«МАСТИТ У КОРОВ В ПОСЛЕРОДОВЫЙ ПЕРИОД (ВЕРИФИКАЦИЯ ДИАГНОЗА И ТЕРАПИЯ) ...»

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РФ

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение

высшего профессионального образования

«Саратовский государственный аграрный университет

имени Н.И. Вавилова»

На правах рукописи

АБДЕССЕМЕД ДАЛИЯ

СУБКЛИНИЧЕСКИЙ МАСТИТ У КОРОВ В ПОСЛЕРОДОВЫЙ ПЕРИОД

(ВЕРИФИКАЦИЯ ДИАГНОЗА И ТЕРАПИЯ)

06.02.06 – Ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель – доктор ветеринарных наук, профессор Авдеенко В.С.

Саратов

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

Ад – артериальное давление, мм рт. ст.

АДс – систолическое артериальное давление, мм рт. ст.

АДд – диастолическое артериальное давление, мм рт. ст.

АлАт – аланинаминотрансфераза, Е/л АсАТ – аспартатаминотрансфераза Кр – креатинин Л – лейкоциты, Лм – лимфоциты, Лт – лактат дегидрогеназа, Е/л ЛФ – лактоферрин ЛПО – лактопероксидаза М – мочевина, ммоль /л ПС – половая система Na+ – натрий сыворотки крови, ммоль/л БАС – бактерицидная активность сыворотки крови БГКП – бактерии группы кишечной палочки ИРТ – инфекционный ринотрахеит КМПА – кровяной мясопептонный агар КОЕ – колониеобразующие единицы ММГ – мастит-метрит-гипогалактия ММ-излучение – миллиметровое излучение МПА – мясопептонный агар ПАВ – поверхностно активные вещества ПБДС – пластины биохимические дифференцирующие стафилококки ПБДЭ – пластины биохимические дифференцирующие энтеробактерии СОЭ – скорость оседания эритроцитов СК – соматические клетки CMT – Калифорнийский маститный тест WMT–Висконсинский маститный тест ЛГ – лютеинизирующий гормон ОФС – оценка функционального состояния ФСГ – фолликулостимулирующий гормон ЧСС – частота сокращений сердца

ОГЛАВЛЕНИЕ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

……………………………….…

ГЛАВА 1. АНАЛИЗ ЛИТЕРАТУРЫ И ОБОСНОВАНИЕ

ВЫБРАННОГО НАПРАВЛЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ ………………….. Этиология и патогенез субклинического мастита у лактирующих 1.1.

коров …………………………………………………………………………….. 1.2. Состояние системы диагностики субклинического мастита у лактирующих коров …………………………………………………………... 1.3. Методологические принципы лечения и профилактики субклинического мастита у лактирующих коров …………………………….. 1.4. Заключение по обзору литературы ………………………………………. ГЛАВА 2. МЕТОДОЛОГИЯ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ …………. ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ ……… 3.1. Частота возникновения и дифференциальная диагностика субклинического мастита у коров в послеродовой период ………………….. 3.2. Изменение гематологических параметров у коров в послеродовом периоде и выявление информативных маркеров при субклиническом мастите ………………………………………………………………….…….…. 3.3. Изменение параметров молока у коров в начале лактации и выявление информативных маркеров при субклиническом мастите ……………………. 3.4. Видовой состав микрофлоры молока у коров, больных субклиническим маститом …………………………………………………….. 3.5. Клиническая эффективность применения препаратов цефалоспоринового ряда при субклиническом мастите ……………………... ЗАКЛЮЧЕНИЕ ……………………………………………………….……….. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ …………………………………….. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ …………………………………………………….

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Одной из важнейших задач развития молочного животноводства во всех странах мира является повышение продуктивности коров и улучшение пищевых и санитарно-технологических качеств получаемого молока [1, 4, 30, 58, 106], причиной ухудшения которых является такое широко распространенное заболевание коров, как мастит.

Мастит – одна из наиболее экономически значимых болезней молочного скота. По данным Международной молочной федерации, сообщениям Европейской ассоциации животноводов, а также по результатам многих исследований, клиническая форма мастита диагностируется у 20,0–25,0 %, а субклиническая – у 35,0–50,0 % коров молочного стада [4, 5, 6]. Причем субклиническая форма мастита может сохраняться в течение 1–2 лактаций при отсутствии своевременного и эффективного лечения [25].

В Европе более 38,0 % от общей суммы прямых расходов в молочном стаде приходится на лечение и профилактику субклинического мастита [61, 67].

Финансовые потери, связанные с заболеванием вымени и сосков у лактирующих животных, складываются из ранней выбраковки коров (потеря генетического потенциала), стоимости лекарств, ветеринарных услуг, увеличения расходов на оплату труда работников и ухудшения качества молока. В Европе они оцениваются в $ 233 на 1 гол. в год [163, 177].

Заболевания вымени и сосков в послеродовой период занимают в настоящее время первое место в структуре заболеваемости этих животных [12, 136,177,181].

При эпизоотологическом анализе состояния молочных стад данная патология не учитывается, хотя ее удельный вес в нозологическом профиле был бы весьма значителен. Так, ряд исследователей [115, 125, 138] отмечают, что до 77,7 % лактирующих животных переболевают субклиническим маститом в послеродовой период.

Этиологией, патогенезом и лечением субклинического мастита у коров занимались отечественные и зарубежные исследователи [6,69, 134, 146, 175, 194].

Особое внимание они уделяли изучению состояния гомеостаза, иммунной системы в различные периоды лактации и применению различных лекарственных средств.

Субклинический мастит, по данным большинства авторов [23, 24, 116, 117, 118], встречается везде, где развито молочное скотоводство. Однако различия в технологии содержания, генетических особенностях животных и другие факторы могут существенно влиять на распространение маститной патологии [3, 5, 31, 84, 100].

При исследовании породной предрасположенности коров к маститу Б.К.

Акназаров [5] выявил, что чистопородные коровы симментальской породы заболевают маститами реже, чем их помеси с голштинофризским и черно-пестрым скотом. Л.К. Попов [117], сравнивая черно-пестрый и симментальский скот, установил, что последний более устойчив к маститной патологии.

Рядом авторов проведено исследование не только терапевтической эффективности фармакологических средств, но и их профилактической активности. Так, О.П. Татарчук [144] и другие исследователи [22, 195] рекомендуют для профилактики мастита парентеральное применение ветеринарных препаратов совместно с интрацистернальными препаратами лактирующим коровам, что позволяет на 20,0 % повысить эффективность профилактических мероприятий.

Социальное значение мастита, по мнению Л.Д. Демидовой [40], проявляется в том, что возбудители маститов у коров могут вызывать заболевания и у людей. Поскольку в маститной патологии ведущая роль принадлежит стрептококкам и стафилококкам, то именно они чаще всего попадают в молоко.

Так, роль молока в распространении пищевых токсикоинфекций, особенно стафилококковой, была неоднократно подтверждена фаготипированием [40].

Таким образом, во всех странах мира с интенсивным молочным животноводством болезни вымени у крупного рогатого скота представляют собой социально-экономическую проблему. Они обусловливают колоссальные потери молока за счет снижения молочной продуктивности животных, уменьшают сроки хозяйственного и племенного использования коров, снижают качество молока и молочной продукции.

Степень разработанности темы. Значимость маститной патологии, согласно литературным данным, велика как по экономическим, так и по социальным последствиям. Снижение молочной продуктивности в период болезни, по данным Л.К. Попова [117], составляет 33,0–62,0 %. Контрольные удои с 5-х по 40-е сут. показали неполное восстановление молочной продуктивности после лечения мастита. Потери молока у коров, переболевших субклиническим маститом, составляет в среднем 226,85 кг (4,53 кг/сут.).

регистрируют в странах с развитым молочным скотоводством, особенно там, где высок уровень механизации и автоматизации производства и наиболее интенсивна эксплуатация животных.

В исследованиях Н.Т. Климова [69] показано, что при производстве молока с традиционной технологией количество животных с атрофией (следствие мастита) одной, двух и более четвертей составило 8,4 %, а в стадах молочных комплексов 10,33 %.

Причины возникновения субклинического мастита интересовали ученых длительное время, однако до настоящего времени ветеринарные специалисты не пришли к единому мнению о первостепенном значении тех или иных факторов в развитии данной патологии. В качестве причин субклинического мастита рассматривается ряд факторов: это инфекционное начало и факторы окружающей среды, такие как нарушение ветеринарно-зоотехнических правил, послеродовые осложнения и травмы опорно-двигательного аппарата [86, 139].

Несмотря на признание большинством авторов [4, 135, 157, 171] роли микробного фактора в развитии маститной патологии, субклинический мастит в нозологическом профиле не представлен как инфекционная болезнь. Этому способствуют такие факторы, как его полиэтиологичность, сравнительно невысокая возможность заражения, а также традиционно сложившееся представление о том, что заболевание связано с условиями внешней среды (кормлением, доением).

В.Д. Мисайлова [95], при субклиническом мастите активность матки снижается в 1,5–2,0 раза, удлиняются ее инволюция, сервис-период (на 16 дней). Молоко от коров, переболевших маститом в начале лактации, даже с неявными клиническими признаками, в 80,0 % случаев вызывает у новорожденных телят расстройство пищеварительного тракта и нередко заканчивается их гибелью.

При рассмотрении рядом авторов взаимосвязи здоровья коров-матерей и их потомства была выявлена коррелятивная зависимость [87, 179].

Большинство авторов [87, 92, 116, 126, 133, 148, 164, 179] указывают на снижение при мастите качества молока (плотность, кислотность, жирность, СОМО, увеличение бактериальной контаминации) и получаемых из него продуктов.

В настоящее время установлено, что стафилококки могут выделять экзотоксины, вызывающие поражение желудочно-кишечного тракта у людей и животных (стафилококковый энтеротоксический гастроэнтерит), иногда заканчивающийся летально [83, 111].

Мастит – одно из наиболее распространенных заболеваний молочного скота в мире [60], несмотря на широкое внедрение технологий профилактики мастита.

Возбудителем заболевания могут быть различные микроорганизмы: бактерии, микоплазмы, дрожжи и водоросли. Выделяют более 137 видов микроорганизмов, которые могут послужить причиной его возникновения [72], но только 20 из них хорошо изучены. Маститы могут быть классифицированы по двум типам:

инфекционного патогенеза и патогенеза, связанного с окружающей средой [179].

Возбудители инфекционного патогенеза существуют внутри зараженных долей вымени. Они приводят к возникновению субклинического мастита, который, как правило, проявляется в виде увеличения числа соматических клеток (лейкоцитов [преимущественно нейтрофилы] и эпителиальных клеток) в молоке из пораженной четверти [2, 60, 199]. Возбудители передаются от коровы к корове или от одной доли вымени к другой, а также во время доения через ветошь для вытирания рук доярок и доильных аппаратов. Наиболее распространенными патогенными организмами этого типа являются Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcusdis dysgalactiae, Corynebacterium bovis. [83].

распространенные микроорганизмы, связанные с окружающей средой, – это Esherichia coli и Streptococcus uberus [2, 42, 69,72].

