WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального

образования «Южно-Уральский государственный медицинский университет»

Министерства здравоохранения Российской Федерации

На правах рукописи

Бабин

Константин Александрович

ОСОБЕННОСТИ ОБМЕНА БИОГЕННЫХ АМИНОВ И

СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ ПРИ АЛКОГОЛЬНОМ

ДЕЛИРИИ С СОПУТСТВУЮЩИМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ С

03.01.04 – биохимия Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор В.Э.Цейликман Челябинск - Оглавление Введение

Глава 1 Обмен биогенных аминов и состояние свободнорадикального окисления при алкогольном делирии и вирусном гепатите С (обзор литературы)

1.1 Нарушения обмена биогенных аминов в патогенезе алкогольного делирия...... 1.2 Факторы формирования окислительного стресса при алкогольном делирии.... 1.3 Гепатотоксичность этанола как индуктора развития алкогольных психозов..... 1.4 Окислительный стресс у больных с вирусным гепатитом С

1.5 Окислительный стресс у больных алкоголизмом с сопутствующим вирусным гепатитом С

Глава 2 Материалы и методы исследования

2.1 Дизайн исследования, характеристика обследованных пациентов

2.2 Биохимические методы исследования

2.3 Статистический анализ результатов

Глава 3 Результаты и обсуждение

3.1 Соотношение между уровнем кортизола, показателями обмена биогенных аминов и показателями свободнорадикального окисления у больных с алкогольным делирием

3.2 Соотношение между уровнем кортизола, показателями обмена биогенных аминов и показателями свободнорадикального окисления у больных с типичным алкогольным делирием

Соотношение между показателями обмена биогенных аминов и 3.3 показателями свободнорадикального окисления у больных с тяжелым алкогольным делирием

Соотношение между показателями обмена биогенных аминов и 3.4 показателями свободнорадикального окисления у больных вирусным гепатитом С

Соотношение между показателями обмена биогенных аминов и 3.5 показателями свободнорадикального окисления у больных с типичным алкогольным делирием с сопутствующим ВГС

3.6 Соотношение между показателями обмена биогенных аминов и показателями свободнорадикального окисления у больных с тяжелым алкогольным делирием с сопутствующим вирусным гепатитом С

3.7 Обсуждение

Заключение

Выводы

Список сокращений и условных обозначений

Список литературы

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования и степень ее разработанности Алкоголизм и вирусный гепатит С (ВГС) - важнейшие медикобиологические и социальные проблемы, приводящие к росту заболеваемости и смертности среди населения планеты [39; 84; 85; 164; 194; 195; 204].

Хроническая алкгольная интоксикация создает благоприятный фон для репликации вируса гепатита С (HCV) и увеличения степени активности ВГС, а также снижает эффективность антивирусной терапии [52;

Кроме того, известно, что длительный алкогольный анамнез 139].

повышает риск инфицирования HCV по сравнению с лицами, не злоупотребляющими алкоголем [194; 195]. В особенности это касается заражения вирусом половым путем Клинические [79; 194; 196].

исследования выявили прямую корреляционную зависимость между количеством потребляемого алкоголя и внутрипеченочным титром HCV [221]. Причем ограничение потребления алкоголя может снизить HCV титр у некоторых пациентов [191]. В ходе исследований in vitro установлена способность этанола повышать уровень РНК HCV в гепатомных клеточных линиях человека Huh7. В этих условиях можно говорить о «холостом ходе» репликации, так как образование вирусной РНК проходит без сборки вирусной частицы [194; 195]. Ценность исследований на вирус продуцирующих клеточных культурах связана с тем, что это дает возможность изучать молекулярные механизмы сочетанного действия этанола и HCV в печени.

Отказ от алкоголя повышает эффективность антивирусной терапии [212].

Но отмена алкоголя у больных с алкоголизмом может провоцировать развитие алкогольных психозов, 71-91% из которых составляет алкогольный делирий [29].

катехоламинов к аутоокислению с генерацией радикальных продуктов [36], а так же возможное увеличение производства перекиси водорода вследствие дезаминирования биогенных аминов моноаминоксидазами (МАО) [171], можно предположить непосредственную роль катехоламинов в окислительном стрессе (ОС) у пациентов с алкогольным делирием и сопутствующим вирусным гепатитом С. Между тем, известно, что некомпенсируемое усиление злокачественное течение заболевания [162; 179].

нейродегенеративных изменений, запуская механизмы аппоптоза нервных клеток посредством усиления генерирации перекиси водорода [44; 45; 123].

Уровень активности тромбоцитарной МАО-Б является одним из маркеров, характеризующих активность МАО в ЦНС [136]. Наиболее значимыми эндогенными регуляторами активности фермента являются кортизол и компоненты трибулина [77; 167]. Известно, что для больных ВГС характерно напряжение гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы [186; 213].



Гиперкортизолемия сопровождается развитием кортизол-резистентности и является общим механизмом адаптивной аллостатической стресс - реакции на присутствие в организме вируса [114; 219].

Известно, что практически у всех пациентов с алкогольным делирием имеются хронические заболевания печени [49]. Изменения функционирования органа напрямую связаны с токсическим и иммунотропным действием этанола, а так же с активацией свободнорадикальных процессов, опосредованной гематоэнцефалического барьера (ГЭБ), и другим нарушениям со стороны ЦНС, увеличивающим вероятность манифестации алкогольного делирия [48]. В данном контексте считаем необходимым произвести оценку выраженности изменений показателей функциональных проб печени у больных ВГС при алкогольном делирии.

В последние годы интенсивно проводятся исследования процессов свободнорадикального окисления при алкоголизме в зависимости от наличия сопутствующего ВГС. Но для категории больных алкоголизмом, осложненным развитием алкогольного делирия, остаются неизученными особенности свободнорадикального окисления, а так же зависимость этих процессов от обмена биогенных аминов и уровня кортизола.

Таким образом, вирусный гепатит С способен существенно влиять на особенности развития и течения алкогольного делирия. При этом, в литературе отсутствуют сведения об изменениях процессов свободнорадикального окисления и обмена биогенных аминов при алкогольном делирии с сопутствующим вирусным гепатитом С. Учитывая роль нарушений обмена биогенных аминов и окислительного стресса в развитии осложнений вышеупомянутых заболеваний, представляется важным исследование этих показателей при сочетанной патологии.

Цель исследования Установить соотношение между интенсивностью процессов свободнорадикального окисления и содержанием биогенных аминов в крови, уровнем их экскреции у больных с алкогольным делирием с сопутствующим вирусным гепатитом С.

Задачи исследования 1. Определить особенности обмена биогенных аминов у больных с типичным и тяжелым алкогольным делирием без сопутствующего вирусного гепатита С, а также у больных с вирусным гепатитом С без алкогольной зависимости.

2. Определить особенности окислительного стресса у больных с типичным и тяжелым алкогольным делирием без сопутствующего вирусного гепатита С, а также у больных с вирусным гепатитом С без алкогольной зависимости.

3. Определить особенности обмена биогенных аминов у больных с типичным алкогольным делирием с сопутствующим вирусным гепатитом 4. Изучить особенности окислительного стресса у больных с типичным алкогольным делирием с сопутствующим вирусным гепатитом С.

5. Определить особенности обмена биогенных аминов у больных с тяжелым алкогольным делирием с сопутствующим вирусным гепатитом С.

6. Изучить особенности окислительного стресса у больных с тяжелым алкогольным делирием с сопутствующим вирусным гепатитом С.

Методология и методы исследования Проведено проспективное, рандомизированое, двойное слепое обследование 147 пациентов, госпитализированых в отделение неотложной наркологической помощи ГБУЗ «Челябинская областная клиническая наркологическая больница» и 20 пациентов III инфекционного отделения МУЗ ГКБ№8 г.Челябинска. Результаты биохимических исследований были изучены и сопоставлены в четырех группах:

госпитализированных по поводу алкогольного делирия. У 80 из них психоз имел типичное течение (АДтип), у 35 – тяжелое (АДтяж) (затяжной, ундулирующий, с глубоким помрачением сознания, с утратой функций витального контроля[41]).

2. «Алкогольный делирий с сопутствующим вирусным гепатитом С (АД+ВГС)» - 32 больных, госпитализированных по поводу алкогольного делирия с подтвержденным диагнозом вирусного гепатита С. У 22 из них психоз имел типичное течение (АДтип+ВГС), у 10 – тяжелое (АДтяж+ВГС). Минимальная степень активности ВГС установлена у пациентов данной группы(АД+ВГСм), низкая степень активности ВГС – у 9 пациентов (АД+ВГСн), умеренная – у 13(АД+ВГСу).

3. «Вирусный гепатит С (ВГС)» - пациентов инфекционного стационара, госпитализированных по поводу вирусного гепатита С, не страдающих наркологическими заболеваниями. Минимальная степень активности ВГС установлена у 6 пациентов данной группы(ВГСм), низкая степень активности ВГС – у 8 пациентов (ВГСн), умеренная – у 6(ВГСу).

наркологических, психоневрологических, соматических и инфекционных заболеваний.

Все обследованные – лица мужского пола, трудоспособного возраста (23-55 лет). Включение пациентов в исследование и взятие биологического материала производилось при поступлении больных в клинику до начала терапии.

Диагноз и степень активности ВГС устанавливалась на основании заключения врача-инфекциониста (заведующая III инфекционным отделением МУЗ ГКБ№ г.Челябинска, врач - инфекционист высшей категории Е.Ю. Лебедева).

Из исследования исключались лица, страдающие психической патологией (эндогенные психические заболевания, деменция, олигофрения), туберкулезом, сахарным диабетом, ВИЧ-инфекцией, тяжелой соматической патологией в стадии декомпенсации, онкологическими заболеваниями, а также лица, имеющие в анамнезе черепно-мозговые травмы. Отказ от динамического наблюдения и обследования также являлся критерием исключения пациента из исследования. Исследование одобрено этическим комитетом ГБОУ ВПО «ЮУГМУ» Минздрава как соответствующее этическим нормам.

В сыворотке крови обследованных пациентов определялось содержание общего белка, общего и прямого билирубина, мочевой кислоты, креатинина, активность аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ), гама-глутамат транспептидазы (ГГТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), осуществлялась постановка тимоловой пробы.

В плазме крови по методике И.А. Волчегорского и соавторов [23; 26] определялось содержание первичных (гидроперекиси липидов) и вторичных (кетодиены и сопряжнные триены) молекулярных продуктов перекисного окисления липидов [23; 26]. Содержание конечных продуктов ПОЛ шиффовых оснований и уровень Fe+2 / аскорбат - индуцированного ПОЛ определялись с использованием методик Е.И.Львовской и соавторов [53; 54].

По методике Е.Е.Дубининой и соавт. в плазме крови определяли содержание карбонилированных белков Активность моноаминоксидазы-Б тромбоцитов определяли, используя метод Волчегорского И.А. и соавт.[24].

Содержание катехоламинов (адреналин, норадреналин, дофамин и ДОФА) в крови, порционной и суточной моче определяли флюорометрическим методом с предварительной адсорбцией на окиси алюминия и детектированием флуоресценции продуктов окисления [40]. Содержание серотонина оценивали флюориметрическим методом по реакции с о - фталевым диальдегидом [40].

Уровень церулоплазмина в сыворотке крови определяли методом Равина по окислению р-фенилендиамина[40]. Содержание кортизола определяли на анализаторе биожидкостей флюорометрическим микрометодом [10].

Трибулиновую активность мочи определяли по степени угнетения МАОактивности стандартизованного препарата митохондрий печени крыс [26].

Активность ксантиноксидазы определяли спектрофотометрическим методом [8]. Содержание битирозина в плазме крови оценивали по методу K.J. Davies [8].

