WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

ГИМАЛОВА ГАЛИЯ ФУАТОВНА

ИССЛЕДОВАНИЕ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ ОСНОВ

АТОПИЧЕСКОГО ДЕРМАТИТА

03.02.07 – генетика

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Уфа – 2013 2

Работа выполнена в лаборатории молекулярной генетики человека Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук

Научный руководитель:

Карунас Александра Доктор биологических наук Станиславовна

Официальные оппоненты:

Викторова Татьяна Викторовна Доктор медицинских наук, профессор Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН г.н.с. лаборатории физиологической генетики Спицын Виктор Алексеевич Доктор биологических наук, профессор ГУ Медико-генетический научный центр РАМН Зав. лабораторией экологической генетики Федеральное государственное бюджетное

Ведущая организация:

учреждение науки Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН  

Защита диссертации состоится 18 декабря 2013 г. в «» часов на заседании диссертационного совета Д 002.133.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН по адресу:

450054, Уфа, пр. Октября, 71. ИБГ УНЦ РАН

С диссертацией и авторефератом можно ознакомиться в научной библиотеке Уфимского научного центра РАН по адресу: Уфа, пр. Октября, 71;

с электронной версией автореферата - на сайтах ВАК РФ и ИБГ УНЦ РАН:

ibg.anrb.ru e-mail: [email protected] Автореферат разослан «_» 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, к.б.н С.М. Бикбулатова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Атопический дерматит (АД) – хроническое рецидивирующее воспалительное заболевание кожи аллергической природы, для которого характерна возрастная особенность локализации, интенсивный зуд и гиперчувствительность к аллергенам и неспецифическим раздражителям (Odhiambo et al., 2009). В течение последних десятилетий заболеваемость АД существенно выросла, и в настоящее время распространенность его составляет в среднем 10-20% (Odhiambo et al., 2009, Pawankar et al., 2011). Заболевание чаще встречается у детей и, как правило, проявляется в возрасте до 1 года. У большинства больных атопический дерматит является первым проявлением аллергии, на фоне которого в дальнейшей жизни могут развиться бронхиальная астма и аллергический ринит (Spergel, Paller, 2003). АД может продолжаться и в зрелом возрасте, существенно ухудшая качество жизни больных (Beattie et al., 2006).

АД имеет многофакторную природу и развивается при взаимодействии таких эндогенных факторов, как генетическая предрасположенность и атопия, с различными аллергенными и неаллергенными факторами внешней среды (Schultz Larsen, 1993; Bisgaard et al., 2008). Молекулярно-генетические исследования АД с использованием современных методов и подходов значительно расширили знания о генетических факторах, способствующих формированию наследственной предрасположенности к данному заболеванию. Проведено множество ассоциативных исследований полиморфных локусов генов-кандидатов АД, которые показали, что в этиопатогенезе заболевания активное участие принимают гены, вовлеченные в атопический иммунный ответ организма – гены интерлейкинов IL4, IL10, IL13, IL18, IL25, IL33, тимусного стромального лимфопоэтина TSLP; в регуляцию барьерной функции эпителия - гены филаггрина FLG и ингибитора сериновых протеаз SPINK5; в распознавание консервативных структур микроорганизмов - гены образраспознающих рецепторов (TLR1, TLR2, TLR6, TLR9, TLR10, NOD1, NOD2) и др.

(Kawashima et al., 1998; Chavanas et al., 2000; Tsunemi et al., 2002; Ahmad-Nejad et al., 2004; Hosomi et al., 2004; Palmer et al., 2006; Sohn et al., 2007; Barnes K.C., 2010; Gao et al., 2010; Qian et al., 2010; Bussmann C. et al., 2011; Behniafard et al., 2012). Показано, что важный вклад в развитие этого заболевания вносят различные взаимодействия генов между собой и с факторами окружающей среды (Cramer et al., 2010; Lesiak et al., 2011; Namkung et al., 2011; Deleuran et al., 2012). В результате полногеномных анализов сцепления выявлены хромосомные области, тесно сцепленные с развитием АД (1q21, 3q21, 3p24–22, 17q25) (Lee et al., 2000; Cookson et al., 2001; Bradley et al., 2002), идентифицирован позиционно-клонированный ген АД, кодирующий эпидермальный коллаген COL29A1 (3q22.1) (Soderhall et al., 2007). Полногеномные анализы ассоциации АД позволили определить полиморфные локусы, ассоциированные с данным заболеванием и локализованные в областях 11q13.5 (гены C11orf30, LRRC32) (Esparza-Gordillo et al., 2009); 11q13.1 (ген OVOL1 - человеческий гомолог гена ovo дрозофилы), 19p13.2 (ген актин-подобного белка 9 - ACTL9) и 5q31.1 (ген белка 3A семейства кинезинов - KIF3A) (Paternoster et al., 2011; Hirota et al., 2012).

В России генетические исследования атопического дерматита единичны (Саликова и др., 2010; Тюменцева и др., 2011; Фрейдин и др., 2011; Карунас А.С. и др., 2012), а комплексное изучение роли генов цитокинов, образ-распознающих рецепторов и белков, ответственных за формирование и поддержание барьерной функции эпидермиса, в развитии АД ранее не проводилось. В связи с этим актуальным является углубленное молекулярно-генетическое исследование этой многофакторной патологии, которое позволит подробно охарактеризовать генетическую основу предрасположенности к АД, достоверно оценить роль исследуемых генов в развитии этого заболевания, что может послужить основой для разработки способов его прогнозирования и подходов ДНК-диагностики.



В связи с вышеизложенным, были определены цели и задачи настоящего исследования.

Цель работы - анализ роли полиморфных вариантов и мутаций геновкандидатов в развитии атопического дерматита в Республике Башкортостан.

Задачи исследования:

1. Провести анализ мутаций и полиморфных вариантов генов, участвующих в формировании эпидермального барьера - филаггрина FLG и ингибитора сериновых протеаз SPINK5, у больных атопическим дерматитом и индивидов контрольной группы.

2. Провести анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов генов образ-распознающих рецепторов у больных атопическим дерматитом и индивидов контрольной группы.

3. Провести анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов генов цитокинов - интерлейкина 4 (IL4), -цепи рецептора интерлейкина 4 (IL4R), интерлейкина 13 (IL13), интерлейкина 10 (IL10), фактора некроза опухоли (TNFA) и эотаксина (CCL11), у больных атопическим дерматитом и индивидов контрольной группы.

4. Провести исследование полиморфных локусов, ассоциированных с атопическим дерматитом по данным полногеномных анализов и локализованных в областях 5q31.1 (ген KIF3A), 11q13.1 (OVOL1), 11q13.5 (C11orf30 и LRRC32), 19p13. (ACTL9), у больных атопическим дерматитом и индивидов контрольной группы.

5. Провести анализ ассоциации исследованных полиморфных вариантов генов с развитием атопического дерматита у индивидов различной этнической принадлежности.

предрасполагающих к развитию атопического дерматита.

Научная новизна исследования. Впервые определены частоты аллелей и генотипов полиморфных вариантов генов образ-распознающих рецепторов TLR1, TLR2, TLR4, TLR5, TLR6, TLR9, TLR10, NOD1, NOD2, CD14 у больных атопическим дерматитом и здоровых индивидов русской, татарской и смешанной этнической принадлежности, проживающих в Республике Башкортостан. Установлены частоты мутаций c.2282del4, p.Arg501X и p.Arg2447X в гене филаггрина у больных АД и индивидов контрольной группы. С целью репликации результатов полногеномных анализов ассоциации атопического дерматита проведено исследование полиморфных локусов генов, локализованных в областях 5q31.1 (KIF3A), 11q13.1 (OVOL1), 11q13. (C11orf30 и LRRC32) и 19p13.2 (ACTL9), у больных АД и в контрольной группе индивидов из РБ. Выявлены генетические маркеры риска развития заболевания с учетом этнической принадлежности индивидов. Установлены модели межгенных взаимодействий полиморфных вариантов генов цитокинов, филаггрина, ингибитора сериновых протеаз, генов образ-распознающих рецепторов и генов, ассоциированных с развитием АД по данным полногеномного анализа, предрасполагающие к развитию АД у русских и татар.