происхождение, в 80,0 % случаев вызываются пятью видами бактерий (Escherichia coli, Streptococcus uberis, Staphylococcus aureus, Streptococcus dysgalactiae и Streptococcus agalactiae) [78].

Экономические последствия мастита крупного рогатого скота явились причиной разработки различных терапевтических стратегий для борьбы с инфекцией молочной железы. Для этого применяются препараты, относящиеся к противовоспалительные, витамины, вакцины, цитокины и даже гомеопатия.

Разработаны различные пути введения лекарственных средств: системный, внутрицистернальный и местный (нанесение на сосок или кожу вымени) [91].

Однако, несмотря на значительный прогресс в терапии маститов, часть животных продолжает страдать от этого заболевания [2, 92].

В России чаще всего для системного лечения мастита применяют препараты на основе антибиотиков (пенициллина, стрептомицина, неомицина, эритромицина и некоторых других), эффективность которых недостаточно высока [180].

В последнее время на рынке стали появляться препараты на основе цефалоспоринов) [200].

полусинтетических антимикробных препаратов, используемых для лечения молочного скота при заболевании бактериальной этиологии [220]. Представителем третьего поколения цефалоспоринов является цефтиофур, специально синтезированный для крупного рогатого скота [181].

Цефтиофур обладает повышенной активностью в отношении грамотрицательных бактерий, сохраняя при этом высокую активность против грамположительных бактерий. Следует также отметить его повышенную гидролитическую стабильность в отношении -лактамаз. В целом антибиотики цефалоспоринового ряда активно воздействуют на -лактамазу [221].

Оксиминная группа в боковых цепях увеличила устойчивость -лактамного кольца в отношении -лактамаз [220]. Цефтиофур (как натриевая соль) был введен в ветеринарную практику в 1988 г. компанией Upjohn Company в виде препарата Naxcel® в форме стерильного порошка, который использовался для приготовления раствора для внутримышечных инъекций, при лечении респираторных заболеваний у крупного рогатого скота. Тогда же стал использоваться и цефтиофур гидрохлорид в виде масляной суспензии, известный как Excenel® RTU [221].

В последнее время появились суспензии для интрацистернального введения (Spectramast DC), применяемые при лечении и профилактике маститов. Отличительная особенность препаратов на основе цефтиофура – возможность применения их лактирующим животным без ограничения использования молока [220].

Системное применение антибиотических препаратов обычно является единственным способом быстрого лечения субклинического мастита у лактирующих коров. Курс лечения составляет до 3–5 введений. При этом не следует забывать об ограничении на использование молока, которое составляет от 2 дней при применении антибиотиков пенициллинового ряда и до 21 дня и более при применении антибиотиков тетрациклинового ряда.

Цель и задачи. Цель работы – разработка критериев дифференциальной диагностики субклинического мастита; изучение терапевтической эффективности применения препарата «Цефтонит®» (на основе цефтиофура) при лечении субклинического мастита в период лактации в сравнении с препаратом «Cobactan 2,5 %» (на основе цефкинома сульфата); выяснение срока ограничения на использование молока вследствие присутствия антибиотиков.

В соответствии с поставленной целью определены следующие задачи:

субклинического мастита и разработка алгоритма дифференциальной диагностики;

иммунобиологических и гормональных параметров организма и изменения статуса лактирующих коров, больных субклиническим маститом;

– установление клинической и терапевтической эффективности применения препарата «Цефтонит®» при субклиническом мастите у коров в начале лактации.

Научная новизна. Впервые:

– выявлены информативные показатели по результатам клинических, рентгенологических и эхографических исследований животных, больных субклиническим маститом, а также разработан алгоритм дифференциальной диагностики мастита у лактирующих животных в послеродовой период;

– показано, что развитие субклинического мастита в 46,6 % случаев сопровождается иммунологическим стрессом в родовом и послеродовом вариабельностью сердечного ритма, ортостатической дисрегуляцией и усилением тонических влияний парасимпатического отдела нервной системы;

лактирующим коровам терапевтически эффективно, что сопровождается восстановлением гомеостаза, устранением гиперсимпатикотонии со снижением частоты вариабельности сердечного ритма;

– обоснованы критерии оценки экономической эффективности препарата «Цефтонит®» при субклиническом мастите, что сопровождается повышением качества молока и молочной продуктивности.

Теоретическая и практическая значимость работы. Разработаны пути оптимизации дифференцированной диагностики субклинического мастита у коров в послеродовом периоде, а также выбора рационального метода лечения препаратом «Цефтонит®» с нормализацией мамогенеза, гомеостаза и нейрогуморальной регуляции сердца с установлением паритета двух отделов вегетативной нервной системы. Дана оценка эффективности применения препарата «Цефтонит®» и переносимости его животными без ограничения реализации молока после лечения.

В ходе исследований получены данные, которые могут использованы:

– практикующими ветеринарными специалистами при установлении дифференциального диагноза на субклинический мастит в послеродовом периоде и лечении препаратом «Цефтонит®»;

– в учебном процессе на факультетах ветеринарных учебных заведений, на курсах повышения квалификации практикующих ветеринарных врачей, а также при написании учебников, учебных пособий и монографий;

– в научной и исследовательской работе организаций биологического, ветеринарного и медицинского профиля.

Положения, выносимые на защиту:

– пути оптимизации дифференцированной диагностики субклинического мастита в послеродовой период, а также выбора метода лечения препаратом «Цефтонит®» без ограничения реализации молока на пищевые цели;

– развитие субклинического мастита в послеродовой период в 46,6 % случаев сопровождается иммунологическим стрессом, нарушением автономной регуляции сердца с повышенной вариабельностью сердечного ритма, парасимпатического отдела нервной системы;

– применение препарата «Цефтонит®» в послеродовой период у коров, больных субклиническим маститом, эффективно, что сопровождается достоверным восстановлением гомеостаза, нормализацией качества молока и нейрогуморальной регуляции сердца с установлением паритета двух отделов вегетативной нервной системы;

Степень достоверности и апробация результатов. Основные положения, заключение и практические предложения, сформулированные в диссертации, отвечают целям и задачам работы, а клинические, диагностические и экспериментальные исследования проведены на сертифицированном современном оборудовании. Достоверность полученных результатов подтверждена статистической обработкой полученных данных.

Результаты диссертации доложены, обсуждены и одобрены на ежегодных научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ» (Саратов, 2011–2014), на VII, VIII, IX Международном симпозиуме «Состояние и перспективы развития практикующей ветеринарной медицины» (Москва, 2011, 2012, 2013); Международной научно-производственной и учебно-методической конференции «Молодые ученые в решении актуальных проблем науки»

(Владикавказ, 2012); Всероссийской научно-практической конференции СевероЗападного региона РФ (Санкт-Петербург, 2012); XII, XIII Поволжской научнопрактической конференции (Саратов, 2012, 2013).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ, общим объемом 3,85 печ. л. (3,0 печ. л. принадлежат лично соискателю), 3 из них опубликованы в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертационное исследование изложено на 122 страницах машинописного текста компьютерного набора; состоит из введения, 3 глав, заключения, практических рекомендаций, списка литературы.

Работа содержит 26 таблиц, 16 рисунков. Список литературы включает в себя источника, из них 170 на русском и 54 на иностранном языке.

ГЛАВА 1. АНАЛИЗ ЛИТЕРАТУРЫ И ОБОСНОВАНИЕ ВЫБРАННОГО

НАПРАВЛЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ

1.1. Этиология и патогенез субклинического мастита Производственно-технологические вопросы предупреждения возникновения субклинического мастита. Заболевания вымени у коров в послеродовой период – одна из наиболее серьезных проблем молочного скотоводства [2, 17, 61, 74, 106, 136, 148, 160, 202].

Экономический ущерб от заболеваний молочной железы у коров превосходит потери от незаразных и заразных болезней вместе взятых [1, 8, 28, 66, 139, 182], что обусловливается рядом факторов:

– большим охватом поголовья (от 20,0 до 50,0 %) – снижением молочной продуктивности как в период болезни, так и после лечения (в целом по стаду оно составляет 10,0–12,0 % годового удоя) – преждевременной вынужденноц выбраковкой части коров из-за необратимых изменений в молочной железе;

– снижением генетического потенциала стада, поскольку заболеваниям молочной железы наиболее подвержены высокопродуктивные животные;

– примесью маститного молока к нормальному, что снижает его потенциальную ценность и технологические качества, создает угрозу здоровью людей, особенно детей( молозиво и молоко маститных коров служит одной из причин заболеваемости и гибели новорожденных телят от диспепсии);

– осуществлением комплекса лечебно-профилактических мероприятий при мастите сопряжено со значительными финансовыми и трудовыми затратами.

Как показывают расчеты, суммарный ущерб от заболеваний матки и вымени у коров эквивалентен стоимости 12,0–15,0 % произведенной продукции [18, 21, 149, 163, 169]. Поэтому во многих странах мира разработаны и приняты национальные программы борьбы с патологией матки и молочной железы у коров, их осуществление субсидируют правительства этих стран [38, 52, 61, 92, 198].

К настоящему времени имеется немало сведений [78, 139, 146, 208] об отрицательных последствиях массового бесконтрольного применения антибиотиков и химиотерапевтических препаратов в системе противомаститных мероприятий.

Так, при их внутрицистернальном введении возникает опасность нарушения целостности защитного кератинового слоя, возникновения микротравм слизистой оболочки соскового канала, внесения извне микроорганизмов [13, 47, 54, 199].

Активные компоненты (антибиотики, сульфаниламиды, нитрофуруновые соединения), входящие в состав маститных препаратов, обладают иммунодепрессивным действием. Следовательно, они являются одной из причин иммунодефицитных состояний у животных [125, 137, 211].

От 26,0 до 40,0 % антибиотиков при внутрицистернальном их применении в составе маститных препаратов выделяются с молоком. Остаточные антибиотики обнаруживаются в молоке на протяжении всего курса лечения и в последующие 72–96 ч. Наличие ингибирующих веществ в молоке является серьезной проблемой в ветеринарии [40, 138, 190].

Так, употребление в пищу молока, содержащего антибиотики, вызывает реакцию аллергического и анафилактического характера, дисбактериоз в кишечнике [56, 64, 191].

Длительное пребывание антибиотиков и химиотерапевтических препаратов в молочной железе может привести к повреждению паренхимы и развитию на этой почве гипо- и агалактии [69, 111].

По некоторым данным [71, 112], организация полноценного кормления, содержания, доения и соблюдение гигиенических требований – гарантия производства молока высокого санитарного качества и предотвращения заболеваний вымени.

Для получения молока высокого санитарного качества необходимо создание условий, обеспечивающих нормальное физиологическое состояние вымени у коров. Эффективность использования доильных установок зависит от того, насколько они подходят животным. До сих пор во многих хозяйствах имеется большое количество коров, которые плохо выдаиваются аппаратом из-за наличия дефектов в строении вымени [53, 67, 75, 86, 108, 170]. Поэтому необходимо проводить отбор и селекцию на выведение коров, по своим морфологическим и функциональным свойствам пригодных к машинному доению [97, 127, 167].

Форма вымени – один из основных показателей пригодности коров к машинному доению [99, 117, 126].