обследование [30; 81] для более детальной оценки характера возможных нарушений психической деятельности (данный раздел работы проведен совместно с преподавателем кафедры клинической психологии ФГБОУ ВПО Южно-Уральский государственный университет (НИУ) А.В. Новохацки).

Обследование производилось после полного купирования алкогольного делирия.

Статистический анализ данных проведен с помощью пакета прикладных программ STATISTICA-8. Результаты обрабатывались общепринятыми среднеарифметической (М) и е стандартной ошибки (m). Статистически значимые различия определяли с использованием непараметрического критерия Wilcoxon. Применялись критерии непараметрической статистики:

Манна-Уитни (U), Колмогорова-Смирнова ( ) и Вальда-Вольфовица (WW).

Статистические взаимосвязи изучали при помощи непараметрического корреляционного анализа, выполняя расчт коэффициентов корреляции рангов по Спирмену (rs) и Кенделлу (rk). Для проведения кластерного анализа использован метод К-средних (К-means).

Степень достоверности, апробация результатов, личное участие автора Достоверность полученных результатов обусловлена достаточным объемом выборки, четко сформулированными критериями включения и исключения в исследование, использованием адекватных поставленным сертифицированного оборудования, применением современных методов статистического анализа. Достоверность также подтверждена актами внедрения результатов работы в учебный процесс и проверки первичной документации, публикацией материалов диссертации в статьях, докладах на достаточно большом числе научных конференций.

Основные положения работы изложены и представлены на региональной научно - практической конференции «Актуальные проблемы возрастной наркологии» (Челябинск, 2011); Tokyo international neuroscience conference (Tokyo, 2012); всероссийской междисциплинарной научно - практической конференции «Актуальные проблемы возрастной наркологии» (Челябинск, 2012); V Российской научно-практической конференции «Здоровье человека в XXI веке» (Казань, 2013); IV международном симпозиуме «Взаимодействие нервной и иммунной систем в норме и патологии» (Санкт-Петербург, 2013);

всероссийской междисциплинарной научно-практической конференции «Актуальные проблемы возрастной наркологии и профилактика аддиктивных состояний» (Челябинск, 2013).

В диссертации представлены результаты исследований, выполненных при личном участии автора на кафедре биохимии государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Южно-Уральский государственный медицинский университет»

Министерства здравоохранения Российской Федерации. Личный вклад автора в настоящую работу состоит в постановке целей и задач (совместно с М.М.Денисламовым, Б.В. Изаровским, И.В. Изаровской), проведении обследования пациентов и сборе первичного материала (совместно с к.м.н.

Д.Б.Виноградовым, к.м.н. И.В. Паначевым, к.м.н. А.Х.Мингазовым, Е.Ю.

Лебедевой, А.В. Новохацки), выполнении лабораторного этапа исследований (совместно с к.м.н. А.И.Синицким, и Ю.М. Шатровой), обработке, анализе и обобщении полученных результатов (совместно с профессором О.Б.Цейликман, профессором Н.А. Боханом, профессором Манухиной Е.Б., профессором Г.Ф.Дауни), подготовке текста диссертации.

Положения, выносимые на защиту 1. Нарушения обмена биогенных аминов, вызванные алкогольным делирием, модифицируются при сопутствующем гепатите С.

2. Изменения содержания молекулярных продуктов липопероксидации и карбонилирования белков в крови, характерные для вирусного гепатита С, модифицируются при алкогольном делирии.

3. Характер изменений обмена биогенных аминов и свободнорадикального окисления больных с алкогольным делирием с сопутствующим вирусным гепатитом С зависит от тяжести наркологической патологии.

Научная новизна Установлено, что сопутствующий ВГС влияет как на особенности обмена биогенных аминов, так и на характер свободнорадикального окисления в зависимости от тяжести алкогольного делирия. Установлено, что уровень экскреции биогенных аминов зависит от степени тяжести сопутствующего ВГС. У больных с типичным алкогольным делирием с сопутствующим ВГС снижается экскреция катехоламинов с мочой. У больных с тяжелым алкогольным делирием снижается уровень активности тромбоцитарной МАОБ. Установлено, что у больных с типичным алкогольным делирием с сопутствующим ВГС наблюдается снижение уровня карбонилированных белков относительно неинфицированных больных.

Обнаружено, что при типичном алкогольном делирии с сопутствующим ВГС повышается содержание церулоплазмина относительно неинфицированных больных. Напротив, у больных с тяжелым алкогольным делирием и сопутствующим ВГС наблюдалось увеличение содержания карбонилированных белков относительно пациентов контрольной группы и неинфицированных больных на фоне сниженной активности тромбоцитарной МАО-Б и сниженного уровня кортизола.

Установлено, что общими проявлениями окислительного стресса у больных с алкогольным делирием вне зависимости от наличия сопутствующего ВГС, является прирост содержания изопропанол - растворимых диеновых конъюгатов на фоне снижения содержания гептан-растворимых кетодиенов и сопряженных триенов.

алкогольным делирием усугубляет поражение печени, что выражается в увеличении значения показателя тимоловой пробы при одновременном повышении активности АЛТ.

динамического психологического стереотипа у больных, перенесших алкогольный делирий.

Теоретическая и практическая значимость работы свободнорадикального окисления и обмен биогенных аминов при алкогольном делирии.

Результаты исследования могут быть использованы для разработки алгоритмов диагностики, мониторинга, прогнозирования тяжести течения и медикаментозной коррекции алкогольного делирия с сопутствующим вирусным гепатитом С с учетом степени активности инфекции.

Внедрение результатов исследования в практику Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе государственный медицинский универсистет» Минздрава России и в практической деятельности ГБУЗ «Челябинская областная клиническая наркологическая больница».

Конкурсная поддержка исследования

Работа выполнена при поддержке Министерства образования и науки РФ в рамках базовой части государственного задания (код проекта -1696).

Публикации Соискатель имеет 13 опубликованных работ, в том числе по теме диссертации - 13 научных работ, из них 6 работ опубликовано в рецензируемых научных изданиях. Соискателем опубликовано 6 статей, 7 материалов конференций, общим объемом 2,1 печатных листа.

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 135 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, главы собственных исследований, обсуждения результатов, выводов.

Библиографический указатель включает 223 источника: 88 – на русском языке и 135 – иностранных. Работа содержит 16 таблиц, 9 рисунков.

Обмен биогенных аминов и состояние свободнорадикального окисления при алкогольном делирии и вирусном гепатите С 1.1 Нарушения обмена биогенных аминов в патогенезе алкогольного делирия Под алкогольным делирием (delirium tremens, АД) понимают иногда опасное для жизни состояние спутанности сознания с сопутствующими соматическими расстройствами, которое развивается после полной / частичной отмены алкоголя у лиц страдающих алкоголизмом II-III стадии [29; 84; 85; 138].

В патогенезе алкогольного делирия определнную роль играют локальные нарушения мозгового кровообращения и повышенная проницаемость сосудов для токсических агентов [46; 88]. В этих условиях сформированные алкоголизмом механизмы зависимости и толерантности, приводят к «искаженному» нейроэндокринному ответу на абстиненцию с разной степенью выраженности психотических нарушений, которые сопровождаются метаболическими и гемодинамическими сдвигами, митохондриальной дисфункцией и нарушениями водно-минерального обмена[29; 83; 100; 154].

Синдром отмены этанола может являться причиной смерти при неблагоприятном течении психоза и выступать в качестве самостоятельного фактора повреждения мозга [29]. Обобщая симптоматику, можно сказать, что алкогольный делирий характеризуется тремя основными синдромами: синдром органического поражения мозга, психотический синдром и синдром гиперреактивностью САС, парасимпатической, ГАМК-ергической и холинергической недостаточностью [66].

Нарушения координации нейромедиаторных систем реализуются в условиях сформированного алкоголизмом дефицита витаминов, в первую очередь витаминов группы В [127;207]. Так, например, дефицит тиамина приводит к развитию острой энцефалопатии по типу тяжелого делирия [143] и формирует недостаточность холинергической нейромедиации. Дефицит пиридоксина является фактором недостаточности гамма-аминомасляной кислоты в ЦНС и снижения активности дофа-декарбоксилазы [63;96;103;121].

аминокислот с разветвленной углеводородной цепью (лейцин, изолейцин, валин) и ароматических аминокислот (тирозин, фенилаланин, триптофан), что нарушает нормальный транспорт аминокислот через ГЭБ. Увеличение их концентраций в ткани мозга - прямое следствие повышения уровней этих аминокислот в плазме крови. Доказано, что селективное повышение уровня ароматических аминокислот в структурах головного мозга способствует синтезу так называемых "ложных" нейротрансмиттеров с последующим нарушением функций головного мозга [43; 77].

Во II стадии алкоголизма отмечается выраженная гиперпродукция КА и их ускоренный метаболизм, что коррелирует с наибольшей толерантностью к функционирования Са2+-АТФазы в результате нарушения транспорта ионов натрия, опосредованного, в свою очередь, гиперактивностью Na+,K+-АТФазы [29;46;144].

Алкогольный делирий характеризуется достоверным повышением в крови больных не только уровней норадреналина, адреналина, но и кортикотропинрилизинг фактора, АКТГ и кортизола. По некоторым данным в состоянии абстиненции кортизол плазмы на 164-175% превышает норму[65].

конъюгированных форм повышается, но не так значительно. Прирост экскреции норадреналина зачастую выражен сильнее, чем адреналина, однако уровень адреналина превышает таковые показатели при абстинентном синдроме[29;45]. Этим объясняют рост -адренорецепторной симпатикотонии при делирии, поскольку адреналин проявляет в 2-10 раз большее сродство к адренорецепторам, чем норадреналин [4]. При этом, уровень дофамина превышает средние нормальные значения до 300%. Редукции делириозной симптоматики у больного соответствует нормализация уровня катехоламинов, а тяжесть делирия коррелирует с уровнем дофамина крови [5; 6; 7; 65].

Возбуждение адренергической системы в первой и второй стадии алкоголизма постепенно сменяется е истощением в третьей [192].

Продолжительность алкогольного делирия в основном составляет от 2 до суток, но иногда затягивается до 20 дней и более. В таких случаях выход из психоза литический, а симптоматика редуцируется волнообразно и постепенно [41;48].

Дофаминергическая система головного мозга играет ключевую роль в патогенезе психических и двигательных расстройств, опосредует эйфоризирующие свойства этанола. Отмечено, что при гиперреактивности дофаминергической системы происходит характерное 4-5 кратное повышение плотности специфических рецепторов, что клинически зачастую проявляется галлюцинаторно-бредовыми психотическими расстройствами [72]. В норме метаболизм медиатора осуществляется преимущественно в глиальных клетках, путем экстраклеточного захвата дофамина и его метилирования катехол - О метилтрансферазой (КОМТ). Часть медиатора, путем обратного захвата в нервной терминали, попадает в нервное окончание и дезаминируется МАО-Б.

Высказаны предположения о том, что дофаминергическая передача реципрокно связана с деградацией медиатора моноаминоксидазой, то есть чем активнее МАО, тем ниже эффективность дофаминергической системы мозга [61].

В структурах мезокортиколимбических путей дофаминергической системы расположены рецепторы глюкокортикоидов (GR), которые служат кортикостероидами в ЦНС. Установлено, что длительное воздействие высокими концентрациями глюкокортикоидов приводит к десенситизации пресинаптических рецепторов дофамина, т.е. к снижению их аффиности [155].

Подобное наблюдается при развитии алкогольного делирия, поэтому алкогольного делирия не всегда эффективно. Неэффективность дофаминовых блокаторов может быть связана с влияниями других нейромедиаторов / модуляторов ЦНС (серотонина, эндорфинов и др.), а также с изменением биологического эффекта дофамина при его взаимодействиях с продуктами катаболизма и патологически измененными нейропептидами[174; 214;220].

