WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК

СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ

ЛИМНОЛОГИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

БАРАМ

Григорий Иосифович

РАЗВИТИЕ МЕТОДА МИКРОКОЛОНОЧНОЙ

ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ РЕШЕНИЯ

КОМПЛЕКСНЫХ АНАЛИТИЧЕСКИХ ЗАДАЧ

02.00.20 - хроматография

ДИССЕРТАЦИЯ

в виде научного доклада на соискание ученой степени доктора химических наук

Иркутск

Официальные оппоненты:

доктор технических наук, профессор В.И.Калмановский доктор химических наук, профессор Б.В.Мчедлишвили доктор химических наук С.М.Староверов

Ведущая организация:

Институт элементоорганических соединений им. А.Н.Несмеянова РАН

Защита состоится 20 ноября 1997 года в 16 часов на заседании диссертационного совета Д 002.95.02 при Институте физической химии РАН по адресу:

117915, Москва ГСП-1, Ленинский проспект, 31.

С диссертацией в виде научного доклада можно ознакомиться в библиотеке Института физической химии РАН.

Диссертация в виде научного доклада разослана 20 октября 1997 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат химических наук Л.Н.Коломиец

1.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Появившись более 25 лет назад, высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) в настоящее время стала одним из самых мощных аналитических методов, главным преимуществом которого является, прежде всего, универсальность по отношению к анализируемым веществам. Потенциальные возможности ВЭЖХ создали в аналитической химии реальные предпосылки для широчайшей унификации всего химического анализа путем замены во многих случаях большого числа других методов и их вариантов.

Однако, несмотря на такие перспективы, внедрение ВЭЖХ в рутинную практику происходит весьма медленно. Научная литература свидетельствует, что до сих пор во многих лабораториях отдается предпочтение пусть менее совершенным, менее производительным и менее достоверным, но более привычным методам исследования. Изучение сложившейся ситуации дает основание утверждать, что главными причинами, сдерживающими широкое применение ВЭЖХ являются следующие:

относительно высокая сложность оборудования для ВЭЖХ, рассчитанного на эксплуатацию при давлениях до 30 и более МПа, и прямо связанная с этим его высокая стоимость;

необходимость использования больших объемов специально очищенных и, следовательно, дорогих растворителей для подвижных фаз.

Выход из создавшегося положения нам видится в удешевлении жидкостных хроматографов за счет отказа от высоких давлений и, тем самым, упрощения их конструкции, а также в уменьшении расхода подвижной фазы на один анализ за счет уменьшения объема хроматографической колонки.

Следует отметить, что по отдельности каждый из этих путей хорошо обоснован, изучен и апробирован. На рынке аналитического оборудования можно найти и микроколоночные хроматографы высокого давления, и хроматографы "среднего" давления для работы с колонками объемом 2-5 мл, но ни те, ни другие большого распространения не получают, т.к. первые - чрезмерно дороги и ненадежны, а вторые - предназначены для решения лишь узких задач (главным образом, для разделения биополимеров). Тем не менее, за 25 лет развития ВЭЖХ в области рутинного анализа прослеживается явная тенденция к переходу к более коротким колонкам. Так, если 10-15 лет назад фактически "стандартной" считалась колонка 4.6х250 мм, то в последние годы колонки диаметром 2 или длиной 100-150 мм применяются все чаще.

Основным препятствием для интенсивного внедрения ВЭЖХ на коротких колонках малого диаметра является отсутствие пригодных для работы с ними хроматографов. По сравнению с обычными, такие хроматографы должны обеспечивать малые скорости потока и малое внеколоночное уширение хроматографических зон, имея при этом достаточно высокие метрологические характеристики и оставаясь в рамках типичного для рутинного химического анализа масштаба. Разработка и организация промышленного производства таких приборов представляется нам весьма актуальной задачей. В этом ключе, не менее актуальная и другая задача - разработка типовых методик анализа с применением предлагаемого варианта ВЭЖХ, предназначенных для решения как простых, так и комплексных аналитических задач.

