На правах рукописи

Силкин Иван Иванович

ВОЗРАСТНЫЕ И СЕЗОННЫЕ СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ

ПЕРЕСТРОЙКИ НЕКОТОРЫХ ПОЛОВЫХ, ЭНДОКРИННЫХ И

МУСКУСНЫХ ПРЕПУЦИАЛЬНЫХ ЖЕЛЕЗ САМЦОВ ОНДАТРЫ

06.02.01 Диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и

морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Благовещенск - 2013

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Иркутская государственная сельскохозяйственная академия» и Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р. Филиппова» Министерства сельского хозяйства Российской Федерации.

Научный консультант доктор ветеринарных наук, профессор Попов Александр Петрович

Официальные оппоненты:

Сиразиев Ромазан Закарьянович доктор биологических наук, профессор, Федеральное государственное учреждение «Научно-исследовательский институт ветеринарии Восточной Сибири» Сибирского отделения Российской академии сельскохозяйственных наук, заместитель директора по научной работе Овчаренко Нина Дмитриевна доктор биологических наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Алтайский государственный университет, заведующая кафедрой зоологии и физиологии человека и животных Донкова Наталья Владимировна доктор ветеринарных наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Красноярский государственный аграрный университет», заведующая кафедрой анатомии и гистологии животных

Ведущая организация Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Якутская государственная сельскохозяйственная академия

Защита состоится «30» мая 2013 года в 10:00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.027.02 при ФГБОУ ВПО «Дальневосточный государственный аграрный университет» на факультете ветеринарной медицины и зоотехнии в ауд. 14(а) по адресу: 675005 Амурская область, г.

Благовещенск, ул. Политехническая 86, факс: (416-2) 52-62-80, Е-mail:

[email protected].

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Дальневосточный государственный аграрный университет», на сайте ВАК РФ http//vak.ed.gov.ru и на сайте ДальГАУ http: //www.dalgau.ru

Автореферат разослан «12» марта 2013 года

Ученый секретарь диссертационного совета Самусенко Ольга Леонидовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В отечественной и зарубежной литературе в последнее время отмечается заметное повышение интереса к всестороннему изучению органов эндокринной регуляции животных и человека. Это объясняется рядом положений. Прежде всего, следует отметить, что их гормоны – влияют на многие биологические процессы (обмен веществ, терморегуляцию, рост и размножение, функциональную активность всех органов и систем, ЦНС и др.) Известна высокая лабильность функциональной активности этих органов при различных воздействиях.

Показано, что они принимают участие в реакциях адаптации. Значение эндокринной системы ставит эндокринологию на одно из ведущих мест среди биологических наук.

Повышенное внимание со стороны ученых, медицинских работников, биологов к проблемам бесплодия, безусловно, привело к развитию андрологического направления не только в медицине, но и в ветеринарии (Попов А.П., 2004). Выбор этого направления оказался весьма своевременным и перспективным, так как на сегодняшний день в медицине сформировалась новая область науки: инфлогенитология, которая изучает взаимосвязь репродуктивной системы с другими органными системами и в первую очередь с эндокринной (Ромашова М.Ф. и др., 1998).

Помимо практического значения изучения внутренних половых органов самцов и эндокринных органов, результаты наших исследований могут быть использованы в эколого-гистологических исследованиях. Этот термин был предложен Ю.Н. Олейником (2003), изучавшем в этом аспекте щитовидную железу крапчатого суслика.

Среди всех видов охотничье-промысловых животных ондатре принадлежит пальма первенства по величине ареала, искусственно созданного человеком. Экономическая эффективность акклиматизации и искусственного расселения этого грызуна не вызывает сомнения. Кроме того, с ее помощью удалось решить проблему утилизации водно-болотной и прибрежно-водной растительности на водоемах нашей страны (Ширяев В., 1989).

Данный вид мелких млекопитающих благодаря многочисленности, широте распространения и удобству изучения может успешно использоваться в разнообразных экологических исследованиях в качестве тест-объекта. Метод морфофункциональных индикаторов часто используется в эколого-физиологических исследованиях. Он позволяет более объективно оценить реакцию организма на конкретные природно-климатические факторы и в условиях техногенных загрязнений. Изменчивость морфофункциональных характеристик органов репродукции и эндокринной регуляции может быть связана с определенными адаптивными сдвигами метаболизма животных при действии разнообразных факторов окружающей среды.