Норадренергические нейроны находятся в стволе мозга, а многочисленные проекции распространяются практически на все отделы ЦНС. Норадреналин является тормозным нейромедиатором в коре ГМ и возбуждающим в гипоталамусе. Предполагают участие норадреналина в формировании и поддержании толерантности к воздействиям этанола через активацию системы вторичных посредников. Норадренергическая нейромедиаторная система играет так же важную роль в центральных механизмах регуляции потребления алкоголя, а снижение ее активности снижает интенсивность влечения к алкоголю [9; 43; 45; 84; 85].

Говоря о роли дофамина и норадреналина в компенсаторных механизмах регуляции деятельности ЦНС у лиц, страдающих алкоголизмом, нельзя не упомянуть медиаторную роль еще одного биогенного амина: серотонина. Как и норадреналин, серотонин подвергается дезаминированию МАО-А [123]. В ряде исследований отмечают снижение уровня серотонина крови у больных при алкогольном делирии в 1 - 2 раза [64]. С другой стороны, при тяжелых абстинентных состояниях, вызванных отменой этанола, обнаруживают динамику уровня серотонина, сходную с изменениями в САС [41].

Принято считать, что нарушения вызванные увеличением содержания норадреналина компенсируются параллельной активацией серотонинергической системы и наоборот. Кроме того, существуют представления об антагонистическом взаимоотношении дофаминергической и серотонинергической систем мозга [71; 91; 145]. Извращенный выброс серотонина может проявляться эйфорией и галлюцинациями, сравнимыми с клиникой интоксикации ЛСД. Экспериментально показана взаимосвязь между нарушениями обмена серотонина и наличием агрессивного и суицидального поведения [17; 31]. Повышенный уровень серотонина в крови у больных хроническим алкоголизмом может способствовать торможению развития стероид-резистентности, так как в тканях - мишенях усиливается серотонинзависимая экспрессия глюкокортикоидных рецепторов GR-[131; 223]. Если говорить о роли серотонинергической системы в механизмах влечения к алкоголю, то по имеющимся данным эта роль представляется пока неоднозначной. Ряд стимуляторов синтеза и выхода серотонина, блокаторы обратного захвата и многие агонисты подавляют влечение к этанолу. В то же время селективные антагонисты 5НТ3-рецепторов и ингибиторы синтеза серотонина (р-хлорфенилаланин) имеют такой же эффект[149; 161; 169; 217].

Полагают, что уровень серотонина (5-НТ) в плазме крови может предоставить достоверную информацию относительно уровня активного трансмиттера в синаптической щели [108]. Об этом свидетельствует ряд многочисленных экспериментальных фактов. Так, пулы серотонина и его основного метаболита 5-оксииндолуксусной кислоты (5-ОИУК) в плазме не связаны непосредственно с изменениями содержания серотонина в тромбоцитах. Об этом свидетельствует отсутствие корреляции между уровнем серотонина в плазме и содержанием этого вещества в цельной крови.

Различные воздействия, включая введение ингибиторов моноаминоксидазы (МАО-А) и ингибиторов синтеза серотонина, приводят к снижению концентрации серотонина и 5-ОИУК в плазме, но не меняют уровень 5-НТ в тромбоцитах[94;108]. Длительная терапия ингибиторами обратного захвата серотонина приводит к противоположному эффекту: снижается содержание медиатора в тромбоцитарных клетках, а плазменный пул остается неизменным[190].

обнаруживается увеличение содержания серотонина в тромбоцитах или цельной крови, является повышенная агрессивность и импульсивность [165;

181; 187]. Учитывая снижение уровня 5-ОИУК в ликворе при агрессивности, особенно импульсивной агрессии, некоторые исследователи [104; 165; 209] делают предположение о возможном увеличении уровня серотонина в тромбоцитах как о проявлении наследственного феномена усиления процесса обратного захвата моноаминов (или снижения их высвобождения) в пресинаптических терминалях ЦНС и в тромбоцитах, что приводит к недостаточности моноаминовых механизмов [79].

Главными ферментными системами инактивирования биогенных аминов являются – моноаминоксидаза (МАО-А, МАО-Б), катехол-О-метилтрансфераза (КОМТ), фенолсульфотрансфераза (ФСТ). Инактивация КА осуществляется так же конъюгацией с радикалами серной и глюкуроновой кислот и хиноидным окислением (церулоплазмин, ферритин, цитохромы) [57; 77].

свободнорадикальных процессах[36]. При алкоголизме I и II изоформы АДГ (норадреналина, серотонина), а так же в трансформации гидроксистероидов[9].

ограничивать активность КОМТ и увеличивать значимость реакций дезаминирования[29; 57]. В свою очередь, моноаминоксидазам отводят существенную роль в окислительном повреждении нервной ткани. А одним из маркеров, характеризующих активность моноаминоксидаз в ЦНС при алкоголизме, считается тромбоцитарная МАО-Б [136].

В нейронах моноаминооксидаза представлена, в основном, изоформой МАО-Б (субстраты - дофамин, бензиламин), а в клетках нейроглии – основная изоформа МАО–А (субстраты - норадреналин, серотонин). Более чем 90% моноаминоксидаз сосредоточено в отростках нейронов и в нейроглии[175; 176;

197]. Регуляция экспрессии и активности фермента напрямую осуществляется глюкокортикоидами [126]. Обнаруживают усиление экспрессии и увеличение активности МАО на введение дексаметазона in vitro [126; 166] и in vivo [199].

Но перекрестные помехи биологических эффектов изоформ рецепторов GR-, GR- и влияние других факторов транскрипции, могут модулировать глюкокортикоид - зависимую экспрессию генов [89; 109; 146]. Учитывая функционированием дофамин- и серотонинергической систем, а также их роль в регуляции активности моноаминоксидаз, гиперсекрецию кортизола часто связывают со степенью выраженности депрессивных расстройств[125].

Препараты, имеющие антиглюкокортикоидную направленность, используют для нейропротекции и коррекции депрессий[122; 215].

В настоящее время имеются данные о транзиторном приросте активности тромбоцитарной МАО-Б при развитии алкогольного абстенентного синдрома.

Этот факт можно рассматривать как адаптивную реакцию, защищающую организм от дофаминовой перегрузки [22]. Однако эти данные не однозначны.

В работах последних лет отмечают снижение активности МАО-Б у больных при алкогольном делирии, при условии сохранности дофаминовых рецепторов [22; 68]. В исследованиях Виноградова Д.Б. [22] отмечен прирост активности тромбоцитарной МАО-Б при тяжелом алкогольном делирии. В то же время исследования Паначева И.В. [68] уточняют, что активность тромбоцитарной МАО-Б увеличивается у больных с сенсорным и моторным типами полинейропатий, которые сопутствуют тяжелому алкогольному делирию. И снижается у больных со смешанным типом сопутствующих полинейропатий.

Важным регулятором активности моноаминоксидаз является трибулин.

Это название объединяет фракцию эндогенных ингибиторов МАО[58].

Существенное увеличение трибулина обнаруживается в тканях и биологических жидкостях при различных видах стресса. Количественно преобладающий компонент этой фракции изатин (2,3-диоксоиндол), избирательно ингибирующий МАО - Б [59;167]. Компоненты "трибулина" рассматриваются как медиаторы тревожности[25].

У больных с алкогольным делирием обнаруживаются диффузные нарушения мозгового метаболизма глюкозы с образованием лактата. При выраженных нарушениях соотношения лактат / пируват могут наблюдаться панические атаки [29]. В то же время в эксперименте убедительно продемонстрирована связь развития панических расстройств с инфузией лактата натрия и зависимость развившегося психоза от уровня трибулина, даже в условиях предварительного ингибирования моноаминоксидаз[158].

Особую роль в развитии психотического синдрома при алкогольном делирии отводят продуктам конденсации ацетальдегида с биогенными аминами – дофамином и серотонином. Ацетальдегид образует комплексы с пептидными гормонами, биогенными аминами и регуляторными аминокислотами. Этому способствует дисбаланс НАД/НАДН[9]. Образованные тетрагидроизохинолины и тетрагидро--карболины конкурируют с нейромедиаторами в нейрохимических процессах, усугубляют течение алкогольного психоза, способны повышать судорожную готовность. Конкурируя с ионами кальция за анионные участки фосфолипидов, ТГИХ активируют фосфолипазы [38; 69].

Имея структурное сходство с морфином, ТГИХ способны функционировать, как эндогенные лиганды опиоидных рецепторов. Продукт конденсации ацетальдегида с дофамином – сальсолинол провоцирует абстиненцию и является сильным галлюциногеном. Известно о его свойствах ингибировать активность тирозингидроксилазы и дофаминдекарбоксилазы[38]. Конденсация ацетальдегида с серотонином приводит к образованию гармалина (метилтетрагидро--карболина), являющегося также сильным галлюциногеном и ингибитором активности МАО. Кроме того, тетра--карболины угнетают обратный захват серотонина в мозге[38]. Микроконцентрации ТГИХ постоянно присутствуют в головном мозге, однако постоянное введение этанола многократно повышает их уровень [63]. Таким образом, увеличение концентрации ТГИХ, вызванное приемом алкоголя, вносит вклад в развитие психотической симптоматики алкогольного делирия.

алкогольном делирии Окислительно - востановительные реакции в организме сопровождаются генерацией большого количества радикальных соединений, обладающих реакционной способностью и вовлекающихся в процессы жизнедеятельности.

Радикальные продукты выполняют определенную функциональную нагрузку, выступая в качестве прямых мессенджеров они: стимулируют образование вторичных посредников без гормон-рецепторного взаимодействия рецептора;

индуцируют или подавляют экспрессию генов; осуществляют регуляцию роста и дифференцировки клеток; клеточной адгезии; регулируют апоптоз[36; 67].

Физиологические концентрации АФК в головном мозге необходимы для запуска репаративных механизмов восстановления ДНК в долгоживущих нервных клетках. Однако в определенных условиях радикальные продукты могут проявлять сильное токсическое действие, приводя к повреждению огромного числа биологически важных молекул – белков, липидов, нуклеиновых кислот. Модифицированные перекисным окислением липиды активируют фосфолипазы и протеазы, усиливая повреждающее действие на мембраны клеток. Избыток радикальных соединений приводит к накоплению нерепарируемых повреждений в нуклеиновых кислотах, деградации ДНК и гибели нейрона[36; 72].

Для алкогольных психозов характерным является сдвиг обменных процессов в сторону катаболизма с усилением протеолиза и накоплением в крови недоокисленных продуктов, аммиака, токсичных пептидов средней молекулярной массы, олигопептидов (8-12 аминокислотных остатков) и микронутриенов, связан с их недостаточным поступлением с пищей и усвоением, а также усиленным расходом на поддержание эффективного гормонального и медиаторного звена САС[7]. Особенно важным является тот факт, что катоболизм около 60% биогенных аминов осуществляется моноаминоксидазой [175]. Одним из копродуктов дезаминирования является перекись водорода – это нейтральная молекула, легко проникающая через близлежащие мембраны клеток, которая в присутствии металлов переменной валентности превращается в высокоактивный ОН•-радикал. Следовательно, повреждение тканей мозга у пациентов с алкогольным делирием возможно при определенных условиях, а именно: нарушение уровня синтеза биогенных аминов, скорости выброса из пресинаптических окончаний и обратного захвата в терминалях, возможность спонтанной утечки из везикул в цитоплазму; высокая активность МАО; дефицит антиоксидантов (глутатион, токоферол); присутствием металлов переменной валентности [36; 45].