Научно-практическая значимость работы. Результаты работы вносят вклад в общее представление о генетических основах предрасположенности к атопическому дерматиту. Идентификация мутаций в генах белков, ответственных за формирование и поддержание эпидермального барьера организма, позволяет установить точную молекулярно-генетическую природу АД и подобрать эффективные методы его лечения. Результаты исследования могут быть использованы при чтении спецкурсов на факультетах биологии, в медицинских ВУЗах, на курсах повышения квалификации медицинских работников.

Апробация работы. Основные результаты исследования были представлены на Конгрессах Европейской академии аллергологии и клинической иммунологии EAACI Congress (Стамбул, 2011; Женева, 2012; Милан, 2013), Конференциях Европейского общества генетики человека (Амстердам, 2011; Нюрнберг, 2012;

Париж, 2013), II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием (Курск, 2011), V Всероссийской конференции с международным участием «Пренатальная диагностика и генетический паспорт – основа профилактической медицины в век нанотехнологий» (Санкт-Петербург, 2012), II и III Всероссийской школы – конференции молодых ученых Уфимского научного центра РАН и ВолгоУральского региона по физико-химической биологии и биотехнологии «Биомика – наука XXI века» (Уфа, 2011, 2012), Всероссийской школе-конференции молодых ученых «Актуальные проблемы генетики человека, животных, растений и микроорганизмов» (Уфа, 2012).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 18 печатных работ, из них 6 – статьи в журналах из Перечня ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 180 страницах машинописного текста. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, который включает 240 источников.

Содержит 33 таблицы и 29 рисунков.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы исследования. Материалом для исследования служили образцы ДНК 448 неродственных индивидов, больных АД в возрасте от 1 до 50 лет (средний возраст 13,29 лет). Все обследованные являлись пациентами Республиканского кожно-венерологического диспансера и детского отделения Клиники Башкирского государственного медицинского университета. Диагноз заболевания устанавливался квалифицированными врачами на основании данных клинического, общелабораторного и дополнительных методов исследования в соответствии с критериями программных документов по диагностике, лечению и профилактике заболеваний.

В состав группы больных входили индивиды различной этнической принадлежности, проживающие в Республике Башкортостан: 177 русских, 126 татар и 145 индивидов метисного происхождения (от смешанных браков русских и татар).

Среднетяжелое течение атопического дерматита наблюдалось у 377 человек ( русских, 106 татар, 118 метисов), тяжелое – у 71 человека (24 русских, 20 татар и метисов). Среди больных 225 человек имели клинические проявления только АД ( русских, 67 татар, 76 метисов) и 223 индивида имели АД и сопутствующие аллергические заболевания – бронхиальную астму, аллергический ринит, аллергический конъюнктивит или сочетание данных патологий (95 русских, 59 татар, 69 метисов).

Контрольную группу составили 408 практически здоровых лиц, сопоставимых по полу, возрасту (от 4 до 60 лет, средний возраст 21,88 лет) и этнической принадлежности с больными и не имеющих отягощенной наследственности по атопическим заболеваниям (152 русских, 109 татар и 147 метисов). Информированное согласие на участие в данном исследовании было получено от всех его участников.

Методы исследования. ДНК из периферической крови выделяли методом фенольно-хлороформной экстракции (Mathew et al., 1984). Анализ полиморфных вариантов генов IL4, IL13, IL4R, IL10, TNFA, CCL11, SPINK5 и мутаций в гене FLG проводили при помощи метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК с последующим рестрикционным анализом. Мутации в гене FLG также исследовали методом анализа конформационного полиморфизма однонитевой ДНК (SSCP-анализа) (Orita et al., 1989) с последующим секвенированием. Определение нуклеотидной последовательности образцов ДНК проводили на автоматическом секвенаторе ABI Prism модель 3130xl (Applied Biosystems). Генотипирование полиморфных вариантов генов образ-распознающих рецепторов и генов C11orf30, LRRC32 проводили с использованием системы для генотипирования OpenArray SNP Genotyping System (Applied Biosystems).

Исследование полиморфных вариантов генов KIF3A, OVOL1 и ACTL9 выполняли при помощи ПЦР в реальном времени с флуоресцентной детекцией (FLASH/RTAS) (ООО «ТестГен», Москва).

Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием пакета прикладных программ обеспечения MS Office Excel (Microsoft), PLINK (1.07) (http://pngu.mgh.harvard.edu/~purcell/plink/index.shtml) (Purcell et al., 2007). Поправку на множественное тестирование вводили, используя метод оценки доли ложно-положительных результатов FDR (False Discovery Rate) (Benjamini, Hochberg, 1995). Анализ неравновесия по сцеплению и гаплотипический анализ выполняли с помощью программы Haploview 4.2 (Barett et al., 2005). Метаанализ результатов исследований в трех выборках русской, татарской и смешанной этнической принадлежности проводили с использованием программы WinPepi v.11. (http://www.brixtonhealth.com/pepi4windows.html) (Abramson, 2011). Анализ межгенных взаимодействий выполняли при помощи программ MDR (Ritchie et al., 2001) и GMDR (Lou et al., 2007; Chen et al., 2011).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Анализ мутаций и полиморфных вариантов генов, участвующих в формировании эпидермального барьера, у больных атопическим дерматитом и в контрольной группе В последнее время главную роль в развитии АД отводят повреждениям эпидермального барьера. Изменения последовательности нуклеотидов в генах, белковые продукты которых участвуют в формировании этого барьера, приводят к нарушению защитной функции эпителия, облегчению проникновения через него аллергенов и микроорганизмов, общей сенсибилизации организма. В связи с этим нами было проведено исследование мутаций и полиморфных вариантов генов одних из основных белков, участвующих в поддержании целостности рогового слоя кожи – гена филаггрина FLG и гена ингибитора сериновых протеаз SPINK5, в группах больных АД и контроля различной этнической принадлежности.

Анализ мутаций в гене филаггрина у больных атопическим дерматитом Мутации в гене филаггрина являются основным из известных на сегодняшний день генетических факторов риска развития АД и других аллергических заболеваний на фоне АД (Palmer et al., 2006; Weidinger et al., 2007; Schuttelaar et al., 2009;

Greisenegger et al., 2010; Irvine et al., 2011; Poninska et al., 2011; Li et al., 2013; Yu et al., 2013). Следствием мутаций является нарушение агрегации кератиновых филаментов и гидратации кожи, повышение чувствительности кожи к ультрафиолетовым лучам, изменение липидного состава, эпидермального гомеостаза и местного иммунного ответа (Jungersted et al., 2010; Mildner et al., 2010; Kezic et al., 2011).

Нами проведен анализ частоты встречаемости трех распространенных в европейских популяциях мутаций c.2282del4 (c.2282delAGCT), p.Arg501X (с.1501C>T) и p.Arg2447X (с.7339С>T) в гене FLG у больных АД и индивидов контрольной группы. Установлено, что в Республике Башкортостан наиболее часто встречающейся мутацией гена FLG является делеция c.2282del4, аллельная частота которой в объединенной выборке индивидов у больных АД составляет 6,61%, в контроле Данная мутация выявлена у 12,3% больных АД (у 4-х человек в гомозиготном состоянии и 50-ти человек – в гетерозиготном) и 2,23% индивидов контрольной группы (у 9-ти человек в гетерозиготном состоянии).