Цель работы состояла в обосновании выбора масштаба микроколоночной ВЭЖХ (МК ВЭЖХ), не выходящего за рамки масштаба рутинного химического анализа, в проектировании макетов и промышленных образцов хроматографического оборудования, в исследовании их метрологических характеристик, в разработке таких методик ВЭЖХ-анализов для различных областей науки и практики, в которых бы преимущества МК ВЭЖХ выявлялись в максимальной степени.

Научная новизна. Разработан метод МК ВЭЖХ, масштаб которого оптимизирован по отношению к типичному масштабу современного химического рутинного анализа. Его основные характеристики следующие:

колонка 2х60-80 мм; с сорбентом, размер зерна которого равен 5 мкм, колонка имеет эффективность 5000-6000 теоретических тарелок, что обеспечивает ее пиковую емкость до 30-40 пиков при изократическом элюировании, а при градиентном - до 50 пиков;



скорость потока элюента - 100-200 мкл/мин;

рабочее давление - 3-4 МПа;

расход элюента на один анализ - 2 мл;

время анализа - 5-30 мин.

По сравнению с обычной ВЭЖХ на колонке 4.6х250 мм достигнута более, чем 10-ти кратная экономия растворителя; во столько же раз снижены требования к его чистоте.

Показана применимость разработанного метода МК ВЭЖХ для решения широкого круга аналитических задач:

исследована обращенно-фазная (ОФ) МК ВЭЖХ белков и пептидов;

получены данные для прогнозирования результатов разделения по начальным условиям (нагрузка на колонку, крутизна градиента, скорость потока);

в сочетании с техникой многоволнового УФ-детектирования разработаны методики микропрепаративной ОФ МК ВЭЖХ для структурных исследований белков и пептидов и методики анализа аминокислот;

методом ОФ МК ВЭЖХ впервые выполнены следующие работы:

идентифицирован аффинно модифицируемый пептид в РНКазе; выделены индивидуальные триптические пептиды белка Е оболочки вируса клещевого энцефалита и расшифрована их первичная структура; из гидролизатов миоглобина байкальской нерпы выделены пептиды, по структуре которых найдена полная первичная структура миоглобина; из гипофиза теленка выделен пептидный эндогенный лиганд бензодиазепинового рецептора;

разработана методика выделения микроколичеств ДНС-производного пептидов;

для оценки загрязнения природных вод экотоксикантами впервые разработаны ВЭЖХ-методики определения коэффициентов аккумуляции хлорфенолов в желчи рыбы методики определения DDT (и его метаболитов) и суммы фталатов в жире тюленя; разработана и апробирована in situ методика прямого определения бис(2-этилгексил)фталата в воде оз. Байкал;

для искусственных смесей и объектов окружающей среды показана применимость ОФ МК ВЭЖХ для определения полициклических ароматических углеводородов, пестицидов, фенолов, нитросоединений, фталатов и неорганических анионов;

разработаны методики определения хлорофиллов, альдегидов и УФпоглощающих веществ, которые в одном пакете с другими методиками анализа делают хроматографы "Милихром" широко применимыми для контроля качества питьевой воды;

разработан принцип формирования банка хроматографических и спектральных данных для идентификации пиков при анализе фармацевтических препаратов методом градиентной МК ВЭЖХ в сочетании с многоволновой детекцией.

Практическое значение работы. Разработанный метод МК ВЭЖХ реализован в серийно выпускающихся с 1982 г. хроматографах "Милихром". В настоящее время "Милихром-5" выпускает АО "Научприбор" (г.Орел), а "Милихром А-02" - ЗАО "ЭкоНова" (г.Новосибирск). Все хроматографы включены в Государственный реестр средств измерений. Всего было выпущено около 4000 приборов.

Исследования в области ОФ МК ВЭЖХ белков и пептидов, а также сама методология этих исследований, представляют практический интерес для структурной химии белка.