ваннообразное, чашеобразное и округлое. Нежелательным следует считать вымя козьей формы. Коровы с чашеобразным выменем наиболее продуктивны. Они отличаются более полной молокоотдачей при высокой скорости выделения молока [87, 95].

Коровы с округлым выменем пригодны к машинному доению. Однако следует учитывать, что при подвешивании на такое вымя доильных стаканов соски несколько пригибаются, молочные протоки сдавливаются, в результате последние порции молока не выдавливаются аппаратом. Такое вымя чаще травмируется, загрязняется и подвергается различным болезням [73, 91, 100].

Коровы с козьим выменем совершенно непригодны к машинному доению.

В стадах их не более 5–6 %, они подлежат выбраковке [3, 28, 122].

Равномерность развития долей, дающих примерно одинаковое количество молока с отклонением не более 5–7 % задних от передних, позволяет выдаивать его аппаратом из всех долей практически одновременно. Если вымя развито неравномерно, то молоко из менее развитых, обычно передних, долей выдаивается раньше. Доильные стаканы при этом продолжают оставаться на сосках до конца выдаивания молока из задних долей. В этом случае передние соски подвергаются холостому доению, что может привести к воспалению вымени и маститу [58, 76, 147].

Скорость молокоотдачи и полнота выдаивания играют важную роль, особенно при использовании установок типа «Елочка», «Карусель» и другой доильной техники [4, 7, 55, 163].

Максимальное время доения каждой коровы не должно превышать 5–6 мин, т.е.

скорость доения должна отвечать длительности действия рефлекса молокоотдачи, который связан с присутствием в крови гормона окситоцина [10, 19, 45].

Размер, форма и расположение сосков вымени имеют не менее важное значение для машинного доения коров. Желательная длина сосков 8–10 см, толщина 2–3 см. Корова с более толстыми сосками испытывает боль при доении, так как канал соска сильно сдавливается, и рефлекс молокоотдачи тормозится. С очень маленьких и тонких сосков доильные стаканы спадают. Лучшее расстояние от сосков до уровня пола не менее 35–40 см, иначе доильный аппарат будет касаться пола, что ведет к загрязнению отверстий коллектора и проникновению патогенной микрофлоры [23, 122, 142, 212].

признакам, необходимо проводить своевременную выбраковку первотелок, не удовлетворяющих требованиям машинного доения [71, 156, 217].

Инфекция молочной железы – это, прежде всего, бактериальная инфекция.

Однако она может быть вызвана микоплазмами, грибами, вирусами и другими микроорганизмами. Большинство маститов вызвано бактериальной инфекцией молочной железы [5, 27, 101, 214].

Инфекционный мастит распространяется от коровы к корове. Среда обитания бактерий, которые вызывают инфекционный мастит, находится на коже вымени и в повреждениях соска. Эти бактерии не устойчивы в окружающей среде, если не находятся на коже или в молочной железе. Инфекционный мастит может протекать в хронической и субклинической формах. Инфекция передается с загрязненным молоком во время доения через доильные аппараты, губки для мытья сосков, руки доярок и т.д. [9, 81, 101, 218].

Основные организмы, вызывающие инфекционный мастит, – Streptococcus agalactiae, Staphylococcus aureus и Mycoplasma (bovis) [14, 36, 129, 219].

Streptococcus agalactiae (Strep. agalactiae) – грамположительные бактерии, населяющие емкостную систему вымени (мелкие, средние, крупные каналы и цистерну молочной железы). Они вызывают воспаление, которое блокирует каналы и ведет к снижению производства молока, увеличению количества соматических клеток, в конечном счете, к инволюции альвеолярного аппарата.

Кроме того, в емкостной системе вымени имеется несколько ферментов/токсинов, очень чувствительных к антибиотикам [43, 63, 193].

Staphylococcus aureus (Staph. aureus) возникновения маститов. Они вызывают острый, хронический и субклинический маститы. Эти бактерии производят много ферментов/токсинов (каталазу, коагулазуа), они высоко агрессивны (производят гиалуронидазу, которая позволяет им вторгаться в ткани), обладают способностью сопротивляться фагоцитозу (производят тиахуроновую кислоту). Staph. аureus – факультативновнутриклеточные паразиты (могут жить внутри фагоцитов), среднеустойчивы в окружающей среде. Их часто изолируют из молочных желез первотелок. Они являются главной причиной мастита у телок. Некоторые штаммы Staph. aureus устойчивы к антибиотикам вследствие генетических мутаций [6, 29, 33, 34, 80, 194].

Микоплазмы – полиморфные организмы (не имеют клеточной стенки), часто выделяются из дыхательного и мочеполового трактатов. Они вызывают энзоотический мастит (заболевает много коров в одно и то же время, быстро распространяется), против которого нет эффективного лечения. Инфицированные коровы должны быть изолированы или выбракованы [12, 48, 158, 292].

Мастит считается «дорогостоящей болезнью» в молочном скотоводстве.

Потери в американской молочной промышленности только от мастита составляют как минимум $ 2 млрд/год. Распространенность среди молочного рогатого скота приближается к 25 % или превышает это значение [17, 135, 196]. При маститах снижается производство молока, приблизительно 70,0 % от общих потерь. При субклиническом мастите у 10,0–26,0 % коров прекращается лактация в одной или во всех четвертях вымени [2, 8, 157, 229].

После использования антибиотика молоко не пригодно к употреблению.

Забракованное молоко и уменьшенное его производство при субклиническом мастите у коров составляют около 85,0 % от всех потерь [4, 20, 153].

Качество молока при субклиническом мастите снижается в результате увеличения количества лейкоцитов, уменьшения жира и белка [24, 35, 60].

По данным [8, 39, 52], иногда трудно ввести программы контроля заболеваемости маститом, так как 70 % потерь невидимы производителю (неосуществленный потенциал производства).

Действительно ли возникновение субклинического мастита зависит от взаимодействия хозяина, инфекционного агента и факторов окружающей среды?

По данным [25, 30, 46], это выглядит следующим образом:

– факторы хозяина включают в себя присутствие/отсутствие естественного сопротивления маститу, состояние механизмов защиты (чем представлены и как функционируют), учитывают стадию лактации, наличие стресса;

микроорганизмов в железе, их патогенность (они должны проникнуть в железу, адгезироваться на ткани, затем воспроизводиться), а также другие факторы вирулентности и состояния иммунного статуса хозяина;

функционирование доильных аппаратов, организацию доения, методы гигиены доения, тип технологии содержания и подстилки, технологию кормления и погодные условия.

По данным [59, 75, 79], мастит чаще всего протекает в период активной инволюции после запуска, а также в течение ранней лактации. Молочная железа подвергается активной инволюции в начале сухостойного периода.

Инфекция, вызывающая мастит, может возникнуть в любое время лактации. Данная ситуация предрасполагает молочную железу к маститу в первые две недели после запуска [46], так как она продолжает секретировать молоко с максимальным накоплением его в вымени (продолжается секреция альвеолярных желез от 2 до 3 дней после того, как доение молока остановлено).

Давление в железе может заставлять канал соска и его сфинктер расширяться, позволяя бактериям проникать в железу, откуда они регулярно не удаляются процессом доения [107].

Фагоциты вовлечены в процесс удаления продуктов клеточной секреции (жир, казеин) и малоэффективны при удалении бактерий из вымени. Увеличение цитрат:лактоферриновое отношение) в железе улучшает защиту, но не может решить проблемы, отмеченные выше [113].

Обработка всех четвертей вымени у сухостойных коров антибиотиками во время запуска уменьшает количество стрептококковых и стафилококковых (но не колиформных) маститов во время активной инволюции. При этом сокращение периода активной инволюции введением колхицина (прерывает механизмы секреции молока) уменьшает вероятность мастита [102, 114].

По данным [11, 47], некоторые механизмы защиты от инфекционного начала ставятся под угрозу в течение периода до и после родов, что совпадает с формированием молозива и предрасполагает молочную железу к маститу.

Увеличение объема жидкости в вымени приводит к расширению канала соска, иногда к утечке молозива. Повышается содержание цитрата и снижается количество лактоферрина. В это время фагоцитарные клетки не эффективны при захвате и убийстве бактерий в молозиве [109], а высокая концентрация иммуноглобулинов в молочной железе не эффективна в предотвращении нового мастита. В то же время IgG1, главный изотип иммуноглобулинов в молозиве коров, обычно не эффективный опсонин в молочной железе в этот период [115].

Кроме того, концентрация антибиотика при антибиотикотерапии сухостойных коров слишком низка, чтобы предотвратить инфекцию, а дезинфекция соска в этот период не эффективна [46, 120].

В ранний период лактации коровы подвержены метаболическому стрессу [17, 75, 140], который может ставить под угрозу иммунитет животных и кончаться клиническими вспышками субклинических заразных болезней (мастита, приобретенного в течение сухостойного периода). По данным [122], для мастита характерно большое количество концентрированных кормов в ранний период лактации.

По многочисленным исследованиям [4, 10, 70], дефицит витаминов, макро-, микроминералов влияет на частоту возникновения клинического или субклинического мастита, увеличивает тяжесть течения заболевания вымени. В последние годы [82] уделяют особую роль селену и витамину E, которые защищают железистую ткань вымени от повреждения (ущерба) oxidative и увеличивает функцию фагоцитов.

В то же время мало изучено влияние на возникновение мастита таких витаминов и минералов, как В-каротин, витамин A, цинк, медь, кобальт и др.

Патогенез воспаления молочной железы у лактирующих животных.

Бактерии попадают в молочную железу тремя путями (галактогенно, гематогенно и лимфогенно). Проникшие в молочную железу бактерии могут размножаться в количестве, достаточном, чтобы вызвать серозное или катаральное воспаление [2, 126, 164]. В связи с этим происходит вазодилатация, которая приводит к увеличению притока крови к молочной железе, что увеличивает сосудистую проницаемость альвеолярного аппарата вымени. Этому способствуют такие воспалительные медиаторы, как простогландины, лейкотриены, протеазы и токсические метаболиты кислорода. Они увеличивают капиллярную порозность железистой ткани в молочной железе [2, 28]. Отек происходит из-за инфильтрации жидкости в железистую ткань. Фагоциты оставляют кровеносные сосуды и выходят за их пределы (диапедез). Первоначально полиморфноядерные нейтрофилы входят в железистую ткань, в последующем преобладают макрофаги, происходит фагоцитоз и разрушение бактерий [15, 188].

По мнению [16, 178], регенерация железистой ткани происходит после разрушения бактерий. Однако секретирующая молоко альвеолярная ткань может разрушаться, что приводит к образованию рубца.

По данным [18, 31, 177], факторами, влияющими на способность молочной железы сопротивляться инфекции, являются полиморфноядерные нейтрофилы, но некоторые лейкоциты при этом могут быть слишком стары, чтобы быть максимально эффективными, особенно те, которые вступили в воспалительную реакцию первыми.

Когда же происходит большой выброс нейтрофилов в молочную железу, некоторые из них могут быть слишком незрелыми, чтобы быть максимально эффективными.

Некоторые полиморфноядерные нейтрофилы будут заглатывать бактерии, но не убивать их, защищая таким образом от дальнейшего разрушения и обеспечивая источник хронической инфекции [33, 59, 187].