У больных АД русской и татарской этнической принадлежности частота мутации c.2282del4 в гене FLG была статистически значимо выше, чем у здоровых индивидов соответствующих контрольных групп (Рисунок 1). У русских мутация c.2282del4 обнаружена в гетерозиготном состоянии у 21-го больного АД (12,07%) и двух индивидов (1,33%) контрольной группы. Аллельная частота мутации c.2282del у больных АД составила 6,03%, а в соответствующем контроле – 0,97% (p=2,3*10-4, OR=9,57). У русских со среднетяжелой формой заболевания эта мутация встречалась с аллельной частотой 5,96% (p=2,9*10-4; OR=9,44), а у больных тяжелой формой АД – с частотой 6,25% (p=0,0025; OR=9,93). В группе русских, больных АД без сопутствующих АЗ, аллельная частота этой делеции составляла 6,79% (p=0,00015;

OR=10,85), у больных АД с сопутствующими АЗ – 5,32% (p=0,0011; OR=8,47).

Рисунок 1. Исследование мутации c.2282del4 в гене FLG.

А – Электрофореграмма рестрикционного анализа: дорожка 1 – образец ДНК больного АД, гомозиготы по мутации c.2282del4, 2 - 8 – образцы ДНК без мутации c.2282del4, 9 – образец ДНК гетерозиготы по мутации, 10 – контрольный образец ДНК без мутации; Б – Аллельная частота мутации c.2282del4 гена филаггрина у больных АД русской и татарской этнической принадлежности.

В группе больных АД татарской этнической принадлежности обнаружено трое гомозиготных носителей делеции c.2282del4 (2,44%) и 17 гетерозигот по этой мутации (13,82%), в контроле она выявлена у одного индивида (0,92%) в гетерозиготном состоянии. Аллельная частота делеции c.2282del4 у больных АД составила 9,35%, в контрольной группе – 0,46% (p=1,6*10-5, OR=22,38). У татар, больных АД средней тяжести, эта делеция встречалась с аллельной частотой 8,74% (p=0,00004; OR=20,78), у больных тяжелой формой АД ее частота была выше – 12,50% (p=0,000003; OR=31,0). В группе больных АД, не имеющих сопутствующих АЗ, данная мутация была обнаружена с аллельной частотой 10,45% (p=0,000007;

OR=25,32), у больных АД с сопутствующими АЗ – 8,04%.

Среди индивидов смешанной этнической принадлежности мутация c.2282del выявлена у 12-ти больных АД (8,51%) в гетерозиготном состоянии и у одного (0,71%) – в гомозиготном. В контроле гетерозиготными носителями мутации являлись шесть человек (4,17%). Аллельная частота делеции c.2282del4 у больных АД составила 4,96%, а в контроле – 2,08%.

Проведен мета-анализ результатов исследования мутации c.2282del4 в гене филаггрина в трех выборках – русских, татар и метисов. Обнаружен высокий уровень гетерогенности исследуемых выборок по частоте встречаемости данной мутации (критерий гетерогенности Хиггинса I2=66,2%), в связи с чем рассматривалась модель со случайным эффектом (метод Дерсимоняна-Лэйрда). Выявлены статистически значимые различия между выборками больных АД и контрольной группой по частоте встречаемости делеции c.2282del4 (p=0,0051). Показатель отношения шансов (OR) для мутантного аллеля по делеции c.2282del4 составил 5,76 (CI95% 1,69-19,58).

Сравнение полученных результатов с данными литературы показало, что определенные в наших группах больных АД частоты гетерозиготного носительства мутации с.2282del4 сходны значениям их у больных АД европеоидного происхождения - голландцев (16,1%), немцев (13,6%) (Schuttelaar et al., 2009;

Greisenegger et al., 2009), а также русских (9%) из г. Новосибирска (Саликова, 2011). У ирландцев с АД частота данной мутации была выше – она определялась у 26,9% больных, а у поляков ниже – у 6,0% больных (Palmer et al., 2006; Poninska et al., 2011).

Мутация p.Arg501X является второй по распространенности в популяциях Европы, однако в нашем исследовании была обнаружена низкая частота встречаемости этой мутации в РБ. В группе русских она выявлена в гетерозиготном состоянии у 3-х больных АД и у 4-х индивидов контроля (Рисунок 2). Аллельная частота мутации p.Arg501X составила 0,90% у больных АД и 1,36% в контроле. У татар данная замена в гетерозиготном состоянии обнаружена у 2-х больных АД и 1-го здорового индивида, аллельная частота мутации у больных АД равна 0,85%, у индивидов контрольной группы – 0,47%. Среди больных АД смешанной этнической принадлежности выявлены один гомозиготный и один гетерозиготный носители мутации p.Arg501X, аллельная частота мутации составила 0,66%. В контрольной группе метисов обнаружен один гетерозиготный носитель этой мутации, аллельная частота мутации – 0,29%. В объединенной выборке индивидов различной этнической принадлежности аллельная частота мутации p.Arg501X составила 0,92% у больных АД и 0,71% в контроле.

Рисунок 2. Идентификация мутации p.Arg501X в гене FLG. А – SSCP-анализ: дорожка 1 – контроль, дорожки 2-5, 7, 8 – образцы ДНК больных АД, не имеющих мутации p.Arg501X, 6 – образец ДНК гетерозиготы по мутации p.Arg501X; Б – сиквенс ДНК больного АД, гетерозиготы по мутации; В – сиквенс образца ДНК из контрольной группы.

Полученные нами данные согласуются с результатами ранее проведенных исследований: частота гетерозиготного носительства мутации p.Arg501X у больных АД из г. Новосибирска составляет 2,1%, у больных АД немецкого происхождения польского - 1,5% (Stemmler et al., 2007; Weidinger et al., 2007; Poninska et al., 2011;

Саликова, 2011). В ряде исследований у больных АД частота мутации p.Arg501X была выше – от 6% в Нидерландах и Австрии до 25% в Англии и 40% в Ирландии (Palmer et al., 2006; Barker et al., 2007; Greisenegger et al., 2009; Schuttelaar et al., 2009; Irvine et al., 2011).

Мутация p.Arg2447X в рассмотренных нами группах также являлась редкой (Рисунок 3). У русских данная мутация не выявлена. Среди татар гетерозиготными носителями мутации являлись 4 больных АД и 2 индивида контрольной группы.

Аллельная частота мутации p.Arg2447X у татар, больных АД, составила 1,75%, в контроле – 1,33%. Среди индивидов смешанной этнической принадлежности эта мутация обнаружена у 3-х больных АД в гетерозиготном состоянии, аллельная частота мутации – 0,97%. В объединенных группах больных АД и контроля различной этнической принадлежности аллельная частота мутации p.Arg2447X составила 0,82% и 0,31%, соответственно.

Наши результаты согласуются с литературными данными, по которым мутация p.Arg2447X встречается с аналогичными частотами у больных АД из Ирландии (1,9%) и Германии (1%) (Sandilands et al., 2007; Weidinger et al., 2008; Greisenegger et al., 2010).

Рисунок 3. Идентификация мутации p.Arg2447X в гене FLG. А – электрофореграмма рестрикционного анализа: дорожка 1 – контроль, дорожки 2, 3, 5, 6, 7 – образцы ДНК больных АД, не имеющих мутации, 4 – образец ДНК гетерозиготы по мутации, Б – сиквенс ДНК больного АД, гетерозиготы по мутации, В – сиквенс образца ДНК из контрольной группы.

