на правах рукописи

Дубцова Елена Анатольевна

КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ

ПРИМЕНЕНИЯ ПРОДУКТОВ ПЧЕЛОВОДСТВА В КОМПЛЕКСНОЙ

ТЕРАПИИ

НЕКОТОРЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ОРГАНОВ ПИЩЕВАРЕНИЯ

14.00.05 – внутренние болезни

14.00.16 – патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва 2009

Работа выполнена в Центральном научно-исследовательском институте гастроэнтерологии ДЗ г.Москвы (директор – д.м.н., профессор Л.Б.Лазебник).

Научные консультанты:

Доктор медицинских наук Касьяненко В.И..

Доктор медицинских наук Белостоцкий Н.И.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Ткаченко Е.И.

доктор медицинских наук, профессор Звенигородская Ф.А.

доктор медицинских наук, профессор Эттингер А.П.

Ведущая организация ГОУ ДПО Российская медицинская академия постдипломного образования.

Защита состоится 18 сентября 2009г. в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 850.002.01 при Центральном научноисследовательском институте гастроэнтерологии по адресу: 111123, Москва, шоссе Энтузиастов, 86.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ЦНИИГ Автореферат разослан «»_2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор Комиссаренко И.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы Из-за побочных эффектов химических медикаментов человек вернулся к натуральным лечебным препаратам. После долгого испытания продукты пчеловодства занимают одно из ведущих мест среди натуральных средств лечения (Жин Ж. И соавт.,1993). К ним относятся мед, пыльца, перга, прополис, маточное молочко, воск, пчелиный яд и другие. Особенностью продуктов пчеловодства является высокая концентрация органических и неорганических веществ.

Механизм лечебного действия пчелиных продуктов невозможно полностью объяснить вследствие сложности и многообразия их состава. Они имеют ряд преимуществ: безвредность и возможность использования без дополнительной переработки; универсальность действия и возможность комплексного использования; быстрота действия, простота и надежность в применении без побочных эффектов; использование для питания, лечения и профилактики заболеваний; возможность длительного хранения в обычных условиях (без холодильников, консервации и стерилизации); дешевизна и доступность.

Многовековой опыт и научные исследования показали широкий спектр биологического действия на организм человека ферментов, микроэлементов, витаминов, входящих в состав продуктов пчеловодства (Бирюля В.П.,2000 г.). В работах различных авторов (Младенов С., 1969, Ногаллер А.М. и соавт., 1987, Вахонина Т.В., 2002) имеются указания об улучшении ферментативной деятельности, секреторной и моторной функций желудочно-кишечного тракта. Также встречаются публикации, показывающие общеукрепляющее, гепатопротекторное, дезинтоксикационное, консервирующее, регенерирующее действие меда (Младенов С., 1969, Лудянский Э.А.,1994). Однако эти утверждения носят преимущественно описательный характер, результаты основаны на наблюдениях и не имеют клинического и экспериментального подтверждения.

Немало работ посвящено антимикробному (Кивалкина В.П. и соавт., 1962, Валье М.Л., 2000), антимикозному (Кендзия Б. и соавт., 1987, Грашкин В.А. и соавт., 2002) и антивирусному (Асфандиярова Н.С., 1984, Грашкин В.А. и соавт., 2002) действию прополиса. Его используют в лечении язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки как болеутоляющее и трофогрануляционное средство (Шкендеров С. и соавт., 1985).

Описан ряд биологических свойств пыльцы и перги: анаболическое, антиатеросклеротическое, антиоксидантное, регенерирующее, антимикробное, иммуностимулирующее и другие (Астраусскене А.Э. и соавт., 1991, Вахонина Т.В. и соавт., 1979, Ващенко Т.И. и соавт., 1988, Георгиева Е и соавт., 1975, Горобец А.В. и соавт., 1982, Еремия Н.Г., 1988, Чекстерите В.В, 1988).