Компоненты липидов молока и фракции летучих жирных кислот могут блокировать иммуноглобулиновые рецепторы (Fc-рецепторы) на лейкоцитах.

Блокировка Fc-рецепторов может привести к дополнительному выбросу в железистую ткань гидролитических ферментов, осложняя воспаление в железистой ткани [49, 85].

По данным [16, 69, 77], кислород необходим для кислородзависимой микробоцидной системы, которая является частью фагоцитоза, но концентрация его в молоке низка (в 100 раз меньше, чем в крови). Поэтому фагоциты во время фагоцитоза используют большое количество энергии; глюкоза – ее первичный источник. В молоке концентрация глюкозы низкая, фагоциты не способны использовать лактозу (лейкоциты, найденные в молоке, содержат приблизительно на 38,0 % меньше гликогена, чем найденные в крови) [111, 138].

В то же время молоко относительно бедно опсонинами, такими как иммуноглобулины и комплемент [110, 138].

По данным [124, 131, 140], молоко коровы имеет по существу низкую лизоцимную активность (лизоцим – антимикробный гидролитический фермент, найденный в высоких концентрациях в молоке других видов животных).

Мастит могут вызвать многие патогены. У лактирующих коров нет специфических антител против патогенов [90, 128, 171]. Некоторые бактерии, перевариванию. Это позволяет им жить в молочной железе, быть защищенными от механизмов иммунитета и реинфицировать лактирующее вымя.

Кроме того, проведенные в последнее время исследования [65, 106] показали, что сниженную способность полиморфноядерных нейтрофилов к фагоцитозу и убийству бактерий имеют коровы в околородовой период, а также при дефиците витамина E или селена.

Иммунологические и защитные процессы, происходящие в лактирующей молочной железе, играют двойную роль – защита новорожденного и молочной железы. Приведем некоторые литературные данные [154]:

– избирательная проницаемость IgG1 во время формирования молозива и в течение ранней инволюции (это относится к молочной железе, но не к другим эпителиальным и слизистым оболочкам);

– избирательная проницаемость для секреторных иммуноглобулинов (IgA, IgM) в течение формирования молозива и лактации (подобные механизмы существуют и в других эпителиальных и слизистых оболочках);

– вовлечение клеточных и гуморальных факторов в защиту молочной железы в ответ на инфекцию.

По данным морфологических исследований [16, 73], сосок и канал соска – первая линия защиты молочной железы. Длина и диаметр канала соска могут влиять на восприимчивость к проникновению бактерий. Кератин, выстилающий канал соска, содержит факторы, которые обладают бактериостатическим эффектом.

Исследования, проведенные [74, 173], показали, что предрасполагающим фактором возникновения мастита является форма соска, его сфинктера и концевой части. Остроконечные или округленные концы соска отличаются лучшей сопротивляемостью маститу, чем плоские или вдавленные. Конусовидные соски более стойкие, чем цилиндрические.

Канал соска простирается от его отверстия до перехода в цистерну, при этом выстлан слоями сквамозного эпителия [16, 95, 174]. Канал соска имеет несколько механизмов защиты: физическая преграда для попадания бактерий в молочную железу и кератиновая заглушка для предотвращения их входа.

Формирование кератиновой заглушки в течение раннего сухостойного периода – важный механизм защиты, способствующий высокому сопротивлению болезни, наблюдаемому в молочной железе до родов и после них.

Сфинктер расположен в стенке соска, в 2 мм от канала соска, состоит из сжимающегося гладкого мускула, не имеет антибактериальной активности, но, открывая и закрывая канал соска, является физической преградой для бактерий.

Некоторые коровы имеют слабый сфинктер (низкий тонус) и могут быть более восприимчивы к маститу [17, 53].

отмерших эпителиальных клеток, жирных кислот и катионоактивных белков [159]. Он функционирует как физическая преграда для бактерий и адсорбирует те, которые могут входить в канал соска. Кератин с адсорбированными бактериями выдаивается вместе с молоком в период лактации. Кератин содержит жирные кислоты с бактерицидным и бактериостатическим эффектом, а также белки, которые связывают с лизисом грамположительные бактерии. Однако некоторые бактерии могут сохраняться и расти в кератине. Толстый слой кератина обеспечивает большее сопротивление маститу. У кератина кислотный состав жиров наследственный [52, 135].

По данным [62, 155], лауриновая, миристиновая и пальмитиновая кислоты «связаны с сопротивлением маститу», в то время как стеариновая, олеиновая и линоленовая не обладают защитными свойствами.

Морфологические исследования [4, 58, 74] показали, что проток канала соска спавшийся и закрыт между доениями. Перистальтика гладких мускулов, выстилающих канал, способствует выведению бактерий. Канал становится расширенным во время доения (8,6 мм длиной, 1,2 мм в диаметре), после чего, оставаясь в таком же состоянии, не имеет перистальтики от 2 до 4 ч. Временное насыщение тканей конца соска жидкостью (кровь, межклеточная жидкость) происходит после доения. Чтобы оставить конец соска, жидкости требуется время. Через короткий широкий канал молоко доится быстрее, но такая корова более восприимчива к маститу. Длина и диаметр канала соска изменяются с возрастом, который играет важную роль в восприимчивости к маститу [75].

В ходе исследований [73, 80] выявлено специфическое образование (розетка Фюрстенберга), которое расположено во внутреннем конце канала соска.

Оно имеет защитную инфильтрацию лейкоцитами, которые, как полагают [16, 74], оставляют его и входят в цистерну в области розетки Фюрстенберга, содержащей бактерицидные катионоактивные белки.

внутрисосковое вливание жидкостей ослабляет естественные механизмы защиты канала соска, расширяя его, соскабливая или удаляя кератин (требуется от 2 до недель для исправления), подталкивает микроорганизмы в цистерну соска. Один из эффективных способов решения этой проблемы – частичная вставка канюли в конец соска.

По данным [14, 99], бактерии способны избегать естественных механизмов защиты:

– прямым попаданием в цистерну соска через внутрисосковые вливания, в результате чего увеличивается число бактериальных колоний по каналу соска (особенно после доения);

– проталкиванием в цистерну соска вакуумными колебаниями во время доения.

В большинстве тканей иммунная система обычно подавляет бактерии.

Однако в молочной железе многие факторы могут поставить под угрозу эффективность иммунных компонентов [10, 134]. Иммунная система включает в себя все физиологические механизмы, позволяющие организму идентифицировать и нейтрализовать инородные или измененные клетки.

Литературные данные показывают [138]:

– клеточный иммунитет – лейкоциты;

– гуморальный иммунитет – растворимые иммунные компоненты, такие как иммуноглобулины и комплемент.

Иммунные клетки включают в себя лейкоциты (белые клетки крови) и их производные в тканях. Все эти ячейки происходят из красного костного мозга.

Типы лейкоцитов [134, 137, 138]:

– гранулоциты – нейтрофилы (полиморфноядерные нейтрофилы, или полиморфноядерные нейтрофилы, имеют сегментированные ядра), базофилы и эозинофилы. Все имеют гранулы, которые содержат гидролитические ферменты и другие антибактериальные и бактериолитические компоненты. Гранулоциты, являющиеся фагоцитами, глотают и уничтожают инородный материал. Во время мастита или активной инволюции полиморфноядерные нейтрофилы являются клетками, первыми попадающими в ткань. Они рассматриваются как «вторая линия защиты» в молочной железе;

– лимфоциты – выделяют два основных типа. B-лимфоциты вовлечены в производство антител (производят гуморальные иммунные компоненты).

T-лимфоциты включены в клеточный иммунитет (Т-киллеры, Т-хелперы и т.д.).

Конкретное назначение B- и T-лимфоцитов в молочной железе определить сложно. Однако плазмоциты, производные B-лимфоцитов, находясь в ткани, локально секретируют иммуноглобулины;

– моноциты/макрофаги – относятся к мононуклеарам (несегментированное ядро). Моноцит – форма, найденная в крови, после выхода в ткань становится макрофагом. Макрофаги важны в инициировании как клеточного, так и гуморального иммунного ответа, также в фагоцитозе чужеродных клеток. Обычно в молочной железе эпителиальных клеток меньше чем 2,0 %. Оставшиеся соматические клетки – лейкоциты. Полиморфноядерные нейтрофилы преобладают во время ранних стадий воспаления или инволюции и могут составлять более чем 90,0 % всех соматических клеток. Макрофаги и лимфоциты входят в ткань позже и преобладают после нескольких дней. Макрофаги предоставляют антиген лимфоцитам и начинают вводить гуморальный и клеточный специфический иммунный ответ.

По данным [134], специфический иммунитет требует предшествующего контакта с антигеном, повторной идентификации этого антигена и ответа со стороны лимфоцитов. Специфический иммунитет включает в себя гуморальный и клеточный компоненты.

Исследованиями [58, 66] установлено, что неспецифический иммунитет осуществляется гранулоцитами и макрофагами и не требует предшествующего контакта с антигеном. Полиморфноядерные нейтрофилы и макрофаги будут пытаться заглатывать любые чужеродные частицы, независимо встречались они с ними ранее или нет. Неспецифический иммунитет особенно важен на раннем этапе бактериального воздействия.

Проведенные исследования [85, 162, 172] показали, что антиген – инородное вещество, которое стимулирует специфический иммунный ответ, в основном белок или полисахарид. Антитело – специфический белок, способный к объединению с определенным антигеном. Антитела синтезируются в плазмоцитах. Антитела – класс белков, называемых иммуноглобулины (Ig). Известны следующие классы иммуноглобулинов (антител): IgG, IgM, IgA, IgD, IgE.

Данные, приведенные В.И. Слободяником [134, 138], показали, что антитела участвуют в формировании комплекса антиген-антитело в молочной железе, который:

– усиливает фагоцитоз (опсонизацию и распознание);

– участвует в нейтрализации антигенов (токсинов и вирусов);

– активирует компоненты системы комплемента.

Комплемент – часть гуморальной системы иммунитета [90]. Он представлен рядом белков крови, которые взаимодействуют как каскад ферментов и функционируют как компонент острого воспалительного ответа. Есть 11 компонентов комплемента. Они могут функционировать совместно с иммуноглобулинами и лейкоцитами или независимо от них. Главный результат активации комплемента – лизис целевой клетки. Содержание комплемента низко в коровьем молоке и зависит от стадии лактации и патологического статуса вымени.

Фагоцитоз, по данным [13, 58], – сложный процесс, когда фагоциты (нейтрофилы, макрофаги) выходят в ткань, распознают чужеродный материал, заглатывают его и уничтожают/переваривают.

Хемотаксис, по данным [115], – направленное клеточное движение по градиенту концентрации хемоаттрактанта. Хемоаттрактант связывается с рецепторами на мембране активной клетки, стимулирует изменения в цистоскелете и направляет движение по градиенту концентрации хемоаттрактанта в молочную железу. Лейкоциты мигрируют к клетке с самой высокой концентрацией хемоаттрактанта. Многочисленные стимуляторы хемотаксиса были идентифицированы. Это лимфокины, C5a, токсины и пептиды бактерий [69].

