На правах рукописи

БОТЧЕЙ ВЕРОНИКА МИКАЭЛОВНА

КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ СВЕТООПТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ

ТКАНЕВЫХ И КЛЕТОЧНЫХ КОМПОНЕНТОВ

МИОМЕТРИЯ МАТКИ ПЕРВОРОДЯЩИХ ЖЕНЩИН

ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ВИДАХ РОДОВОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ

03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология.

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва 2011

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации им. Н.И. Пирогова» на кафедре морфологии Медико-биологического факультета

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Павлович Евгений Ростиславович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Дубовая Татьяна Клеониковна, РГМУ, Лечебный факультет доктор медицинских наук, профессор Бархина Татьяна Григорьевна, НИИ морфологии человека РАМН

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Первый Московский государственный медицинский университет им И.М. Сеченова Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Защита диссертации состоится «_» _ 2011г. в часов на заседании диссертационного совета Д 212.203.08 при ГОУ ВПО Российский университет дружбы народов по адресу: 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.8.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Российского университета дружбы народов (117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.6).

Автореферат разослан «_» 2011г.

Ученый секретарь диссертационного совета Кандидат биологических наук, доцент Саврова Ольга Борисовна Список сокращений:

АРД – аномалии родовой деятельности СРД – слабость родовой деятельности ДРД – дискоординация родовой ФРД – физиологическая родовая деятельности деятельность НМС – нижний маточный сегмент ГМК – гладкомышечные клетки

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. До настоящего времени известно, что преобладающим компонентом миометрия, как интактной (не беременной), так и беременной матки, являются гладкие мышцы. При этом недооценивается роль соединительной ткани в развитии аномалий родовой деятельности (АРД), как крайней степени проявления функциональной недостаточности миометрия в родах [Маликов, 1952; Савицкий и соавт., 2003; Подтетенев, 2003]. По наблюдениям последних десятилетий нет тенденции к снижению частоты возникновения АРД, этиология и патогенез которых до сих пор малоизученны. АРД, как осложнения родового акта, являются одной из причин экстренного оперативного родоразрешения, провоцируют неблагоприятный исход родов для матери и плода, могут быть причиной различных осложнений раннего послеродового периода [Сидорова, Оноприенко, 1987; Дуда, 1989;

Раскуратов, 1995; Асатова, Гафарова, 1999; Подтетенев и соавт., 2004; Айламазян, 2005; Савицкий, 2005; Мальцева, Зефирова, 2006; Савельева, 2008]. Остаются малоизученными механизмы физиологической и патологической родовой схватки.

Все это связано с тем, что работы, посвященные комплексной количественной оценке морфологии миометрия женщин в родах при разных видах родовой деятельности, в доступной литературе малочисленны, а их результаты противоречивы [Рудюк и соавт., 1975; Введенский, 1990; Моммадов, 1995; Зайченко, 1997; Братчикова и соавт., 2004; Грудкин, 2004; Забозлаев и соавт., 2006, 2008; Бородашкин, 2007].

Фундаментальные знания по морфологии миометрия женщин при нормальных и аномальных родах, а также на поздних сроках беременности позволят клиницистам улучшить тактику ведения родов и их исход. Согласно статистике АРД наиболее часто (в 70-80% случаев), развиваются у первородящих, соматически здоровых женщин [Михайленко, 1978; Старостина, Голощапова, 1988; Газазян, 1998], при этом чаще всего встречается слабость родовой деятельности (СРД), а менее изученной и сложной для диагностирования и лечения является дискоординация родовой деятельности (ДРД).

Наиболее доступным отделом матки для получения материала является область нижней ее трети – нижний маточный сегмент (НМС), или место оперативного доступа при кесаревом сечении. Многие авторы отводят НМС немаловажную роль в родовом процессе [Кременцов, 1965; Красильникова, 1972; Персианинов и соавт., 1975; Дрампян, 1985; Абрамян и соавт., 2005]. Учитывая, что между структурой миометрия и характером родовой деятельности есть тесная связь [Кох, Биссе, 1993;

Воскресенский, 1996] в настоящей работе количественно оценили миометрий, как основной морфологический субстрат, отвечающий за маточные сокращения и родовую деятельность в целом. Выявили особенности миометрия, которые могут обусловливать развитие различных, по характеру маточных сокращений, клинических вариантов родовой деятельности.

Цель исследования: Методом качественного и количественного светооптического анализа изучить тканевой состав и клеточные компоненты миометрия матки женщин разных возрастов при нормальных и патологических родах.