Богатый химический состав имеет маточное молочко. Его используют в лечении язвенной болезни (Гончаренко В.Ф., 2004, Ногаллер А.М. и соавт., 1987), анемии (Кусима С., 1985, Орлов Б.Н. и соавт., 2004, Echigo N. et al., 1986), болезней органов дыхания (Кусима С., 1985) и других систем и органов (Курякин В.В. и соавт., 1998, Притулина Е.Е. и соавт., 2000), применяют как биологически активную добавку к пище в качестве профилактического, иммуномодулирующего средства, а также после тяжелых заболеваний и в геронтологии (Воробьев Л.П. и соавт., 2004, Сокольский С.С., 2002). Однако описанные эффекты не всегда убедительны.

Таким образом, в литературе по апитерапии имеются ссылки на эффективность применения продуктов пчеловодства при лечении различных заболеваний органов пищеварения. Но все результаты, как правило, сводятся лишь к констатации факта благоприятного влияния на функциональное состояние пищеварительной системы (Балтушкявичус А.И. и соавт., 1983 г.;

Лудянский Э. А., 1994 г., Ногаллер А.М. и соавт., 1987 и др.). Достоверные, основанные на современных методах исследований, сведения в литературе отсутствуют. Этот факт послужил основой для проведения нашего исследования.

На основании клинических и экспериментальных исследований доказать эффективность включения продуктов пчеловодства в комплексную терапию заболеваний органов пищеварения.

Проанализировать влияние водного раствора меда различных температур на кислотообразующую функцию желудка по результатам двухчасовой компьютерной рНметрии.

Определить влияние продуктов пчеловодства на процессы репарации слизистой оболочки желудка у Проанализировать влияние продуктов пчеловодства на уровень рН желудочного сока у экспериментальных Определить чувствительность Helicobacter pylori к прополису в лабораторных условиях на основе минимальной бактерицидной концентрации прополиса экспериментальных и клинических данных определить место прополиса в схемах антихеликобактерной терапии.

Выявить влияние меда на скорость капиллярного кровообращения по результатам капилляроскопии.

Показать эффективность применения меда при нарушении сна у больных язвенной болезнью.

Определить влияние маточного молочка на изменения уровня цитокинов в крови при обострении язвенной болезни двенадцатиперстной кишки.

пчеловодства в лечении заболеваний желчного пузыря, связанных с нарушением его моторной функции.

инструментальных и экспериментальных исследований, доказана эффективность применения продуктов пчеловодства в лечении язвенной болезни, хронического гастрита и хронического холецистита.

Установлен кислотоингибирующий эффект «теплого» раствора меда при повышенном кислотообразовании и кислотостимулирующий эффект «холодного» раствора меда при сниженном кислотообразовании.

В эксперименте установлено снижение уровня кислотности желудочного сока крыс с ацетатной язвой на фоне применения меда, маточного молочка и прополиса. При этом на седьмые сутки с момента инициации язвенного процесса зафиксирована меньшая площадь поражения при воздействии этих продуктов пчеловодства, в сравнении с самостоятельно заживающими язвами.

Впервые выявлено антихеликобактерное действие прополиса in vitro, определена минимальная ингибирующая и минимальная бактерицидная концентрации. Определен уровень эрадикации при применении 30%-ного водного экстракта прополиса у больных с Hpассоциированной патологией желудка и двенадцатитиперстной кишки.

По результатам проведенной капилляроскопии выявлено влияние меда на микроциркуляцию, установлено увеличение линейной и объемной скоростей капиллярного кровотока после его приема.

Выявлено лечебное действие меда, проявляющееся в нормализации функции сна у больных язвенной болезнью.

Впервые отмечено, что маточное молочко, включенное в лечение дополнительно к антихеликобактерной и кислотоснижающей терапии при обострении язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, способствует увеличению выработки противовоспалительного интерлейкина-4, что свидетельствует о более интенсивном иммунном ответе и активации процессов репарации.

Впервые проведено сравнение действия меда и других желчегонных завтраков на сократительную функцию желчного пузыря и установлено, что и «теплый» и «холодный» растворы меда обладают желчегонным действием. При этом эффект «холодного» раствора несколько выше эффекта «теплого» раствора и по степени выраженности приближается к желчегонному действию бутерброда с маслом и сыром.

Впервые показано, что перга улучшает сократительную функцию желчного пузыря, нормализует изначально сниженный коэффициент опорожнения и способствует исчезновению взвеси в желчном пузыре и восстановлению однородности желчи.