Биохимическими и молекулярными исследованиями, проведенными за последние годы, доказано, что у больных алкоголизмом этанол индуцирует активность фермента глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы. Фермент образует комплекс с фактором транскрипции МАО (TIEG2) и опосредованно усиливает экспрессию моноаминоксидаз. Учитывая, что активность глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы у больных алкоголизмом весьма высока, этот механизм рассматривают, как один из основных путей регуляции активности МАО и как один из факторов нарушения функции нервных клеток при сформированной алкогольной зависимости [92; 95; 115; 178; 182;193].

Нарушения регуляции метаболизма дофамина и его способность к аутоокислению, так же могут быть причиной гибели нейронов и некротических изменений в синапсах. Самоокисляясь, катехоламины генерируют большое количество радикальных продуктов [11]. При физиологическом рН окисление катехоламинов происходит медленно. Однако, в условиях митохондриальной недостаточности, истощения запасов восстановленного глутатиона, при высоком уровне общего железа, пониженном содержания ферритина - эти процессы значительно интенсифицируются[172]. Высокореактивными продуктами реакции являются семихиноны, хиноны, адренохромы, адренолютины и меланин. Частичное депротонирование аминогруппы боковой цепи катехоламинов приводит к необратимой 1,6-внутримолекулярной циклизации, с образованием адренолютина, дальнейшее окисление образует адренохром. В структуру образующихся соединений могут вовлекаться ионы металлов, а также сера. Включение атома серы в кольцо хинона (тиоэфирные катехины) усиливает окислительно-востановительный потенциал и длительность окислительно-востановительного цикла с выраженной иммунотоксичное действие по различным механизмам, зависящим от структуры взаимодействующих соединений [101; 168; 200; 201].

Окисленные катехоламины легко взаимодействуют с нуклеофильными группами аминокислотных остатков, особенно SH- и NH2- с образованием хинопротеинов. Вследствие такой модификации ингибируется активность части ферментов, изменяется внутриклеточный метаболизм и снижается жизнеспособность клеток. Кроме того, радикальные производные катехоламинов истощают запасы аскорбиновой кислоты, a адреналин способен напрямую инактивировать глутатион, образуя комплекс, 5-(glutathion-S-yl)adrenaline. Отмечают высокую токсичность этого аддукта [116; 120; 202].

Гиперактивность САС может быть причастна к окислительной модификации белков, однако катехоламины практически не участвуют в процессах перекисного окисления липидов. Более того, отмечают выраженное свойство адренохрома ингибировать ПОЛ. Хоть и в меньшей степени, таким же эффектом обладают семихиноны [99]. Адренохром и семихиноны, ограничено полимеризации [200]. Роль катехоламинов в продукции АФК реализуется и по механизмам интенсификации глюкозомонофосфатного шунта[72].

В основе современных концепций патогенеза различных заболеваний признают нарушение структуры клеточных мембран, универсальным фактором повреждения которых является перекисное окисление липидов (ПОЛ) [47; 98].

Процессы ПОЛ при алкогольном делирии зависят от особенностей обмена липидов. В настоящее время усиленно изучаются особенности окислительного стресса при алкогольном делирии. Ранее было показано, что при алкогольном делирии усиление активности тромбоцитарной МАО-Б, мембрано-связанного свободнорадикального окисления сопряжены между собой [22].

формированию мембранной толерантности к этанолу. Перестройка в обмене липидов на уровне мембран является «последней линей защиты», вслед за которой начинаются патологические реакции [47]. Адаптивные изменения ориентированы на стабилизацию бислоя и стабилизацию обмена ионов, они характеризуются ограничением встраивания в фосфолипиды арахидоновой кислоты, усилением инкорпорации триацилглицеридов и холестерина.

Холестерин относится к группе структурных антиоксидантов, он затрудняет доступ друг к другу соединений вовлеченных в ПОЛ, что заметно снижает потенциал окислительной реакции[172]. Фосфатидилхолин так же является компонентом антиоксидантной системы [56]. Мембраны клеток нервной ткани фосфатидилсерином (ФС) [86;159]. Роль ФС и ФИ заключается в стабилизации нормализации обмена Са2+ и в формировании устойчивости к воздействиям фосфолипаз [27; 47; 63; 86].

Нарушение липидного обмена может быть обусловлено нарушением глюкокортикоидной регуляции [60]. Так, при хроническом стрессе в кровь усиленно экскретируются глюкокортикоиды и при этом повышается содержание триглицеридов в сыворотке крови. По мнению авторов, это наиболее вероятный механизм развития гипертриглицеридемии [47].

Образующиеся в ходе цепных реакций ПОЛ гидроперекиси и малоновый диальдегид являются сильными мутагенами и обладают выраженной цитотоксичностью. При ацидозе усиливается взаимодействие малонового межмолекулярных сшивок [72].

Модифицированные перекисным окислением ЛПНП, не узнаются клеточными рецепторами и потенцируют клеточную адгезию, утилизируются макрофагами [47; 98]. В.Н.Бочков с соавт. [16] показали в своих исследованиях, что ЛПНП способны активировать вход ионов кальция в клетки через рецептор управляемые каналы. Некоторые ученые считают, что ЛПВП обладают антиоксидантным потенциалом [73].

Считают, что при окислительном стрессе атаке АФК подвергаются не липиды, а в первую очередь белки плазматических мембран [36; 37].

Подтверждением этого может служить феномен, названный «молекулярной памятью липидов» [14]. Суть его заключается в том, что многие краткосрочные события, протекающие в белковой молекуле клеточной мембраны, влияют на долговременные параметры функционирования мембранного бислоя. При воздействии соответствующего агента на мембранный белок-рецептор конформация последнего изменяется, и в дальнейшем индуцирует изменение белок-липидных контактов, состояние липидов, окружающих белок [33]. Эти изменения состояния липидов сохраняются и после отщепления лиганда от рецептора, т.е. служат способом закрепления рецептора в возбужденной конформации. В ОМБ особая роль принадлежит гидроксил-радикалу, NOрадикалу, пероксинитриту, гипохлориданион-радикалу. В результате окислительной модификации белков образуются: ортотирозин, 6нитротриптофан, 3-нитротирозин, 2-оксогистидин, в белковой молекуле возникают карбонильные, сульфоновые группы, битирозиновые сшивки, а также повышается степень фрагментации молекул [33; 37]. Некоторые авторы считают, что дитирозин является специфическим маркером окислительного стресса головного мозга [35;36]. Окислительная модификация белковых молекул приводит к нарушению метаболических систем нейрона. Кроме того, АФК модифицируют антиапоптозные белки (Bcl-2 и другие), снижая их функции, а избыток NO-радикала усиливает синтез проапоптических белков (fas и apo-1), приводя к апоптической гибели нейрона. Отрицательный эффект окислительно-модифицированных белков в клетке связан с тем, что окисленные белки способны выступать в качестве источника свободных аскорбиновая кислота и глутатион [36].

значительно превышают таковые показатели у людей с эндогенными психическими заболеваниями, также находящихся в состоянии психоза [55; 76].

1.3 Гепатотоксичность этанола как индуктора развития алкогольных психозов Алкогольный делирий развивается на фоне хронических гепатопатий [49].

Практически в 100% случаях у больных алкоголизмом наблюдается патология печени с развитием жировой липодистрофии, гепатита и цирроза [154].

иммунотропным действием этанола с активацией свободнорадикальных процессов [19; 154]. Токсичность этанола выражена относительно всех клеток организма и реализуется через прямое взаимодействие спирта с рядом биологических молекул, и опосредовано, через каскад метаболических нарушений в ходе окисления этанола и эффектами ацетальдегида [77]. В печени этанол индуцирует экспрессию изоформы цитохрома Р450 - CYP2E. Считают, что активность цитохромов у больных с хроническим алкоголизмом обеспечивает второй по значимости, после АДГ путь элиминации этанола [42;

Основными продуктами реакции являются ацетальдегид и 1гидроксиэтил радикал. Монооксигенирование сопровождается массовым выходом супероксиданиона, пероксида и гидроксильного радикала.

Возрастающая до 20 раз активность CYP2E в гепатоцитах, приводит к продукции АФК, превышающей антиоксидантные возможности органа и ацетальдегиддегидрогеназой (АлДГ) до ацетата. Основная часть уксусной кислоты завершает трансформацию в печени (25%) и тканях организма (70%).

Образовавшийся ацетил-КоА в конечном счете может преобразовываться до СО2 или использоваться на синтез жирных кислот, кетоновых тел, холестерина и стероидов[105].

Алкоголизм рассматривают, как состояние гиперактивности митохондрий клеток всех органов и тканей [102; 203]. Митохондриальные АФК образуются в окислительном метаболизме как результат одноэлектронного восстановления кислорода [188; 189]. Прием этанола способствует значительному накоплению в тканях жирных кислот (пальмитиновая, олеиновая, линоленовая), а нарушение их утилизации создает условия для усиленной этерификации спиртом. Образующиеся эфиры жирных кислот плохо удерживаются в белковых комплексах и массово поступают в митохондрии. Реализация токсического эффекта связана с ингибированием эфирами жирных кислот Na+K+-АТФазы, что угнетает дыхание и активирует процессы ПОЛ. При ингибировании ацетальдегидом -окисления жирных кислот, в пероксисомах компенсаторно активируется ацил-КоА-оксидаза. Однако пероксимальное окисление генерирует значительное количество супероксидных ионов, так же запускающих цепную реакцию ПОЛ в мембранах гепатоцитов. Дефицит антиоксидантов (прежде всего витамина Е, кофакторов глутатионпероксидазы свободнорадикальные процессы [102; 138].

Ацетальдегид, как и этанол, угнетает дыхание и все окислительновостановительные процессы. Накопление недоокисленных продуктов восстановленных форм пиридиннуклеотидов (НАДН, НАДФН), вызванное дегидрогеназными реакциями, дополнительно снижает использование энергетических возможностей углеводов, ТАГ, жирных кислот и способствует развитию гиперпротеинемии. Усиление протеолиза приводит к интоксикации аммиаком, последний, отвлекая 2-оксоглутарат из цикла Кребса, способствует дефициту сукцината в митохондриях. Кроме того, измененное соотношение НАД \ НАДН в тканях меняет соотношения лактат \ пируват и увеличивает уровень глицерол-3-фосфата с угнетением глюконеогенеза из ряда субстратов.

Запасы гликогена истощаются, развивается гипогликемия и усиливается депонирование ТАГ в печени [156; 157].

Нарушение баланса АТФ / АМФ запускает протеинкиназную систему, что является дополнительным механизмом мембраной деструкции[72]. С развитием окислительного стресса связано негативное влияние этанола на фосфолипидные структуры мембран клеток нервной ткани, печени и развивается дисаминоацидемия и диспротеинемия, связанные со снижением захвата циркулирующих в крови аминокислот печенью, с усиление протеолиза во внепеченочных тканях и нарушением процессов синтеза белка, в крови накапливаются токсичные средние молекулы, олигопептиды и белки в норме не присутствующие в крови.

Предрасположенность к алкогольному поражению печени зависит от индивидуальных особенностей протекания реакций ПОЛ и состояния системы антиоксидантной защиты в печени до воздействия этанолом, что подтверждается рядом экспериментальных фактов [3].

1.4 Окислительный стресс у больных с вирусным гепатитом С одноцепочечной 9,6 т.п.н. РНК-генома, которая кодирует большую молекулу белка-предшественника вирусных белков приблизительно в аминокислотных остатков. Этот полипротеин расщепляется по меньшей мере на 10 вирусных белков в следующем порядке: коровый белок, E1, E2, p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A и NS5B [147; 148]. Начиная с момента инфицирования вирионом HCV, у пациентов развивается дисбаланс свободнорадикальных процессов.

