры, выделенные от птиц, на МПА и среду Минка не пересевают. Их высевают в специальные питательные среды для изучения биохимических свойств.

Характер роста эшерихий на питательных средах. На плотных питательных средах эшерихий образуют круглые с гладкой, вьшуклои поверхностью, ровным краем, диаметром 2-4 мм колонии.

На МПА колонии полупрозрачные, сероватого цвета. На средах Эндо, Левина и Мак-Конки за счет ферментации лактозы и закисления среды приобретают цвет индикаторов: на среде Эндо - красные, малиново-красные с металлическим блеском или без него; на среде Левина — темно-синие, фиолетовые, черные с металлическим блеском или без него; на среде Мак-Конки — розовые, красные (отдельные штаммы эшерихий могут не ферментировать лактозу и формировать на перечисленных средах бесцветные колонии). На среде с сорбитом эшерихий серогруппы О157 (варианты О157:Н7 и О157:Н), вызывающие диарею животных с признаками геморрагического гастроэнтерита, образуют серовато-белые колонии Sформы. Колонии эшерихий других серогрупп — красно-малинового цвета. Колонии штаммов, образующих гемолизин, на кровяном агаре окружены зоной гемолиза. В МПБ рост эшерихий проявляется в виде равномерного помутнения среды с образованием легко разбивающегося осадка.

Обнаруженные на данном этапе исследований эшерихий с гемолитическими свойствами, выделенные от поросят-отъемышей с признаками отечной болезни (из содержимого тонкого отдела их кишечника и (или) брыжеечных лимфатических узлов), относят к возбудителю отечной болезни (энтеротоксемии) поросят.

Морфология клеток эшерихий в культуре. В мазках, приготовленных из культур, эшерихий обнаруживают в виде грамотрицательных, мелких (1,0-3,0x0,3-0,6 мкм) прямых палочек с закругленными концами. В поле зрения микроскопа располагаются одиночно, реже попарно. Спор не образуют. Некоторые (штаммы серо групп 08, 09, 020, 0101) образуют капсулу или микрокапсулу.

Большинство подвижно за счет перетрихиальных жгутиков, но встречаются и неподвижные.

Идентификация эшерихий по ферментативным признакам.

Выделенные чистые культуры микроорганизмов с характерными для эшерихий культуральными, морфологическими и тинкториальными свойствами окончательно относят к роду Escherichia и виду E.coli на основании изучения их ферментативных свойств. Ориентируясь на критерии к E.coli относят штаммы, образующие индол, не образующие H2S, дающие положительную реакцию с метиловымкрасным (среда окрашивается в розово-красный цвет) и отрицательную реакцию Фогеса-Проскауэра (среда окрашивается в желтый цвет), не растущие на среде Симмонса, не расщепляющие мочевину, образующие лизиндекарбоксилазу. Большая часть эшерихий образует орнитиндекарбоксилазу, ферментирует манит. Все (за редким исключением) сбраживают лактозу.

На данном этапе исследований диагноз на колибактериоз считают установленным в том случае, если выделены чистые культуры Е. coli не менее чем из двух ниже указанных органов и тканей: селезенки, крови, крови сердца, костного мозга, головного мозга свежего трупа животного без изучения патогенных свойств штаммов и установления их серогрупповой принадлежности. В остальных случаях устанавливают патогенность выделенных культур.

Серологическая идентификация. Важнейшую информацию о патогенных свойствах эшерихий получают при определении их антигенной структуры. Клетки эшерихий содержат три вида антигенов: О — соматический; К — оболочечный и Н — жгутиковый.

Эшерихии в своем составе содержат 164 варианта О-антигена, вариантов Н-антигена и 90 вариантов К-антигена.

О-антиген термостабилен (выдерживает нагревание при 100° С в течение 2,5 часов). Является липополисахаридо-протеиновым комплексом, неоднороден, и на его основе эшерихий делят на группы (164 О-групп).

К-антигены поверхностные, оболочечные (кислые полисахариды, редко протеины). По своим свойствам их подразделяют на три типа: L-антиген термолабильный, инактивируется при 100° С в течение часа;

В-антиген в этих же условиях теряет агглютинабелыюсть; Аантиген термостабильный, инактивируется при 120° С в течение 2, часов, имеется у слизистых капсулообразующих эшерихий О-групп 08,09,020,0101;

Н-антиген термолабильный, инактивируется при 60° С в течение 1 часа, протеин, располагается в фимбриях (пилях), пронизывающих клеточную стенку, поэтому в последнее время его чаще называют фимбриальным антигеном.

К-антигены покрывают О-антиген и делают клетки эшерихий иннаглютинабельными в гомологичных О-сыворотках. Они обладают адгезивными свойствами, т.е. с их помощью бактерии прикрепляются к эпителиальным клеткам кишечника. Адгезивные антигены являются фактором патогенности, который изучается у чистых культур E.coli в первую очередь.