Следует также отметить, что территория экосистемы озера Байкал относится к биогеохимическим провинциям, характеризующиеся дефицитом йода в биосфере и наличием среди населения эндемического зоба (Муратова Н.М., 2002).

Помимо исследования органов репродукции и эндокринной регуляции у самцов ондатры интересным объектом исследования явился специфический орган – мускусные препуциальные железы. В доступной нам литературе есть единичные работы по этому органу, и то они выполнены на взрослых животных (Reisinger L., 1916, Schaffer J., 1940, Соколов В.Е. и др., 1993). В брошюрах и книгах об ондатре мускусные препуциальные железы либо совсем не упоминаются, либо неправильно указывается, что они имеются только у самцов.

О морфофункциональных изменениях органов эндокринной регуляции и репродукции у человека и разных видов животных накоплен колоссальный материал, представленный в ряде оригинальных работ. Однако в доступной нам литературе мы не обнаружили данных о морфофункциональном видоспецифичных мускусных препуциальных желез ондатры в постнатальном онтогенезе и при воздействии сезонных изменений окружающей среды. Впервые эти исследования проведены в природноклиматических условиях экосистемы Южного Прибайкалья.

Цель и задачи исследования. Настоящая работа является самостоятельным разделом общей комплексной темы кафедры анатомии и ветеринарно-санитарной экспертизы Иркутской государственной сельскохозяйственной академии (номер государственной регистрации 01.2.00900999) и кафедры анатомии, гистологии и патоморфологии Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р.

Филиппова (номер государственной регистрации 01.2.01156775).

Целью настоящих исследований явилось изучение возрастных и сезонных морфофункциональных изменений тканевых и клеточных структур внутренних половых органов, щитовидных, надпочечных и мускусных препуциальных желез самцов ондатры, обитающих в условиях экосистемы Южного Прибайкалья.

Исходя из цели исследования, необходимо было решить следующие задачи:

– изучить анатомо-топографические особенности внутренних половых органов, щитовидной, надпочечных и мускусных препуциальных желез самцов ондатры;

– изучить органо- и гистогенез внутренних половых органов, щитовидной, надпочечных и мускусных препуциальных желез самцов ондатры обитающих в условиях экосистемы Южного – проследить морфофункциональные изменения внутренних половых органов, щитовидной, надпочечных и мускусных препуциальных желез самцов ондатры в период спада половой активности до наступления стадии полового покоя в условиях экосистемы Южного – выявить физиологическую взаимосвязь внутренних половых органов, щитовидной, надпочечных и мускусных препуциальных Научная новизна и ценность полученных результатов заключается в том, что методами классической гистологии, современной гистохимии и биометрии в дифференциальной оценке белковых и углеводных компонентов, а также исследованиями уровня тиреоидных и андрогенных гормонов методами радиоиммунологического и иммуноферментного анализов, выявлен ряд новых закономерностей структурно-функциональной дифференциации внутренних половых органов, щитовидной, надпочечных и мускусных препуциальных желез самцов ондатры в различные периоды постнатального онтогенеза и в период спада половой активности вплоть до наступления стадии полового покоя на территории Южного Прибайкалья.

Полученные данные являются оригинальными, расширяют и дополняют отдельные положения теории индивидуального развития систем органов и организма в целом.

Теоретическая и практическая значимость. Полученные нами данные расширяют современные представления о биологии ондатры, особенностях развития и строения семенников и придаточных половых органов самцов, органов эндокринной регуляции и видоспецифичных органов (мускусные препуциальные железы) в условиях уникальной экосистемы Южного Прибайкалья. Обнаружен ряд особенностей в действии факторов (природно-климатические условия) на морфофункциональные показатели и состояние этих органов. Результаты гистологических и гистохимических исследований по вопросам возрастных и сезонных особенностей структуры и функций органов репродукции и эндокринной регуляции ондатры в постнатальном онтогенезе представляют несомненный интерес и могут быть использованы при написании соответствующих разделов биологии, зоологии, охотоведения и звероводства, сравнительной гистологии и гистохимии. Биометрические исследования тканевых и клеточных структур органов репродукции и эндокринных органов могут быть использованы как базовые (нормативные) при изучении влияния природно-климатических факторов на эти органы, степени техногенных загрязнений в данном регионе, учитываться для регуляции промысла и разумного использования популяций ондатры, а также могут быть использованы для прогноза влияния биогеохимических условий на состояние биоты.