протискиваются между эпителиальными клетками, чтобы выйти из кровяного русла. Вход полиморфноядерных нейтрофилов в ткань облегчен порозностью капилляров. Хемотаксис ответственен, прежде всего, за контакт фагоцита с бактериями в очаге воспаления. Это необходимо для начала стадии незнакомых антигенов, процесс может быть облегчен, если фагоцит определенно признает частицу как инородную.

Опсонизация – иммуноглобулины (Fab – конец молекулы Ig) и/или комплемент (особенно C3b) могут связываться с антигеном или инородной частицей. Другой конец молекулы Ig (Fc часть) после этого может связываться с определенными Fc-рецепторами на поверхности фагоцитов, заканчивая процесс распознавания [138]. Поэтому молекула антитела действует как мостик между антигеном и фагоцитом. IgG1 – наиболее распространенное антитело в молоке, но он не эффективен как опсонин для полиморфноядерных нейтрофилов, а IgG2 – эффективный опсонизирующий агент.

Staphylococcus aureus «сопротивляется» распознаванию. Белок на его поверхности связывает Fc – часть IgG, предотвращая опсонизацию, и нивелирует бактерию с антителами хозяина, после чего бактерия не распознается как чужеродный компонент. Комплемент также может связываться с определенными рецепторами на поверхности фагоцита.

По данным [137], IgA продуцируется, прежде всего, плазмоцитами в молочной железе. Секреторный IgA составлен из двух молекул IgA, что позволяет ему склеивать бактерии, или непосредственно связывать и нейтрализовать токсины без взаимодействия с полиморфноядерными нейтрофилами.

Псевдоподии сформированы из складок поверхностной мембраны фагоцитов, обеспечивают заглатывание чужеродного материала. Они, соединяясь вместе, образуют внутриклеточную вакуоль, содержащую инородное тело. Эта вакуоль называется фагосомой. Во время формирования фагосомы или сразу после ее образования цитоплазматические лизосомы сливаются с ней и выпускают свое содержимое в фагосомную вакуоль, которая после этого называется фаголизосомой. Внутриклеточное убийство бактерий происходит в фаголизосоме [187].

Процесс слияния фагосомы с лизосомой, сопровождающийся выпуском компонентов называется дегрануляцией. Фагоциты, как предполагает [134], дегранулируют во время всего фагоцитоза. Если фагосома полностью не сформировалась до того, как лизосомы начинают соединяться с ней, что часто имеет место [139], то гидролитическое содержимое лизосом, выпущенное в фагосому, может также просачиваться из клетки.

фагоцитированного инородного материала: кислородзависимая и кислороднезависимая [77]. По данным [90, 138], параллельно с заглатыванием происходит главный взрыв окислительного метаболизма. Увеличиваются потребление кислорода, производство перекиси водорода и суперокисного аниона, а также окисление глюкозы через гексозомонофосфатный путь. Этот процесс заканчивается производством нескольких микробоцидных окислительных агентов в фаголизосомах, включая суперокисный анион, гидроксильный радикал, элементарный кислород и водородный пероксид, которые окисляют липиды в бактериальных мембранах, вызывая лизис бактерий, и окисляют белки, нарушая тем самым их функции.

Исследования [2, 89] показали, что первичный фермент – миелопероксидаза – вовлекается в катализацию окисления инородных материалов в фагоците, который содержится в лизосомах. Сформированные в фагосоме кислоты убивают непосредственно чувствительные к ним бактерии, а также обеспечивают кислую окружающую среду для лизосомальных гидролаз.

Лактоферрин (LF) – железосвязующий белок. Он поддерживает свою железосвязывающую способность даже в кислой среде. LF синтезируется в секреторных эпителиальных клетках, найден в молоке, а также во вторичных гранулах полиморфноядерных нейтрофилов. Он связывает железо, необходимое для роста колиформных бактерий. LF не действует при цитратах, которые связывают железо и делают его доступным для бактерий. Во время мастита концентрация цитратов низка. LF-деятельность активизируется карбонатами, количество которых во время мастита увеличивается [2, 33].

Во время фагоцитоза вторичные гранулы мигрируют к мембране клетки и выпускают лактоферрин с ее внешней стороны [43]. Лактоферрин связывает железо, затем снова усваивается клеткой. При этом он увеличивает адгезивность полиморфноядерных нейтрофилов, сохраняя их в воспаленном участке. LF играет важную роль в нормальном функционировании лимфоцитов, полиморфноядерных нейтрофилов и макрофагов [49].

Гидролитические ферменты, найденные в гранулах полиморфноядерных нейтрофилов, – лизоцим, глюкозидаза [138]. Катионоактивные белки, включая низкомолекулярные антимикробные белки, гидролизируют 1–4 гликозидную связь в стенке грамположительной клетки, вызывая ее гибель. Они отсутствуют в молочной железе коровы, но являются важным антимикробным компонентом в молоке людей и лошадей [85].

Лактопероксидаза синтезируется в секреторных эпителиальных клетках.

Она вступает в реакцию с тиоционатом (продукт синегнойной палочки) и водородным пероксидом (синтезируемым стрептококками). Окислительная реакция разрушает мембрану стрептококков, вызывая их гибель.

Лактопероксидаза не эффективна против других бактерий, если не добавлен пероксид водорода [66].

1.2. Состояние системы диагностики субклинического мастита Мастит приводит к ряду изменений в составе молока, которые можно использовать для диагностики мастита, а также оценки качества и ценности молока [1, 42, 62, 64].

Исследования В.И. Слободяника [138] показали, что синтез лактозы уменьшен при субклиническом мастите. Протеолиз, активизированный плазмогенными (из крови), лейкоцитарными и бактериальными протеолитическими ферментами; ведет к плохому свертыванию казеина, снижению сырной продуктивности, измененной структуре казеинсодержащих изделий, образованию пептидов, дающих горький вкус. Это особенно важно, если производитель стремится получить высококачественное молоко [60].

Жир молока – мембраны капель молочного жира, восприимчивы к действию ферментов липаз, приводящих к лизису триглицеридов, окислению жирных кислот и соответствующему привкусу.

Содержание Na+, Cl–, K+ при субклиническом мастите снижается, в результате электрический потенциал на апикальной мембране нарушается, что приводит к повышенному содержанию в молоке Na+. Это основа электрических методов обнаружения маститов [105].

Полиморфноядерные нейтрофилы – это соматические клетки молока.

Мастит вызывает хемотаксис клеток в железистую ткань и разрушение клеточных переходов эпителия, с чем связано образование соматических клеток и, как следствие, снижение производства молока. Это является основанием многих тестов на мастит [88].

Альбумины, иммуноглобулины, карбонаты (частично определяют pH молока) попадают в молоко через разрушенные стенки сосудистого эпителия.

Увеличенные концентрации этих компонентов являются основанием различных методов обнаружения маститов [60].

При клиническом мастите вымя может стать твердым, красным, горячим при контакте. Пальпация его может быть болезненна. Эти признаки являются результатом изменений в сосудистом русле и в кровоснабжении железы при воспалении [20, 104].

Для обнаружения соматических клеток разработано несколько методов:

Калифорнийский маститный тест (CMT; диагностика каждой коровы по альвеолярному молоку), Висконсенский маститный тест (WMT; диагностика мастита в сборном молоке), микроскопическое подсчитывание количества соматических клеток и электронное подсчитывание количества соматических клеток [40, 62, 130, 177, 212].

CMT и WMT обнаруживают при формировании геля, когда соматические клетки реагируют с детергентом. Реакция происходит на пластине (CMT), оценивается субъективно (отрицательно, следы) или в пробирке (WMT), измеряется в миллиметрах. Результаты CMT и WMT можно использовать как грубую оценку количества соматических клеток в молоке и идентифицировать субклинический мастит [64, 100, 186].

При помощи подсчета количества соматических клеток можно исследовать сборное молоко как из оптового резервуара (что указывает маститный статус стада), так и от отдельных коров (обнаруживает определенную корову с вероятным маститом). Количество соматических клеток в молоке меньше 200 тыс.

ячеек/мл – показатель отсутствия мастита в стаде [61, 95, 143, 187].

Увеличение количества соматических клеток говорит о наличии мастита.

Если соматических клеток в оптовом резервуаре больше 750 тыс. ячеек/мл, то это приводит к потере сортового статуса молока (производитель не может продолжать продавать молоко) [24, 156].

По данным [162, 214], N-ацетил-D-глюкозаминидаза – лизосомальный фермент, концентрация которого увеличивается в молоке при присутствии мастита. Некоторая часть фермента появляется из лейкоцитов, проникающих в железистую ткань молочной железы, но основная его часть прибывает из эпителиальных клеток в ответ на присутствие лейкоцитов.

Так, наличие данного фермента в молоке высоко коррелирует с количеством лейкоцитов [13, 60]. В тесте на N-ацетил-D-глюкозаминидазу часто используется флюоресцентный субстрат. Интенсивность флюоресценции, произведенной в этом тесте, коррелирует с количеством соматических клеток в молоке и степенью воспаления.

Электрическая проводимость молока [42, 105, 124, 166] возрастает во время мастита из-за увеличения Na+ и Cl– и уменьшения K+ и лактозы.

Для обнаружения в молоке антител к Staphylococcus aureus предназначен тест ELISA [64, 92, 203, 222].

Антитела к Staphylococcus aureus могут появиться в молоке намного позже возникновения инфекции. Если это новая инфекция, синтез антител запаздывает, что может привести в отдельных случаях к ложным положительным или отрицательным результатам [69, 155, 212, 224].

Следовательно, этот метод имеет ограничения на обнаружение антител к S.

aureus при остром мастите, но может быть полезен в ситуациях с хроническим маститом и скрининге всего стада.

Сбор чистых образцов молока для бактериологического исследования – единственный путь окончательного диагностирования инфекционного мастита и идентифицирования патогенного организма [9, 40, 189].

По данным [51, 159, 186], исследование проб молока требует специальной бактериологической среды, создания необходимых лабораторных условий, подготовленного персонала и хорошей техники. В чашку с кровяным агаром помещают по 0,01 мл молока из каждой четверти, используя петлю или пипетку.

Для выделения колиформных бактерий в чашку с кровяным агаром или агаром МакКонки сеют 0,1 мл молока из каждой четверти. Культивирование проводят при 37 C в течение 48 ч.

Для выделения патогена или контоминанта, по данным [34, 64, 185], необходима хорошая техника при сборе образцов молока и их культивировании.

Пять или больше идентичных колоний от 0,01 мл молока (чистая культура) – скорее всего патоген. Пять или больше идентичных колоний от 0,01 мл молока (смешанная культура) – вероятно патоген. Меньше пяти идентичных колоний от 0,01 молока мл – скорее всего контаминант.

Испытания на чувствительность к антибиотикам [43, 69, 75, 195] часто проводят для того, чтобы определить, к каким антибиотикам бактерии наиболее чувствительны. Однако на это требуются время и дополнительные микробиологические методы. Для этого испытания используют или диски с антибиотиками, или их раствор. Чувствительность к антибиотикам in vitro может не отражать чувствительность бактерий in vivo.