В целом, у 68-и человек (15,49%) объединенной выборки больных АД из Республики Башкортостан выявлены мутации в гене филаггрина: c.2282del4 – у 50-ти человек в гетерозиготном состоянии и у 4-х – в гомозиготном; p.Arg501X – у 6-ти индивидов в гетерозиготном состоянии и у 1-го – в гомозиготном; p.Arg2447X – у 7-и человек в гетерозиготном состоянии. Проведенное исследование свидетельствует о важной роли мутаций гена филаггрина, в особенности делеции c.2282del4, в развитии атопического дерматита.

у больных атопическим дерматитом и в контрольной группе Ген SPINK5 кодирует белок LEKTI, ингибитор сериновых протеаз, участвующий в поддержании целостности эпидермального барьера. Нами проведено исследование полиморфных вариантов rs77532553 (c.-206G>A) и rs (c.1258G>A, p.Glu420Lys) гена SPINK5 у больных АД и в контрольной группе индивидов. У русских выявлена ассоциация полиморфного локуса rs77532553 гена SPINK5 с развитием АД. У больных достоверно чаще, чем в контроле, выявлялся генотип rs77532553*G/A (p=0,0347; OR=3,13). Кроме того, обнаружено, что в данной этнической группе генотип rs77532553*G/A (p=0,0225; OR=3,73) и аллель rs77532553*A (p=0,0329; OR=2,85) являются маркерами повышенного риска развития АД без сопутствующих АЗ, а генотип rs77532553*G/G (p=0,0259; OR=0,3) – маркером пониженного риска развития заболевания. По литературным данным, описанный полиморфный локус также ассоциирован с развитием аллергических заболеваний у китайцев (Liu et al., 2009).

При анализе полиморфного локуса rs2303067 (p.Glu420Lys) гена SPINK5 не обнаружено достоверных различий между группами больных АД и здоровых индивидов русской и татарской этнической принадлежности.

Проведенный мета-анализ результатов исследования двух полиморфных локусов гена SPINK5 в трех исследованных выборках – русских, татар и метисов, не выявил статистически значимых различий между больными АД и контролем.

Таким образом, в результате исследования полиморфных вариантов и мутаций генов, ответственных за формирование эпидермального барьера, нами обнаружена ассоциация генотипа rs77532553*G/A полиморфного локуса rs77532553 гена SPINK с развитием АД у русских, а также показана значимость мутации c.2282del4 в гене филаггрина в развитии АД у индивидов различной этнической принадлежности, проживающих в Республике Башкортостан.

образ-распознающих рецепторов, генов C11orf30 и LRRC у больных атопическим дерматитом и в контрольной группе В развитии аллергических заболеваний значительную роль играют полиморфные локусы генов образ-распознающих рецепторов, которые способны узнавать консервативные молекулярные структуры различных патогенов и аллергенов, запуская систему врожденного иммунитета (Ahmad-Nejad et al., 2004;

Novak et al., 2007; Kormann et al., 2008). С использованием системы OpenArray SNP Genotyping System в группах больных АД и контроля нами проведено генотипирование 62 полиморфных вариантов генов образ-распознающих рецепторов - Toll-подобных рецепторов (TLR1, TLR2, TLR4, TLR5, TLR6, TLR9, TLR10), NODподобных рецепторов (NOD1, NOD2), рецептора липополисахаридов CD14, а также генов C11orf30 и LRRC32, локализованных в области 11q13.5 и выявленных при полногеномном анализе ассоциации АД. После проведения контроля качества генотипирования для анализа ассоциации было отобрано 57 ОНП, прогенотипированных у 257 больных (104 русских, 61 татарин и 92 метиса) и индивидов контрольной группы (90 русских, 73 татарина и 81 метис).

Генотипирование данных полиморфных вариантов проводилось одновременно, в связи с чем при анализе ассоциации нами была введена поправка на множественность сравнений FDR (false dicovery rate) (Benjamini, Hochberg, 1995). В качестве статистически значимых рассматривались результаты с FDRT) гена TLR1. Маркерами повышенного риска развития заболевания в данной группе являются аллель rs5743571*C (p=0,0004, FDR=0,0234, OR=2,98) и генотип rs5743571*C/C (p=0,0021, OR=2,96) (Рисунок 4А). Кроме того, выявлена ассоциация АД у русских с полиморфным вариантом rs5743794 (g.30712C>T) гена TLR6: маркерами повышенного риска развития заболевания являются аллель rs5743794*С (p=0,0017, FDR=0,0496, OR=2,23) и генотип rs5743794*C/C (p=0,002, OR=2,68) (Рисунок 4Б).

Следует отметить, что ранее была обнаружена ассоциация полиморфных вариантов генов TLR1 и TLR6 с развитием бронхиальной астмы и аллергического ринита в европейских популяциях (Tantisira et al., 2004; Hoffjan et al., 2005; Kormann et al., 2008), однако ассоциации этих генов с развитием АД выявлено не было.

У индивидов татарской этнической принадлежности между группами больных АД и здоровых индивидов выявлены различия в распределении частот аллелей по полиморфным локусам rs1816702 (p=0,0406) и rs4696483 (p=0,0249) гена TLR2, которые, однако, не достигли уровня статистической значимости при введении поправки на множественность FDR.

При анализе ассоциации полиморфных локусов генов TLR4, TLR5, TLR9, NOD1, NOD2, CD14, C11orf30 и LRRC32 статистически значимых различий в распределении частот аллелей и генотипов этих локусов в выборках больных АД и контроля не обнаружено.

Рисунок 4. Распределение частот аллелей и генотипов полиморфных локусов rs5743571 гена TLR1 (рисунок А) и rs5743794 гена TLR6 (рисунок Б) у больных АД и в контрольной группе индивидов русской этнической принадлежности.

Проведен анализ неравновесия по сцеплению полиморфных вариантов генов TLR1, TLR6 и TLR10, локализованных в области 4p14. У русских и татар выявлен одинаковый гаплоблок протяженностью 31 т.п.н., включающий 7 полиморфных локусов (rs11466617, rs10004195, rs4543123, rs4833095, rs5743604, rs5743571 и rs2101521) (Рисунок 5). В результате гаплотипического анализа по полиморфным вариантам данного гаплоблока обнаружены статистически значимые различия между больными АД и контрольной группой индивидов русской этнической принадлежности: наиболее распространенный гаплотип TTATACG встречался в группе больных значительно чаще (78,3%), чем в контроле (66,0%, p=0,0159). Кроме того, в группе больных АД была выше частота гаплотипа TAGCGCA (p=0,0043) и ниже – гаплотипа TAGCGTA (p=0,0194).

Мета-анализ результатов исследования полиморфных локусов генов образраспознающих рецепторов, генов C11orf30 и LRRC32, проведенный в трех выборках (русских, татар и индивидов смешанной этнической принадлежности) подтвердил ассоциацию с развитием АД полиморфных локусов rs5743571 (ORc=1,91, p=2,7х10-4) гена TLR1 и rs5743794 (ORC=1,66, р=0,001) гена TLR6, выявленную нами ранее у русских. Кроме того, была обнаружена ассоциация с развитием заболевания ОНП rs5743604 (ORA=1,50, р=0,011) гена TLR1, rs11466617 (ORT=1,55, p=0,019) гена TLR и rs2508755 (ORG=1,45, p=0,003) гена регулятора транскрипции EMSY C11orf (chromosome 11 open reading frame 30) (Таблица 1).