Разработанные методики ВЭЖХ-анализа экотоксикантов представляют практический интерес для специалистов, занимающихся фундаментальными исследованиями окружающей среды и контролем ее загрязнения, для лабораторий контроля качества питьевой воды. Предложенная методология применения градиентной ОФ МК ВЭЖХ в сочетании с многоволновым детектированием представляет интерес для специалистов, разрабатывающих методики анализа фармацевтических препаратов.

Положения, выносимые на защиту.

1. Метод МК ВЭЖХ, согласованный по своему масштабу с типичным масштабом рутинного химического анализа и отвечающий его основным требованиям.

2. Алгоритм автоматического ВЭЖХ-анализа на микроколонках и схема микроколоночного жидкостного хроматографа "Милихром А-02" с градиентным двухшприцевым насосом, характеристики которого оптимизированы с учетом ограничений, связанных со сжимаемостью жидкости.

3. Результаты исследования зависимости эффективности микроколонки с обращенной фазой при хроматографии пептидов от скорости элюции, от нагрузки и от крутизны градиента концентрации элюента.

4. Методики определения аминокислот в виде ФТК-, ФТГ- и ДНС-производных, методика препаративной очистки трипсина, методика выделения микроколичеств дансилированного производного пептида из реакционной 5. Комплексные методики выделения:

аффинно модифицированного триптического пептида рибонуклеазы;

триптических пептидов белка Е вируса клещевого энцефалита;

протеолитических пептидов миоглобина байкальского тюленя;

пептидного лиганда бензодиазепинового рецептора (из гипофиза).

6. Методики определения ПАУ, фенолов, пестицидов, фталатов, нитросоединений, формальдегида и ацетальдегида, хлорофиллов, неорганических анионов в искусственных смесях и в объектах окружающей среды.

7. Методики суммарного определения хлорфенолов в желчи рыб, фталатов и пестицидов группы DDT в жире тюленя.

8. Метод формирования банка хроматографических и спектральных данных для идентификации пиков при анализе фармацевтических препаратов.

Апробация работы. Материалы работы докладывались на 2-ом Всесоюзном симпозиуме по жидкостной хроматографии (Черноголовка, 1982), 10-ой Конференции по изопреноидам (Лазне Требон, ЧССР, 1983), 1-ой Всесоюзной конференции "Хроматография в биологии и медицине"(Москва, 1983), 3-ем Всесоюзном симпозиуме по молекулярной жидкостной хроматографии (Рига, 1984), 10-ой Международной конференции по масс-спектрометрии (Сванси, Великобритания, 1985), 5-ом Дунайском симпозиуме по хроматографии (Ялта, 1985), 4-ом Всесоюзном симпозиуме по молекулярной жидкостной хроматографии (Алма-Ата, 1987), Всесоюзной конференции "Применение хроматографии на предприятиях химического комплекса" (Пермь, 1989), 1-ой и 2-ой Верещагинских международных конференциях (Иркутск, 1989, 1995), Всесоюзной конференции "Применение хроматографии в пищевой, микробиологической и медицинской промышленности (Геленджик, 1990), 5-ом Всесоюзном симпозиуме по молекулярной жидкостной хроматографии (Рига, 1990), 2-ом Финско-Российском семинаре "Химия и экология элементоорганических соединений (Яваскила, Финляндия, 1992), Всероссийской конференции по экономическому развитию Сибири (Новосибирск, 1993), Международном симпозиуме "Байкал как природная лаборатория для изучения изменения глобального климата" (Иркутск, 1994), Международной конференции "Атмосферный аэрозоль" (Хельсинки, 1996), Международном конгрессе по аналитической химии (Москва, 1997).

Результаты работы вошли в состав коллективного труда "Создание метода микроколоночной жидкостной хроматографии, разработка и организация производства микроколоночного хроматографа "Милихром" ("Обь-4")", удостоенного Государственной премии СССР в области техники за 1985 г.