1.3. Методологические принципы лечения и профилактики субклинического мастита у лактирующих коров Цель лечения животного при субклиническом мастите, по мнению большинства авторов [1, 3, 22, 41, 68, 203], – устранение латентного патологического процесса в тканях вымени и восстановление продуктивности животного. Важным критерием при терапии данной патологии является комплексный подход. Все исследователи [37, 56, 83, 93, 151, 204], занимавшиеся проблемами лечения маститов, едины в том, что в основе лечения лежат следующие факторы, независимо от применяемых средств и методик:

– устранение условий, способствующих развитию субклинических маститов;

– эвакуация секрета пораженного органа (механически – при помощи массажа или фармакологически);

патологических реакций и нормализация иммунного статуса.

Терапевтическая эффективность ферментных препаратов, гипохлорита натрия, пробиотиков и антибактериальных средств различных групп при лечении коров, пораженных субклиническим маститом, широко описана в отечественной литературе [44, 50, 63, 94, 179, 183, 215].

Согласно имеющимся литературным данным [72, 86, 184, 205, 224] в качестве классических средств этиотропной терапии применяются антимикробные субстанции разных фармакологических групп, в основном это антибиотики и нитрофураны, реже сульфаниламиды, фторхинолоны, производные хиноксалина, поверхностно-активные вещества и окислители.

Кроме того, отечественными учеными [103, 118, 145, 206] предложен ряд средств природного происхождения, такие как прополис (эмульсия прополиса и биогель-10), препараты, содержащие экстракты растений (хлорофиллипт, препараты чеснока), которые наряду с антибактериальным действием оказывают также противовоспалительное и иммуностимулирующее.

В специальной литературе [7, 98, 144] достаточно широко представлены препараты различных групп, применяемые при маститах. Эффективность их оценивалась авторами в основном по срокам выздоровления, нормализации функции вымени и процентному соотношению излеченных животных к общему количеству подвергшихся лечению, а также в сравнении с такими широко распространенными в ветеринарной практике препаратами, как бициллин, бензилпенициллин, мастисан (А, Е).

Из этиотропных средств, предназначенных для лечения мастита, наиболее широко в литературе [9, 106, 116, 209] представлены данные по препаратам для интрацистернального введения, хотя эффективность данного способа введения оспаривается некоторыми авторами [11, 119, 197].

Е.А. Сидоркин [132] сообщает об эффективном применении при различных формах мастита таких интрацистернальных препаратов, как мастомицин, релексин-500, мастилекс. Так, при введении мастомицина с 12–24-часовым интервалом кратность применения по сравнению с мастисаном сокращалась при субклиническом, серозном и серозно-катаральном мастите в 1,3–1,8 раза, при гнойно-катаральном в 1,9–2,6 раза; сроки лечения сокращались на 2–3 дня, причем двукратное введение оказалось более эффективным, чем однократное.

А.В. Бойко и др. [19] рекомендуют к применению при мастите у лактирующих коров интрацистернальное введение препаратов клоксамаст (один шприц-катетер содержит 75 мг ампициллина, 200 мг клоксациллина и мазевую основу) и мультимаст (один шприц-катетер содержит 250 мг неомицина, 100 мг пенициллина прокаина, 50 мг тетрациклина, 10 мг преднизолона и мазевую основу) с интервалом 12 ч.

А.И. Варганов и др. [22] предлагают для интрацистернального введения комплексный препарат пеносепт (содержит в себе антимикробные препараты и экстракт крапивы двудомной на пенящейся при контакте с влагой масляной основе) по 10 мл с интервалом 24 ч.

Головко А.Н. с соавт. [54] сообщают об успешном применении при маститах интрацистернальных введений препарата бимастин.

В.Г. Гавриш [29] рекомендует в качестве противомаститного средства интрацистернальное введение йодсодержащего препарата септогель (действующая основа йодповидон 30/06 на гелевой основе).

И.И. Тетерев и А.В. Филатов [145] для лечения маститов предлагают интрацистернальное введение препарата биогель-10 (на основе прополиса) в подогретом виде в дозе 10 мл с повтором при клинической форме через 12 ч, а при субклинической – через 24 ч.

Е.В. Ильинский и др. в качестве терапевтических средств, используемых при мастите, выделяют комплексный препарат уберцид, который включает в себя антибактериальные вещества, анестетик, иммуномодулятор и некоторые другие компоненты. Его особенность заключается в способе применения: в количестве 25–50 г наносится на кожу пораженной четверти. Терапевтическое действие препарата сохраняется 12 ч, затем аппликацию повторяют. Данный способ применения позволяет избежать негативных последствий катетеризации соска.

Эффективность этого метода лечения составляет 90,0 %, удой увеличивается по сравнению с мастисаном на 14,3 % [55].

представляющий собой настой и экстракт трав. Согласно наставлению, наносят на кожу пораженной четверти и втирают до полного высыхания, процедуру повторяют несколько раз в течение 10–15 мин. На одну обработку используют 50–100 мл препарата, кратность обработки – дважды в сутки [41, 77, 176].

Не так широко представлены инъекционные формы антибактериальных средств. Так, О.П. Татарчук [144] рекомендует к применению фармазин совместно с внутрицистернальными препаратами. Д.М. Журавлев [50] сообщает об успешном использовании препарата пеносепт при лечении мастита у коров.

А.В. Бойко и др. [19] предлагают использовать бимоксил Л.А., тетрокси Л.А. и тетрокси 10 % в дозе 1 мл на 10 кг живой массы, с повтором через 48 ч, тетрокси 10 % можно вводить внутривенно по 0,5 мл на 10 кг живой массы.

Сравнительно новым направлением является применение гормональных противовоспалительных препаратов, которые могут вводиться как комплексно (мультимаст, мастиет форте), так и в дополнение к основным [71, 165, 210, 216].

В последние время большое внимание при лечении субклинического мастита уделяется коррекции иммунного статуса животного препаратами различных групп [46, 72, 161, 168].

Некоторые зарубежные авторы [207, 213] считают, что в профилактических целях необходимо применение кормовых добавок, включающих в себя витамины и минералы и оказывающих положительное влияние на устойчивость организма коров к действию патогенной микрофлоры.

Серьезные экономические последствия мастита крупного рогатого скота стали причиной разработки различных терапевтических стратегий. Для лечения этого заболевания применяются препараты, относящиеся к различным терапевтическим классам (противомикробные, противовоспалительные) [21, 54, витамины, вакцины [18, 68, 192], цитокины [31, 132] и даже 65, 83, 128], гомеопатия [3, 51]). Кроме того, разработаны различные пути введения лекарственных средств (системный, интрацистернальный, а также местный – нанесение на сосок или кожу вымени) [37, 72, 84]. Однако, несмотря на значительный прогресс в терапии маститов, животные продолжают страдать от этого заболевания.

В России чаще всего для системного лечения мастита применяют препараты на основе антибиотиков (пенициллина, стрептомицина, неомицина, эритромицина и некоторых других), эффективность которых недостаточно высока.

В последнее время на рынке стали появляться препараты на основе высокоэффективных антибиотиков новых поколений (например, цефалоспоринов) [180, 200, 201].

Цефалоспорины – полусинтетические антимикробные препараты, используемые при лечении воспалительных заболеваний у молочного скота [181].

Одним из наиболее применяемых препаратов, входящих в состав цефалоспоринов, является цефтиофур. Он обладает повышенной активностью в отношении грамотрицательных бактерий, сохраняет при этом высокую активность против грамположительных бактерий. Кроме того, отличается повышенной гидролитической стабильностю в отношении -лактамаз, которые активны в отношении цефалоспоринов ранней генерации и пенициллинов. Оксиминная группа в боковых цепях увеличила устойчивость -лактамного кольца в отношении лактамаз [220, 221].

субклинического мастита у лактирующих коров обычно является единственным способом быстрого решения проблемы, курс лечения составляет до 3–5 введений.

При этом не следует забывать об ограничении на использование молока, которое составляет от 2 дней при применении пенициллинов до 21 дня и более при применении тетрациклинов.

Субклинический мастит проявляется во все функциональные периоды: при запуске, во время сухостоя и лактации. Чаще всего им заболевают высокопродуктивные животные. Субклинический мастит встречается в 4–5 раз чаще, чем клинически выраженный.

Основным предрасполагающим фактором субклинического мастита является несоблюдение технологии и правил машинного доения коров, завышенный и нестабильный вакуум в вакуум-проводе, нарушение условий кормления и содержания животных.

Существенную роль в возникновении мастита коров играют такие возбудители, как Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus agalactiae, E. сoli, Candida, Aspergillus.

Для лечения мастита коров предложено много методов и лекарственных средств. Применяют в основном внутрицистернальные и внутримышечные введения антибиотиков, нитрофуранов, сульфаниламидов, а также комплексные противомаститные препараты, содержащие антимикробные вещества.

Использование только антимикробных средств для лечения мастита коров недостаточно. Это приводит к возникновению резистентных штаммов микроорганизмов, особенно к антибиотикам, в результате чего снижается терапевтическая эффективность противомаститных препаратов на их основе.

Кроме того, после лечения отмечается наличие остаточных количеств антибиотиков в молоке. В связи с этим оно становится технологически непригодно и вредно для здоровья людей. Также угнетается иммунная система, возникают аллергические реакции и микотические маститы.

Потому терапия мастита – это не только устранение причины заболевания, но и восстановление физиологического состояния лактирующего животного.

ГЛАВА 2. МЕТОДОЛОГИЯ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в 2011–2013 гг. на кафедре «Терапия, акушерство и фармакология» факультета ветеринарной медицины и биотехнологии ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова», в ЗАО «Нита-Фарм», а также в хозяйствах различных форм собственности Саратовской области:

– Учхозе РГАУ–МСХА им. К.А. Тимирязева «Муммовское» Аткарского района;

– ЗАО «Агрофирма «Волга» Марксовского района;

– ЗАО «Племзавод «Трудовое» Марксовского района;

– К(Ф)Х ИП «А.В. Акимов» Базарно-Карабулакского района».

Изучая распространение маститов, использовали отчетные материалы районных ветеринарных станций по борьбе с болезнями животных.

В основу работы положены результаты аналитического анализа литературы, комплексного клинического, инструментально-лабораторного исследования лактирующих коров, больных маститами (рисунок 1).

Исследования проводили в соответствии с Наставлением по диагностике терапии и профилактике мастита у коров (2000), Методическими рекомендациями по диагностике, терапии и профилактике субклинического мастита у коров в сухостойный период (2005).

Критерий постановки диагноза на субклинический мастит – симптомы поражения вымени. При клиническом исследовании коров определяли частоту дыхательных движений и сердечных сокращений, температуру тела, состояния вымени (пальпировали, осматривали, проводили пробное сдаивание секрета вымени).

Клиническую форму мастита выявляли путем осмотра, пальпации, пробного доения, а также по характеру клинического состояния организма животного и молочной железы.

Теоретическое обоснование выбранного направления тестов на субклинический в организме коров при методики ЛабосубклиничеСтепень раторском мастите ничес- обусловливающие Изучение свойств лимфы риологические Рекомендации по внедрению предложенных мероприятий При наружном осмотре обращали внимание на форму вымени, состояние волосяного покрова, симметричность четвертей, цвет кожи, величину сосков, состояние сфинктера соскового канала.