Н-антиген — жгутиковый, состоит из протеина, термолабилен, имеет несколько десятков разновидностей, определяемых в РА. Для диагностики существенного значения не имеет. Сочетание О-, К- и Н-антигенов характеризует серологический вариант (серовар) эшерихий.

Схема антигенного строения Е. соli Факторами патогенности Е.соli являются:

1. Факторы адгезии и колонизации – необходимы для прикрепления к клеткам ткани и их колонизации.

2. Факторы инвазии С их помощью энтероинвазивные Е.соli проникают в эпителиальные клетки кишечника и развиваются в них.

а) экзотоксины У патогенных Е.соli наиболее известными являются термолабильные (LT) и термостабильные (ST).

б) эндотоксины – липополисахариды - определяют антигенную специфичность бактерий, форму колоний, вызывают эндотоксикоз.

В зависимости от содержания факторов патогенности различают следующие категории диареегенные Е.соli:

- энтеротоксигенные Е.соli (ЭТКП);

- энтероинвазивные Е.соli (ЭИКП);

- энтеропатогенные Е.соli (ЭПКП);

- энтерогеморрагические Е.соli (ЭГКП);

- энтероагрегирующие Е.соli (ЭАКП).

Энтеротоксигенные кишечные палочки обнаружены среди представителей более 70 О-групп.

Эти кишечные палочки образуют токсины, нарушающие равновесие между секрецией и всасыванием жидкости эпителиальными клетками тонкого кишечника, вызывая диарею.

К энтеропатогенным Е.соli относится около 20 представителей О серогрупп.

Они вызывают поражение тонкого кишечника с повреждением поверхности эпителия, с образованием эрозий и умеренного воспаления.

Энтероинвазивные Е.соli более 10 представителей, они способны внедряться в эпителиальные клетки, размножаться в них, вызывая гибель.

В результате появляется воспаление и изъязвление слизистой оболочки толстого кишечника.

Энтерогеморрагические кишечные палочки около 10 представителей колонизируют толстый кишечник, вызывая геморрагический колит.

Это сопровождается общей интоксикацией и поражением внутренних органов.

Они синтезируют специфические цитолизины.

Данные эшерихиозы являются зоонозами.

Энтероагрегирующие кишечные палочки отличаются морфологическими особенностями адгезии в культурах эпителиальных клеток человека (Hep2 и Hela).

Известно, что патогенные эшерихии вызывают и внекишечные поражения: цистит, пиелонефрит, сепсис.

Ведущая роль в развитии колибактериоза принадлежит эшерихиям с адгезивными антигенами К88, К99, F41, F18, 987Р, А20 и др.

Наличие этих адгезинов можно выявить в реакции агглютинации на стекле или в ELISA-тесте с соответствующими антисыворотками. В нашей стране наиболее распространенным методом выявления адгезивных антигенов у эшерихий является РА. Для этой цели промышленностью выпускается набор агглютинирующих сывороток к адгезивным антигенам эшерихий. Этот набор включает моновалентные агглютинирующие сыворотки к антигенам К88, К99, F41, 987Р, А20 и поливалентную агглютинирующую сыворотку, представляющую собой смесь моновалентных сывороток в равных объемах. Сыворотки выпускаются в сухом виде во флаконах по 0,5 см3, что обеспечивает сохранение их специфической активности на срок не менее 5-ти лет.

Постановка РА. В ампулу (флакон) с сухой сывороткой добавляют растворитель (дистиллированная вода или физиологический раствор) до первоначального объема сыворотки (0,5 см3), затем растворителем разводят поливалентную сыворотку в соотношении 1:2, а моновалентные — 1:10 (рабочий титр). Разведенные сыворотки хранят в пробирках (флаконах) под резиновой пробкой при температуре 4-10° С до 3 месяцев. По внешнему виду разведенные сыворотки должны представлять собой прозрачную или слегка опалесцирующую бледно-розовую жидкость. Мутные сыворотки, проросшие плесенью или другими микроорганизмами, с обильным осадком к употреблению непригодны.

Для выявления антигенов К88, 987Р и А20 используют культуры эшерихий, выращенные на МПА или агаре Хоттингера, для обнаружения антигенов К99 и F41 — на среде Минка. В обоих случаях посевы инкубируют при 37-38° С в течение 20-24 часов.

Культуры эшерихий, выделенные от птиц, для выявления адгезивных антигенов не используют. Выросшие культуры исследуют в РА на стекле вначале с поливалентной, а затем (в случае положительной реакции) с моновалентными сыворотками. С этой целью каплю поливалентной сыворотки наносят на предметное стекло, бактериологической петлей берут испытуемую культуру и тщательно растирают с сывороткой. Реакцию учитывают в течение одной минуты при легком покачивании стекла при температуре от до 28° С. Контролем служит испытуемая культура, смешанная с каплей физиологического раствора (рН 7,2 -7,4) и с каплей нормальной кроличьей сыворотки, разведенной 1:10 (для исключения самоагглютинации культуры).