Результаты исследований мускусной препуциальной железы помогут глубже понять физиологические процессы, происходящие в специфическом функциональном органе самцов ондатры на различных этапах постнатального онтогенеза.

Более того, материалы данной работы будут служить основой для конкретизации дальнейших исследований экологии, морфологии и биологии ондатры, а также способствовать разработке региональных ландшафтногеографических принципов рационального использования ресурсов вида.

Внедрение исследований. Полученные данные используются в практической работе службой по охране и использованию животного мира Иркутской области, Государственным учреждением Амурской области «Дирекция по охране и использованию животного мира и ООПТ», промыслово-охотничьем хозяйством ЗАО «Новый Промой» Кабанского района Республики Бурятия; учебной и научной работе отдела эволюционной морфологии позвоночных животных Института зоологии им. И.И.

Шмальгаузена НАН Украины, научно-исследовательского центра биобезопасности и экологического контроля ресурсов АПК Днепропетровского государственного аграрного университета; кафедр факультета охотоведения Иркутской государственной сельскохозяйственной академии; кафедры анатомии, гистологии и патоморфологии Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова;

кафедры морфологии, патологии и физиологии животных Дальневосточного государственного аграрного университета; кафедры анатомии и гистологии животных Красноярского государственного аграрного университета;

кафедры патологической анатомии и гистологии Витебской ордена «Знак Почёта» государственной академии ветеринарной медицины; кафедры анатомии животных им. акад. В.Г. Касьяненка Национального университета биоресурсов и природопользования Украины; кафедры анатомии и физиологии животных Полтавской государственной аграрной академии;

кафедры анатомии и гистологии им. П.А. Ковальского Белоцерковского национального аграрного университета; кафедры анатомии сельскохозяйственных животных Львовского национального университета ветеринарной медицины и биотехнологий; кафедры анатомии, нормальной и патологической физиологии животных Сумского национального аграрного университета.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на научно-практических конференциях Бурятской государственной сельскохозяйственной академии (Улан-Удэ, 2001-2009), Иркутской государственной сельскохозяйственной академии (Иркутск, 2004-2010), Всероссийской конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины мелких домашних животных» (Екатеринбург, 2003), 2 научно-практической конференции «Роль молодых ученых в развитии науки» (Великие Луки, 2007), Международной научно-практической конференции «Состояние и перспективы обеспечения ветеринарного благополучия Восточной Сибири»

ГНУ НИИ ветеринарии Восточной Сибири СО РАСХН (Чита, 2008), Международной научной конференции посвященной 90-летию кафедры анатомии животных СПбГАВМ «Актуальные проблемы ветеринарной морфологии» (Санкт-Петербург, 2009), Международной научной конференции посвященной 100-летию со дня рождения профессора Г.О.

Гиммельрейха и 90-летию кафедры анатомии им. академика В.Г. Касьяненко НУБП Украины «Морфология XXI столетия» (Киев, 2010).

Основные положения, выносимые на защиту.

Возрастная морфофункциональная дифференциация внутренних половых органов, щитовидной, надпочечных и мускусных препуциальных желез самцов ондатры, обитающих в условиях экосистемы Южного Прибайкалья.

Видовые особенности морфологических и гистохимических показателей внутренних половых органов, щитовидной, надпочечных и мускусных препуциальных желез у самцов ондатры.

Видовая специфичность секретов внутренних половых органов, щитовидной, надпочечных и мускусных препуциальных желез самцов ондатры.

Зависимость изменения морфофункционального состояния внутренних половых органов, щитовидной, надпочечных и мускусных препуциальных желез самцов ондатры от возраста и половой активности.

Физиологическая взаимосвязь внутренних половых органов, щитовидной, надпочечных и мускусных препуциальных желез самцов ондатры.

Публикации. Основное содержание работы

отражено в 47 научных работах, из них 16 статей – в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, монография, получен 1 патент РФ на изобретение.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на страницах компьютерного текста, состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, собственных исследований, анализа полученных результатов, выводов, практических предложений. Список использованной литературы включает 377 источников, в том числе 112 иностранных. Работа иллюстрирована 38 таблицами и 77 рисунками.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалом для исследования являлись семенники, придатки семенников, предстательные, пузырьковидные, щитовидные, надпочечные и мускусные препуциальные железы, а также сыворотка крови от новорожденных, 1, 3, 5, 8, 10, 12-месячных самцов ондатры (Ondatra zibeticus) постнатального периода развития и половозрелых животных в разные периоды года (сентябрь, октябрь, ноябрь, декабрь). Мы не обнаружили у самцов ондатры бульбоуретральные (луковичные) железы.

