9) 157 пациентов (в возрасте от 18 до 50 лет) с урогенитальными заболеваниями (хламидиоз, уреаплазмоз, гарднереллез). Диагноз хламидиоз был подтвержден методом “золотой стандарт” в культуре клеток, уреаплазмоз – методом ИФА и РИФ, гарднереллез – бактериологическим методом. Обследование пациентов проводили на базе МОНИКИ.

10) 100 больных с СР после лечения сифилиса (в возрасте от 20 до 65 лет) до лечения и в течение 1 - 2 лет в процессе терапии, проводимой в соответствии с методическими рекомендациями по лечению и профилактике сифилиса (1999). Длительность заболевания составляла от 2 до 6 лет. Дополнительно к принятой схеме нами проводилось лечение цефтриаксоном (цефалоспориновый препарат III поколения) по 2 г внутримышечно ежедневно в течение 7 дней. Одновременно назначался курс иммуномодулирующей терапии (по общей схеме в течение месяца) в зависимости от индивидуальной чувствительности к иммуномодулятору (неовир, амиксин, полиоксидоний, гепон), и биоантиоксидант диквертин. Антибиотик назначался, начиная со второй инъекции иммуномодулирующего препарата. Иммунный и ИФН статусы исследовали в динамике у каждой группы больных с СР до лечения, через 2 месяца после начала лечения и через год. Лечение пациентов проводили на базе кафедры кожных и венерических болезней лечебного факультета РГМУ МЗ РФ и КВКД №1 КЗ г.Москвы.

Оценка клинического состояния больных в процессе лечения проводилась врачами в соответствующих лечебных учреждениях.

Определение иммунного статуса Показатели клеточного иммунитета определяли в соответствии с принципами, разработанными Р.В. Петровым с соавт. (1999 г.), включающими тесты I и II уровня и рекомендованными Минздравом СССР. Полученные результаты соотносили с общепринятыми физиологическими нормами, установленными ГНЦ - Институтом иммунологии МЗ РФ и одобренными Минздравом РФ (Г.Фримель, 1989 г.).

В тестах I уровня определяли:

общее содержание лейкоцитов в периферической крови:

процентное и абсолютное содержание лимфоцитов;

уровень сывороточных иммуноглобулинов классов A, M, G в сыворотке крови.

В тестах II уровня определяли:

относительное содержание отдельных субпопуляций лимфоцитов;

абсолютное содержание отдельных субпопуляций лимфоцитов;

иммунорегуляторный индекс;

концентрацию IgE в сыворотке крови.

Лимфоциты выделяли из свежей гепаринизированной венозной крови и использовали в дальнейшем исследовании. Субпопуляции лимфоцитов анализировали по специфическому мембранному свечению в ультрафиолетовом свете с помощью люминесцентного микроскопа МБИ-15-2 (НПО «ЛОМО», г. С.-Петербург). Относительное содержание лимфоцитов, экспрессирующих различные дифференцировочные антигены (процент светящихся лимфоцитов), учитывали на проточном цитофлуориметре FACScan (Becton Dickinson США). Уровень сывороточных иммуноглобулинов в сыворотке крови определяли методом радиальной иммунодиффузии по Манчини с использованием тестсистем, разработанных в ГНЦ РФ - Институте иммунологии. IgE в сыворотке крови определяли методом полуколичественного иммуноферментного анализа.

Определение ИФН статуса и чувствительности к препаратам Исследовали следующие показатели:

1) продукция ИФН-, индуцируемая вирусом болезни Ньюкасла (ВБН);

2) продукция ИФН-, индуцируемая стандартным митогеном (стафилококковый энтеротоксин А - СЭА, фитогемагглютинин - ФГА, конканавалин А - КонА).;

3) уровень циркулирующего ИФН в плазме крови;

4) уровень спонтанно продуцируемого клетками крови ИФН;

5) уровень чувствительности к препаратам ИФН- (с использованием прайминг-эффекта).

Пациента считали чувствительным к ИФН-, если клетки его крови отвечали увеличением ВБН-индуцируемой продукцией ИФН при праймировании хотя бы одним из шести препаратов ИФН-: человеческий лейкоцитарный ИФН (ЧЛИ), лейкинферон, реаферон, реальдирон, интрон А, роферон А.