Положительная реакция характеризуется склеиванием микробных клеток в зерна или хлопья различной величины и полным или частичным просветлением сыворотки при отсутствии агглютинации в контроле.

Эшерихии, давшие положительную реакцию агглютинации с одной из сывороток, считают возбудителем колибактериоза (колидиареи).

Наличие адгезивных антигенов у энтеропатогенных эшерихии (ЕРЕС) имеет определенную связь с хозяевами этих возбудителей и О-серогруппами (табл.1).

Культуры эшерихии на скошенном МПА, полученные после пересева серовато-белых колоний со среды с сорбитом (не ферментирующие этот многоатомный спирт), исследуют с агглютинирующей коли-сывороткой О157 в РА на стекле. Реакцию ставят с живыми культурами. Для исключения самоагглютинации бактериальных клеток культуру исследуют с 0,85%-ным раствором натрия хлорида. При отсутствии агглютинации в контроле и ее наличии на стекле с коли-сывороткой О157 исследуемые эшерихии относят к возбудителю колибактериоза.

Таблица 1 - Распространение адгезивных антигенов у ЕРЕС в зависимости от хозяина и О-серогрупп Со штаммами, давшими отрицательную реакцию агглютинации, а также со штаммами выделенными от птиц, проводят дальнейшие диагностические исследования. При этом определяют их Огрупповую принадлежность в РА с поливалентными и моновалентными агглютинирующими О-коли-сыворотками или изучают их патогенность в биопробе на белых мышах (штаммы, выделенные от млекопитающих) или цыплятах (штаммы, выделенные от птиц).

Серогрупповая принадлежность эшерихии определяется в реакции агглютинации на стекле и в пробирочной реакции агглютинации. Для этого выпускаются наборы агглютинирующих О-колисывороток, включающие моновалентные сыворотки к О-антигенам 30 основных серогрупп ЕРЕС, и четыре поливалентные, каждая к О-антигенам 6-8 серогрупп. Агглютинирующие О-коли-сыворотки выпускают во флаконах в жидком виде. Пригодные к использованию сыворотки представляют собой прозрачную жидкость светложелтого цвета.

Ход определения. 1. Испытуемый штамм выращивают на МПА при 37-38° С в течение 18-24 часов, смывают физиологическим раствором, переносят в стерильные пробирки, прогревают в течение часа в водяной бане при температуре 100° С для разрушения поверхностных термолабильных L- и В-антигенов или автоклавируют при температуре 120° С в течение 2-2,5 часов для разрушения термостабильного А-антигена. Если во взвеси бактерий после кипячения или автоклавирования образуются хлопья или зернистость (R-форма), то ее не используют для реакции. Прогретую взвесь бактерий центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 20 минут, надосадочную жидкость сливают, а осадок используют в качестве антигена для постановки реакции на стекле. Оставшуюся часть антигена разводят стерильным физиологическим раствором по оптическому стандарту мутности до концентрации 500 млн. микробных клеток в 1см3 и используют для постановки пробирочной реакции агглютинации.

2. На предметное стекло наносят по одной капле каждой из четырех поливалентных сывороток. В каждую из них бактериологической петлей вносят осажденную центрифугированием культуру и хорошо перемешивают. Реакция протекает при комнатной температуре, учитывают ее в течение 3 минут. Положительная реакция характеризуется образованием мелкозернистого агглютината и полным или частичным просветлением жидкости. При отрицательном результате антиген остается в капле сыворотки в виде равномерной взвеси.

3. Каждый антиген, агглютинирующийся одной из поливалентных сывороток, исследуют в реакции агглютинации на стекле с моновалентными, разведенными 1:10, сыворотками, входящими в состав данной поливалентной сыворотки, а затем в пробирочной реакции агглютинации с каждой сывороткой, давшей положительную реакцию на стекле.

4. Пробирочную РА ставят в обычных серологических или бактериологических пробирках в объеме 1 мл.

Сыворотку разводят стерильным физиологическим раствором от 1:25 до титра, указанного на этикетке. Для приготовления исходного разведения к 2,4 см3 физиологического раствора добавляют 0,1 см3 сыворотки. Во все другие пробирки разливают по 0,5 см физиологического раствора. Из исходного разведения 0,5 см3 смеси переносят во вторую пробирку, из второй — в третью и т.д. Каждое разведение готовят отдельной пипеткой. Содержимое каждой пробирки смешивают. Из первой пробирки удаляют 1,5 см3, из последней — 0,5 см3 антигена, имеющего концентрацию 500 млн. микробных тел в 1 см3.

Одновременно ставят контроли:

а) антиген + физиологический раствор (для исключения самоагглютинации);

б) сыворотка в разведении 1:25 без антигена (для исключения флокуляции).