Изучаемый возрастной ряд представлен семью, функционально обоснованными возрастными периодами. Исследование сезонных изменений в изучаемых органах базировалось на знании о влиянии природноклиматических факторов в данном регионе на физиологию самцов ондатры.

Материал собирали в период полевых экспедиций от условно здоровых особей в южной зоне Прибайкалья, на территории Иркутского района Иркутской области по берегам Иркутского водохранилища (пойма реки Ангары) и в районе дельты реки Селенги Кабанского района Республики Бурятия.

По величине вегетационного периода всю территорию Иркутской области и Республики Бурятия можно разделить на три зоны: южную, среднюю и северную. В южную зону входят южные районы Бурятии до широты города Улан-Удэ и дельты реки Селенги, а также южные районы Иркутской области до широты г. Иркутска (Комаров А.В., 1971). Здесь имеются такие ценные, наиболее продуктивные угодья с обильными запасами кормовых растений как пойма реки Ангары с Иркутским водохранилищем и дельта реки Селенги с прилегающими байкальскими сорами.

Возраст определяли при помощи соответствующих методик (Корсакова И.Б., 1970; Водопьянов Б.Г., Саловаров В.О., 2001). Всего исследован материал от 198 животных. Полученный материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, жидкости Карнуа, в нейтральной смеси Шабадаш и заключали в парафин. Полученную сыворотку крови замораживали при температуре – 18°С.

Осуществлен комплекс мероприятий, включающий в себя различные методы исследования:

• Морфологические исследования.

Общие макро-морфометрические исследования. Для оценки морфофункциональных параметров использовали животных отловленных капканами (капкан № 1). Тушки животных подвергали взвешиванию с точностью до 1,0 г. После изъятия органов из тушек, их подвергали взвешиванию с целью определения относительной массы исследуемых органов к массе тела животных в зависимости от возраста и сезона года. При осмотре отмечали цвет, консистенцию, форму и топографию.

Общие микро-морфометрические исследования. Для оценки клеточных элементов и тканевых структур изготавливали серийные парафиновые срезы толщиной 5-7 мкм на санном микротоме «C. Reichert wien», с последующей их окраской гематоксилин-эозином по Караччи, железным гематоксилином по Гейденгайну и по методу Ван-Гизон.

Гистологические препараты изучали при помощи микроскопов «ЛОМО Микмед-1» и «Motic BA 400 T», микро-морфометрические измерения производили при помощи винтового окуляр-микрометра МОВ-16-1.

При выборе морфологических критериев оценки функциональной активности изучаемых органов использовали как общие микроморфометрические методы исследования, которые универсальны для всех исследуемых органов, так и специфические, учитывающие особенности их гистологического строения.

Во всех исследуемых органах определяли индекс склерозирования – соотношение относительных объемов паренхимы и стромы. При вычислении объема ядер клеток пользовались формулами для определения объемов круглых ядер (с коэффициентом элонгации менее 1,2) по формуле:

овальных ядер по формуле:

где L – малый диаметр ядра, В – большой диаметр ядра (Хесин Я.Р., 1967;

Ташке К., 1980). Ядерно-цитоплазматическое соотношение (ЯЦС) клеток вычисляли по формуле:

где d2 ср.я – средний диаметр ядра, d2 ср.к – средний диаметр клетки (Бондаренко О.В. и др., 2000). Причем чем выше значения ЯЦС, тем активнее клетка (Диденко А.А. и др., 2006).

Для оценки функциональной активности клеточных ядер, проводили окраску альциановым синим и сафранином Т (Яцковский А.Н., 1987). При этом ядерные структуры, окрашивающиеся в красный цвет, учитывались как гетерохроматин, а структуры синего цвета считали эухроматином.

Специальные микро-морфометрические исследования.

Семенник. В гистоструктуре семенника определяли диаметр извитых семенных канальцев, клеточный состав органа, а также стадии цикла сперматогенного эпителия (Ortavant R., 1959).

Придаток семенника. Изучение придатка семенника осуществлялось в различных его частях: головке, теле и хвосте придатка. Проводили измерения диаметра протока и просвета выносящих семенных канальцев.