Cуществуют несколько источников продукции свободных радикалов в условиях вирусного гепатита С [117; 179]:

- перегрузка печени Fe+2, сопряженнае с усилением ПОЛ - активация вирусным белком NS3 НАДФН-оксидазы в гепатоцитах -увеличением продукции митохондриальных активных форм кислорода вирусным белком NS5A -снижение уровня восстановленного глутатиона -снижение экспрессии антиоксидантных ферментов - увеличение цитокин-зависимой продукции активных форм кислорода -активация НАДФН-оксидазы в лейкоцитарных клетках и клетках Купфера -увеличение экспрессии циклооксигеназы - увеличение экспрессии CYP2E NS3 протеин может активировать экспрессию протеина NOX2 белка в макрофагах, являющегося составной частью НАДФН-оксиазы. В результате этого генерируется окислительный стресс, влекущий за собой развитие апоптоза в макрофагах и в натуральных киллерах, и дисфункцию Тлимфоцитов [111; 112;113].

Важно отметить, что печень является поставщиком глутатиона в другие органы и ткани. При HCV-индуцированном повреждении гепатоцитов страдает экспорт глутатиона печенью, что создает предпосылки для системного окислительного стресса. Недавно установлено, что вирусные коровые белки способны снижать уровень внеклеточного и внутриклеточного глутатиона. В свою очередь это сопровождается повышением уровня окисленного тиоредоксина и увеличением содержания молекулярных продуктов ПОЛ[153;

180; 222].

трансмембранного потенциала митохондрий через нарушение кальциевой сигнализации [111; 113]. В настоящее время установлено, что вирусный коровый белок обладает способностью связываться с митохондриальной мембраной.

Среди белков HCV, коровый белок, а также E1, NS3, и NS5A, могут изменить уровень внутриклеточного кальция и вызывать окислительный стресс, тем самым вызывая повреждение ДНК, и конститутивно активировать транскрипционные факторы STAT3 и NF-kB, которые связаны с патогенезом ВГС [170]. В частности, окислительный стресс вызывает в транскрипционном факторе STAT3 фосфорилирование тирозина и ядерную транслокацию, которая коррелирует с активацией STAT3, что сопровождается возрастанием его ДНКсвязывающей активности [112]. Важно отметить, что активация STAT непосредственно, связана с репликацией HCV. В частности, STAT3-Tyr705доминантный негативный мутант, ингибирует репликацию РНК HCV. Этот факт дает основание предполагать, что STAT3 позитивно регулирует репликацию HCV.

В крови больных показатели свободнорадикального окисления наиболее отчетливо повышены на стадии острой инфекции. Позже показатели липопероксидации могут не отличаться от контроля, однако это не говорит о снижении атаки свободными радикалами, а связано с ингибированием микросомальных десатураз, участвующих в насыщении жирных кислот при оптимальном уровне витамина Е [111]. О продолжении радикальной атаки свидетельствует усиленное карбонилирование белков. В латентный период базальный уровень показателей остается стабильно высоким, это обусловлено сочетанием двух патологических изменений: истощением антиоксидантов и гиперпродукцией АФК. На стадии развития вирусного гепатита наблюдается дополнительное усиление окислительного статуса, в разы повышается уровень гидроперекисей крови и малонового диальдегида[111; 113].

вирусного гепатита связано со значительным истощением запасов липофильных антиоксидантов (витамин Е, убихинол, убихинон, витамин А, каротин), гидрофильных (аскорбат, мочевая кислота), а так же запасов глутатиона, селена, холестерина. На этой стадии резко угнетается активность глутатионпероксидазы и компенсаторно активируется СОД, что приводит к нарушению утилизации перекиси водорода [140; 208]. Обнаружено, что снижение содержания витамина Е в крови пациентов положительно коррелирует с прогрессированием симптоматики вирусного гепатита [133].

Дефицит глутатиона – так же ранний маркер ВГС, его содержание зависит от степени активности продукции цитокинов. Прием антиоксидантов и сбалансированная диета значительно улучшают показатели проводимой терапии [106; 128; 150].

Как уже упоминалась, что митохондриальная дисфункция при ВГС является общим механизмом развития ОС и способствует развитию метаболических нарушений, аналогичных характерным нарушениям при синдроме Иценко-Кушинга [183; 184; 185; 198; 211].

1.5 Окислительный стресс у больных алкоголизмом с сопутствующим вирусным гепатитом С способствующим повышению изменчивости HCV, что в значительной степени может снизить эффективность антивирусной терапии. Этанол и эндогенные активные формы кислорода могут увеличить частоту мутации вируса гепатита С в клетках гепатомы[135]. В клинических исследованиях появляется все больше доказательств того, что на фоне введения антиоксидантов или дефицита железа повышается чувствительность к антивирусной терапии на основе IFN. Напротив, этанол подавляет противовирусную активность интерферона-, усиливая сигнальные пути, связанные с продукцией транскрипционного фактора Stat, что способствует вирусной репликации [135].

Однако, одного этого факта недостаточно для объяснения этанол-зависимого исследования in vitro, в которых показано, что этанол повышает уровень вирусной РНК в гепатомных клетках человека линии Huh7. Уникальная особенность этих линий состоит в том, что в них поддерживается репликация РНК HCV без продукции вируса [111]. Следовательно, этанол усиливает репликацию HCV как в присутствии, так и в отсутствие полного цикла вирусной репликации. Однако, механизм этанольной регуляции репликации РНК HCV во многом остается не изученным.

В отношении активных форм кислорода и продуктов перекисного окисления липидов, появление которых так или иначе связаны с метаболизмом этанола, имеются сведения, характеризующие их способность как усиливать, так и подавлять репликацию HCV в клетках[195]. Как уже упоминалось, окислительный метаболизм этанола в печнени является многоэтапным процессом[77].

Алкогольдегидрогеназа, основной фермент, метаболизирующий этанол, находится в цитозоле, и производит ацетальдегид и NADH. Цитохром Р который индуцируется при длительном воздействии этанола, (CYP2E1), расположен в эндоплазматической сети и генерирует NADP + и АФК в дополнение к ацетальдегиду [163]. Каталаза, которая локализована в пероксисомах, не вносит значительный вклад в метаболизм этанола в альдегиддегидрогеназы. Некоторые метаболиты этанола модулируют субгеномную репликацию РНК [221]. В частности, предполагается, что этанол и ацетальдегид также непосредственно повышают репликацию HCV. Кроме того, обнаружено, что изопропиловый спирт, ацетон, этилацетат также увеличивают репликацию HCV, как и увеличение соотношения NADH / NAD +.

При алкогольном делирии, как и при алкогольной интоксикации, нарушается кислотно-основное равновесие с развитием ацидоза. Кроме того, изменение соотношения НАД\НАДН, а также дефицит АТФ при ВГС ассоциируют с дефицитом глутатиона и ОС [153]. В свою очередь, повышение кислотности среды снижает возможность связывания HCV со специфичными хемокинами иммунных клеток (CD4, CXCR4, CCR5), однако индукция экспрессии этих рецепторов катехоламинами может способствовать дальнейшему распространению HCV при купировании АД [112; 113].

К сожалению, практически отсутствуют исследования, посвященные особенностям алкогольного делирия у лиц с ВГС. Между тем, алкоголизм, лежащий в основе патогенеза целого ряда соматических заболеваний, увеличивает смертность больных ВГС до 50%[110].

Таким образом, как ВГС, так и АД сопровождаются «извращенной»

стресс-реакцией, истощением системы антиоксидантной защиты и усилением атаки плазматических мембран и биологически важных молекул свободными радикалами.

2.1 Дизайн исследования, характеристика обследованных пациентов Проведено проспективное, рандомизированое, двойное слепое обследование 147 пациентов, госпитализированых в отделение неотложной наркологической помощи ГБУЗ «Челябинская областная клиническая наркологическая больница» и 20 пациентов III инфекционного отделения МУЗ ГКБ№8 г.Челябинска.

Результаты биохимических исследований были изучены и сопоставлены в четырех группах:

госпитализированных по поводу алкогольного делирия. У 80 из них психоз имел типичное течение (АДтип), у 35 – тяжелое (АДтяж) (затяжной, ундулирующий, с глубоким помрачением сознания, с утратой функций витального контроля[41]).

2. «Алкогольный делирий с сопутствующим вирусным гепатитом С (АД+ВГС)» - 32 больных, госпитализированных по поводу алкогольного делирия с подтвержденным диагнозом вирусного гепатита С. У 22 из них психоз имел типичное течение (АДтип+ВГС), у 10 – тяжелое (АДтяж+ВГС). Минимальная степень активности ВГС установлена у пациентов данной группы(АД+ВГСм), низкая степень активности ВГС – у 9 пациентов (АД+ВГСн), умеренная – у 13(АД+ВГСу).

стационара, госпитализированных по поводу вирусного гепатита С, не страдающих наркологическими заболеваниями. Минимальная степень активности ВГС установлена у 6 пациентов данной группы(ВГСм), низкая степень активности ВГС – у 8 пациентов (ВГСн), умеренная – у 6(ВГСу).

наркологических, психоневрологических, соматических и инфекционных заболеваний.

Все обследованные – лица мужского пола, трудоспособного возраста (23-55 лет). Включение пациентов в исследование и взятие биологического материала производилось при поступлении больных в клинику до начала терапии.

Диагноз и степень активности ВГС устанавливалась на основании заключения врача-инфекциониста (заведующая III инфекционным отделением МУЗ ГКБ№ г.Челябинска, врач - инфекционист высшей категории Е.Ю. Лебедева).

Из исследования исключались лица, страдающие психической патологией (эндогенные психические заболевания, деменция, олигофрения), туберкулезом, сахарным диабетом, ВИЧ-инфекцией, тяжелой соматической патологией в стадии декомпенсации, онкологическими заболеваниями, а также лица, имеющие в анамнезе черепно-мозговые травмы. Отказ от динамического наблюдения и обследования также являлся критерием исключения пациента из исследования. Исследование одобрено этическим комитетом ГБОУ ВПО «ЮУГМУ» Минздрава как соответствующее этическим нормам.

обследование [30; 81] для более детальной оценки характера возможных нарушений психической деятельности (данный раздел работы проведен совместно с преподавателем кафедры клинической психологии ФГБОУ ВПО Южно-Уральский государственный университет (НИУ) А.В. Новохацки).

Обследование производилось после полного купирования алкогольного делирия.

Нейропсихологическое обследование включало:

1. Пробы на исследование функции праксиса.

Цель проведения – выявление нарушений произвольных движений и действий у больных алкоголизмом (целенаправленность, возможность следовать плану).

2. Пробы на исследование функции гнозиса.

Цель проведения – определить расстройства узнавания объектов, ритмов, схемы тела (зрительный, слуховой, соматосенсорный).

3. Пробы на исследование функции речи.

Цель проведения – выявить расстройства сенсорной и моторной стороны речи.

4. Пробы на исследование функции внимания.

Цель проведения – определить способность концентрировать и удерживать внимание.

5. Пробы на исследование функции памяти.

Цель проведения – определить уровень познавательной активности, доступный объем долговременной, кратковременной и непосредственной памяти.

6. Пробы на исследование мыслительной деятельности.

Цель проведения – выявление расстройств мыслительной деятельности.

Взятие крови для исследования производилось пункцией кубитальной вены. Порционную и суточную мочу собирали с соблюдением условий преаналитического этапа исследования. Материал хранили при температуре -20оС – -70оС до осуществления анализа. Содержание катехоламинов определяли непосредственно после взятия биологического материала.