Хроматографы серии "Милихром" многократно демонстрировались на крупнейших международных выставках аналитического оборудования. Так, последняя модель - хроматограф "Милихром А-02" - под торговыми названиями "EnviroChrom" и "SyChrom" экспонировался в Иннсбруке ("HPLC'95"), в Мюнхене ("Analytika'96"), в Чикаго ("Pittcon'96"), в Сан-Франциско ("HPLC'96"), в Харькове ("Фармация'96"), в Москве ("Химия'97").

2. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Идея применения "микроколонок" в жидкостной хроматографии для повышения чувствительности анализа была реализована еще до "официального" рождения ВЭЖХ. Позже к ней возвращались не один раз и возвращаются до сих пор, но, несмотря на свои очевидные достоинства, широкого распространения МК ВЭЖХ так и не получила. Подробное рассмотрение причин, по которым МК ВЭЖХ столь настойчиво "отторгается" практикой, позволяет, как нам кажется, выявить главную - несовместимость предлагаемых вариантов миниатюризации ВЭЖХ с существующим масштабом рутинного химического анализа и несогласованность их рекордных возможностей с более "приземленными" требованиями, лежащими в основе самой постановки типовых аналитических задач. В погоне за рекордами, как часто бывает, исследователи, перешагнув границу "разумного", не смогли создать оборудование, по сложности и надежности конкурентоспособное с общепринятым, и их достижения оказались пока невостребованными. В науке и технике аналогичных примеров множество.

Разрабатывая свой вариант МК ВЭЖХ, мы постарались учесть это обстоятельство и выбору масштаба хроматографии, обоснованного с точки зрения рутинного химического анализа, уделили особое внимание.

Исторически эта часть работы была выполнена в два этапа. На первом этапе (1978-1982гг.) мы руководствовались во многом интуитивными соображениями, основанными на поиске компромисса между желанием сделать максимально простой, надежный, отвечающий всем требованиям метрологии микроколоночный хроматограф и техническими решениями, которые должны быть реализуемы при его промышленном производстве.

К этому времени в Новосибирском институте органической химии СО АН СССР, благодаря работам Л.С.Сандахчиева, С.В.Кузьмина, М.А.Грачева, В.В.Власова и др., уже в течение 10 лет в области биоорганической химии нуклеиновых кислот широко применялась микроколоночная ионообменная ЖХ с многоволновым детектированием. Разделения проводили на колонках объемом 50-100 мкл с "мягкими" ионообменниками на макетном оборудовании, изготовленном в том же Институте. Наша задача заключалась, по сути, в том, чтобы повысить эффективность существующего варианта МК ЖХ до уровня современной ВЭЖХ, в которой для "жестких" сорбентов с dp=5-10 мкм ВЭТТ (Н) достигала величины 2-4 dp или 10-40 мкм. Несколько раньше эту проблему пытались решить японские исследователи (D.Ishii и др., 1977), но эффективность их колонок из фторопластовых капилляров с внутр=0.5-1 мм, не превышала 500теоретических тарелок (т.т.) при Н=6-10dp.

При выборе длины колонки (L) мы приняли во внимание результаты фундаментальных исследований по ВЭЖХ, опубликованные в середине 70-х гг.

(G.Guiochon, M.Martin, I.Halasz, H.Schmidt и др.), из которых следовало, что по многим критериям оптимальной является колонка с N5000-6000 т.т. Ее разделяющая способность (пиковая емкость Z) в зависимости от приемлемого на практике коэффициента разделения соседних пиков Ri,i+1=1-1.5 составляет 30- пиков (см. рис. 1) и это достаточно для разделения весьма сложных смесей.

Цитируемые авторы показали, что в случае плохо разделяемых веществ выгоднее не увеличивать N колонки за счет ее удлинения, а оптимизировать состав подвижной фазы.

Ограничив из этих соображений N проектируемой колонки величиной т.т., мы ориентировались на применение самых мелкодисперсных доступных в то время сорбентов с dp=5 мкм, позволяющих минимизировать ее длину и, тем самым, время разделения. Так как в ВЭЖХ для этих сорбентов реально достигалась Н=12-15 мкм, то L=NH=60-75 мм.