Предстательная и пузырьковидная железа. В гистоструктуре добавочных половых желез нами изучалась высота эпителия в концевых отделах и выводных протоках желез, а также диаметр выводных протоков. При выборе морфологических критериев оценки функциональной активности половых желез руководствовались работами А.П. Попова (1981, 1995, 2004).

Щитовидная железа. Для оценки морфологических критериев функциональной активности щитовидной железы исследовали следующие показатели:

Форма и средний диаметр фолликулов, их число в поле зрения, процентное соотношение крупных, средних и мелких фолликулов.

Объем фолликулов (исходя из представлений о фолликулах как об эллипсоидах) по формуле:

где L и B – больший и меньший диаметры фолликула.

Среднюю площадь тиреоцитов (исходя из формы трапеции) по формуле (Дмитриева Н.И., 1990; Дубынин В.А., 1996):

где S k – площадь клетки, h – высота клетки, n1 и n2 – большее и меньшее основание клетки (трапеции).

Оценка функциональной активности щитовидной железы проводилась с помощью вычисления фолликулярно-коллоидного индекса (индекса Брауна), который обозначает соотношение относительных объемов фолликулярного эпителия и коллоида (функциональная активность прямо пропорциональна относительному объему эпителия и обратно пропорциональна относительному объему коллоида).

При исследовании щитовидной железы руководствовались работами О.А. Гомбоевой (2005); Е.С. Горбачевой (2006); Е.С. Манюк (2008).

Надпочечник. При выборе морфологических критериев оценки функционального состояния надпочечной железы исследовали следующие морфологические показатели: абсолютную толщину коркового и мозгового слоя и их соотношение, абсолютную и относительную толщину клубочковой, пучковой и сетчатой зон коры. Толщину различных зон коркового и мозгового вещества измеряли в 10 полях зрения на гистопрепарате от каждого животного. В работе по изучению надпочечника пользовались трудами П.М. Торгуна (1968); Е.С. Горбачевой (2006).

Мускусная препуциальная железа. При выборе морфологических критериев оценки функциональной активности мускусной препуциальной железы руководствовались работами В.Е. Соколова и др. (1993); С.А.

Шабадаш (2005); С.А. Шабадаш, О.Ф. Чернова (2006). Нами учитывались следующие морфологические и морфометрические показатели: форма и средний диаметр железистых клубочков, ширина и длина долей, высота эпителия в концевых отделах, выводных протоках, а также диаметр, просвет и количество выводных протоков.

Полученные числовые данные макро- и микрометрических показателей подвергали статистической обработке с использованием компьютерных программ «Microsoft Excel», «Biostatica», при этом учитывая классические работы некоторых авторов (Плохинский Н.А., 1970; Урбах В.Ю., 1975; Лакин Г.Ф., 1980).

Гистохимические исследования. Для выявления гликогена и других ШИК-положительных веществ использовали метод А.Л. Шабадаша (1947).

Для дифференциации гликогена от других ШИК-положительных компонентов гистологические препараты перед окраской подвергали обработке амилазой слюны в течение 20 минут при температуре 37°С (Кононский А.И., 1976), а также в нашей модификации 0,5%-ным раствором -амилазы (-Amylase from Aspergillus oryze) производства фирмы «Fluka»

(Швейцария) в буферном растворе при рН 5,6 в течение 20 минут при температуре 37°С.

Для идентификации нейтральных гликопротеинов учитывали ШИКреакцию после предварительной обработки гистологических срезов 5%-ным раствором солянокислого фенилгидразина в течение 1 часа при комнатной температуре (Spicer S.S., 1961).

Кислые группы углеводных соединений выявляли основным коричневым (Шубич М.Г., 1961), альциановым синим при рН-1,0 (Lev R., Spicer S.S., 1964) и при pH-2,7 (Mowry R.W., 1956), толуидиновым синим при pH-4,6, реакцией «скрытой метахромазии» (Виноградов В.В., Потапова В.Б., 1961).

Для идентификации кислых гликопротеинов использовали ферментативный контроль с бактериальной гиалуронидазой (Streptomyces hyalurolyticus) фирмы «Sigma» в концентрации 1 мг/мл на физиологическом растворе в течение 3 часов при температуре 37°С (Quintarelli G., 1963).