Определение содержания адреналина, норадреналина, дофамина и ДОФА Исследовалось содержание катехоламинов в крови и порции мочи больных 1-го стабилизированной суточной моче проводился анализ содержания катехоламинов и ДОФА. Анализ осуществляли методом колоночной хроматографии с адсорбцией на окиси алюминия и детектированием флуоресценции продуктов окисления при рН 4,2; 6,2 на флуориметре «ФЛЮОРАТ-02-АБЛФ-Т» с использованием наборов светофильтров I – 410нм; II – 360-520 нм; III – 360-410 нм.

Стандартные растворы (1000 мкг/мл) адреналина, норадреналина, дофамина, ДОФА готовили растворением 10 мг сухого вещества в 5 каплях концентрированной соляной кислоты с последующим доведением объема до 10 мл бидистилированной водой. Перед использованием поводили разведение основного стандарта до концентраций 50,0 нг\мл; 25,0 нг\мл; 10,0 нг\мл; 1, нг\мл 0,25 н уксусной кислотой.

Гидролиз конъюгированных форм КА осуществлен путем кипячения подкисленной до рН 1 мочи. К 17,5 ml фильтрата мочи добавляли 250 мг ЭДТА и доводили рН до 8,2-8,5 подщелачиванием 1,0Н раствором аммиака.

Экстракцию катехоламинов из крови осуществляли ТХУ 10% при 40С в течение 30 минут, не допуская образования преципитатов. Адсорбцию осуществляли на 1,0 г окиси алюминия в хроматографической колонке, предварительно промытой 10,0 мл бидистилированной воды со скорость 1,0-2,0 ml\мин. Окись алюминия предварительно очищали (по Брокману). После этапа адсорбции, Al2O3 двукратно промывали 5,0 мл бидистилированной воды с добавлением капли 0,5 н аммиака. Элюцию проводили в два этапа. В качестве элюентов использовали 0,25 Н уксусную кислоту (7,0 мл) и 1,0 н соляную кислоту (3,5мл). Солянокислый элюат доводили до объема 7,0 мл бидистилированной водой.

Дифференцирование катехоламинов осуществляли при разных значениях рН среды и по разнице спектральных характеристик. Для определения флюоресценции окисленного продукта адреналина уксуснокислый элюат доводили до рН 4,2 и отбирали эквивалент 1,0 мл материала в контрольную и опытную пробы в пробирки с 1,0 мл фосфатного буфера (рН 4,2). Для определения флюоресценции окисленных продуктов норадреналина, дофамина и части ДОФА солянокислый и уксуснокислый элюаты доводили до рН 6-7,2.

Эквиваленты 1,0 мл материала переносили в пробирки с фосфатным буфером рН 6,2 (опыт и контроль) для исследования содержания норадреналина и ДОФА. Для определения содержания дофамина пробирки для опыта и контроля предварительно содержали 0,5 мл фосфатного буфера с рН 6,2 и 1,0 мл бидистилированной воды.

Окисление опытных проб проводили 0,1 мл феррицианида калия (2,5г\л) в течение 4 минут, для окисления дофамина использовали 0,2 мл водного раствора йода (0,02 н) с экспозицией в 7 минут. По истечении времени окисления и в опытные и в контрольные пробы добавляли 1,0 мл щелочного аскорбината натрия (2 г\л), в опытные пробы дофамина вносили 0,5 мл щелочного сульфита. Через 3 минуты в контрольные пробы добавляли 0,1 ml феррицианида калия, в контрольные пробы дофамина - 0,45ml 5 н NaOH, и доводили объем водой до 4,0 мл. В опытные и контрольные пробы дофамина через 7 минут после добавления щелочного сульфита, вносили 0,8 ml 5н уксусной кислоты. Стабильность флуоресценции продуктов окисления адреналина, норадреналина и ДОФА поддерживалась на холодной бане.

Максимальной флуоресценции диоксииндола дофамина добивались регистрировали с использованием I набора светофильтров. По разнице показателей окисления опытных и контрольных проб при рН 4,2 определяли флуоресценцию адренолютина. Совместную флуоресценцию окисленных норадреналина и адреналина (рН 6,0-7,2) с использованием I набора использовали разницу показателей свечения реакций окисления при рН 6,0-7, и рН 4,2. Совместную флуоресценцию адреналина, норадреналина и ДОФА определяли, используя II набор светофильтров. По концентрации адреналина и норадреналина в 1мл элюата и флуоресценции стандартных растворов этих моноаминов с использованием II набора светофильтров, рассчитывали светофильтров, оценивали уровень свечения окисленного продукта ДОФА в использованием III набора светофильтров, с учетом концентрации ДОФА и его флюоресценции при окислении раствором йода [40; 57].

Определение концентрации серотонина крови [40] флюориметрическим методом по реакции с о-фталевым диальдегидом. К 1,0 мл крови добавляли 1,0 мл ТХУ 20% и центрифугировали. Надосадок переносили в 2,5мл н-бутанола, встряхивали 5 минут и центрифугировали 5 минут ( об\мин). Верхнюю фазу переносили в пробирку с 3,0 мл бидистилированной воды, 0,1 мл цистеина (1 г\л 0,1Н HCl) и 5,0 мл гептана. Повторяли этапы встряхивания и центрифугирования. Водную (нижнюю) фазу переносили в концентрированной HCL) и помещали в баню (100оС) на 15 минут.

Флюоресценцию оценивали при длинах волн 360 и 480 нм.

Контроль: 3,0 мл воды, 0,1 мл цистеина и 1,8 мл о-фталевого диальдегида прогревали на бане и охлаждали.

Стандартная проба: 3,0 мл воды, 0,1 мл цистеина, 0,1 мл рабочего стандарта и 1,8 мл о-фталевого диальдегида прогревали на бане и охлаждали.

Стандартные растворы готовили на бидистилированной воде. Рабочий раствор содержал 0,6 мкг\мл серотонин-креатинин-сульфата или 0,26 мкг\мл серотонина-основания [42].

Определение активности моноаминооксидазы-Б [24; 26] В плазме крови, обогащенной тромбоцитами, определяли активность моноаминоксидазы (МАО, аминкислородоксидоредуктазы (дезаминирующей, флавинсодержащей), К.Ф. 1.4.3.4.). В качестве субстрата МАО использовали бензиламина гидрохлорид, о дезаминировании которого судили по накоплению в среде бензальдегида. Для регистрации продукта реакции использовали принцип образования семикарбазона с последующей детекцией по поглощению при длине волны 278 нм [24].

Метод определения содержания кортизола в плазме крови [10] К 1,5 мл хлористого метилена добавляли 0,1 мл плазмы и встряхивали на шейкере 3 минуты, после чего содержимое пробирки замораживали при – 30оС в течение 40 минут. К экстракту добавляли 4,0 мл флуоресцентного реактива (серная кислота (концентрированная, ОСЧ) и абсолютный этанол 7 : 3). После перемешивания в течение 3 минут отбрасывали верхнюю фазу и оставляли на 90 минут. Интенсивность флюоресценции оценивали при 475 (возбуждение) и 530 – 550 нм (эмиссия) [10].

Определение активности компонентов трибулина в моче [26] В пробирку вносили 0,2 мл свежеразмороженной суспензии митохондрий печени крыс, добавляли 0,02 мл мочи и доводили объем в пробирке до 2,5 мл 0,067 М Na-фосфатным буфером (рН 7,4). После тщательного перемешивания инкубировали с экспозицией в 20 минут при внесением субстрата и инкубировали 60 минут при постоянном помешивании.

В холостую пробу субстрат вносили после инкубации. В качестве контроля определяли активность митохондриального препарата без добавления мочи.

[26].

Определение продуктов липопероксидации [23; 26] Содержание продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивали спектрофотометрически в липидном экстракте исследуемого биоматериала. 0, мл биологического образца суспендировали в 0,1% растворе ЭДТА на 0,9% NaCl, экстрагировали пятью мл смеси гептан-изопропанол (1:1, объм:объм) при встряхивании в течение 15-ти минут. Липидный экстракт отделяли центрифугированием, разбавляли пятью мл смеси гептан-изопропанол (3:7, объм:объм) и разделяли на фазы добавлением 2 мл водного раствора HCl (pH = 2). Через 30 минут верхнюю (гептановую) фазу переносили в отдельную обезвоживания.

В гептановую фазу экстрагируются преимущественно нейтральные липиды, а в изопропанольную - фосфолипиды. В каждой фазе экстракта измеряли оптическую плотность при 220, 238 и 272 нм. Соответствующие величины экстинкции отражают поглощение изолированных двойных связей, диеновых коньюгатов, ацилгидроперекисей (первичных молекулярных продуктов ПОЛ), кетодиенов и сопряженных триенов (вторичных молекулярных продуктов ПОЛ).

Результаты выражали в виде индекса окисления, для чего рассчитывали соотношение Е232/Е220 и Е278/Е220 [23; 26].

Определение конечных продуктов перекисного окисления липидов спектрофотометрическим методом по Львовской Е.И. с соавт [53].

аминогруппами различных веществ (фосфолипидов, аминолипидов, белков и др.) с образованием соединений типа шиффовых оснований. Последняя группа соединений является структурной основой липофусцинов (кероида), представляющих собой неметаболизируемые маркеры дистрофических процессов в клетке.

Общеизвестным аналитическим подходом к определению конечных (спектрофотометрические методы не разработаны, поскольку шиффовы основания обладают высокой способностью к изомеризации, что существенно отражается на спектре поглощения.) Вместе с тем известно, что в области 401нм находится изосбестическая точка для этих соединений, которая не зависит от вида изомеров[53].

Получение липидных экстрактов, а также определение первичных, вторичных продуктов ПОЛ проводили по разработанному ранее методу [23;

26]. Содержание конечных продуктов ПОЛ определяли по величине оптической плотности гептановых и изопропанольных фаз липидных экстрактов при 400 нм (толщина оптического слоя 2 см). Относительное содержание шиффовых оснований рассчитывали по отношению поглощения при 400 нм к оптической плотности при 220 нм. Последняя величина является функцией содержания изолированных двойных связей в экстрагированных липидах, которые являются субстратами ПОЛ [53].

Определение интенсивности аскорбат-индуцированного ПОЛ [54].

Для изучения интенсивности индуцированного ПОЛ (окисляемости липидов) к изопропанольным экстрактам биологических жидкостей (сыворотки крови) добавляли индуцирующую ПОЛ смесь (0,5 мМ аскорбиновой кислоты и 50 мкг сульфата железа). После чего через 10 минут, когда наблюдается наибольшее изменение содержания молекулярных продуктов липопероксидации, проводили их спектрофотометрическое определение.

Окисляемость липидных экстрактов оценивали по соотношению величин оптических плотностей Е232/Е220, Е278/Е220 определяемых до и после внесения инициирующей ПОЛ смеси и выражали в процентах по отношению к исходному уровню [54].

Определение содержания окислительно модифицированных белков[8; 34] Окислительную модификацию белков оценивали по уровню образования динитрофенилгидразонов по методу Е.Е. Дубининой [8; 34]. В первую порцию (опыт) добавляли 0,1 мл 0,1М раствора 2,4-динитрофенилгидразина (2,4-ДНФГ) в 2М растворе соляной кислоты, а во вторую порцию (контроль) – 0,1мл 2М раствора HCl. Далее пробы инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре, и для получения белкового осадка центрифугировали на центрифуге ОПН-3 при 3000 об/мин в течение 10 минут. Осадок промывали раза в 5 мл смеси этанол-этилацетат (1:1) для экстракции липидов и 2,4-ДНФГ, который не прореагировал с карбонильными группами окислительно модифицированных белков. Полученный очищенный осадок высушивали для удаления растворителей и растворяли в 2,5 мл 8 М раствора мочевины. Для лучшего растворения белкового осадка в каждую пробу добавляли 15 мкл 2 М раствора НСl [8; 34]. При 270, 370 и 430 нм регистрировали продукты взаимодействия карбонильных производных белкового происхождения с 2,4 – динитрофенилгидразином.