Объем колонки (Vкол) выбирали из необходимости сохранения ее N для малоудерживаемого вещества (k'=1) с учетом размывания хроматографической полосы в ячейке детектора. В качестве детектора использовали двухлучевой УФмикроспектрофотометр (190-360 нм) с Z-образной ячейкой объемом 1.8 мкл (1.2х1.6 мм), разработанный и изготовленный в СО АН СССР.

Экспериментально найденное значение дисперсии ячейки вместе с входным капилляром (яч) оказалось равным 0.3-0.5 мкл. Принимая, что вклад яч в дисперсию хроматографического пика (пик) не должен превышать 10% (для пика вещества с k'=1 пик4 мкл), а объем пор типичного для ВЭЖХ силикагельного сорбента составляет 0.75Vкол, для колонки с N=5000 т.т.

вычисляли ее минимальный объем Vкол из уравнения:

где V0 - свободный объем колонки.

Так как колонки экономически выгоднее делать из стандартных коммерчески доступных трубок, диаметры которых изменяются дискретно, то для колонки с Vкол=200 мкл и L=60-75 мм ближе всего размеры "2х62 мм", взятые нами в качестве базовых. По сравнению со "стандартной" ВЭЖХколонкой, объем нашей был меньше примерно в 20 раз, и это дало основание назвать ее "микроколонкой". Очевидно, что подобный термин носит весьма условный характер, впрочем, как и сам термин "ВЭЖХ".

После экспериментальных проверок нескольких вариантов конструкции микроколонки, узла ввода пробы и методик упаковки колонок "жесткими" прямыми и обращенными фазами с dp=5 мкм, нам удалось достичь проектной эффективности 5000 т.т. Такой результат был получен во многом благодаря неоценимым советам А.Карапетяна.

Итогом этого этапа работы явился хроматограф "Обь-4", около 30 которых было выпущено Опытным заводом СО АН СССР (г.Новосибирск) в 1980-1982 гг.

Под названием "Милихром-1" этот хроматограф серийно производился в 1982гг. в ПО "Научприбор" (г.Орел). Затем его заменили более автоматизированные модели "2", "4" и "5" (см. рис. 2).

Для всех этих приборов масштаб хроматографии был одинаковым:

колонка 2х60-80 мм с реализованной эффективностью N=4000-5000 т.т.;

типичная скорость потока элюента F=0.1-0.2 мл/мин;

типичное рабочее давление Р=2-4 МПа;

типичный расход элюента на один анализ - 2 мл.

По сравнению с общепринятым масштабом ВЭЖХ, характерным для колонки 4.6х250 мм, за счет применения более короткой и узкой колонки экономия подвижной фазы составила более 10 раз, а рабочее давление уменьшилось в 3-4 раза. Многолетняя эксплуатация хроматографов "Милихром" во многих аналитических лабораториях доказала принципиальную пригодность этого варианта МК ВЭЖХ для решения самых разнообразных задач.

В начале 90-х годов, когда возникла необходимость в разработке более совершенного хроматографа, мы вернулись к проблеме выбора масштаба. С одной стороны, новые технологические возможности позволяли уменьшить Vкол еще в 5-10 раз и получить большую экономию элюента. С другой стороны, нельзя было не учесть отрицательный опыт внедрения ВЭЖХ на "сверхминиатюрных" колонках в практику. Исходя из этого, в основу проекта мы положили не наши возможности, а сложившиеся к этому времени общие требования, предъявляемые к рутинному ВЭЖХ-анализу. Информация, полученная путем просмотра 200 работ прикладного характера за 1985-86 гг. в журналах "Chromatographia" и "Analyt. Biochem.", свелась к следующему:

количество веществ, определяемых в одном анализе, составляет от 1 до 20;

концентрация аналита в инжектируемом образце составляет 10-5-10-2 М;