Для выявления общего белка использовали метод тетразониевого азосочетания по Даниелли с применением прочного синего Б по Берстону (Пирс Э., 1962) в нашей модификации (Силкин И.И., Власов Б.Я., 2009), где взамен труднодоступного веронала (барбитала) мы использовали глицингидроокись натрия (Кочетов Г.А., 1980). Бромфеноловый синий применяли для обнаружения суммарного (при рН-2,2) и свободного катионного (при рНбелков (Ringerts N., Zetterberg А., 1966). При выявлении последнего гистопрепараты предварительно обрабатывали 3%-ным раствором трихлоруксусной кислоты при t 90С с целью удаления нуклеиновых кислот и освобождения связанных с ними белков типа гистонов.

РНК выявляли по методу Браше в модификации N.B. Kurnick (1955) с постановкой контроля рибонуклеазой (Ribonuclease from bovine pancreas) производства фирмы «Fluka» (Германия) в концентрации 1мг/мл на физиологическом растворе в течение 1 часа при t 37С. За РНК принимали вещества, проявляющие пиронинофилию, ферментирующиеся рибонуклеазой. ДНК идентифицировали стандартной реакцией Фельгена (Лилли Р.Д., 1969).

Взамен трудно доступных М-проционовых красителей для выявления аминокислот лизина и гистидина мы использовали остазиновые красители (остазин – С-6Г), рекомендованные в гистохимическую практику А.П.

Поповым (1981). Для обнаружения аргинина использовали реакцию с тиазиновым красным (Шубич М.Г. и др., 1975) и качественную реакцию на аргинин с 8-оксихинолином-гипохлорита (Лилли Р.Д., 1969).

Идентификацию лизина, гистидина и аргинина проводили дезаминированием в свежеприготовленной смеси равных объемов 5%-ного раствора нитрита натрия и 10%-ного раствора уксусной кислоты при t +4С в течение 24 часов. Дезаминирование блокирует лизин, сохраняя окрашивание гистидина и аргинина.

Таким образом, проведение комплекса гистохимических реакций позволило выявить большинство функциональных групп углеводных и белковых компонентов и на этом основании, более предметно судить о функциональных особенностях исследуемого эпителия и его секрета. При этом, для оценки функционального состояния органов в нашем случае у диких животных, наиболее высокоинформативными методами являются морфологические и гистохимические.

Гормональные исследования. Для проведения гормональных исследований от животных была получена кровь. От новорожденных кровь получали путем декапитации, от взрослых путем перерезки сонной артерии.

Кровь собирали в стерильные химические стаканы, затем переливали в стерильные одноразовые пробирки производства фирмы «Vacuette» для получения сыворотки. Сыворотку крови исследовали на содержание трийодтиронина (Т3), тироксина (Т4), тестостерона, лютропина (ЛГ) и фоллитропина (ФСГ). Концентрацию гормонов в сыворотке крови определяли методами радиоиммунологического и иммуноферментного анализов с использованием коммерческих тест-наборов «Диас» (Россия) и «Алкорбио» (Россия). Полученные данные обрабатывали методами вариационной статистики и корреляционного анализа. По результатам исследований анализировали содержание указанных гормонов в зависимости от возраста и сезона года.

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЙ ГИСТОГЕНЕЗ СЕМЕННИКА

Возрастные морфологические изменения семенника Нами установлено, что у самцов ондатры всех исследуемых возрастных групп имеются следующие внутренние половые органы: парные половые железы: семенники с придатками; семяпроводы с их железистой частью (ампулами семяпроводов); придаточные половые железы; к ним относятся парные: предстательная и пузырьковидная железы; у самцов ондатры отсутствуют луковичные (бульбоуретральные) железы.

Семенники располагаются в тазовой полости на уровне седалищных бугров под париетальным листком брюшины и приближены к анальному отверстию, овальной формы бело-желтоватого цвета с хорошо различимым придатком. Под белочной оболочкой располагаются многочисленные кровеносные сосуды.

Формирование гонады связано с увеличением ее массы. Изменения диаметра семенных канальцев находятся в прямой зависимости от изменения толщины слоя сперматогенного эпителия. Установлена тесная положительная корреляция между возрастом и диаметром семенных канальцев (r= 0,84).

У новорожденных и 1-месячных щенков ондатры развитие тканевых структур гонад и их клеточного состава является далеко не завершенным.