6) уровень чувствительности к препарату ИФН- - гаммаферону (с использованием прайминг-эффекта);

7) уровень чувствительности к индукторам ИФН - ридостину, циклоферону, амиксину и др. Пациента считали чувствительным к индукторам ИФН, если клетки его крови продуцировали ИФН при действии хотя бы одного из препаратов.

8) ИФН-ингибирующая активность или ИФН-стимулирующая активность плазмы или сыворотки крови.

Определение проводили в 96-луночных круглодонных планшетах, в которые вносили кровь, разведенную в 10 раз средой RPMI-1640 (с глютамином и антибиотиками) в трех повторах. В определенной последовательности вносили препараты ИФН-, ИФН-, ИФН- и индукторы ИФН, ВБН и один из стандартных митогенов (СЭА, ФГА, или КонА).

Планшеты инкубировали 24-48 часов в СО2-инкубаторе при 37°С. Оставшуюся кровь центрифугировали. Полученную плазму крови тестировали на присутствие циркулирующего ИФН, наличие ИФН-ингибирующей или ИФН-стимулирующей активности и на присутствие ряда цитокинов.

Определение активности ИФН Титрование ИФН проводили в 96-луночных плоскодонных планшетах с культурой диплоидных фибробластов человека, выращенных в ростовой среде до образования монослоя. В качестве индикаторного тест-вируса использовался вирус энцефаломиокардита мышей (ВЭМК). За единицу активности ИФН (Ед/мл) принималась величина, обратная его максимальному разведению, которое защищало 50% клеток от цитопатогенного действия 100 ТЦД50/мл вируса. В каждом титровании использовали также референс-препарат ИФН для перевода полученной активности ИФН в международные единицы (МЕ).

Определение ИФН-ингибирующей (ИИС) или ИФН-стимулирующей (ИСС) способности Определение ИИС/ИСС плазмы крови проводили параллельно с титрованием референс-препарата ИФН. Для этого после титрования ИФН в те же лунки добавлялась плазма крови, разведенная средой RPMI-1640 в отношении 1:4 (для предотвращения токсического воздействия плазмы крови на клетки в тест-системе). В зависимости от увеличения или подавления противовирусной активности референс-препарата ИФН делалось заключение о наличии ИИС или ИСС. Активность ИИС выражалась в интерферон-ингибирующих единицах (ИИЕ50/мл); активность ИСС выражалась в интерферон-стимулирующих единицах (ИСЕ50/мл).

Определение мРНК цитокинов Определение мРНК 11 цитокинов в мононуклеарах периферической крови (МПК) проводили с использованием методов обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР). Выделение РНК проводили по методике (Chomczynski P., Sacchi N., 1987) методом кислой гуанидин тиоцианат – фенол – хлороформ экстракции. Обратная транскрипция и ПЦР-амплификация были выполнены в соответствии с методикой, предложенной (С.М. Gelder, P.S Thomas, D. H. Yates et al., 1995). В работе были использованы пары праймеров для следующих цитокинов: ИФН- (С.М. Gelder, P.S Thomas, D. H. Yates et al, 1995), ИЛ-6, ИЛ-8 (Y. Lin, M. Zhang, P.F. Barnes, 1998), ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10 ФНО-, ИФН- (M. Yamamura, K. Uyemura, R. J. Deans et al., 1991), ИЛGaede KI, Mamat U, Schlaak M et al., 1999), ИЛ-12 (Thomas S. Harrison, Stuart M. Levitz, 1996). В качестве положительного контроля использовали – актин (Y. Lin, M. Zhang, P.F.

Barnes, 1998). Регистрацию результатов ПЦР осуществляли электрофоретически в 2,5% агарозном геле, окрашенным бромистым этидием. Для идентификации нуклеотидных последовательностей использовали маркер для электрофореза фирмы Promega (G 1758).

Определение количественного содержания цитокинов методом ИФА Количественное содержание цитокинов в плазме/сыворотке и пробах цельной крови, индуцированных исследуемыми цитокинами и индукторами ИФН с последующей индукцией стандартными индукторами ИФН или без нее, определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием коммерческих тест-систем («Протеиновый контур», С.-Петербург, Россия).

Статистическая обработка результатов исследования Статистическую обработку результатов оценки иммунного статуса проводили с использованием программы StatGraph (версия 4.3) на компьютере PC IBM 486.