полный объем образца, подготовленного для ВЭЖХ-анализа, превышает 100мкл; при работе с меньшими объемами заметно возрастает погрешность анализа из-за ошибок, вносимых лабораторным оборудованием;

минимальный объем образца, вводимый в колонку, также ограничен возможностями лабораторного оборудования и равен не менее 10-20 мкл;

минимальное количество определяемого вещества равно 10-10 моля;

погрешность всего анализа (включая пробоподготовку) - >5%, что при определении 10-10 моля вещества соответствует пределу чувствительности ВЭЖХ-стадии всего анализа 10-12 моля;

продолжительность хроматографического анализа составляет 10-30 мин.

Следует отметить, что перечисленные выше основные характеристики ВЭЖХ-анализа хорошо согласуются с общим уровнем типичного рутинного химического анализа, определяемым следующими причинами:

метрологические характеристики типичного лабораторного оборудования (весы, пипетки, шприцы, мерные пробирки, колбы и цилиндры) не позволяют получить погрешность анализа лучше 5%;

при работе с объемами 50%);

длина колонки составляет 150-250 мм (50%), а ее диаметр - 4-5 мм (70%);

вычисленная из приведенных в статьях хроматограмм эффективность колонок составила 1000-3000 (34%) и 3000-6000 (42%) теоретических тарелок.

Полученная таким образом совокупность исходных данных позволила получить представление о реальном состоянии рутинной ВЭЖХ. Обращает на себя внимание тот факт, что длина применяемых в большинстве случаях колонок явно завышена. Эффективность колонок с L=150-250 мм с сорбентом, имеющим dp=5 мкм, должна составлять не менее 12000-20000 т.т., но на практике она существенно ниже (1000-6000 т.т.). Причина такого несоответствия объясняется либо несовершенством методик разделения (например, неправильно выбран состав подвижной фазы), либо большим экстраколоночным размыванием хроматографической полосы из-за несогласованности колонки с применяемым хроматографическим оборудованием.

Поскольку выбранный нами ранее вариант МК ВЭЖХ гарантировано обеспечивал достаточную для рутинных анализов Nкол=5000 т.т., при проектировании нового хроматографа мы не стали изменять ее L. Длину колонки можно было бы уменьшить, перейдя к сорбентам с dp=3 мкм, но такие фазы менее доступны, дороже, их ассортимент довольно ограничен, а колонки часто имеют меньший срок службы.

Мы не стали уменьшать Vкол за счет уменьшения ее диаметра. Разумеется, это пропорционально уменьшило бы расход элюента на один анализ, но, по сравнению с уже достигнутым уровнем экономии, дальнейшее его снижение несущественно. Уменьшение Vкол, кроме того, привело бы к ограничению ее препаративных возможностей, которые, важны, например, при работе с пептидами и белками. Наконец, уменьшение Vкол было бы не оправдано с точки



Похожие работы:

«Амирханова Евгения Александровна АДМИНИСТРАТИВНО-ПРАВОВОЕ РЕГУЛИРОВАНИЕ В СФЕРЕ ТУРИЗМА Специальность 12.00.14 – административное право; административный процесс ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата юридических наук Научный руководитель кандидат юридических наук,...»

«Ган Елена Юрьевна КОМПЛЕКСНАЯ КЛИНИКО-ПСИХОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ЖИЗНИ ПАЦИЕНТОК С БОЛЕЗНЬЮ ШЁГРЕНА 14.01.22 Ревматология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учной степени кандидата медицинских наук Научный руководитель : доктор медицинских наук, профессор Л.А. Шардина...»

«РУСНАК НАТАЛЬЯ АЛЕКСАНДРОВНА СОЦИОКУЛЬТУРНЫЕ МАРКЕРЫ И ОСОБЕННОСТИ ТРАНСФОРМАЦИИ ОБРАЗА И ЗНАКА В ХУДОЖЕСТВЕННОМ ТВОРЧЕСТВЕ Специальность 09.00.13 – Религиоведение, философская антропология, философия культуры Диссертация на соискание ученой степени кандидата философских наук Научный руководитель доктор философских наук, профессор Грачев Василий Дмитриевич Ставрополь - ПЛАН ДИССЕРТАЦИИ Введение.. Глава I. Проблема трансляции знания,...»