Штатив с пробирками встряхивают и выдерживают 16-18 часов при температуре 37° С и 6-8 часов при комнатной температуре.

5. Положительная реакция характеризуется просветлением жидкости и образованием на дне пробирки осадка в форме раскрытого зонтика, который при встряхивании распадается на мелкие хлопья или комочки.

Реакцию считают отрицательной, когда на дне пробирки образуется осадок в виде пуговки (диска), который при встряхивании разбивается в равномерную взвесь. Аналогичный результат должен быть в контрольных пробирках.

6. В том случае, когда поливалентные О-коли-сыворотки не агглютинируют в РА на стекле, антиген, прогретый при температуре 100° С, и суспензию из исследуемых бактерий автоклавируют при температуре 120° С в течение 2 -2,5 часов.

Полученный антиген исследуют в пробирочной РА с сыворотками серогрупп 08, 09, 020 и 0101.

7. Исследуемый штамм относят к той О-группе, с сывороткой которой он вступает в реакцию до титра или не ниже половины титра сыворотки.

Определение серогрупповой принадлежности эшерихий имеет важное диагностическое значение, поскольку по морфологическим, ферментативным и культуральным свойствам патогенные и непатогенные разновидности эшерихий не отличаются друг от друга. В то же время установлено, что из более чем 160 О-серогрупп известных в настоящее время эшерихий лишь около 40 являются основными возбудителями колибактериоза (эшерихиоза) у животных и птиц (табл. 2). Отнесение изучаемого штамма к одной из этих серогрупп дает основание для постановки диагноза на колибактериоз.

е) Определение патогенных свойств E.coli. Патогенность изучаемых штаммов эшерихий может быть установлена в биопробе на белых мышах или цыплятах. Для этого испытуемый штамм выращивают на МПА при 37-38° С в течение 18-24 часов, смывают стерильным физиологическим раствором, готовят суспензию концентрацией 1 млрд. микробных клеток в 1см3 по оптическому стандарту мутности и вводят внутрибрюшинно по 0,5 см3 трем белым мышам массой 14-16 г или трем цыплятам 3-4-недельного возраста (при исследовании материала от птиц). Наблюдение за зараженными животными проводят в течение трех суток. В случае гибели двух и более зараженных мышей или цыплят выделенный штамм признают патогенным и считают возбудителем инфекции.

Таблица 2 - Основные серогруппы эшерихий, патогенные для животных Виды животных и патология Основные серогруппы ЕРЕС 1. Крупный рогатый скот:

2. Свиньи:

диарея у поросят энтеротоксемия у поросят 0138,0139,0140, 3. Овцы:

сепсис у ягнят 5. Кролики, нутрии: диарея 085, 02, 01, 0101, 06, 018, 0128, 055, 6. Лошади: из репродуктивных 018,02,06,0147, органов 7. Птица: септицемия цыплят, 01, 02, 078, 015, О101, 0115, сальпингит кур-несушек, колигранулематоз Постановка биопробы завершает общепринятую схему бактериологического исследования материала на колибактериоз (эшерихиоз). При необходимости могут быть проведены исследования токсигенных свойств изучаемых штаммов.

Одним из факторов вирулентности эшерихий является продуцируемый ими экзотоксин. Экзотоксины E.coli относят к энтеротоксинам, а штаммы, их продуцирующие, — к энтеротоксигенным E.coli (ETEC). Выявление ЕТЕС позволяет установить диагноз на колибактериоз при бактериологическом исследовании материала.

Кроме того, наличие энтеротоксигенных штаммов необходимо учитывать при конструировании вакцин против колибактериоза.

ЕТЕС продуцируют два типа энтеротоксинов: термостабильный (ТС) и термолабильный (ТЛ), отличающиеся друг от друга по молекулярной массе, структурной организации, иммуногенности и механизму действия.

Синтез ТЛ-токсина детерминирован конъюгативной (передающейся другим, в т.ч. и непатогенным, бактериям) плазмидой. Он секретируется во внешнюю среду, окружающую бактерию, адсорбируется на ворсинках эпителиальных клеток тонкого кишечника, где стимулирует аденинлатциклазу. Последняя вызывает увеличение концентрации аденозинмонофосфата, который ведет к гиперсекреции воды и хлоридов в просвет кишечника и угнетению резорбции натрия. Просвет кишки переполняется жидкостью, развиваются усиленная перистальтика кишечника и диарея. Молекулярная масса ТЛ-токсина 24000 Д, он является пептидом и обладает антигенными свойствами. Разрушается при 60° С в течение 30 минут, инактивируется в среде с рН 4,0 -5,0 и под воздействием проназы.

ТС-токсин также находится под генетическим контролем гетерогенной группы конъюгативных Ent-плазмид. Адсорбируясь на клетках эпителия тонкого отдела кишечника, он вызывает гиперсекрецию воды и электролитов, путем активации гуанилатциклазы.