Рисунок 5. Структура неравновесия по сцеплению между полиморфными локусами, локализованными в области 4p14: А – у русских, Б – у татар (Haploview 4.2). Черными линиями очерчен гаплотипический блок. В ячейках указаны значения коэффициента неравновесия по сцеплению D’. Различные оттенки красного цвета отображают силу неравновесия по сцеплению между ОНП.

Результаты мета-анализа исследованных полиморфных локусов у больных АД и индивидов контрольной группы русской, татарской и смешанной этнической TLR10 C11orf30 Примечание: P - p-value fixed, P(R) – p-value random, Q – критерий гетерогенности Кохрена, I2 – критерий гетерогенности Хиггинса.  В целом, результаты данной работы подтверждают значительную роль системы врожденного иммунитета в патогенезе атопического дерматита и значимость изменений нуклеотидных последовательностей генов Toll-подобных рецепторов TLR1, TLR6 и TLR10 в развитии этого заболевания. Кроме того, проведенное исследование свидетельствует об участии полиморфного варианта гена регулятора транскрипции EMSY C11orf30 в развитии атопического дерматита у жителей Республики Башкортостан.

Анализ ассоциации полиморфных вариантов генов цитокинов с атопическим дерматитом в Республике Башкортостан Цитокины играют ключевую роль во всех стадиях развития и поддержания аллергического воспаления. Нами проведен анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфных локусов rs2243250 гена IL4, rs20541 гена IL13, rs гена IL4R, rs17809012 гена CCL11, rs1800629 гена TNFA и rs1800872 гена IL10 у больных АД и в контрольной группе. Установлена ассоциация АД у русских с полиморфным вариантом rs1800872 (c.-627C>A) гена IL10. Маркером повышенного риска развития АД, не сопровождающегося сопутствующими аллергическими заболеваниями, является генотип rs1800872*А/С (p=0,0406; OR=1,91) (Рисунок 6).

Рисунок 6. Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного локуса rs1800872 гена IL10 у больных АД и в контрольной группе индивидов русской этнической принадлежности.

Исследование других полиморфных вариантов генов цитокинов не выявило статистически значимых различий между группами больных АД и контроля различной этнической принадлежности. Достоверных различий, как в группе русских, так и у татар, не обнаружено и при сравнении с контролем групп больных АД различной степени тяжести и групп больных АД с сопутствующими аллергическими заболеваниями или без них.

Проведенный мета-анализ результатов исследования полиморфных вариантов генов цитокинов в трех выборках – русских, татар и метисов, не выявил статистически значимых различий между группами больных АД и индивидов контроля.

Таким образом, в результате проведенной нами работы обнаружена ассоциация полиморфного варианта rs1800872 гена IL10 с развитием атопического дерматита, не сопровождающегося другими аллергическими заболеваниями, у русских.

у больных атопическим дерматитом и в контрольной группе Полногеномные исследования АД, проведенные в европейских и азиатских популяциях, показали ассоциацию с развитием заболевания полиморфных локусов rs2897442 (c.1130-2278G>A) гена белка 3A семейства кинезинов KIF3A (5q31.1), rs479844 (g.10857752A>G) гена человеческого гомолога гена ovo дрозофилы OVOL (11q13.1) и rs2164983 (g.52183C>A), расположенного выше области гена актинподобного белка 9 ACTL9 (19p13.2) (Paternoster et al., 2011; Hirota et al., 2012).

Нами проведен анализ ассоциации данных полиморфных вариантов с развитием АД у индивидов русской и татарской этнической принадлежности.

Статистически значимых различий между больными АД и здоровыми индивидами не выявлено. Различия между контролем и больными АД различной степени тяжести и больными АД с сопутствующими АЗ и без них также не обнаружены.

Проведенный мета-анализ в трех выборках индивидов русской, татарской и смешанной этнической принадлежности также свидетельствует об отсутствии ассоциации изученных полиморфных вариантов генов KIF3A, OVOL1 и ACTL9 с развитием атопического дерматита в Республике Башкортостан. Таким образом, в результате проведенной репликации результатов полногеномного анализа не выявлено ассоциации исследованных полиморфных локусов с развитием АД.

Исследование роли межгенных взаимодействий в формировании предрасположенности к атопическому дерматиту При прогнозировании риска развития заболевания необходимо учитывать сложные взаимодействия различных генетических факторов, которые лежат в основе генетической предрасположенности к многофакторной патологии. Нами проведена оценка вклада полиморфных вариантов изученных ДНК-локусов и роли межгенных взаимодействий в детерминацию риска развития атопического дерматита при помощи программ MDR и GMDR.

Определены две оптимальные статистически значимые модели межгенных взаимодействий, ассоциированные с развитием АД у русских. В состав четырехлокусной модели входят полиморфные варианты генов Toll-подобных рецепторов: TLR1 (rs5743571) - TLR2 (rs1816702) - TLR6 (rs5743794) - TLR (rs11466617) (Рисунок 7А). Анализ информационной значимости полиморфных локусов данных генов показал наиболее значимый вклад генов TLR1 и TLR6, показатели энтропии (H) по которым составили 6,93% и 6,18%, соответственно. Более низкий информационный вклад у полиморфного локуса гена TLR10 (Н=2,34%), минимальный вклад у полиморфного локуса гена TLR2 (Н=0,03%). Сбалансированная точность данной модели составила 65,98%, чувствительность – 82,3%, специфичность – 50,66%, воспроизводимость результата – 10/10, OR=4,83 (CI95% 1,42-16,46), p = 0,0107.

Кроме этого, у русских определена шестилокусная модель межгенного взаимодействия FLG (c.2282del4) - IL10 (rs1800872) - OVOL1 (rs479844) -TLR (rs5743794) - TLR1 (rs5743571) - C11orf30 (rs2508755) (Рисунок 7Б). Согласно данной модели, значительный вклад в формирование предрасположенности к данному заболеванию так же, как и в четырехлокусной модели, вносят полиморфные локусы генов TLR1 (H=10,52%) и TLR6 (H=9,53%), умеренный вклад у мутации c.2282del гена филаггрина FLG (H=2,05%) и полиморфного локуса гена регулятора транскрипции EMSY C11orf30 (H=2,35%). Данная модель обладает высокими показателями сбалансированной точности (91,21%), чувствительности (85,86%) и специфичности (96,56%), а также низким значением р=0,0010, что свидетельствует о её хорошей прогностической значимости.

Исследование ген-генных взаимодействий у индивидов татарской этнической принадлежности выявило оптимальную трехлокусную модель межгенных взаимодействий, предрасполагающую к развитию АД (Рисунок 7В). В ее состав входят полиморфные локусы генов FLG (c.2282del4), TLR2 (rs1816702) и C11orf (rs2508755). Все три локуса вносят приблизительно одинаковый вклад в развитие атопического дерматита: показатели энтропии составляют НC11orf30=6,58%;

НTLR2=5,76% и НFLG =5,34%. Сбалансированная точность модели - 68,22%, чувствительность 88,29%, специфичность 51,16%, OR=7,13 (CI95% 1,36-37,38), p = 0,0107.

Анализ межгенных взаимодействий подтвердил полученные нами при анализе ассоциации АД с отдельными полиморфными вариантами генов результаты и показал наличие множества взаимосвязей между генами, которые в совокупности оказывают влияние на развитие атопического дерматита.

Рисунок 7. Оптимальные модели межгенных взаимодействий, предрасполагающие к развитию АД у русских (А, Б) и татар (В).

Таким образом, результаты проведенного нами исследования демонстрируют значимость мутаций и полиморфных вариантов генов FLG, SPINK5, TLR1, TLR6, TLR10, C11orf30 и IL10 в развитии АД у индивидов русской и татарской этнической принадлежности. Определены маркеры повышенного и пониженного риска развития атопического дерматита, выявлены ключевые межгенные взаимодействия, детерминирующие развитие этого заболевания.