Пальпацией определяли местную температуру, консистенцию молочной железы, наличие болевой реакции. Проводили поочередно пальпацию правой и левой половины молочной железы путем прощупывания тканей от основания к верхушке соска, выявляли состояние надвыменных лимфатических узлов их величину, консистенцию и болезненность.

Клиническое исследование молочной железы заканчивали пробным сдаиванием для определения тонуса сфинктера соскового канала и его проходимости, также обращали внимание на внешний вид секрета, цвет, количество, однородность и наличие в нем сгустков и хлопьев.

Для диагностики субклинического мастита использовали тесты «Кетотест»

(«Интервет», Нидерланды), «Масттест» («Агрофарм», Россия), «CMT» – Калифорнийский маститный тест (США) и «WMT» – Висконсинский маститный тест (США).

Пробу отстаивания учитывали через 16–18 ч после выдержки пробирок с секретом в холодильнике при 4…8 °С (по Мутовину В.И., 1974). Визуально отмечали изменение секрета, характер и величину слоя сливок, наличие и количество осадка. Диагноз на субклинический мастит ставили при наличии положительной реакции секрета молочной железы с диагностическим реактивом при повторном исследовании через 48 ч, а также при замерах слоя сливок в пробе отстаивания. Слой сливок менее 5 мм указывал на наличие патологического процесса в четверти вымени.

Кроме того, проводили подсчет соматических клеток в счетной камере с сеткой Горяева (по Хилькевичу Н.М., 1973) и при помощи прибора «Соматосмини».

Для определения видового состава микрофлоры, выделенной из вымени, было исследовано 54 пробы секрета, взятого от больных маститом коров. Взятие проб проводили по методике В.И. Слободяник, Н.Т. Климова и В.В. Подберезного (2009). Для этого перед взятием пробы соски вымени и руки протирали ватным тампоном, смоченным 70…50° этиловым или денатурированным спиртом, и надаивали в пробирки 5–10 мл альвеолярного молока. При взятии пробы следили за тем, чтобы сосок не касался края пробирки. Пробирку с молоком (секретом) закрывали стерильной ватно-марлевой или резиновой пробкой, на этикетке записывали кличку или инвентарный номер животного, долю вымени и ее состояние (здоровая, больная).

Пробы с секретом помещали в термос со льдом и в течение 2–3 ч доставляли в научно-исследовательскую лабораторию ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ», где проводили исследования микроорганизмов.

Из взятых проб делали посевы на МПА, МПБ, МПА с 7,5%-м раствором натрия хлорида, МПА с 5,0%-м раствором дефибринированной крови барана, МПА с 1,0%-м раствором глюкозы, а также на среды Сабуро, Эндо, цветные среды Гисса. Для культивирования микроорганизмов чашки Петри с посевами помещали в термостат при 38 °С.

Культуральные свойства определяли по характеру роста на питательных средах и по внешнему виду колоний микроорганизмов. Учитывали форму колоний, цвет, размер, характер поверхности и прозрачность. При посевах на кровяной агар учитывали отсутствие или наличие зоны гемолиза.

Для определения вида бактерий использовали пластины (биохимические дифференцирующие стафилококки и энтеробактерии) научно-производственного объединения «Диагностические системы» (г. Нижний Новгород), углеводные среды Гиса. Видовую принадлежность микроорганизмов устанавливали, руководствуясь «Определителем бактерий Берги» (1980) и рекомендациями «Определителем патогенных, токсигенных и вредных для человека грибов»

(1979), «Атласом грибов, патогенных для сельскохозяйственных животных и птиц» (1953). Идентификацию осуществляли с учетом культуральных, морфологических и биохимических свойств бактерий по общепринятым методикам (Сидоров М.А., 1982).

Патогенность микроорганизмов устанавливали при внутрибрюшинном заражении белых мышей массой 18–20 г взвесью микробных тел (1 млрд в 1 мл), смытой с агаровой культуры, в дозе 0,2–0,5 мл (200–500 млн микробных тел).

Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам определяли на среде АГВ луночным методом, а также методом наложения стандартных дисков с антибиотиками и методом кратных серийных разведений в МПБ.

Для лабораторных исследований брали кровь из подхвостовой вены до кормления животных.

голштинофризской пород различного репродуктивного возраста, содержащихся в традиционных условиях современных молочных комплексов.

В ходе исследования использовались следующие методы:

– сбор анамнеза in morbid и in vite;

– проведение клинических, рентгенологических и эхографических исследований;

– проведение морфологических и биохимических исследований крови;

– проведение морфологических и биохимических исследований секрета вымени.

При выполнении работы тщательно собирали данные анамнеза, которые затем анализировали по следующим показателям:

– возраст животного;

– момент начала заболевания относительно родов;

– сезонность заболевания;

– особенности клинической картины заболевания;

– клинические, рентгенографические и эхографические данные;

– морфологические и биохимические показатели крови.

Для гематологических исследований применяли ветеринарный автоматический гематологический анализатор крови Абакус Джуниор Pse 90 Vet (Automatic Veterinary производство Германия) и биохимический анализатор крови Chem Well combi Models 2902 and 2910 (производства USA, Florida).

В работе использовали следующие диагностические наборы и стандарты фирмы DiaSys: креатининкиназа ФС «ДДС», АСТ ФС «ДДС», АСТ ФС «ДДС», щелочная фосфатаза ФС «ДДС», общий белок ФС «ДДС», альбумины ФС «ДДС», глюкоза ФС «ДДС», мочевина ФС «ДДС», адаптированные для биохимического анализатора.

Для гормонального скрининга состояния больных использовали набор реагентов для иммуноферментного определения ЛГ, ФСГ, прогестерон, производили из вены утром до и после курсового лечения.

Для оценки секрета вымени определяли пероксидазную активность по Б.П. Плешкову (1976) и выражали в у.ед., концентрацию лактоферрина с помощью радиальной иммунодиффузии по G.A. Manhcini (1965) в модификации Б.Е. Караваева (1983), свободный оксипролин спектрофотометрически по М.А. Осадчуку (1979) в модификации Т.П. Кузнецовой и др. (1982) и выражали в процентах оптической плотности (%оп).

Ультразвуковое исследование проводили на аппарате MyLab 40 Vet Esaote Для рентгенографии применяли цифровой рентгенологический (Италия).

комплекс «ВАТЕЛ-1» (Корея).

Запись и анализ кардиоинтервалов реализовали с использованием автоматизированной системы «Полиспектр 8/В» ( «Нейрософт», Россия).

Всего в исследовании было задействовано 40 лактирующих коров с диагнозом субклинический мастит. По результатам диагностики сформировали две опытные группы по принципу аналогов. Больных животных в каждой группе разбили на две аналогичных подгруппы в зависимости от кратности применения препаратов. Препараты применяли в терапевтической дозе согласно инструкции по применению, подкожно.

Препарат «Цефтонит®» (ЗАО «Нита-Фарм», серия – 004211212) применяли в сравнении с препаратом «Cobactan 2,5 %» (Интервет Интернешнл ГмбХ Унтершляйсхем, Германия, серия – А576А01), схема опыта представлена в таблице 1.

Таблица 1 – Схема титрации доз, кратности применения препаратов Результаты эффективности терапии оценивали по клиническим признакам и результатам применения тестов: «Масттест» и пробы отстаивания. Животные считались здоровыми, если тесты давали отрицательный результат.

Также проводили забор молока и секрета молочной железы до применения препаратов, через 24, 48, 72 ч и на 5-е сут. после начала лечения. Определяли количество соматических клеток и наличие антибиотиков. Для определения антибиотиков использовали BRT-тест фирмы AIM, Германия.

Контроль состояния вымени при помощи теста на скрытый мастит проводился в течение 21 дня после выздоровления животных.

Статистический анализ данных проводился при помощи стандартных программ Microsoft Excel 2000 SPSS 10.0.5 for Windows.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Частота возникновения и дифференциальная диагностика субклинического мастита у коров в послеродовой период С 2011 по 2013 г. клиническому осмотру было подвергнуто лактирующих коров с 7-го по 27-й день после родов. Ежегодные исследования животных на мастит с использованием тест-диагностикумов показали, что количество положительно реагирующих животных нарастало, несмотря на то, что поголовье ферм оставалось примерно одинаковым.

Анализ полученных материалов показал, что инцидентность заболеваний вымени у лактирующих коров с субклиническим маститом составила 20,74 % всего маточного стада, а инцидентность заболеваний клиническим маститом – 6,82 %. Если в 2011 г. нами были выявлены маститы у 36,22 % животных, в 2012 г. – у 39,37 %, в 2013 г. – у 43,3 %, т.е. инцидентность заболевания вымени маститом увеличилась в 1,22 раза (рисунок 2).

Рисунок 2 – Инцидентность заболеваний вымени у коров На долю субклинического мастита приходилось в 2011 г. – 23,5 %, в 2012 г. – 22,5 %, в 2013 г. – 24,5 %. Субклинический мастит диагностировали у 30,5–30,6 % коров после родов.

Кроме того, проводили исследования сезонности возникновения мастита (рисунок 3).

Рисунок 3 – Сезонность возникновения мастита у коров Анализ полученного материала показал, что заболевание вымени у коров в начале лактации имеет определенный сезонный характер и основные его пики приходятся на март – май и сентябрь – ноябрь. В эти месяцы было выявлено от 2,5 до 4,1 % больных маститом коров от общего поголовья фермы, что связано с плохими условиями содержания (в выгульных базах грязь, в корпусах постоянные сквозняки и повышенная влажность). Именно эти причины приводили к снижению как общего, так и местного иммунитета у животных. Так, с декабря по февраль этот показатель снижался до 1,3–2,0 %, а с июня по август до 1,2–1,7 % от общего поголовья фермы.

В ходе эксперимента всем животным с диагнозом субклинический мастит подвергали электрокардиографическому исследованию, а также определяли артериальное давление реографическим методом.

Измерение интервалов и сегментов производили в секундах по штриховке миллиметровой бумаги, амплитуду зубцов измеряли в милливольтах.

Представленные электрокардиограммы у коров после отела, больных субклиническим маститом (рисунок 4), свидетельствуют о развитии миокардиопатии.

Рисунок 4 – Электрокардиограмма лактирующей коровы после отела У больных лактирующих животных регистрировали ритм сердца с частотой ниже контрольных значений у клинически здоровых, выявляли достоверное повышение тонуса парасимпатической нервной системы, на что указывали повышенные показатели RMSSD (на 28,1 %) пpи NN50 (на 26,2 %), рисунок 5.

Результаты анализа кардиограмм коров, больных субклиническим маститом (рисунок 6, 7), помогают оценить тяжесть и степень распространения патологического процесса, а также вторичные повреждения тканей сердца.

Изменения ЭКГ при субклиническом мастите у коров необходимо интерпретировать в тесной связи с данными клинических и лаборатор ных исследований.

При анализе электрокардиограмм животных с субклиническим маститом, установили существенные отличия от показателей лактирующих коров с раздражением, отеком, гиперемией вымени и клинически здоровых животных.

При субклиническом мастите отмечали появление синусовой тахикардии с незначительным исчезновением интервала ТР.