Молекулярная масса ТС-токсина колеблется от 1000 до 10 000 Д, он является гаптеном и не обладает антигенной активностью. Сохраняет биологическую активность при температуре 65° С в течение 15 мин., при 100° С - 2 мин. Полностью разрушается при кипячении в течение 30 мин. Устойчив к действию трипсина, проназы, протеиназы, дезоксирибонуклеазы. Имеется две разновидности термостабильного энтеротоксина: ТСа и ТСв.

Синтез энтеротоксинов у Е. coli не связан с их серогрупповой принадлежностью. Так, ЕТЕС-возбудители колибактериоза телят могут принадлежать к серогруппам 08, 09, О20, 026, О101 и другим, колибактериоза поросят — к 08, 045, 0141, 0149, 0149, 0139 и 0157.

Энтеротоксигенные E.coli — возбудители колибактериоза новорожденных телят, ягнят и козлят, синтезируют в основном ТСа энтеротоксин (среди них такие штаммы встречаются в 86,4 - 100% случаев), редко — ТЛ-энтеротоксин (0 - 9,1%).

Кроме того, ЕТЕС выделяются при колибактериозе поросят и жеребят, при отечной форме у поросят, редко выделяются от щенков.

Данные о корреляции у штаммов Е. coli между адгезивными антигенами, энтеротоксигенностыо и хозяевами представлены в табл. 3.

Под влиянием антибактериального или антиадгезивного иммунитета или специфических сывороток ЕТЕС теряют способность к адгезии и не проявляют энтеротоксичности. То же происходит с энтеротоксигенными Е. coli при утрате ими плазмид, детерминирующих адгезивные антигены.

Таблица 3 - Взаимозависимость между адгезинами, Главные хозяева Продуцируемые энтеротоксины Тип адгезинов штаммов Поскольку, как отмечалось выше, в большинстве случаев корреляция между энтеротоксигенностыо штаммов эшерихий и их серогрупповой принадлежностью отсутствует, проводить диагностику заболеваний, вызванных ЕТЕС с помощью обнаружения у них О- или К-антигенов, нецелесообразно. Для этой цели необходимо выявлять либо адгезины, либо непосредственно энтеротоксины.

Определение энтеротоксигенных свойств Е. coli проводят на изолированных петлях тонкого кишечника кролика или морской свинки. Метод основан на феномене расширения кишечной петли за счет скопления в ее просвете жидкости, что и является показателем токсигенной активности испытуемых штаммов.

При использовании кроликов (классическая модель) отбирают клинически здоровых животных массой 2,0-2,5 кг, выдерживают их на голодной диете со свободным доступом к воде в течение 36- часов, после чего оперируют под эфирным наркозом с фиксацией в спинном положении. Общепринятыми хирургическими методами осуществляется лапаротомия, тонкий кишечник извлекается на стерильную салфетку и орошается физиологическим раствором через каждые 5-7 минут операции. На кишечник накладывают шелковые лигатуры так, чтобы образовалось 8-12 сегментов по 10 см с промежутками между ними в 3-5 см. В опытные сегменты вводят испытуемый материал в объеме 2 см3 (суспензия испытуемого штамма эшерихий в физиологическом растворе концентрацией 1 млрд.

микробных клеток в 1 мл. Культуру выращивают на плотных средах в течение 16-24 часов. В контрольные сегменты вводят по 2 см стерильного физиологического раствора. Петли кишечника вправляют в брюшную полость, брюшину с брюшными мышцами зашивают непрерывным швом. Через 16-18 часов кроликов усыпляют.

Извлекают кишечник, из каждого опытного сегмента жидкость переносят в мерный цилиндр. Индекс дилатации определяют соотношением объема скопившейся жидкости в сегменте к длине этого сегмента. Энтеротоксигенными считают штаммы, дающие индекс дилатации 1 и более.

При использовании морских свинок тест выполняется аналогичным образом. При этом отбирают животных массой 250-500 г.

Лигатуры накладывают на тощую кишку так, чтобы образовались сегменты длиной 1,0-1,5 см. Исследуемый материал вводят в объеме 0,1см3. Энтеротоксигенными признают штаммы, дающие индекс дилатации 0,5 и более.

Для обнаружения ТЛ-энтеротоксина в настоящее время используют тест отека лап белых мышей, кожную пробу на кроликах, реакцию агрегации тромбоцитов, реакцию отсутствия прилипания лейкоцитов в вате, реакцию латекс-агглютинации, РИД по Манчини и др. ТС-энтеротоксин выявляют в анальной пробе на 15дневных мышатах-сосунах или в пробе на 15-дневных куриных эмбрионах.

Патогенные эшерихии сероваров О157:Н7 и О157:Н-, вызывающие диарею животных с признаками геморрагического гастроэнтерита, бактерии, образующие адгезивный антиген F 18 и вызывающие отечную форму колибактериоза поросят, продуцируют вероцитотоксин.