Впервые проведено определение биологического возраста пчеловодов, как лиц, постоянно употребляющих продукты пчеловодства.

Установлено, что большинство пчеловодов имеет биологический возраст ниже среднепопуляционного, что свидетельствует о геропротекторных свойствах продуктов пчеловодства.

Результаты проведенного исследования позволяют заключить, что применение меда, маточного молочка, перги и прополиса в лечении хронического гастрита, язвенной болезни и хронического холецистита являют собой новое научно-практическое направление в гастроэнтерологии, способствующее повышению эффективности комплексной терапии, а, в ряде случаев, замене химиопрепаратов продуктами пчеловодства.

Проведенное исследование способствует повышению эффективности лечения заболеваний органов пищеварения с применением натуральных, доступных, нетоксичных продуктов пчеловодства. Они могут применяться как самостоятельно, так и в комплексе с общепринятыми химиопрепаратами, в зависимости от заболевания и индивидуальных особенностей больного. Продукты пчеловодства обладают менее выраженным, чем химиопрепараты, но полиорганным действием и практически не имеют побочных эффектов.

Научное обоснование применения продуктов пчеловодства в клинике позволяет использовать полученные результаты в практическом здравоохранении.

Основные положения, выносимые на защиту Теплый раствор меда обладает кислотоингибирующим эффектом у больных с повышенной кислотообразующей функцией желудка.

Холодный раствор меда обладает кислотостимулирующим эффектом у больных со сниженной кислотообразующей функцией желудка.

Темпы заживления экспериментальных ацетатных язв увеличиваются при воздействии меда, маточного молочка и прополиса.

Прополис обладает антихеликобактерным эффектом и может применяться в лечении больных, страдающих Нр-ассоциированными заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки.

Прием меда способствует увеличению линейной и объемной скорости капиллярного кровотока.

Вечерний прием меда способствует снижению пресомнических, интрасомнических и постсомнических расстройств у больных язвенной болезнью.

Применение маточного молочка способствует усилению иммунного противовоспалительных интерлейкинов.

Мед и перга способствуют улучшению сократительной функции дисфункциональных расстройств билиарного тракта.

Мед является геропротектором.

Материалы диссертации доложены на Пленуме правления научного общества гастроэнтерологов России и ХХХ сессии ЦНИИГ (Москва, 2003 г.);

IV, V, VI, VII, VIII съездах научного общества гастроэнтерологов России (Москва 2004, 2005, 2006, 2007, 2008 гг.); VII Международном СлавяноБалтийском научном форуме «Санкт-Петербург-Гастро-2005» (СанктПетербург, 2005) и VIII Славяно-Балтийском научном форуме «СанктПетербург-Гастро-2006» (Санкт-Петербург, 2006); на четвертой, пятой, шестой и седьмой московских ассамблеях «Здоровье столицы» (Москва, 2005, 2006, 2007, 2008); на IV конференции с международным участием «Проблемы качества жизни в здравоохранении» (Лара, Турция, 2006), Международной научной конференции «Человек, питание, здоровье» (Тверь 2006), 6 Международной конференции «Фитотерапия, биологически активные вещества естественного происхождения в современной медицине»

(Черноголовка 2006); XII и XIII Всероссийских конференциях «Успехи апитерапии» (Рязань, 2006, Адлер, 2007); I всероссийской конференции, посвященная проблемам женского здоровья (Москва, 2007); XII и XIII Международных научно-практических конференциях «Пожилой больной.

Качество жизни» (Москва, 2007, 2008); V Всероссийской научнопрактической конференции "Общество, государство и медицина для пожилых" ( Москва, 2008); XXI Международном форуме по изучению H.Pillory (Рига, 2008). Апробация работы проведена на заседании Ученого совета Центрального научно-исследовательского института гастроэнтерологии 5.05.2009 г.

Материалы диссертации изложены в 32 печатных работах, из них 31 – в российских и 1 – в зарубежном журналах, получено 2 патента на изобретение.

Диссертация изложена на 169 страницах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, трех глав результатов собственных исследований, заключения, выводов и практических рекомендаций. Текст иллюстрирован 31 рисунком и таблицами.