Для выявления значимых различий в динамике ИФН статуса в пределах одной группы обследованных применяли парный критерий Уилкоксона. Определялось среднее арифметическое (М) и стандартное отклонение (m).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

количественные (методы первой ступени - определение в крови циркулирующего ИФН и уровней продукции спонтанного, вирус- и митоген-индуцированного интерферонов) и качественные (методы второй ступени - определение типов и кислотолабильности циркулирующего и спонтанно-продуцируемого ИФН).

Мы же предположили, что для более развернутой характеристики ИФН статуса, кроме определения уровней ИФН-продуцирующей способности клеток крови человека, необходимо охарактеризовать и ИФН-эффекторную функцию лейкоцитов периферической крови, т.е. определить уровень чувствительности клеток или организма человека к ИФНи ИФН-.

Для этого был разработан комплекс тестов с целью определения уровня клеточной чувствительности к ИФН, который использовался нами в дальнейшей работе для исследования вариабельности клеточной чувствительности к ИФН.

Предварительный анализ полученных данных показал, что среди здоровых и больных людей можно выделить следующие группы: 1.Чувствительные только к ИФН-;

2. Чувствительные только к ИФН-; 3.Чувствительные к ИФН- и -; 4.Резистентные к ИФН.

Отмечено, что среди здоровых людей преобладают чувствительные к обоим типам ИФН, резистентных к ИФН оказалось всего 7%.

У больных ВГС процентное соотношение в таких группах изменено и поэтому можно предположить, что это связано либо с изменением чувствительности к ИФН у больных гепатитом С, либо чаще гепатитом С болеют люди, чувствительные к обоим типам ИФН. Не исключено наличие обоих процессов.

При ИППП также происходит изменение чувствительности больных к интерферонам, и наиболее подвержены урогенитальным заболеваниям люди, резистентные к ИФН, а наименее - люди, чувствительные только к ИФН-.

При сравнении показателей ИФН статуса у здоровых добровольцев и больных вирусными и бактериальными заболеваниями отмечено, что продукция ИФН- подавлена у всех типов людей, кроме чувствительных к ИФН-. У всех типов обследованных также подавлена продукция ИФН-. Следует отметить появление у заболевших ИФНстимулирующей способности (ИСС) сыворотки крови в высоких титрах и отсутствие ИФН-ингибирующей способности ИИС сыворотки крови.

Таким образом, в результате проделанной работы было предложено понятие «расширенного ИФН статуса», в котором, кроме принятых ранее тестов, определяется чувствительность клеток крови к ИФН.

Полученные результаты легли в основу дальнейшего изучения роли ИФНчувствительности и ИФН-резистентности в развитии патологического процесса.

Чувствительность здоровых и больных людей к препаратам и индукторам ИФН- (ЧЛИ) ИФН- (6 препаратов) ИФН- (Гаммаферон) Чувствительные к ИФН- (6 препаратов), ИФНРезистентные к ИФНвсе препараты), ИФНЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К ИНДУКТОРАМ ИФН Циклоферон Ридостин Примечание: ИППП – инфекции передающиеся половым путем, ОВГС – острый вирусный гепатит С, РС – рассеянный склероз.

В таблице 1 представлены данные о чувствительности 100 здоровых добровольцев и больных с различными заболеваниями – ИППП (300 человек), ОВГС (300 человек), рассеянный склероз (30 человек) и пациенты с новообразованиями (100 обследованных).

Клетки крови больных ИППП и ОВГС в большинстве случаев отвечали продукцией ИФН только на препараты ИФН-, а также одновременно на препараты ИФН- и -.

Наибольший процент чувствительных только к ИФН- наблюдался среди больных ИППП.

А наибольший % резистентных к препаратам ИФН- и - выявлен у больных РС.

К индукторам ИФН циклоферону и ридостину в большинстве случаев оказались чувствительны здоровые добровольцы, больные РС и больные с новообразованиями.

При этом отмечено, что ИФН-чувствительность характеризуется высоким потенциалом восстановления до нормальных характеристик при выздоровлении. Таким образом, этот показатель является одним из ключевых параметров алгоритма слежения за функциональным состоянием организма в норме и при патологии.