Контрольные вопросы:

1. Как и какой патматериал отбирают для лабораторных исследований на эшерихиоз?

2. Возбудители эшерихиоза животных?

3. Как проводится диагностика эшерихиоза у животных?

4. Методы лабораторной диагностики эшерихиоза у животных?

5. Питательные среды для выращивания возбудителей эшерихиоза животных?

Список использованной литературы 1. Акатов А.К., Зуева В.К. Стафилококки. М.: «Медицина», 1983.

2. Антонов Б.И, Борисова В.В, Волкова П.М. и др. Лабораторные исследования в ветеринарии. Справочник. - М.: Агропромиздат, 1986.

3. Белоусов В.И., Каврук Л.С, Малахов Ю.А. и др. Методические указания по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных. М., 2000.

4. Ветеринарная микробиология иммунология: Учебник /Под ред.

проф. Н. А. Радчука. - М. Агропромиздат 1991.

5. Костенко Т.С., Скаршевская Е.И., Гительсон С.С. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии. М. Агропромиздат 1989.

6. Колычев Н. И. Ветеринарная микробиология и иммунология.

Омск 1996г.

7. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии.

Костенко Т.С., Родионова В.Б, Скородумов Д.И. М.: Колос, 2001.

8. Сидоров М.А, Скородумов Д.И, Федотов В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. – М.: Колос, 1995.

9. Скородумов Д.И, В.В. Субботин, Сидоров М.А, Костенко Т.С.

Микробиологическая диагностика бактериальных болезней животных. – М.: ИзографЪ, 2005.

10. Шевченко А.А., Шевченко Л.В., Черных О.Ю., Шевкопляс В.Н.

Лабораторная диагностика инфекционных болезней животных. – Краснодар. - 2009, 575 с.

11. Шевченко А.А., Шевченко Л.В., Литвинова А.Р., Брилев Р.О., Злищева М.А. Совершенствование специфической профилактики крупного рогатого скота//Труды Кубанского государственного аграрного университета. Серия: Ветеринарные науки, 2009. – № (ч.1). - С. 127-129.

12. Шевченко А.А., Зеркалев Д.Ю., Шевченко Л.В., Баженова Е.А., Шарова Т.В. Специфическая профилактика и лечение колибактериоза кроликов//Труды Кубанского государственного аграрного университета. Серия: Ветеринарные науки, 2009. – №1 (ч.1). - С.

122-125.

13. Двадненко А.И. Эпизоотологические особенности, специфическая профилактика и лечение эшерихиоза кроликов//Ж. Ветеринария Кубани, 2012. – №2. – С.15-16.

14. Двадненко А.И., Шевченко А.А. Изучение нозологического профиля инфекционных болезней кроликов в Краснодарском крае/Труды Кубанского государственного аграрного университета, 2012. – №2 (35). - С. 357-359.

Авторы: А. А. Шевченко, О. Ю. Черных, Л.В. Шевченко, Г.А. Джаилиди, Д.Ю. Зеркалев, А.Р. Литвинова, Т.В. Левченко, А.В. Скориков, Е.В. Якубенко Учебное пособие «Диагностика эшерихиоза животных».

© Кубанский государственный аграрный университет 350044, Краснодар, ул. Калинина,



Похожие работы:

«Федеральное агентство по образованию Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Ульяновский государственный технический университет СТАТИСТИЧЕСКАЯ ТЕОРИЯ РАДИОТЕХНИЧЕСКИХ СИСТЕМ Методические указания к лабораторным работам по курсу Статистическая теория радиотехнических систем Составители: С.М. Наместников А.А. Морозов Ульяновск 2006 УДК 621.391(076) ББК 32.84я7 С78 Рецензент заведующий кафедрой Теоретические основы радиотехники, канд. техн. наук, профессор...»

«ВОЕННО-ТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ Кафедра гидротехнических сооружений и мостов Е.Д. Шутов, А.В. Бухаров Учебное пособие по курсовому и дипломному проектированию по дисциплине “Основания и фундаменты” для специальности ПГС ч.2 Балашиха - 2009г. Шутов Е.Д., Бухаров А.В. Учебное пособие для выполнения курсовой работы по дисциплине “ Основания и фундаменты ” для специальности ПГС - Балашиха: издательство ВТУ Спецстроя России, 2009 - 138 с. В учебном пособии изложены: цели и задачи курсовой работы на...»

«МИНОБРНАУКИ РОССИИ Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Юго-Западный государственный университет (ЮЗГУ) Кафедра бухгалтерского учета, анализа и аудита УТВЕРЖДАЮ: Первый проректор – проректор по учебной работе Е.А. Кудряшов 2011 г. БУХГАЛТЕРСКИЙ УПРАВЛЕНЧЕСКИЙ УЧЕТ Методические указания по выполнению курсовой работы для студентов (слушателей), обучающихся по специальности 080109.65 Бухгалтерский учет, анализ и аудит Курск УДК...»