Список литературы включает 246 источников, из них отечественных и 64 зарубежных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

I. Материал и методы, используемые в клинической части Для решения поставленных задач нами было обследовано человек, из которых 411 больных и 407 – считающих себя здоровыми на момент обследования. Из числа больных – 7 страдающих язвенной болезнью желудка, 192 – язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки в фазе обострения, 103 – хроническим гастритом, 41 – сочетание хронического гастрита и хронического холецистита и 68 – заболеваниями желчного пузыря (хронический холецистит, холестероз, дискинезия желчного пузыря). Из них 206 мужчин и 205 женщин в возрасте от 20 до 78 лет. Из числа «здоровых» мужчин и 195 женщин в возрасте от 18 до 70 лет, из которых пчеловода и 105 рабочих завода.

В работе были использованы следующие методы обследования.

1. Клиническое обследование включало расспрос больных для выяснения жалоб и анамнеза заболевания и объективный осмотр.

Клинический и биохимический анализы крови проводились в рамках общеклинического обследования.

2. Всем больным проводилась эзофагогастродуоденоскопия (ЭГДС) при помощи гибких эндофиброскопов OLYMPUS с биопсией из антрального и фундального отделов желудка с целью определения Helicobacter pylori (Hp).

3. Helicobacter pylori определялся до лечения и спустя месяц после окончания лечения следующими методами: 1) быстрый уреазный тест: Biohit Helicobacter pylori Quik Test; 2) гистологическое исследование – при помощи световой микроскопии; 3) цитологическое исследование; 4) определение суммарных антител (IgM+IgG+IgA) к рекомбинантному CagA в сыворотке крови иммуноферментным методом проводилось с применением тестсистем «Вектор-Бест» (Новосибирск); 5) ПЦР-диагностика Hp в кале.

4. Изучение кислотообразующей функции желудка (КФЖ) проводилось с помощью двухчасовой внутрижелудочной рН-метрии на компьютерной системе «Гастроскан-5». В течение 20 минут определяли базальную кислотность. Через 20 минут от начала исследования, в зависимости от определенной предварительно базальной кислотности, больные получали теплый или холодный растворы меда. При гиперацидных состояниях больные получали теплый 30%-ный раствор меда (t=33-35°C). При анацидных и гипоацидных состояниях больные получали холодный 30%-ный раствор меда (t=13-15°C). После чего регистрировали время начала ответа (время от момента введения раствора меда до начала повышения или понижения рН), щелочное время или время стимуляции КФЖ (продолжительность действия раствора меда – время от начала повышения или понижения рН до возвращения к исходному уровню, t) и время максимального повышения или понижения рН в теле или в антральном отделе желудка (tmax).

5. Трансабдоминальная ультрасонография проводилась по стандартной методике с помощью УЗ цифрового сканера EUB–405 plus HITACHI (Япония) с использованием конвексного датчика с частотой 3,5 МГц в В-режиме в утренние часы натощак и через 40-60 минут после приема желчегонного завтрака. Оценивались исходный и конечный объемы желчного пузыря. Для определения коэффициента опорожнения (КО) сначала измеряли исходный объем желчного пузыря (V0). Расчет исходного объема (V0) проводили по формуле:V = 8 х S02 / 3 х х d0 (мл), где S0–исходная площадь изображения желчного пузыря в см, d0–исходная длина желчного пузыря в см, коэффициент =3,14. Через 40 минут и через 1 час после приема желчегонного завтрака определяли конечный объем желчного пузыря (V). При оценке КО учитывали наибольший из полученных показателей V=V0-V, который выражали в процентах от исходного объема (V0): КО = 100 х (V0-V) / V0. Расчет КО после желчегонного завтрака проводили по формуле: КО = 100 - 100 х S2 х d0 / S02 х d (%), где S–площадь изображения желчного пузыря после желчегонного завтрака в см, d–длина желчного пузыря после желчегонного завтрака в см. Показатели S0, S, d0, d вычислялись автоматически при цифровой обработке изображения желчного пузыря встроенным в эхосканер процессором.