На примере РС нами рассмотрены изменения чувствительности клеток крови пациентов к иммуномодуляторам в процессе лечения. Представленные в таблице 2 данные показывают, что в результате лечения чувствительность к препаратам ИФН- и ИФН-, т.е. ИФН-1 типа, снижалась, а к ИФН- - практически не изменялась. В целом, число больных, резистентных ко всем препаратам ИФН, возрастало. Параллельно число больных, чувствительных ко всем препаратам ИФН, снижалось.

Изменение чувствительности к препаратам и индукторам интерферона при

ПРЕПАРАТЫ

ИФН-, ИФНЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К ИНДУКТОРАМ ИФН

При этом отмечено, что у больных РС в процессе лечения продукция ИФН, синтезируемого их клетками крови под действием циклоферона и ридостина in vitro, практически не изменялась.

Полученные данные указывают на полигенный характер признаков чувствительности к ИФН и высокую лабильность ИФН-чувствительности в зависимости от клинической стадии заболевания.

Предложенные и апробированные подходы к первичной диагностике и характеристике ИФН-дефицита у больных РС позволили получить на клеточном уровне результаты, полностью соответствующие опыту клинического использования препаратов ИФН в комплексной иммунотерапии РС. Действительно, иммунологически опосредованные обострения, вызванные применением препаратов ИФН-; не подлежащая сегодня сомнению клиническая эффективность бетаферона; вариабельность чувствительности пациентов к лекарственным формам ИФН- – все эти клинические данные подтверждаются определенными клеточными реакциями и могут быть использованы для прайминга ЛПК больных медицинскими препаратами ИФН.

В дальнейшей работе мы предприняли попытку более глубокого изучения иммунной системы человека с использованием различных иммунологических методов исследования (иммунный, ИФН и цитокиновый статусы) для характеристики иммунных процессов, происходящих в организме, и выявления закономерностей формирования цитокиновой регуляторной сети в норме и при патологии.

Ранние цитокиновые реакции.

На начальном этапе развития острого инфекционного заболевания отмечается быстро развивающийся ответ организма на инфицирование, названный нами ранними цитокиновыми реакциями (РЦР). Практически сразу же после внедрения инфекционного агента наблюдается образование ИФН (главным образом ИФН-/), являющихся первым барьером для инфекции, которые активируют киллерный потенциал иммунной системы.

При этом локально в месте проникновения инфекционного агента осуществляются взаимосвязанные процессы такие, как ингибиция интерферонами репродукции возбудителя, удаление с помощью естественных киллерных клеток (ЕКК) инфицированного материала и защита вновь образованным ИФН окружающих незараженных клеток от возможного заражения. Эти реакции естественного иммунитета крайне важны, учитывая многократные встречи организма в течение жизни с различными возбудителями. Именно благодаря этим процессам в большинстве случаев предотвращается дальнейшая генерализация инфекции и болезнь не развивается.

Однако в некоторых случаях описанных эффектов ИФН оказывается недостаточно для предотвращения инфекционного процесса. Это наблюдается при сниженной сопротивляемости организма, дефектах системы ИФН, неблагоприятной экологической обстановке, стрессах и других причинах. В результате развивается острое или хроническое заболевание, и параллельно наблюдается продукция ранних цитокинов, активация CD4+ и CD8+ Т-клеток с последующим развитием Т- и В-клеточного ответа. Отмечается вариабельность РЦР при различных заболеваниях, и цитокиновый ответ может меняться в зависимости от проникающего в организм возбудителя. Важно подчеркнуть, что вырабатываемые при этом цитокины продуцируются практически всеми иммунокомпетентными клетками. Одним из самых ранних неспецифических ответов на инфекцию является продукция провоспалительных цитокинов (ИФН-/, ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛИЛ-12).

Ранние цитокины, образующиеся при вирусных инфекциях

ВИРУСЫ ОБРАЗУЮЩИЕСЯ ЦИТОКИНЫ

Все описанные явления, имеющие место при прогрессировании инфекции, необходимы для прерывания инфекционного процесса или для перехода к последующему специфическому иммунному ответу. В ряде случаев совокупность этих процессов может оказаться достаточной для остановки дальнейшего развития инфекции.