ВЫВОДЫ

1. Установлена ассоциация атопического дерматита с мутацией c.2282del4 в гене филаггрина FLG у индивидов русской и татарской этнической принадлежности.

Аллельная частота мутации c.2282del4 в гене FLG у русских, больных АД, составляет 6,03%, у татар – 9,35%, в общей выборке больных из Республики Башкортостан Мутации p.R501X и p.R2447X в гене FLG у больных АД из РБ встречаются с низкой частотой (0,92% и 0,82%, соответственно), статистически значимо не отличающейся от их частоты в контрольной группе.

2. Обнаружено, что развитие атопического дерматита у русских ассоциировано с полиморфными вариантами генов Toll-подобных рецепторов TLR (rs5743571) и TLR6 (rs5743794). Установлено, что гаплотипами повышенного риска развития АД у русских являются гаплотипы TTATACG и TAGCGCA по полиморфным вариантам генов TLR1, TLR6 и TLR10 (rs11466617, rs10004195, rs4543123, rs4833095, rs5743604, rs5743571 и rs2101521).

3. Показано наличие ассоциации полиморфных локусов генов Tollподобных рецепторов TLR1 (rs5743571, rs5743604), TLR6 (rs5743794), TLR (rs11466617) и гена регулятора транскрипции EMSY C11orf30 (rs2508755) с развитием атопического дерматита при мета-анализе в трех выборках русской, татарской и смешанной этнической принадлежности.

4. Установлена ассоциация полиморфных вариантов rs1800872 гена интерлейкина 10 (IL10) и rs77532553 гена ингибитора сериновых протеаз SPINK5 с развитием у русских атопического дерматита, не сопровождающегося сопутствующими аллергическими заболеваниями.

5. Выявлены модели межгенных взаимодействий, ассоциированные с развитием атопического дерматита у русских (TLR1-TLR2-TLR6-TLR10 и FLG-IL10OVOL1-TLR6-TLR1-C11orf30) и татар (FLG-TLR2-C11orf30).

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в рецензируемых научных журналах:

1. Федорова, Ю.Ю. Роль полиморфных вариантов генов системы биотрансформации в развитии аллергических заболеваний у татар / Ю.Ю. Федорова, А.С. Карунас, А.Х. Нургалиева, О.А. Гра, Г.Ф. Гималова, Н.Н. Рамазанова, Л.Л.

Гурьева, А.Р. Бикташева, Э.И. Эткина, И.В. Голденкова-Павлова, Э.К. Хуснутдинова // Медицинская генетика. – 2010. – №6. – С.28-35.

2. Федорова, Ю.Ю. Анализ ассоциации полиморфных вариантов гена дизинтегрина и металлопротеазы 33 (АDAM33) с развитием бронхиальной астмы в Республике Башкортостан / Ю.Ю. Федорова, А.С. Карунас, Г.Ф. Гималова, Н.Н.

Рамазанова, Л.Л. Гурьева, Л.А. Мухтарова, Р.Р. Мурзина, Р.Ф. Гатиятуллин, Ш.З.

Загидуллин, Э.И. Эткина, Э.К. Хуснутдинова // Медицинская генетика. – 2011. – Т.10.

– №8. – С.23-29.

3. Карунас, А.С. Полногеномный анализ ассоциации бронхиальной астмы в Волго-Уральском регионе России / А.С. Карунас, Б.Б. Юнусбаев, Ю.Ю. Федорова, Г.Ф. Гималова, Н.Н. Рамазанова, Л.Л. Гурьева, Л.А. Мухтарова, Ш.З. Загидуллин, Э.И. Эткина, Э.К. Хуснутдинова // Молекулярная биология. – 2011. – Т. 45., №6. – С.

1-12.

4. Карунас, А.С. Анализ ассоциации мутаций в гене FLG с развитием аллергических заболеваний / А.С. Карунас, Г.Ф. Гималова, Ю.Ю. Федорова, М.М.

Юнусбаева, Н.Н. Рамазанова, Л.Л. Гурьева, Э.Р. Гуменная, С.В. Левашева, А.Р.

Бикташева, Л.А. Мухтарова, Ш.З. Загидуллин, Э.И. Эткина, Э.К. Хуснутдинова // Медицинская генетика. – 2012. – №1. – C.40-46.

5. Гималова, Г.Ф. Молекулярно-генетические аспекты атопического дерматита / Г.Ф. Гималова, А.С. Карунас, Э.К. Хуснутдинова // Медицинская генетика. – 2012. – №12. – C.18-26.

6. Карунас, А.С. Исследование роли полиморфных вариантов генов цитокинов в развитии бронхиальной астмы в Республике Башкортостан / А.С. Карунас, Ю.Ю.

Федорова, Н.Н. Рамазанова, Е.С. Галимова, Г.Ф. Гималова, Л.Л. Гурьева, С.В.

Левашева, А.Р. Бикташева, Л.А. Мухтарова, Ш.З. Загидуллин, Э.И. Эткина, Э.К.

Хуснутдинова // Пульмонология. – 2012. – №5. – С.55-59.

Тезисы докладов и статьи в сборниках конференций:

7. Гималова, Г.Ф. Анализ ассоциации мутаций в гене филаггрина с атопическим дерматитом в Республике Башкортостан / Г.Ф. Гималова, А.С. Карунас, Ю.Ю. Федорова, М.М. Имангулова, Э.Р. Гуменная, А.Р. Бикташева, С.В. Левашева, Э.И. Эткина, Э.К. Хуснутдинова // Материалы II Всероссийской школы-конференции по физико-химической биологии и биотехнологии «Биомика – наука XXI века». – Уфа: 2011. – Т.1 – №2. – С. 29-30.

8. Гималова, Г.Ф. Анализ ассоциации мутации 2282del4 в гене филаггрина с аллергическими заболеваниями в Республике Башкортостан / Г.Ф. Гималова, Ю.Ю.

Федорова, А.С. Карунас, Э.К. Хуснутдинова, Р.Р. Валиев // Студент и наука. –2010. – С.78-79.

9. Gimalova, G. Analysis of filaggrin loss-of-function mutations in atopic dermatitis patients and populations of the Volga-Ural region of Russia / G. Gimalova, A. Karunas, Y.

Fedorova, E. Gumennaya, M. Imangulova, A. Biktasheva, S. Levashova, E. Etkina, E.

Khusnutdinova // 30th Congress of the European Academy of Allergology and Clinical Immunology. – Istanbul. – 2011. – P.57.

10. Gimalova, G.F. Association analysis of cytokine gene polymorphisms and atopic dermatitis in Volga-Ural region of Russia / G.F. Gimalova, A.S. Karunas, Y.Y.

Fedorova, E.R. Gumennaya, S.V. Levashova, A.R. Biktasheva, E.I. Etkina, E.K.

Khusnutdinova // European Human Genetics Conference. – 2011. – Amsterdam. – P.273.

11. Карунас, А.С. Исследование генетической предрасположенности к аллергическим заболеваниям в Республике Башкортостан / А.С. Карунас, Ю.Ю.

Федорова, А.Х. Хузина, Г.Ф. Гималова, Н.Н. Рамазанова, Л.Л. Гурьева, С.В.

Левашева, А.Р. Бикташева, Л.А. Мухтарова, Э.Р. Гуменная, Р.Р. Мурзина, Р.Ф.

Гатиятуллин, Ш.З. Загидуллин, Э.И. Эткина, Э.К. Хуснутдинова // Материалы II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием.

«Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии» – Курск. – 2011.

– С.59-60.