«Моторина Наталья Валерьевна Лингвокультурные скрипты традиционного коммуникативного поведения в России и Англии 10.02.20 – сравнительно-историческое, типологическое и сопоставительное языкознание Диссертация на соискание ученой степени кандидата филологических наук Научный руководитель : доктор филологических...»

«Просянюк Дарья Вячеславовна МЕТОДЫ ТЕМАТИЧЕСКОЙ КЛАССИФИКАЦИИ ТЕКСТА (НА ПРИМЕРЕ ОБРАЗА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ В NEW YORK TIMES) Специальность: 22.00.01 – Теория, методология и история социологии Диссертация на соискание ученой степени кандидата социологических наук Научный руководитель : кандидат...»

«Свистунова Наталья Владимировна КЛИНИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ СОВРЕМЕННОГО ГРИППА И СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОТИВОВИРУСНОЙ ТЕРАПИИ 14.01.09 – инфекционные болезни ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель : доктор медицинских наук,...»

«Мозговой Максим Владимирович Машинный семантический анализ русского языка и его применения Специальность 05.13.11 — математическое и программное обеспечение вычислительных машин, комплексов и компьютерных сетей Диссертация на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Научный руководитель — доктор физико-математических наук, профессор Тузов В.А. Санкт-Петербург – 2006 2 Оглавление ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ О...»

«ОРЕХОВА НАТАЛЬЯ НИКОЛАЕВНА НАУЧНОЕ ОБОСНОВАНИЕ И РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ КОМПЛЕКСНОЙ ПЕРЕРАБОТКИ И УТИЛИЗАЦИИ ТЕХНОГЕННЫХ МЕДНО-ЦИНКОВЫХ ВОД ГОРНЫХ ПРЕДПРИЯТИЙ Специальность 25.00.13 – Обогащение полезных ископаемых Специальность 25.00.36 - Геоэкология (горно-перерабатывающая промышленность) Диссертация на соискание учёной степени доктора технических наук Научный консультант – доктор технических наук И.В....»

«Казарьянц Эдуард Артурович ПРИМЕНЕНИЕ КОМПОЗИЦИОННОГО ЗОЛОТОСОДЕРЖАЩЕГО ПОКРЫТИЯ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ КЛИНИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ МЕТАЛЛОКЕРАМИЧЕСКИХ ЗУБНЫХ ПРОТЕЗОВ 14.01.14 – стоматология диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук научный руководитель: доктор...»

«ПЛИТИНЬ Юлия Сергеевна ГУМУСНОЕ СОСТОЯНИЕ ЧЕРНОЗЕМА ВЫЩЕЛОЧЕННОГО В АГРОЦЕНОЗАХ АЗОВО-КУБАНСКОЙ НИЗМЕННОСТИ Специальность 03.02.13 – почвоведение Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный руководитель доктор сельскохозяйственных наук, профессор...»

«Чириков Игорь Сергеевич СОЦИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ТРАНСФОРМАЦИИ ОРГАНИЗАЦИОННЫХ ГРАНИЦ: ТЕОРЕТИКО-МЕТОДОЛОГИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ Специальность 22.00.01 – теория, методология и история социологии Диссертация на соискание ученой степени кандидата социологических наук Научный руководитель д.социол.н., профессор И.Ф. Девятко Москва 2013 СОДЕРЖАНИЕ: ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. ОРГАНИЗАЦИОННЫЕ ГРАНИЦЫ КАК СОЦИОЛОГИЧЕСКИЙ ФЕНОМЕН 1.1....»

«Бутаков Михаил Игоревич Инструментальное средство синтеза и исполнения транслирующих программ на основе позитивнообразованных формул Специальность 05.13.11 – Математическое и программное обеспечение вычислительных машин, комплексов и компьютерных сетей Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук Научный руководитель : к.ф.-м.н., доц. В.И. Курганский Иркутск –...»