«Л.С. СаЛоматина Теория и практика обучения младших школьников созданию письменных текстов различных типов (повествование, описание, рассуждение) Лекции 1–4 москва Педагогический университет Первое сентября 2010 Лариса Сергеевна Саломатина материалы курса теория и практика обучения младших школьников созданию письменных текстов различных типов (повествование, описание, рассуждение): лекции 1–4. – м.: Педагогический университет Первое сентября, 2010. – 124 с. Учебно-методическое пособие Редактор...»

«1 РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования ТЮМЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ УТВЕРЖДАЮ: Проректор по учебной работе _ /Волосникова Л.М./ _ 2013 г. ТРЕНИНГ ЛИЧНОСТНОГО РОСТА СПОРТСМЕНА Учебно-методический комплекс. Рабочая учебная программа для магистрантов очной формы обучения направления 034300.68 Физическая культура, профиля Подготовка высококвалифицированных спортсменов в...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ ПЕНЗЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ Осташков А.В. МАРКЕТИНГ Учебное пособие ПЕНЗА 2005 Основы маркетинга Понятие и причины возникновения маркетинга Основные категории маркетинга Концепции маркетинга • этапы развития маркетинга • концепция совершенствования производства • концепция совершенствования товара • концепция интенсификации коммерческих усилий • концепция маркетинга • социально-этический маркетинг Сравнение концепций маркетинга и их реализация в...»

«НОУ ВПО ИВЭСЭП НЕГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ИНСТИТУТ ВНЕШНЕЭКОНОМИЧЕСКИХ СВЯЗЕЙ, ЭКОНОМИКИ И ПРАВА ПРАВОВОЕ РЕГУЛИРОВАНИЕ ЛИЗИНГОВОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКИЙ КОМПЛЕКС по специальности 030501.65 Юриспруденция САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 2012 Правовое регулирование лизинговой деятельности: Учебнометодический комплекс / Автор - составитель: Беженцев А.А., СПб ИВЭСЭП, 2012. Утвержден на заседании кафедры гражданско-правовых...»

«Е. С. Кутугина Арифметические и логические основы построения компьютера Учебное пособие Одобрено Российской академией образования Допущено Департаментом общего образования Администрации Томской области Томск 2009 УДК 681.3.04+ 510.633] (075.3) ББК 32.973я72 К953 Кутугина Е. С. Арифметические и логические основы построения компьютера: Учеб. пособие. — Томск, 2009. — 137 с. Учебное пособие является частью учебно-методического комплекса по курсу информатики средней общеобразовательной школы на...»

«10-11 класс СРЕДНЕЕ (полное) ОБЩЕЕ ОБРАЗОВАНИЕ Русский язык Дрофа Соответствует федеральному компоненту государственного стандарта общего Розенталь Д.Э. Русский 1 2012 образования 2006г. Подготовка к ЕГЭ-2013. Н.А. Сенина. язык. 10-11 кл. Греков В.Ф., Крючков Сиденко Н.В. Пособие для занятий по русскому языку в старших классах, Просвещение 2 С.Е., Чешко Л.А. Волгоград, 2006. Сочинение на ЕГЭ. Курс интенсивной подготовки. Н.А. Сенина, 2012 А.Г. Нарушевич. Пособие для занятий по русскому языку в...»

«XII С. Симаранов, Х. Шох Как создать совместную лабораторию по научно техническому сотрудничеству методические рекомендации Проект EuropeAid Наука и коммерциализация технологий 2006 Серия методических материалов Практические руководства для центров коммерциализации технологий подготовлена под руководством Питера Линдхольма (inno AG), директора проекта, представляющего консорциум inno AG (Германия), АЕА Technology (Великобритания), TNO (Нидерланды) при участии С. Клесовой (Франция), В. Иванова,...»

«Пояснительная записка Рабочая программа Музыка для школ (классов) с углубленным изучением предметов художественно-эстетического цикла базируется на программах, выпущенных под грифом Министерства образования РФ. Программа Музыка 5-8кл. Авт. Г.Сергеева. Е.Критская. Изд. М. Просвещение, 2007г. Программы образовательных учреждений. Музыка. Под руководством Д.Б.Кабалевского. 1-8 кл. –М. Просвещение, 2006 Программы образовательных учреждений. Музыка. Авторы В.В.Алеев, Т.И.Науменко. М. Просвещение,...»

«Негосударственное образовательное учреждение высшего профессионального образования СЕВЕРО-КАВКАЗСКИЙ СОЦИАЛЬНЫЙ ИНСТИТУТ УТВЕРЖДАЮ Первый проректор _ Ю.Е. Леденева _ 20 г. РАБОЧАЯ ПРОГРАММА по дисциплине История государства и права зарубежных стран по специальности 12.00.01 Теория и история права и государства; история учений о праве и государстве форма обучения: очная/заочная Разработана Согласовано: к.и.н., доцент зав. кафедрой истории и теории _ А.К. Киселёв государства и права А.К. Киселёв...»