Задачи исследования:

1. Оценить количественно тканевой и клеточный состав миометрия матки первородящих женщин при физиологической (нормальной) родовой деятельности.

2. Оценить количественно тканевой и клеточный состав миометрия матки первородящих женщин в родах при аномалиях родовой деятельности (при дискоординации и слабости).

3. Определить плотность распределения гладких миоцитов и плотность капилляров в расчете на 1 мм площади ткани в миометрии матки рожениц при трех вариантах родовой деятельности (физиологической, дискоординированной и слабой).

4. Оценить диаметры гладких миоцитов разных типов и диаметры капилляров в миометрии матки рожениц при трех вариантах родовой деятельности (физиологической, дискоординированной и слабой).

5. Выявить наличие возрастных преобразований морфологии миометрия первородящих женщин и оценить их количественно с позиций межгруппового сравнительного анализа.

Научная новизна. В работе проведена комплексная количественная оценка всех гистологических структур выявленных на светооптическом уровне в биопсийном материале миометрия матки женщин, находящихся в родах при нормальной и аномальной родовой деятельности. Впервые на примере миометрия матки женщин с различными видами родовой деятельности отразили в числовом эквиваленте:

плотность капилляров и гладкомышечных клеток (ГМК), процентные соотношения тканевых компонентов и разных типов ГМК, диаметры капилляров и ГМК.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты настоящего исследования актуальны как для морфологии человека, так и для акушерства и гинекологии, т.к.

аномалии родовой деятельности (АРД) являются одной из основных причин экстренного оперативного родоразрешения, а этиология и патогенез данного осложнения мало изучены. Схема морфометрического анализа миометрия рожениц примененная в исследовании может быть использована как алгоритм, а результаты, полученные нами, можно рассматривать как базовые для сравнительного анализа в последующем изучении морфологии миометрия при других осложнениях родового акта (например, вторичная слабость родовой деятельности, аномалии родовой деятельности у повторнородящих женщин, стремительные роды, атония и гипотония матки в раннем послеродовом периоде).

1. Гладкомышечный компонент миометрия гетероморфен и независимо от вида родовой деятельности и возраста рожениц в родах представлен тремя типами миоцитов, которые на светооптическом уровне определяются как светлые, промежуточные, темные, а их соотношение индивидуально для каждой роженицы.

2. Клеточный состав гладкомышечного компонента миометрия и плотность распределения гладких миоцитов в единице площади ткани имеет ряд количественных межгрупповых различий в соответствии с характером родовой деятельности и возрастом рожениц.

3. Особенностью миометрия матки рожениц с разными видами родовой деятельности является схожая морфологическая картина характера кровоснабжения, а именно отсутствие значимых различий в диаметрах кровеносных капилляров и плотности их распределения.

Апробация: результаты исследования доложены и обсуждены: на Пироговской студенческой научной конференции (Москва, 2005); на VII Российском форуме «Мать и дитя» (Москва, 2005); на 19 научном совещании гистологов «Актуальные проблемы учения о тканях» (Санкт-Петербург, 2006); на международной научнопрактической конференции «Проблемы современной морфологии человека», посвященной 75-летию со дня рождения проф. Б.А. Никитюка (Москва, 2008); на научно-практической конференции с международным участием, посвященной 85летию со дня рождения профессора П.Ф. Степанова (Смоленск, 2009); на юбилейной международной конференции РАЕ «Наука и образование в современной России»

(Москва, 2010).

Публикации: по материалам исследования опубликована 21 научная работа, в том числе в журналах рекомендуемых ВАК РФ 7 публикаций.

Структура и объем диссертации: материал изложен на 175 страницах машинописного текста и включает введение (в котором представлены цель и задачи исследования) и 4 главы: обзор литературы, описание материалов и методов исследования, главу результаты исследования, в которой выделено самостоятельных подразделов, обсуждение полученных результатов исследования;

заключение, выводы и практические рекомендации. Список литературы включает источников, из них 131 работа отечественных авторов и 64 – зарубежных.