Рисунок 5 – Электрокардиограмма лактирующей коровы Рисунок 6 – Электрокардиограмма лактирующей коровы после отела Рисунок 7 – Электрокардиограмма лактирующей коровы после отела, Результаты электрокардиографических исследований отражены в таблице 2.

Таблица 2 – Электрокардиографические показатели у лактирующих коров Комплекс QRS, с 0,03–0,05 0,05–0,07 0,07–0,08 0,08–0, Интервал QT, с 0,19–0,22 0,23–0,24 0,25–0,26 0,27–0, Зубец Р, интервал, с 0,03–0,06 0,06–0,07 0,07–0,08 0,08–0, Амплитуда зубца Т, % от QRS По данным таблицы 2, нарастали признаки гипоксии миокарда, зубец Т становился уплощенным, двухфазным или отрицательным с заостренной вершиной. Характерно увеличение амплитуды зубца Т в основных отведениях и отведении rV|5 За нормальные показатели принимали вольтаж зубца Т, равный 28,0 % к вольтажу зубца R в соответствующем отведении. Одновременно отмечали депрессию сегмента ST во II, III стандартных отведениях и aVF, отрицательный или двухфазный зубец Т в этих отведениях, положительный зубец Т в I и aVL отведениях с подъемом сегмента ST, то есть резкое отклонение электрической оси зубца Т влево.

Часто отмечали дискордантность комплекса QRS и зубца Т (в норме вектор QRS не отличался от вектора Т более чем на 30,0 %), увеличение времени активации правого желудочка в отведении VL2 более чем на 0,01 с. В ряде случаев зубец Т в rV при субклиническом мастите слабовыраженный, а у отдельных животных (28,7 %) отрицательный. При смещении ЭОС влево наблюдали отрицательные Т в rV, aVL, депрессия ST в этих отведениях более 0,2 мВ. При этом положительный зубец Т появлялся во II, III, aVF отведениях, а в отведении rV был уплощенным, то есть формировалась картина прямо противоположная предыдущей.

На наш взгляд, имеет значение преимущественное поражение правых или левых отделов сердца. В целом такие изменения надо интерпретировать как начальные стадии метаболических расстройств в миокарде, то есть, неспецифическую кардиопатию.

Следовательно, основные изменения на ЭКГ у лактирующих коров в первые дни после отела при субклиническом мастите являются специфическими. Они служат показателем тяжести процесса, поддаются объективной оценке и могут меняться на прямо противоположные. Так, уплощенный зубец Т в первом отведении может стать как положительным, так и отрицательным по мере утяжеления течения заболевания. Вместе с тем нами выявлен критерий ЭКГ, который появляется во всех случаях тяжелого течения субклинического мастита, а его выраженность соответствует дальнейшему утяжелению болезненного процесса. Это увеличение интервала QT.

Артериальное давление у животных с раздражением, отеком, гиперемией вымени и субклиническим маститом оставалось в пределах нормы. Среднее артериальное давление у больных раздражением вымени, было несколько выше, чем у клинически здоровых, и достигало 120±11,2 мм рт.ст. (р < 0,05).

При отеках и гиперемии вымени этот показатель не отличался от нормальных значений или был несколько ниже 106±6,5 мм рт.ст. (р < 0,05), тогда как при субклиническом мастите происходило резкое падение среднего артериального давления – 75±6,8 мм рт.ст. (р < 0,01), что в высокой степени статистически достоверно.

Таким образом, при измерении артериального давления с помощью реографа-полианализатора отмечали тенденцию повышения артериального давления у животных: при раздражении вымени на 10,0 %, при отеках и гиперимии в среднем на 30,0 % от показателей клинически здоровых животных.

субклиническим маститом, изучали с помощью метода оценки вариабельности ритма сердца.

субклиническим маститом и у клинически здоровых лактирующих коров вскоре после родов отражены в таблице 3.

Таблица 3– Временные показатели вариабельности сердечного ритма у коров, больных субклиническим маститом, и клинически здоровых При меч ание : *р < 0,05; ** р < 0,01 – достоверные различия между показателями по сравнению с клинически здоровыми (здесь и далее).

Известно, что наиболее чувствительным показателем вариабельности ритма характеризует вегетативную регуляцию сердечной деятельности в целом и зависит от воздействия как симпатического, так и парасимпатического отделов нервной системы.

У лактирующих коров, больных субклиническим маститом, по сравнению с клинически здоровыми животными SDNN был выше на 28,4 % (р < 0,05), что свидетельствовало о повышении вариабельности распределения RR-интервалов.

субклиническим маститом и у клинически здоровых животных отражены в таблице 4.

Таблица 4 – Частотные показатели вариабельности сердечного ритма у коров, больных субклиническим маститом, и клинически здоровых животных По результатам временного анализа вариабельности ритма сердца у больных коров в начале лактации выявлено повышение функции разброса и снижение функции концентрации ритма сердца, очевидно, вследствие усиления тонических влияний парасимпатической нервной системы.

У больных субклиническим маститом повышение общей мощности спектра по сравнению с клинически здоровыми, преобладание в структуре спектральной мощности очень медленных колебаний (VLF > 60,0 %) указывали на наличие нарушения функционального состояния высшей нервной системы на уровне надсегментарных эрготропных вегетативных центров. Спектральный анализ вариабельности ритма сердца свидетельствовал о статистически достоверном уменьшении мощности медленных волн LF, отражающих степень активации симпатических сегментарных и церебральных центров регуляции, и повышении мощности быстрых волн HF, обусловленных парасимпатическими влияниями.

Преобладание волн малого периода HFn свидетельствовало о доминировании парасимпатических влияний на сердце.

Так, отношение LF/HF группе коров, больных субклиническим маститом, в начале лактации было 0,6±0,04, тогда как у клинически здоровых животных оно приближалось к 1 и свидетельствовало о равном долевом участии в регуляции ритма сердца двух отделов вегетативной нервной системы. У коров, больных маститом, после начала лактации преобладание в структуре спектральной мощности волн очень медленного VLF периода свидетельствовало о высокой активности менее эффективного уровня регуляции сердца – гуморально-метаболического.

Сравнительный анализ представленных показателей частотного анализа также свидетельствовал об увеличении вариабельности ритма сердца у коров, больных субклиническим маститом, после начала лактации вследствие усиления тонуса блуждающего нерва. Так, показатели моды и вариационного размаха были повышены соответственно на 17,1 % (р < 0,05) и в 2,1 раза (р < 0,05), что свидетельствовало о высокой вариабельности сердечного ритма.

Показатели вариационной пульсометрии у коров, больных субклиническим маститом, после начала лактации, и у клинически здоровых животных отражены в таблице 5.

Таблица 5 – Показатели вариационной пульсометрии у коров, больных маститом, Среди коров, больных субклиническим маститом, после начала лактации в большинстве случаев наблюдали умеренную парасимпатикотонию (53,0 %);

нормотонию – у 21,9 %, выраженную парасимпатикотонию – у 17,1 %; умеренно выраженную симпатикотонию – у 9,0 %. Из 127 обследованных коров с субклиническим маститом после начала лактации у 15,7 % было выявлено вегетативное равновесие, у 30,4 % – одновременная активация обоих отделов ВНС, у 18,4 % – преобладание симпатического отдела, у 35,5 % – преобладание парасимпатического отдела.

Изменения электрокардиограммы при раздражении вымени, отеках, гиперемии и субклиническом мастите в послеродовой период необходимо интерпретировать в тесной связи с данными клинических и лабораторных исследований. У животных с нарушением функции вымени после начала лактации центральное венозное давление оставалось в пределах нормы (таблица 6).

Таблица 6 – Показатели системной гемодинамики у коров, больных маститом, Объем циркулирующей Среднее артериальное давление, мм рт.ст. 120,6±6,3 109,7±4,5* 97,8±3,5** 76,6±5,4** Центральное венозное У лактирующих коров вскоре после родов при раздражении вымени центральное венозное давление практически не отличалось от показателей клинически здоровых животных, но при отеках и гиперемии вымени снижалось на 26,8 %, до 6,7 ± 0,6 см вд. ст. (р < 0,05), при субклиническом мастите – на 73,2 %, достигая 2,4 ± 0,8 см вд. ст. (р < 0,01).

Таким образом, при измерении артериального давления с помощью реографа-полианализатора отмечали тенденцию повышения артериального давления у животных в начале лактации, при раздражении вымени – на 13,4 %, при отеках и гиперемии – в среднем на 27,8 %, а при субклиническом мастите – на 38,8 %.

Изучение кожно-гальванической реакции вымени у коров проводили с 7-го по 14-й день после начала лактации. Замеры производили перед началом вечерней дойки, на 3-й мин и через 15 мин после окончания доения.

У всех коров, больных субклиническим маститом, отмечали достоверное снижение величины кожно-гальванической реакции в среднем на 12,8 % (рисунок 8).

клинически здоровые; раздражение и отек вымени; субклинический мастит Рисунок 8 – Кожно-гальваническая реакция вымени у коров Снижение кожно-гальванической реакции на доение после родов было выражено сильнее у коров с отеком и гиперемией вымени, а также при отеках вымени.

Если условно принять уровень кожно-гальванической реакции перед началом доения за 100,0 %, то ее снижение на 3-й мин доения у клинически здоровых лактирующих коров составляло 32,1 %, а с нарушением функции вымени – 24,4 %.

Для исследований интенсивности формирования рефлекса молокоотдачи, молочной продуктивности, скорости рассасывания послеродового отека и гиперемии вымени, раздражения и субклинического мастита было проведено две серии опытов. Первая выполнена на 10 парах коров-аналогов. Ежедневно в родильном отделении в течении 10 сут. за животными вели наблюдение и учитывали параметры продуктивности.

Первые 5 сут. после отела удой у клинически здоровых коров был на уровне 27,5 кг и разница с отеком, гиперемией, раздражением вымени и субклиническим маститом была недостоверна (р >0,05), таблица 7.

Таблица 7 – Молочная продуктивность коров после родов Количество молочного жира, кг 12,822,7 11,033,3 12,313, Количество молочного белка, кг 11,432,9 9,643,3 11,235, На 10-е сут. удой у клинически здоровых коров был выше по сравнению с животными с нарушением функции вымени: при раздражении – на 1,32 кг, при отеках и гиперемии – на 5,65 кг, при субклиническом мастите – на 7,32 кг;

ежедневная разница в удоях с этого момента всегда была в пользу клинически здоровых коров. Максимальная разница по удою коров контрольной и опытных групп за время пребывания их в родильном отделении составляла 1,78 кг на 10-е сут. лактации.

Динамика удоя свидетельствовала о том, что за время пребывания в родильном отделении (10 сут.) клинически здоровые коровы дали в среднем на 45,3 кг, а за 20 дней лактации на 143,8 кг молока больше, чем животные с нарушением функции вымени (отек, гиперемия, раздражение вымени и субклинический мастит).

Регрессивный анализ показывает, что изменение молочной продуктивности за первые 20 сут. лактации описывается аппроксимирующими уравнениями становления лактации у коров с нарушением функции вымени (отек, гиперемия, раздражение вымени и субклинический мастит).

y = 0,0202x2 – 0,2979x + 8,7278, для опытных групп: y = 0,0134x2 + 0,0111x + 8,02.