12. Гималова, Г.Ф. Полиморфные варианты генов толл-подобных рецепторов TLR1 и TLR10 в развитии атопического дерматита в Республике Башкортостан / Г.Ф. Гималова, А.С. Карунас, Ю.Ю. Федорова, Э.Р. Гуменная, С.В.

Левашова, А.Р. Бикташева, Э.И. Эткина, Э.К. Хуснутдинова // Материалы Всероссийской школы – конференции молодых ученых «Актуальные проблемы генетики человека, животных, растений и микроорганизмов» – Уфа. – 2012. – С.43-46.

13. Гималова, Г.Ф. Ассоциация полиморфных локусов, расположенных на хромосоме 11q13.5, с развитием атопического дерматита в Республике Башкортостан / Г.Ф. Гималова, А.С. Карунас, Ю.Ю. Федорова, Э.Р. Гуменная, С.В. Левашева, А.Р.

Бикташева, Э.И. Эткина, Э.К. Хуснутдинова // Материалы III Всероссийской школы – конференции молодых ученых по физико-химической биологии и биотехнологии «Биомика – наука XXI века». – Уфа. – 2012. – С. 33-34.

14. Гималова, Г.Ф. Ассоциация полиморфных вариантов генов цитокинов с развитием атопического дерматита в Республике Башкортостан / Г.Ф. Гималова, А.С.

Карунас, Ю.Ю. Федорова, Э.Р. Гуменная, С.В. Левашова, А.Р. Бикташева, Э.И.

Эткина, Э.К. Хуснутдинова // Материалы V Всероссийской конференции с международным участием «Пренатальная диагностика и генетический паспорт основа профилактической медицины в век нанотехнологий» – Санкт-Петербург. – 2012. – С.30.

15. Gimalova, G.F. Cytokine gene polymorphisms are associated with atopic dermatitis in Volga-Ural region of Russia / G.F. Gimalova, A.S. Karunas, Y.Y. Fedorova, E.R. Gumennaya, S.V. Levashova, A.R. Biktasheva, E.I. Etkina, E.K. Khusnutdinova // EAACI Congress. – Geneva. – 2012. – P.83.

16. Gimalova, G.F. Toll-like receptor genes variants and atopic dermatitis in Volga-Ural region of Russia / G.F. Gimalova, E. Prans, A.S. Karunas, Y.Y. Fedorova, E.R.

Gumennaya, S.V. Levashova, A.R. Biktasheva, E.I. Etkina, S. Koks, E.K Khusnutdinova // European Human Genetics Conference. – Nuremberg. – 2012. – P.223.

17. Gimalova, G.F. Genetic variation in toll-like receptor genes and atopic dermatitis in Volga-Ural region of Russia / G.F. Gimalova, E. Prans, A.S. Karunas, Y.Y.

Fedorova, E.R. Gumennaya, S.V. Levashova, E.I. Etkina, S. Koks, E.K. Khusnutdinova // European Human Genetics Conference. – Paris – 2013. – P.465.

18. Gimalova, G.F. Toll-like receptor gene polymorphisms are associated with atopic dermatitis in Volga-Ural region of Russia / G.F. Gimalova, E. Prans, A.S. Karunas, Y.Y. Fedorova, E.R. Gumennaya, S.V. Levashova, E.I. Etkina, S. Koks, E.K.

Khusnutdinova // EAACI-WAO Congress. – Milan. – 2013. – P.71.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

LRRC32 Белок 32, содержащий лейцин-богатые повторы 95%CI Сonfidence interval (доверительный интервал) GMDR Generalized Multifactor-Dimensionality Reduction



Похожие работы:

«Наумова Анджелина Юрьевна ВЗАИМОСВЯЗЬ ЦЕННОСТНОЙ ДИНАМИКИ МЕЖДУНАРОДНОЙ ИНТЕГРАЦИИ СИСТЕМ ОБРАЗОВАНИЯ И СОЦИОКУЛЬТУРНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ РОССИЙСКОГО ОБРАЗОВАНИЯ Специальность – 09.00.11 – социальная философия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата философских наук Барнаул, 2013 1 Работа выполнена на кафедре гуманитарных дисциплин Алтайского филиала ФГБОУ ВПО Московского государственного университета культуры и искусств Научный руководитель : Ушакова Елена...»

«E-mail: [email protected] : +7(343)3745992,.,., 20. 2013.. 2,,,., KF KCl K2SiF6.,,.,,.,.,. KF KCl K2SiF6 SiO. KF KCl K2SiF6 SiO2, -,., 2009 2011.., (2009 2011..) -, - ( 01201000812) 2010-2012. KF KCl K2SiF6 SiO2. : 1. SiO2 KF KCl K2SiF. 2. KF KCl K2SiF SiO2. 3. KF KCl K2SiF6 SiO. 4. (, ). 1. KF KCl K2SiF6 ( KF/KCl 0,8). 2. KF KCl K2SiF6 SiO2. KF KCl K2SiF6 SiO2. 3. KF KCl K2SiF6. -. 4.,,, KF KCl K2SiF6 SiO2. SiO2 KF KCl K2SiF6, KF KCl K2SiF6...»

«ПОНИЗОВ Алексей Григорьевич УСТРОЙСТВО И МЕТОДИКА ФОРМИРОВАНИЯ ТЕСТОВЫХ АКУСТИЧЕСКИХ СИГНАЛОВ ЭКВИВАЛЕНТНЫХ КАМЕРТОНУ ДЛЯ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА СЛУХА Специальность 05.13.05. – Элементы и устройства вычислительной техники и систем управления АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Томск – 2012 2 Работа выполнена в Томском государственном университете систем управления и радиоэлектроники (ТУСУР) Научный руководитель – доктор технических наук...»

«ГЕВОНДЯН АРСЕН СЕРГЕЕВИЧ ОРГАНИЗАЦИОННО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ УПРАВЛЕНИЕ ПОТЕНЦИАЛОМ ЭНЕРГЕТИЧЕСКИХ КОМПАНИЙ В УСЛОВИЯХ РЕФОРМИРОВАНИЯ ОТРАСЛИ Специальность: 08.00.05 – Экономика и управление народным хозяйством: экономика, организация и управления предприятиями, отраслями, комплексами (промышленность) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата экономических наук Ростов-на-Дону – 2012 Диссертация выполнена в Кубанском институте международного предпринимательства и...»

«ГЕРАЩЕНКО Сергей Михайлович ДЖОУЛЬМЕТРИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ ЭКСПРЕСС-ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ БИОМЕДИЦИНСКИХ ОБЪЕКТОВ Специальность 05.11.17 – Приборы, системы и изделия медицинского назначения Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора технических наук ПЕНЗА – 2012 Работа выполнена в ФГБОУ ВПО Пензенский государственный университет. Научный консультант : доктор технических наук, профессор, ВОЛЧИХИН Владимир Иванович Официальные оппоненты : ВИХРОВ Сергей Павлович доктор...»

«ПЕЙСАХОВИЧ АРТУР АВРАМОВИЧ ИССЛЕДОВАНИЕ И РАЗРАБОТКА ПРОЦЕССА ПАРОФАЗНОГО КРАШЕНИЯ ШВЕЙНЫХ НИТОК Специальность 05.19.02 Технология и первичная обработка текстильных материалов и сырья АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Санкт-Петербург – 2012 Работа выполнена в Димитровградском инжененрно-технологическом институте (филиале) НИЯУ МИФИ Научный руководитель : Доктор технических наук, профессор ПАВУТНИЦКИЙ Вячеслав Васильевич Официальные...»