Диссертация иллюстрирована 1 схемой, 1 диаграммой, 12 рисунками (фото) и таблицами.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Изучили интраоперационный биопсийный материал. Образцы миометрия первородящих женщин с 3 клиническими видами спонтанно развившейся родовой деятельности (возраст 20-38 лет, срок беременности 37-40 недель) получили с диагностической целью в ходе операции кесарево сечение, выполненной по показаниям со стороны матери или плода: из-за преждевременной частичной отслойки нормально расположенной плаценты, клинически узкого таза матери, острой гипоксии плода, стойкого отсутствия положительного эффекта от проводимой коррекционной терапии АРД. Было 5 рожениц с физиологической (нормальной) родовой деятельностью – ФРД (возраст 21-38 лет), 6 рожениц – с дискоординированной родовой деятельностью – ДРД (возраст 20-31 лет), 6 рожениц – со слабой родовой деятельностью – СРД (возраст 26-36 лет) 1. Биологический материал разделили на 2 группы – основную и группу условного сравнения (табл.1).

В соответствии с видом родовой деятельности весь биопсийный материал основной группы разделили на три подгруппы.

_ Данный материал накоплен в лаборатории нейроморфологии с группой электронной микроскопии ИКК им. А.Л. Мясникова РКНПК Росмедтехнологий РФ (Москва) за период с 2003г. по 2005г. Автор выражает благодарность доценту Подтетеневу А.Д. и коллективу кафедры акушерства и гинекологии ЛФ за оказанное содействие в ходе формирования групп исследования. На стадии проектирования научно-исследовательской работы материалы и методы, заявленные в исследовании, прошли этическую экспертизу и были одобрены Этическим Комитетом ГОУ ВПО РГМУ Росздрава, Москва (председатель: академик РАМН, профессор Г.И. Сторожаков).

Таблица 1. Систематизация биопсийного материала.

Группа Подгруппа в соответствии с диагнозом Число женщин Основная ДРД – беременные с дискоординированной родовой II. Группа сравнения Условно в группу контроля включили биопсийный материал от рожениц с клиникой ФРД, а в группу сравнения – материал от беременных женщин вне родов и небеременной женщины. Сведения о роженицах, характере родов и их исходах получены при анализе историй родов, протоколов сопровождения биопсийного материала. Участок стенки матки размером 0,5 1 1 см иссекали через всю толщу мышечной оболочки, периметрий маркировали ниткой. Биоптаты промывали 0,1 М фосфатным буфером (рН=7,4), частично иссекали 4 надрезами, что позволяло проводить операционную биопсию одним блоком и улучшало условия фиксации, дегидратации и пропитки ткани в эпоксидных смолах. Помещали в 4% раствор параформальдегида на несколько суток в холодильник (t=4С ). Образцы промывали порциями охлажденного 0,1 М фосфатного буфера (рН=7,4) по 30 минут и помещали на 2 часа в 1% раствор четырехокиси осмия. Затем материал отмывали от фиксатора в 2 порциях 0,1 М фосфатного буфера по 30 минут в каждой и помещали на ночь в этанол (t=4С ). Последующие процедуры дегидратации в батарее спиртов возрастающей концентрации (80, 96 и 100 ) шли при комнатной температуре по минут в каждой из двух порций для каждой концентрации. Последовательно с экспозицией в 1 час материал помещали в смесь 100 этанол-окись пропилена (1:1), в окись пропилена и в смесь окись пропилена – полный аралдит (1:1), а затем оставляли блоки на ночь в полной смеси аралдита [Pavlovich, Chervova, 1983]. В целом проводили материал в течение 3 дней. Каждый кусок разрезали на 6 пластин, которые помещали в эпоксидную смолу в нитроцеллюлозные центрифужные пробирки, диаметром 1 см (Beckmann, USA). Смолу полимеризовали 2 дня в термостате при t=65С. Получали для каждого случая 6 макроблоков смолы, в основаниях которых последовательно располагался весь материал биопсии. С блоков на микротоме Historange (ЛКБ, Швеция) получали серию полутонких срезов толщиной 1-2 мкм, окрашивали их толуидиновым синим, согласно описанию [Павлович, 1988; Червова, Павлович, 1981]. Данный краситель выбран с учетом специфики приготовления гистологических препаратов (для тканей, заключенных в эпоксидную смолу – аралдит). Световую микроскопию осуществляли на лабораторном микроскопе МБИ-15 (окуляр 10, объектив 16, дополнительная линза 2,5), укомплектованном окулярной морфометрической квадратно-сетчатой тестовой системой. Оцененные параметры обрабатывали статистически, результаты представляли в виде среднего арифметического и его ошибки (X Sх). Статистическая достоверность результатов оценивалась в соответствии с t-критерием Стьюдента или