Альдегидфенигидразоны (АФГ), являются ранним маркером окислительной деструкции белка. Кетондинитрофенилгидразоны (КФГ) поздний маркер, характеризирующий, в случае спонтанного ОМБ — степень окислительной деструкции белковой молекулы, а при стимулированном ОМБ — свидетельствует об истощении резервно-адаптационных возможностях организма [8; 34].

0,07 М фосфатного буфера (рН=7,4), индукцию ОМБ осуществляли 0,1 мл раствора СuSО4 до конечной концентрации 1 мМ. Контрольная проба содержала 0,1 мл плазмы и 4,9 мл 0,07 М фосфатного буфера (рН=7,4). Пробы инкубировали с экспозицией 20 ч при 37 С. На флюориметре регистрировали снижение флюоресценции образованного битирозина при длине волны возбуждения 325 нм и длине волны испускания 415 нм.

Уровень церулоплазмина оценивали в сыворотке крови методом Равина.

В пробирки вносили 0,1 мл сыворотки (контроль – к сыворотке добавляли 2, мл фтористого натрия (30 г\л) для инактивации ферментативной реакции ЦП).

Добавляли 8,0 мл ацетатного буфера (рН 5,5) и 1,0 мл раствора рфенилендиамина. После перемешивания оставляли в бане при 37 оС на минут. Во все пробирки, кроме контроля, добавляли раствор фтористого использованием зеленого светофильтра (530 нм) в кюветах с шириной слоя мм [40].

Исследование функционального состояния печени В сыворотке крови на биохимическом анализаторе OLYMPUS AU исследовалось содержание общего белка, активность аланинаминотрансферазы (АлАТ), аспартатаминотрансферазы (АсАТ), гамма-глутамилтранспептидазы (ГГТ), щелочной фосфатазы (ЩФ). Постановка тимоловой пробы осуществлялась согласно приказу № 290 от 11.04.1972 МЗ РСФСР «Об унификации клинических лабораторных методов исследований».

Результаты обрабатывались общепринятыми методами вариационной статистики и выражались в виде среднеарифметической (М) и е стандартной ошибки (m). Статистически значимые различия определяли с использованием непараметрической статистики: Манна-Уитни (U), Колмогорова-Смирнова ( ) и Вальда-Вольфовица (WW). Статистические взаимосвязи изучали при помощи непараметрического корреляционного анализа, выполняя расчт коэффициентов корреляции рангов по Спирмену (rs) и Кенделлу (rk). Для проведения кластерного анализа использован метод К-средних (К-means).

Обработка полученных данных производилась с использованием пакета прикладных программ Statistica 6 [80].

Алкоголизм вызывает токсическое поражение печени, проявляющееся в виде гепатитов и гепатозов. В проведенном нами исследовании осуществлялся сплошной скрининг пациентов, госпитализированных по поводу алкогольного делирия, на наличие маркеров вирусных гепатитов. С учетом критериев включения и исключения, обследовано 147 пациентов с алкогольным делирием среди которых у 32 человек был диагностирован хронический гепатит С различной степенью активности, что составило 21,77 % всех больных.

Таким образом, оказалось, что инфекция, традиционно считающаяся спутницей потребителей инъекционных наркотиков, в настоящее время стремительно распространяется среди лиц трудоспособного возраста, страдающих алкоголизмом, никогда не употреблявших инъекционные наркотики.

Кроме того, были выявлены случаи коинфицирования вирусного гепатита С и ВИЧ инфекции. Мы объясняем этот феномен неразборчивостью половых связей, зачастую их случайный характер, среди лиц, страдающих алкоголизмом, а также возникающими в последнее время микстными сообществами, состоящими из больных алкоголизмом и наркоманией, чего не было распространено ранее.

Вместе с тем, исходя из данных литературы [195] следует, что на фоне хронической алкогольной интоксикации усиливается репликация вирусной РНК, что способствует усугублению тяжести вирусного гепатита С. В настоящее время рассматривается значение этанол-индуцированного окислительного стресса в повышении мощности вирусного репликона.

Установлено, что алкоголь усиливает репликацию вируса гепатита С по моноцитах/макрофагах алкоголь индуцирует экспрессию изоформы цитохрома Р450 CYP2E. Известно, что через CYP2E зависимое монооксигенирование опосредуется алкоголь-зависимая индукция окислительного стресса. В свою очередь, коровые белки HCV вызывают деполяризацию митохондрий и усиливают продукцию активных форм кислорода [152], и за счт этого способствуют развитию окислительного стресса. Изложенные представления могут быть экстраполированы на ситуации связанные с инфекцией вируса гепатита С при алкогольном делирии.

В настоящее время одним из наиболее значимых негативных психопатологических последствий воздействия острого и хронического стресса считается формирование зависимости от психоактивных веществ, в первую очередь от алкоголя. Как уже было указано выше, среди больных алкоголизмом стремительно растет процент больных вирусным гепатитом С среди которых характерно развитие депрессивных расстройств, сопровождающиеся определенным дисбалансом в различных структурах ЦНС между серотонином и дофамином[137].

Интересно, что в этиопатогенезе обеих форм указанных психических нейромедиаторные системы, в связи, с чем внутренняя связь между аффективной патологией и синдромом зависимости может быть весьма глубока и неординарна [210]. При алкоголизме ускоряется метаболизм катехоламинов, модифицируется обмен серотонина, что приводит к усилению свободнорадикального окисления. Поэтому повышение уровня биогенных аминов можно рассматривать как фактор повреждения клеточных, тканевых и органных структур.

При алкогольном делирии развивается цитолитический синдром за счт активации в гепатоцитах свободнорадикального окисления. В свою очередь, окислительный стресс развивается на фоне увеличения содержания биогенных аминов, которые метаболизируются с помощью МАО. Не случайно, низкий уровень МАО-активности в тромбоцитах считается маркром развития алкоголизма [119; 176]. В свою очередь, уровень МАО-активности регулируется глюкокортикоидами, которые угнетают активность фермента, но усиливают его экспрессию [110].

Однако в доступной литературе не представилось возможным найти данные о характере влияния нарушений обмена биогенных аминов и окислительного стресса на выраженность цитолитического синдрома при алкогольном делирии с сопутствующим ВГС. Поэтому в проведенном нами исследовании мы сопоставляли между собой содержание таких маркров цитолитического синдрома как активность трансаминаз в крови, а также содержание биогенных аминов вместе с активностью тромбоцитарной МАО и уровнем циркулирующего кортизола и соотношение между прооксидантными и антиоксидантными системами у больных с алкогольным делирием с сопутствующим гепатитом С и без сопутствующей вирусной инфекции.

3.1. Соотношение между уровнем кортизола, показателями обмена биогенных аминов и показателями свободнорадикального окисления у больных с алкогольным делирием Для больных с алкогольным делирием в первую очередь характерно увеличение концентрации серотонина и дофамина в крови (таблица 3.1).

Одновременно наблюдалась повышенная экскреция дофамина (таблица 3.2).

Содержание адреналина и норадреналина не отличались статистически значимо от контрольных значений. Однако для них характерна повышенная экскреция, что проявлялось в четырехкратном повышении концентрации адреналина и в десятикратном повышении концентрации норадреналина в суточном объеме мочи. Кроме того, наблюдалось шестикратное повышение концентрации в крови при двухкратном повышении экскреции 3,4 - диоксифенилаланина (ДОФА), являющегося предшественником катехоламинов.

Таблица 3.1 - Содержание биогенных аминов в крови при алкогольном делирии Примечание: * - статистически значимые отличия от показателей контрольной группы.

Таблица 3.2 - Изменения содержания биогенных аминов в моче у больных с алкогольным делирием Примечание: * - статистически значимые отличия от показателей контрольной группы.

Этот факт позволяет предположить наличие повышенной продукции биогенных аминов у больных с алкогольным делирием.

Установлено, что, несмотря на резкое повышение содержания дофамина и серотонина, в крови в общей выборке больных с алкогольным делирием отсутствовали статистически значимые различия в активности тромбоцитарной МАО – Б по сравнению с контролем. Скорее всего, это связано с повышенным уровнем эндогенных ингибиторов МАО. Так, у больных с алкогольным делирием наблюдался четырехкратный прирост трибулиновой активности по сравнению с контролем. Уровень активности тромбоцитарной МАО-Б коррелирует с ее активностью в ЦНС, а следовательно, ее активность может отражать метаболизм биогенных аминов в ЦНС.

Известно, что эндокринные изменения при ВГС не ограничиваются биогенными аминами, но ещ затрагивают глюкокортикоиды[205].

Установлено, что в обобщенной выборке пациентов с алкогольным делирием уровень циркулирующего кортизола статистически значимо превышает контрольные значения.

Усиление продукции биогенных аминов само по себе может быть тригерром процессов свободнорадикального окисления по механизму аутоокисления [36]. В общей выборке больных с алкогольным делирием обнаружено увеличение содержания карбонилированных белков по сравнению с контролем на базальном уровне. Кроме того, повышен уровень Fe+2/H2O2 индуцированного карбонилирования, что свидетельствует о снижении устойчивости белков к карбонильному стрессу. Повышенный базальный уровень карбонилированных белков наблюдался у больных ВГС без наркологической патологии. В обобщенной выборке больных с алкогольным делирием повышенный уровень карбонилированных белков ассоциируется с повышенным уровнем изопропанол - растворимых диеновых конъюгатов.

Кроме того, наблюдалось повышение содержания изопропанол - растворимых диеновых конъюгатов у больных ВГС без алкогольной зависимости.

В обобщенной выборке больных с алкогольным делирием повышенный уровень изопропанол растворимых диеновых конъюгатов синхронизирован со снижением содержания этой категории молекулярных продуктов ПОЛ в ответ на индукцию в системе Fe+2/аскорбат, что свидетельствует о высоких темпах ПОЛ в полярных фракциях в результате снижения эффективности действия липофильных антиоксидантов.

Таблица Изменения содержания молекулярных продуктов ПОЛ у 3.3 больных с алкогольным делирием Диеновые конъюгаты (гептановая фаза), е.о.и.

Кетодиены и сопряженные (гептановая фаза), е.о.и.

Шиффовы основания (гептановая фаза), е.о.и.

Диеновые конъюгаты (изопропанольная фаза), е.о.и.

Кетодиены и сопряженные (изопропанольная фаза), е.о.и.

Шиффовы основания (изопропанольная фаза), е.о.и.

Диеновые конъюгаты (изопропанольная фаза), 193,73±32,47 176,39±53,67* индукция Fe / аскорбат, е.о.и.

Кетодиены и сопряженные (изопропанольная фаза), индукция Fe2+ / аскорбат, е.о.и.

Примечание: * - статистически значимые отличия от контрольной группы.

В пользу этого свидетельствует низкий уровень изопропанолрастворимых и гептан-растворимых шиффовых оснований в обобщенной выборке больных с алкогольным делирием. Известно, что уровень шиффовых оснований отражает продукцию комплексов переокисленных липидов с белками, характеризующихся антиоксидантными свойствами [36]. Вследствие интенсификации ПОЛ возможно снижение содержания ненасыщенных ацильных радикалов в гептановой фазе, что приводит к снижению содержания гептан-растворимых кетодиенов и сопряженных триенов.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о снижении у больных с алкогольным делирием окисляемости фосфолипидов по сравнению с контролем. Этот феномен развивается независимо от наличия ВГС. Интересно отметить, что между концентрацией кортизола и содержанием гептанрастворимых шиффовых оснований отмечено наличие отрицательной корреляционной связи (Rs = -0,816; P=0,015). Вместе с тем наблюдалась отрицательная корреляционная связь между содержанием гептан-растворимых шиффовых оснований и карбонилированных белков (Rs=-0,801;P=0,018).