Паренхима органа представлена формирующимися семенными канальцами, где более крупные канальцы расположены по периферии, а мелкие ближе к сети семенника. Гонады покрыты белочной оболочкой с нежными оксифильными волоконцами. В семенных канальцах находятся сустентоциты и гоноциты. Ядра сустентоцитов округлой формы с четким ядрышком.

Между канальцами rete testis и семенными канальцами в строме гонад обнаруживаются скопления интерстициальных эндокриноцитов. Мы выделили два вида ИЭ, большую часть составляют ИЭ с округлыми и округло-овальными светлыми ядрами средних размеров со слабо оксифильной цитоплазмой, и с мелкими, светлыми ядрами, имеющими одно ядрышко.

У 3-месячных самцов ондатры белочная оболочка более развита, чем у новорожденных и 1-месячных щенков, состоит из двух слоев:

поверхностного, состоящего из более плотной, и внутреннего, из менее плотной соединительной ткани, она резко утолщается, с перехватами. В этом возрасте становится хорошо выраженной базальная мембрана и собственная пластинка извитых семенных канальцев. В канальцах заметны митотически делящиеся гоноциты. Увеличивается диаметр семенных канальцев и высота эпителия (табл. 1). Существенно изменяется паренхимо-стромальное соотношение, в сторону увеличения удельного объема паренхимы. Волокна и клетки вокруг терминальных отделов семенных канальцев и канальцев rete testis образуют более мощный соединительнотканный каркас, по сравнению с интерстициальной тканью, окружающей семенные канальцы. Наблюдается уменьшение количества интерстициальных эндокриноцитов в интерстиции.

В 5 месяцев митотическая активность гоноцитов увеличивается, и они дают начало новой генерации –просперматогониям. В центральной части канальцев эпителий становится менее плотным, появляются участки разрежения.

В 8 месяцев гонады являются хорошо сформированным органом, покрытым снаружи белочной оболочкой. Происходит начальный процесс развития половых клеток. Существенно увеличивается диаметр извитых семенных канальцев (табл. 1). Отмечается изменение высоты эпителия, которая, по сравнению с предыдущим возрастом, увеличивается почти в раза (табл. 1). У животных этой возрастной группы можно встретить различные сочетания клеток, находящихся на разных стадиях мейотического деления. В некоторых канальцах обнаруживаются сустентоциты, гоноциты, просперматогонии, смерматогонии А и первичные сперматоциты.

Обнаруживаются канальцы, количество которых является доминирующим, где идентифицируются сперматогонии А и В и сперматоциты, которые находятся на стадии пахитены и диплотены. В большинстве ядра половых клеток содержат эухроматин. Интерстициальная ткань несколько уменьшается. В ней обнаруживаются ИЭ средних размеров, расположенные небольшими скоплениями между извитыми семенными канальцами.

В 10-12 месяцев нами отмечен активный сперматогенез и наличие стадий цикла сперматогенного эпителия. Наибольшей своей величины семенные канальцы достигают в 10-12 месяцев (табл. 1). Следовательно, можно сказать, что динамика изменений массы семенников, диаметра семенных канальцев, высоты эпителия находится в прямой зависимости от Морфометрические показатели семенника самцов ондатры в зависимости от возраста Толщина капсулы (мкм) 23,0±0,64 23,5±0,25*** 26,0±1,37*** 30,3±2,70*** 45,0±0,75 48,4±5,10*** 61,4±5, Кол-во сустентоцитов 22,1±0,38 22,2±0,71*** 24,8±1,32*** 32,0±1,16*** 44,4±1,87*** 48,0±2,36 48,7±1, клеток (мкм) Г 11,0±0,10 11,0±0,07** 11,0±0,05** 11,0±0,20** 11,0±0,30*** 11,4±0,10** 11,4±0, Объем ядер клеток С 43,1±1,80*** 49,0±2,90** 51,7±2,50*** 59,2±4,20 59,6±1,54*** 67,4±2,92*** 87,3±2, (мкм3) Г 167,8±5,07* 164,7±20,23** 155,4±16,60*** 167,8±7,55*** 177,2±8,12*** 210,0±5,40*** 216,8±6, Диаметр извитых семен. 55,2±1,47 55,4±0,85** 66,3±0,65*** 76,0±1,01*** 124,1±1,26*** 173,6±0,71*** 177,7±0, канальцев (мкм) Высота эпителия (мкм) 15,2±0,20*** 20,4±0,60*** 27,4±0,70*** 40,0±0,80*** 74,8±1,04*** 84,7±0,86 87,8±1,