«Стрельцова Валентина Павловна КОНЦЕПЦИЯ ПСИХОЛОГИИ ОТНОШЕНИЙ ЛИЧНОСТИ В.Н. МЯСИЩЕВА И ЕЁ МЕТОДОЛОГИЧЕСКАЯ, НАУЧНО-ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИКО-ПСИХОЛОГИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ Специальность 19.00.05 – социальная психология Диссертация на соискание ученой степени кандидата психологических наук Научные руководители: доктор психологических наук, профессор НОВИКОВ Виктор Васильевич доктор психологических наук, профессор ГЛОТОЧКИН Алексей Данилович Ярославль 2002 СОДЕРЖАНИЕ Введение.. Глава...»

«Наркевич Артём Николаевич ОРГАНИЗАЦИЯ АКТИВНОГО ВЫЯВЛЕНИЯ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ ФЛЮОРОГРАФИЧЕСКИМ МЕТОДОМ НА ОСНОВЕ ИНДИВИДУАЛЬНОЙ ОЦЕНКИ ФАКТОРОВ РИСКА 14.02.03 – общественное здоровье и здравоохранение 14.01.16 – фтизиатрия Диссертация на соискание...»

«Герасимов Дмитрий Александрович ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ НИМЕСУЛИДА И БЛИЗКИХ ПО СТРУКТУРЕ СОЕДИНЕНИЙ Специальность: 14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия Диссертация на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Научные руководители: Шорманов В.К.,...»

«Каюкова Инна Викторовна РАЗРАБОТКА МАТЕМАТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ И МОДЕЛЕЙ АНАЛИЗА И ПРОГНОЗИРОВАНИЯ КАЧЕСТВА ОБУЧЕНИЯ В ВУЗЕ НА ОСНОВЕ КОМПЕТЕНТНОСТНОГО ПОДХОДА Специальность 08.00.13 – Математические и инструментальные методы экономики Диссертация на соискание...»

«Бондаренко Валентина Евгеньевна ОСНОВАНИЕ УГОЛОВНО-ПРАВОВОЙ ОХРАНЫ И ЕЕ ПРЕКРАЩЕНИЕ 12.00.08 - уголовное право и криминология; уголовно-исполнительное право Диссертация на соискание ученой степени кандидата юридических наук Научный руководитель : доктор юридических наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ Разгильдиев...»

«Акимов Дмитрий Владимирович УЛЬТРАЗВУКОВОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ В КОМПЛЕКСНОЙ ДИАГНОСТИКЕ И ОЦЕНКЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ С ГИНЕКОМАСТИЕЙ 14.01.13 - лучевая диагностика, лучевая терапия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель : доктор...»

«из ФОНДОВ РОССИЙСКОЙ ГОСУДАРСТВЕННОЙ БИБЛИОТЕКИ Саликсеа, Лейсян Багдатовна 1. Становление индивидуального опыта младжик жкольников в зависимости от стиля родительского отножения 1.1. Российская государственная Библиотека diss.rsl.ru 2003 Саликова, Лейсян Багдатовна Становление индивидуального опыта младшик школьников в зависимости от стиля родительского отношения [Электронный ресурс]: Дис.. канд. псикол. наук : 19.00.07.-М.: РГБ, 2003 (Из фондов Российской Государственной Библиотеки)...»

«ВЕРЕЩАГИН КОНСТАНТИН НИКОЛАЕВИЧ СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ УПРАВЛЕНИЯ КАЧЕСТВОМ ПРОЦЕССОВ МОДЕРНИЗАЦИИ И РАЗВИТИЯ СИСТЕМ ГАЗОПРОВОДОВ-ОТВОДОВ Специальность 05.02.23 Стандартизация и управление качеством продукции ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата технических наук Москва – 2014 ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1...»






 
2014 www.av.disus.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.