Данная корреляционная связь может характеризовать антиоксидантные свойства белок - липидных продуктов свободнорадикального окисления, к которым относятся шиффовы основания[36]. Вместе с тем, отмечено наличие положительных корреляционных зависимостей между содержанием в крови биогенных аминов и содержанием некоторых продуктов свободнорадикального окисления. В частности обнаружена положительная корреляция между содержанием в крови адреналина (Rs=0,766;P=0,029) и норадреналина (Rs=0,719;P=0,035) и количества карбонилированных белков.

Таблица 3.4 - Функциональные пробы печени у больных с алкогольным делирием Примечание: * - статистически значимые отличия от контрольной группы алкогольного делирия, может привести к усилению деструктивных поцессов в тканях, ведущих к развитию цитолитического синдрома.

В ходе исследования было установлено, что в объединенной группе больных с алкогольным делирием наблюдались признаки цитолитического синдрома, проявлявшиеся в увеличении 6 раз активности АСТ, в 4 раза АЛТ и в 7 раз активность ГГТП по сравнению с контролем.

3.2 Соотношение между уровнем кортизола, показателями обмена биогенных аминов и показателями свободнорадикального окисления у больных с типичным алкогольным делирием Следует отметить, что в обследовании участвовала гетерогенная по тяжести заболевания и по наличию ВГС когорта.

Таблица 3.5 - Изменения содержания биогенных аминов у больных с типичным и тяжелым алкогольным делирием Показатель Адреналин (кровь), Норадреналин (кровь), нг/мл Дофамин (кровь), нмоль/мл/мин Трибулиновая Примечание: * - статистически значимые отличия по сравнению с контролем групп 2 и



Похожие работы:

«Киреев Антон Александрович Уссурийское казачество в политическом процессе на Дальнем Востоке России Специальность 23.00.02 – Политические институты, этнополитическая конфликтология, национальные и политические процессы и технологии. Диссертация на соискание учёной степени кандидата политических наук Научный руководитель доктор исторических наук профессор Кузнецов А.М....»

«Мирончук Наталья Николаевна ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ПОЧЕК И СИСТЕМА ГЕМОСТАЗА У БОЛЬНЫХ С ХРОНИЧЕСКОЙ СЕРДЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТЬЮ ИШЕМИЧЕСКОГО ГЕНЕЗА 14.01.04 – внутренние болезни Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель : Мирсаева...»

«Слободнюк Елена Сергеевна ХУДО ЖЕ СТВЕННАЯ ДЕЙ СТВИТЕЛЬНОСТЬ КНИГ ДЖУНГЛЕЙ Д. Р. КИПЛ ИНГА: двоемирие и мифология Закон а Специальность 10.01.03 — литература народов стран зарубежья (западноевропейская литература) Диссертация на соискание ученой степени кандидата филологических наук Научный руководитель : доктор филологических наук,...»

«Робенкова Татьяна Викторовна ПСИХОТИПОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ АДАПТАЦИИ СТУДЕНТОВ КОЛЛЕДЖА 03.00.13 – физиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор В.Н. Васильев Томск - 2003 ОГЛАВЛЕНИЕ. ВВЕДЕНИЕ..7 ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.. 1.1.Современный подход к проблеме адаптации студентов. 1.1.1. Роль стресса в...»

«СОТНИКОВ Геннадий Васильевич УДК 533.9, 533.922, 621.372.8, 621.384.6 ЭЛЕКТРОДИНАМИКА ПЛАЗМЕННЫХ И ПЛАЗМОПОДОБНЫХ ЗАМЕДЛЯЮЩИХ СТРУКТУР ДЛЯ СВЧ–ГЕНЕРАТОРОВ БОЛЬШИХ МОЩНОСТЕЙ И ВЫСОКОГРАДИЕНТНЫХ УСКОРИТЕЛЕЙ 01.04.08 — физика плазмы Диссертация на соискание ученой степени доктора физико-математических наук Научный консультант : доктор физ.-мат. наук, професcор Онищенко Иван...»

«Сорокин Павел Сергеевич КАРЬЕРА РУКОВОДИТЕЛЕЙ НИЖНЕГО И СРЕДНЕГО ЗВЕНА РОССИЙСКИХ БИЗНЕСОРГАНИЗАЦИЙ КАК СОЦИАЛЬНОЕ ЯВЛЕНИЕ Специальность 22.00.03 – Экономическая социология и демография Диссертация на соискание ученой степени кандидата социологических наук Научный руководитель – доктор философских наук...»

«Сайдумов Джамбулат Хамидович СУД, ПРАВО И ПРАВОСУДИЕ У ЧЕЧЕНЦЕВ И ИНГУШЕЙ (ХVIII–ХХ вв.) Диссертация на соискание ученой степени доктора юридических наук Специальность – 12.00.01-теория и история права и государства; история учений о праве и государстве Грозный – 2014 1 СОДЕРЖАНИЕ: ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА I. ИСТОРИЧЕСКИЙ ГЕНЕЗИС И ЭВОЛЮЦИЯ ТРАДИЦИЙ ПРАВА И ПРАВОСУДИЯ У ЧЕЧЕНЦЕВ И ИНГУШЕЙ §1....»

«УДК-616.31.000.93(920) ЧЕРКАСОВ ЮРИЙ АЛЕКСЕЕВИЧ АЛЕКСАНДР ИВАНОВИЧ ЕВДОКИМОВ ОСНОВОПОЛОЖНИК ОТЕЧЕСТВЕННОЙ СТОМАТОЛОГИИ 14.00.21 -Стоматология 07.00.10 - История наук и и техники' ДИССЕРТАЦИЯ На соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: Д.М.Н., профессор B.C. Агапов К.М.Н., профессор Г.Н. Троянский МОСКВА - 2003г. ОГЛАВЛЕНИЕ Стр. ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1....»

«ИЗ ФОНДОВ РОССИЙСКОЙ ГОСУДАРСТВЕННОЙ БИБЛИОТЕКИ Марченко, Сергей Валерьевич Повышение качества высшего профессионального образования в юридических вузах с использованием информационных технологий Москва Российская государственная библиотека diss.rsl.ru 2006 Марченко, Сергей Валерьевич Повышение качества высшего профессионального образования в юридических вузах с использованием информационных технологий : [Электронный ресурс] : Дис. . канд. пед. наук  : 13.00.08. ­ СПб.: РГБ, 2005 (Из...»

«Щебетенко Сергей Александрович Я-КОНЦЕПЦИЯ, ЭМПАТИЯ И ПСИХОЛОГИЧЕСКАЯ БЛИЗОСТЬ В ОТНОШЕНИЯХ ЧИТАТЕЛЯ К ЛИТЕРАТУРНЫМ ПЕРСОНАЖАМ 19. 00. 01 – Общая психология, психология личности, история психологии Диссертация на соискание ученой степени кандидата психологических наук Научный...»

«Севостьянов Дмитрий Владимирович ДИФФЕРЕНЦИРОВАННЫЙ ПОДХОД К ХИРУРГИЧЕСКОМУ ЛЕЧЕНИЮ БОЛЬНЫХ МАЛЬФОРМАЦИЕЙ КИАРИ I ТИПА 14.01.18 - нейрохирургия Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель : доктор медицинских наук, профессор, Заслуженный врач РФ Сакович В.П. Екатеринбург ОГЛАВЛЕНИЕ СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ...»

«Куренной Алексей Святославович НЬЮТОНОВСКИЕ МЕТОДЫ РЕШЕНИЯ ЗАДАЧ ОПТИМИЗАЦИИ С ЛИПШИЦЕВЫМИ ПРОИЗВОДНЫМИ Специальность 01.01.09 — дискретная математика и математическая кибернетика Диссертация на соискание учёной степени кандидата физико-математических наук Научный руководитель : профессор, д.ф.-м.н. Измаилов Алексей Феридович Москва...»

«Науменко Сергей Анатольевич ДИНАМИКА ОДНОЛОКУСНОГО МУЛЬТИАЛЛЕЛЬНОГО АДАПТИВНОГО ЛАНДШАФТА В МОЛЕКУЛЯРНОЙ ЭВОЛЮЦИИ БЕЛОККОДИРУЮЩИХ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ ДНК 03.01.09 — математическая биология, биоинформатика Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель : кандидат биологических наук Г.А. Базыкин Москва — 201 Оглавление Введение Объект...»

«УДК: 633.18:575:631.521+51. ГОНЧАРОВА ЮЛИЯ КОНСТАНТИНОВНА ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ПОВЫШЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ РИСА (06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ) Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Краснодар, 2014 г. ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ... 1. Повышение продуктивности культуры риса. Использование...»

«УДК 911.3:301(470.3) Черковец Марина Владимировна Роль социально-экономических факторов в формировании здоровья населения Центральной России 25.00.24. – Экономическая, социальная и политическая география Диссертация на соискание ученой степени кандидата географических наук Научный руководитель : кандидат географических наук, доцент М.П. Ратанова Москва 2003 г. Содержание Введение.. Глава 1....»

«ИЗ ФОНДОВ РОССИЙСКОЙ ГОСУДАРСТВЕННОЙ БИБЛИОТЕКИ Поповский, Андрей Александрович Метафора органического роста и её текстопорождающая роль в творчестве В. Хлебникова Москва Российская государственная библиотека diss.rsl.ru 2007 Поповский, Андрей Александрович.    Метафора органического роста и её текстопорождающая роль в творчестве В. Хлебникова [Электронный ресурс] : дис. . канд. филол. наук  : 10.01.01. ­ М.: РГБ, 2006. ­ (Из фондов Российской Государственной Библиотеки). Полный текст:...»

«ИЗ ФОНДОВ РОССИЙСКОЙ ГОСУДАРСТВЕННОЙ БИБЛИОТЕКИ Пешков, Игорь Александрович Мониторинг и прогнозирование чрезвычайных ситуаций в системе: атмосферный воздух ­ почвенный слой на объектах нефтегазового комплекса Москва Российская государственная библиотека diss.rsl.ru 2007 Пешков, Игорь Александрович.    Мониторинг и прогнозирование чрезвычайных ситуаций в системе: атмосферный воздух ­ почвенный слой на объектах нефтегазового комплекса  [Электронный ресурс] : дис. . канд. техн. наук...»

«Кузнецов Виталий Александрович ОБНАРУЖЕНИЕ ГЕОИНДУЦИРОВАННЫХ ТОКОВ И ИХ МОНИТОРИНГ В СИСТЕМАХ ЭЛЕКТРОСНАБЖЕНИЯ Специальность 05.09.03 – Электротехнические комплексы и системы Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук Научный руководитель – доктор технических наук, доцент Вахнина Вера Васильевна Тольятти...»

«Разумов Николай Геннадьевич ПОЛУЧЕНИЕ ПОРОШКОВОЙ ВЫСОКОАЗОТИСТОЙ АУСТЕНИТНОЙ СТАЛИ МЕТОДОМ МЕХАНИЧЕСКОГО ЛЕГИРОВАНИЯ ЖЕЛЕЗА АУСТЕНИТООБРАЗУЮЩИМИ ЭЛЕМЕНТАМИ В АЗОТОСОДЕРЖАЩЕЙ АТМОСФЕРЕ Специальность 05.16.06 – Порошковая металлургия и композиционные материалы ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата...»

«Баканев Сергей Викторович Динамика популяции камчатского краба (Paralithodes camtschaticus) в Баренцевом море (опыт моделирования) Специальность 03.00.18 – Гидробиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель – доктор биологических наук, профессор А. В. Коросов Мурманск – 2009 Содержание Введение... Глава 1....»






 
2014 www.av.disus.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.