«КАРЕЛКИН Виталий Владимирович ОСТЕОСИНТЕЗ ПРИ ПЕРЕЛОМАХ ШЕЙКИ БЕДРЕННОЙ КОСТИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ НЕСВОБОДНОЙ КОСТНОЙ АУТОПЛАСТИКИ (клинико-анатомическое исследование) 14.01.15 – травматология и ортопедия 14.03.01 – анатомия человека АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Санкт-Петербург 2012 2 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении Российский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии им....»

«ВАСИЛЕНКО ГЛЕБ ОЛЕГОВИЧ РАЗРАБОТКА ТЕОРЕТИЧЕСКИХ МОДЕЛЕЙ ПРОГНОЗА УРОВНЕЙ СИГНАЛОВ В РАДИОЛИНИЯХ УВЧ И СВЧ ДИАПАЗОНОВ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ПРИ ПОСТРОЕНИИ СЕТЕЙ ЭЛЕКТРОСВЯЗИ 05.12.07 - Антенны, СВЧ устройства и их технологии АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора технических наук Санкт-Петербург 2011 Работа выполнена на кафедре Технической электродинамики и антенн СанктПетербургского государственного университета телекоммуникаций им. проф. М.А. Бонч-Бруевича....»

«СУДАРИКОВ Алексей Владимирович РАЗРАБОТКА МЕТОДИК ОПТИМАЛЬНОГО ПРОЕКТИРОВАНИЯ КОНСТРУКЦИЙ РАДИОЭЛЕКТРОННЫХ СРЕДСТВ С УЧЕТОМ ТРЕБОВАНИЙ ЭЛЕКТРОМАГНИТНОЙ СОВМЕСТИМОСТИ Специальность: 05.12.04 – Радиотехника, в том числе системы и устройства телевидения АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Воронеж – 2013 Работа выполнена в ФГБОУ ВПО Воронежский государственный технический университет Научный руководитель доктор технических наук,...»

«АЛЬХАМОВА ГУЗЕЛЬ КИРАМОВНА ВЛИЯНИЕ СТЕВИОЗИДА НА ПОТРЕБИТЕЛЬСКИЕ СВОЙСТВА ТВОРОЖНОГО ПРОДУКТА ФУНКЦИОНАЛЬНОГО НАЗНАЧЕНИЯ 05.18.15 – Технология и товароведение пищевых продуктов и функционального и специализированного назначения и общественного питания АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Кемерово - 2013 2 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования...»

«ЗАЙНУЛЛИНА ЛИАНА ФАНЗИЛЕВНА РЕГУЛЯЦИЯ NMDA-РЕЦЕПТОРАМИ ФУНКЦИЙ Т-ЛИМФОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА 03.01.04 - биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Уфа – 2013 Работа выполнена в лаборатории молекулярной фармакологии и иммунологии Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук Научный руководитель : Вахитова Юлия Венеровна Доктор биологических наук...»

«ЛОБОВА Екатерина Вячеславовна СИЛУРИЙСКИЙ ИНТРУЗИВНЫЙ МАГМАТИЗМ ВОСТОЧНОЙ ЗОНЫ СРЕДНЕГО УРАЛА Специальность 25.00.04 – петрология, вулканология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата геолого-минералогических наук Санкт-Петербург 2013 Работа выполнена в ФГБУН Институт геологии и геохимии им. академика А.Н. Заварицкого Уральского отделения Российской академии наук. Научный руководитель Смирнов кандидат геолого-минералогических наук, Владимир Николаевич...»

«ТРУБНИКОВА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ РИБОСОМНЫХ ГЕНОВ У ЖИТЕЛЕЙ КУРСКОЙ ОБЛАСТИ И ВКЛАД ПОЛИМОРФИЗМОВ ГЕНОВ ФАКТОРОВ ИХ ТРАНСКРИПЦИИ И ГЕНОВ ФЕРМЕНТОВ БИОТРАНСФОРМАЦИИ КСЕНОБИОТИКОВ В ЕЁ ФОРМИРОВАНИЁ 03.07.02 – генетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва – 2012 1 Работа выполнена на базах научно-исследовательской лаборатории Генетика Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения...»

«КОСОВ Валентин Владимирович ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРОЦЕССОВ КОМПЛЕКСНОЙ ПЕРЕРАБОТКИ БИОМАССЫ В СИНТЕЗ-ГАЗ И УГЛЕРОДНЫЕ МАТЕРИАЛЫ 05.14.01 – энергетические системы и комплексы Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Москва – 2012 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Объединенном институте высоких температур РАН. Научный руководитель : доктор технических наук Зайченко Виктор Михайлович...»

«КАРСАНАЕВА ИРИНА НИКОЛАЕВНА ТЕХНОЛОГИЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ СТУДЕНТОВ ОЧНОГО ОТДЕЛЕНИЯ НА ОСНОВЕ ДИСТАНЦИОННОГО ОБУЧЕНИЯ АНГЛИЙСКОМУ ЯЗЫКУ В ВУЗАХ ФИЗИЧЕСКОЙ КУЛЬТУРЫ 13.00.04 – Теория и методика физического воспитания, спортивной тренировки, оздоровительной и адаптивной физической культуры Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Смоленск - 2013 2 Работа выполнена на кафедре иностранных языков ФГБОУ ВПО Смоленская государственная...»

«Семкин Дмитрий Сергеевич ОБОСНОВАНИЕ РАЦИОНАЛЬНЫХ ПАРАМЕТРОВ И РЕЖИМОВ РАБОТЫ ОБОРУДОВАНИЯ ДЛЯ РАЗРАБОТКИ ГРУНТА ПОД МАГИСТРАЛЬНЫМ ТРУБОПРОВОДОМ Специальность 05.05.04 – Дорожные, строительные и подъемно-транспортные машины АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Омск – 2012 19 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Сибирская государственная...»

«ТВЕРДУНОВ Павел Сергеевич РАЗРАБОТКА УСТРОЙСТВА ДЛЯ ОЧИСТКИ И ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЯ ВОДЫ С ОБОСНОВАНИЕМ ЕГО ПАРАМЕТРОВ И РЕЖИМОВ РАБОТЫ Специальность 05.20.01 – технологии и средства механизации сельского хозяйства АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Ульяновск – 2013 2 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Ульяновская государственная сельскохозяйственная...»

«Устинова Мария Николаевна ОКИСЛИТЕЛЬНАЯ ДЕСТРУКЦИЯ КАК СПОСОБ ИНАКТИВАЦИИ ЭКОПОЛЛЮТАНТОВ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ 03.02.08 – Экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва – 2012 Работа выполнена на кафедре общей химии Белгородского государственного национального исследовательского университета. Научный руководитель Доктор химических наук, профессор Лебедева Ольга Евгеньевна Официальные оппоненты : Лейкин Юрий Алексеевич,...»

«Арутюнов Андроник Арамович РЕДУКЦИЯ ПСЕВДОДИФФЕРЕНЦИАЛЬНЫХ ОПЕРАТОРОВ НА НЕКОМПАКТНОМ МНОГООБРАЗИИ К ПСЕВДОДИФФЕРЕНЦИАЛЬНЫМ ОПЕРАТОРАМ НА КОМПАКТНОМ МНОГООБРАЗИИ УДВОЕННОЙ РАЗМЕРНОСТИ 01.01.02 – дифференциальные уравнения, динамические системы и оптимальное управление АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Москва - Работа...»

«КОЛЬЦОВА Анна Михайловна ПОЛУЧЕНИЕ ПОСТОЯННЫХ ЛИНИЙ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА И СРАВНЕНИЕ ИХ ХАРАКТЕРИСТИК ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ В РАЗНЫХ СИСТЕМАХ 03.03.04.– Клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург – 2012 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург Научный руководитель : доктор биологических наук...»






 
2014 www.av.disus.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.