Капиллярная гемодинамика исследовалась при помощи светового капилляроскопа с 400-кратным увеличением. Исследовались капилляры эпонихия верхних конечностей. Оценивались диаметры артериального, переходного и венозного отделов. Расчет линейной скорости капиллярного кровотока производился в автоматическом режиме, благодаря присоединенному к капилляроскопу процессору.

Объемная скорость кровотока рассчитывалась также автоматически, исходя из линейной скорости и диаметра капилляра.

Цитокины в сыворотке крови определяли иммуноферментным методом с использованием тест-систем ООО «Протеиновый контур»

и «Цитокин» (Санкт-Петербург).

Оценка качества сна определялась по результатам опросника Шпигеля.

Для определения темпов старения и прогноза долголетия пчеловодов мы использовали понятие биологического возраста, который отображает темпы старения человека. Биологический возраст определялся по формуле Войтенко В.П. (1996 г.) отдельно для мужчин и женщин: БВмужчин = 26.985 + 0.215ЧСАД – 0.149ЧЗДВ – 0.151ЧСБ + 0.723ЧСОЗ и БВженщин = –1.463 + 0.415ЧПАД – 0.140ЧСБ + 0.248ЧМТ + 0.694ЧСОЗ, где САД – систолическое АД, ПАД – пульсовое АД, ЗДВ – задержка дыхания на выдохе, СБ – статическое балансирование (время стояния на левой ноге с закрытыми глазами), СОЗ – субъективная оценка здоровья в баллах (по 10-бальной шкале), МТ – масса тела. Должный биологический возраст определялся также по формуле Войтенко В.П. (1996 г.), исходя из календарного биологического возраста, отдельно для мужчин и женщин: ДБВмужчин = 0.629ЧКВ + 18.56 и ДБВженщин = 0.581ЧКВ + 17.24, где КВ – календарный возраст.

II. Материал и методы, используемые в эксперименте.

1. С целью определения влияния продуктов пчеловодства на темпы заживления экспериментальных язв проведены опыты на 100 крысах самцах породы «Вистар» с массой тела 250-300 г. Ацетатная язва воспроизводилась по методу Окабе аппликацией уксусной кислоты на серозную оболочку передней стенки желудка в течение 60 секунд. Продукты пчеловодства вводились в растворе ежедневно однократно внутрижелудочно в объеме 1 мл в течение 7 дней с момента инициации ацетатной язвы. Мед вводился из расчета 1,5 г/кг массы тела (МТ), маточное молочко – 10 мг/кг МТ, прополис – 1,0 мл 10% водного экстракта. Крысам контрольной группы в желудок вводился 1,0 мл дистиллированной воды. После усыпления животных (на седьмые сутки) проводилась оценка величины площади повреждения в мм2.

В желудочном смыве подопытных животных проводилось определение рН при доведении объема смыва до постоянной величины 3,0 мл. Измерения проводились с использованием рН-метра HANNA-9024.

2. С целью проведения исследования антихеликобактерной активности прополиса in vitro был стандартизирован протокол приготовления 30%-ного водного экстракта прополиса в лабораторных условиях, полученного выдержкой измельченного прополиса на водяной бане в течение 60 мин., при постоянном помешивании. Полученный раствор фильтровали через бумажный фильтр и выпаривали на роторном испарителе.

Концентрация сухого вещества в растворе, полученном от разных экстракций, составила от 1,7% до 2,1%. Работа выполнялась на трех штаммах Helicobacter pylori: двух лабораторных (26695 и J99 с известной нуклеотидной последовательностью геномов) и одном клиническом изоляте, выделенном от больного хроническим хеликобактерным гастритом.

Минимальную ингибирующую концентрацию прополиса определяли методом серийных разведений: суточную культуру Helicobacter pylori (~ кое инокулята) засевали в 1мл жидкой питательной среды, содержащей различные концентрации прополиса, и инкубировали при 37оС в атмосфере 5%СО2. Рост культуры оценивали через двое суток.

Статистическая обработка полученных данных проводилась методом вариационной статистики на персональном компьютере в Microsoft Excelи с использованием компьютерной программы «Statistic 7.0»

Качественные показатели отображались в абсолютных значениях с указанием частоты встречаемости в %. Количественные показатели представлены в виде среднего значения и стандартного отклонения. Достоверность различий средних величин сравниваемых показателей оценивали по критерию t