Вслед за РЦР включаются механизмы специфического иммунного ответа. Они протекают по известным схемам опосредованных CD4+ клетками цитокиновых реакций:

по типу Тh-1 или Тh-2. Эти механизмы хорошо изучены в отношении внеклеточных паразитов, но до сих пор не получено однозначных данных на преимущественный тип ответа на вирусные инфекции.

Как РЦР, так и специфический иммунный ответ можно моделировать в системах in vitro и in vivo. Но на практике у человека крайне редко можно уловить момент заражения и проследить РЦР. Чаще больные обращаются к врачу уже на стадии включения специфического иммунитета. При этом наилучшим подходом к иммунокоррекции является вмешательство на уровне цитокиновой регуляторной сети, а сами цитокины могут рассматриваться как новое поколение препаратов (Фрейдлин И.С., 1995).

ИФН статус и цитокиновый профиль в норме. Системный анализ и коррекция нарушений ИФН и цитокинового статусов Для понимания закономерностей изменений в системе ИФН и для коррекции состояния больных необходимо было сначала проведение исследований ИФН статуса и цитокинового профиля здоровых добровольцев. Результаты исследования ИФН статуса 100 добровольцев представлены в таблице 4.

Отмечено, что в современных условиях нормальные показатели ИФН статуса изменились по сравнению с принятыми ранее (Григорян С.С., 1995).

Для более подробного описания состояния системы ИФН и других цитокинов в норме, мы воспользовались методом оценки экспрессии генов цитокинов по продукции их мРНК. В таблице 5 представлены данные о количестве здоровых добровольцев с обнаруженными в клетках их крови мРНК цитокинов. У здоровых добровольцев практически не выявлялись мРНК ИФН-, ИЛ-2 и ИЛ-4, мРНК ФНО- и ИЛ- определялись в среднем в 70% случаев, мРНК остальных исследованных цитокинов была обнаружена у 10-30% здоровых людей.

Показатели интерферонового статуса здоровых добровольцев (n=100) Количество больных (в %, n=100) с повышенным содержанием цитокинов в сыворотке

ДО ЛЕЧЕНИЯ

ПОСЛЕ ЛЕЧЕНИЯ

Напротив, что касается изменений в синтезе ИФН-, у обследованных пациентов в процессе лечения отмечена тенденция к нормализации на уровне транскрипции и продукции этого цитокина.

При этом на начальном этапе лечения у большинства обследованных больных ( человек из 100) отмечено клиническое улучшение, проявившееся в снижении тяжести симптомов интоксикации и местных проявлений. В дальнейшем (в течении 1 года) у этих пациентов отмечалось снижение длительности и частоты рецидивов.

В таблице 13 схематически представлены данные, показывающие зависимость эффективности лечения от уровня и спектра цитокинов, выявляемых в сыворотке крови и МПК больных.

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ ГЕНИТАЛЬНЫМ ГЕРПЕСОМ В

ЗАВИСИМОСТИ ОТ УРОВНЯ ЦИТОКИНОВ

Напротив, отрицательный клинический эффект лечения наблюдался у пациентов при увеличении уровня ИФН-, ИЛ-1, ИЛ-6 в сыворотке крови больных и при полном угнетении способности МПК к выработке ИФН- и ИЛ-4.

Анализ полученных данных позволил прийти к заключению, что особенности иммунного ответа при генитальном герпесе характеризуются изменениями продукции интерферонов (нарушение в основном показателей ИФН-) и других цитокинов (усиление экспрессии генов и/или продукции ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-10, ИЛ-18).

Отмечено, что параметры ИФН статуса и цитокинового профиля при генитальном герпесе отражают эффективность проведенной терапии. Показано, что до лечения у больных генитальным герпесом наблюдалась активация клеточного и гуморального иммунитета. На начальном этапе терапии (10 дней) происходила стимуляция активности Тh1, В-лимфоцитов и естественных киллеров и супрессия Тh2, что и приводило в большинстве случаев к положительному клиническому эффекту.

Обнаружено, что при отрицательном клиническом эффекте у больных генитальным герпесом может не изменяться экспрессия генов ряда цитокинов, но при этом продукция ИФН- и чувствительность к препаратам ИФН- снижается или не изменяется и остается ниже нормальных значений.

Исследование интерферонового статуса и цитокинового профиля у онкологических больных Нами были проведены исследования по схеме, описанной выше, при неинфекционной патологии, в частности при раке молочной железы. Исследование ИФН статуса и цитокинового профиля больных показало нарушение ряда показателей иммунитета у обследованных пациентов.