«Федеральное агентство по образованию ГОУ ВПО Уральский государственный технический университет УПИ С.С. Ананичева, А.Л. Мызин, С.Н. Шелюг СПРАВОЧНЫЕ МАТЕРИАЛЫ ДЛЯ КУРСОВОГО И ДИПЛОМНОГО ПРОЕКТИРОВАНИЯ Часть I. Электроэнергетические системы и сети Учебное электронное текстовое издание Подготовлено кафедрой Физическая и коллоидная химия Научный редактор: проф., д-р хим. наук, Ю.Н. Макурин Методическое пособие по дисциплине Электроэнергетические системы и сети для студентов специальностей 100200 –...»

«Министерство образования Республики Беларусь УЧРЕЖДЕНИЕ ОБРАЗОВАНИЯ ГРОДНЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ ЯНКИ КУПАЛЫ О.Н. ТОЛОЧКО ВНЕШНЕЭКОНОМИЧЕСКИЕ СДЕЛКИ Учебное пособие по курсу Международное частное право для студентов специальности Г 09.01.00 Правоведение Гродно 2002 1 УДК 341.9(075.8) ББК 67.412.2 Т52 Рецензенты: доктор юридических наук, профессор Н.В.Сильченко; кандидат юридических наук, доцент И.А.Белова. Рекомендовано советом юридического факультета ГрГУ им. Я.Купалы. Толочко...»

«Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова Геологический факультет М.К. Иванов, Г.А. Калмыков, В.С. Белохин, Д.В. Корост, Р.А. Хамидуллин Петрофизические методы исследования кернового материала Учебное пособие В 2-х книгах Книга 2 Лабораторные методы петрофизических исследований кернового материала Рис. 1 Издательство Московского университета 2008 МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМ. М.В. ЛОМОНОСОВА Геологический факультет М.К. Иванов, Г.А. Калмыков, В.С. Белохин, Д.В....»

«Содержание Пояснительная записка..3 Методические рекомендации по изучению предмета и 1. выполнению контрольных работ..6 Рабочая программа дисциплины 2. Технология органических веществ.13 Контрольная работа 1 по дисциплине 3. Технология органических веществ.69 Контрольная работа 2 по дисциплине 4. Технология органических веществ.77 1 Пояснительная записка Данные методические указания по изучению дисциплины Технология органических веществ и выполнению контрольных работ предназначены для студентов...»

«Министерство образования и науки РФ Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования МАТИ - Российский государственный технологический университет имени К.Э. Циолковского А.В. Александрова, Н.Н. Кондрашева Итоговая аттестация выпускника по специальности Менеджмент организации (ОКСО 080507.65) Учебно-методическое пособие Москва 2010 УДК 002.55 ББК 65.290.2 А 46 Рекомендовано кафедрой Экономика и управление в качестве учебно-методического пособия по подготовке к...»

«Федеральное агентство по науке и инновациям САРАТОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ РОСЗДРАВА УДК 378 + 616.7 + 617.3 + 001.895 № госрегистрации Инв. № СОГЛАСОВАНО УТВЕРЖДЕНО Заместитель руководителя Ректор ГОУ ВПО Саратовский Федерального агентства по науке государственный медицинский и инновациям университет Росздрава _ И. П. Биленкина В.П.Глыбочко “_” _ 2006 г. “_” _ 2006 г. МП МП ОТЧЕТ О НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОЙ РАБОТЕ по Государственному контракту от 6 марта 2006 года №...»

«Согласовано Рассмотрено и принято Министр здравоохранения Ученым Советом НУОВППО ТМУ и социальной защиты ПМР (протокол № _ от года) В.Ф.Гуменный 2012 год Утверждаю Ректор НУОВППО ТМУ профессор Соколов В.М. Положение об интернатуре провизоров негосударственного учреждения-организации высшего профессионального и послевузовского образования Тираспольский межрегиональный университет Введено в действие Приказом ректора НУОВППО ТМУ № от __ 20_ года Общие положения Подготовка специалистов в...»

«А. С. ГЕРАСИМОВ КУРС МАТЕМАТИЧЕСКОЙ ЛОГИКИ И ТЕОРИИ ВЫЧИСЛИМОСТИ УЧЕБНОЕ ПОСОБИЕ Издание третье, исправленное и дополненное Электронный вариант этой книги (в виде PDF-файла) распространяется с сайта Московского центра непрерывного математического образования http://www.mccme.ru/free-books и с сайта её автора http://gas-teach.narod.ru. Издательство ЛЕМА Санкт-Петербург 2011 УДК 510.6+510.2+510.5+512.54.05+004.05 ББК 22.12 Г37 Герасимов А. С. Курс математической логики и теории вычислимости:...»






 
2014 www.av.disus.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.