У больных до лечения отмечены следующие отклонения от нормы (табл.14):

1. Снижение способности к продукции ИФН- практически у всех пациентов.

2. Снижение способности к продукции ИФН- у 80% обследованных.

3. Снижение чувствительности к химиопрепаратам и к препаратам ИФН.

4. Повышение ИФН-- и ИФН--ингибирующей активности сыворотки крови у 20% и 40% пациентов соответственно.

Результаты исследования ИФН статуса больных после химиотерапии (с применением препарата арглабин) также представлены в таблице 14. Как было показано ранее (Балдуева И.А., 1996; Баймахашева А.Н, 2000), арглабин обладал антипролиферативной и иммуномодулирующей активностью.

У обследованных больных после лечения отмечено:

1. Снижение спонтанно вырабатываемого ИФН у всех пациентов.

2. Повышение до нормы способности к продукции ИФН- и ИФН- в среднем у 40% больных.

3. Повышение чувствительности к препаратам ИФН и иммуномодуляторам.

Описанные изменения ИФН статуса являются положительным прогностическим признаком при терапии.

Нарушения интерферонового статуса у больных раком молочной железы Показатели ИФН Количество больных (в %, n=18) с нарушениями Циркулирующий ИФН в плазме крови Спонтанно вырабатываемый ИФН Продукция ИФНПродукция ИФНЧувствительность к ИФНЧувствительность к ИФНИФН-- ингибирующая активность плазмы крови ИФН-ингибирующая активность плазмы крови Чувствительность к индукторам ИФН (ридостин, циклоферон, амиксин) Ридостин Циклоферон Амиксин Нативный Гидрохлорид диметиламиноарглабин Следует отметить, что у 10-20% обследованных обнаружено ухудшение некоторых показателей ИФН статуса после лечения (табл.14). Этот факт может свидетельствовать о недостаточности объема проведенной терапии.

Также было показано (табл. 15), что при исследуемой патологии по сравнению со здоровыми добровольцами повышалось число людей, у которых определялись мРНК ИФН-, ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10 и ИЛ-18. При этом по сравнению со здоровыми добровольцами выявлено снижение количества пациентов с выявленной мРНК ИФН- и ИЛ-12. Следует отметить, что у 78% больных отмечена экспрессия гена ФНО- на уровне здоровых добровольцев.

После лечения у тех же больных в среднем обнаружено снижение активности мРНК ФНО-, ИЛ-8 и ИЛ-12, а также активация экспрессии генов ИЛ-1, ИЛ-2 и ИЛ-6.

Отмечено, что при положительном клиническом эффекте у большинства пациентов определялась мРНК ФНО- (70% больных).

Также показано, что у всех больных с положительным клиническим эффектом в ходе терапии отмечена экспрессия генов ИФН- и ИЛ-2 или только ИЛ-2, а мРНК ИЛ- определялась в 2 раза чаще, чем у пациентов без положительных изменений. Известно, что эти цитокины принимают участие в развитии Th1-типа иммунного ответа, и подавление активности Тh1 со снижением выработки ИФН- или ИЛ-2 приводит к более тяжелому течению заболевания. Следовательно, терапия с применением арглабина, судя по этим показателям, может быть эффективна.

Проведенные исследования также показали, что мРНК ИЛ-1 после лечения определялась практически у всех обследованных больных. При этом отмечена продукция мРНК ИЛ-6 и ИЛ-8 при положительном клиническом эффекте у 70% и 60% пациентов, соответственно, а при стабилизации состояния – у 80% и 70% больных, соответственно.

Так как ИЛ-1, ИЛ-6 и ИЛ-8 являются медиаторами воспаления, полученные результаты могут свидетельствовать о недостаточности проведенной терапии. Об этом может также свидетельствовать факт активации экспрессии генов антивоспалительных цитокинов (ИЛили ИЛ-10) у 70% больных после лечения, так как известно, что увеличение синтеза именно этих цитокинов приводит к подавлению активности Тh1 со снижением выработки ИФН- и более тяжелому течению заболевания.

Синтез мРНК цитокинов у здоровых добровольцев (n=100) и больных раком мРНК Количество людей (в %) с Количество больных (в %) после Одновременно с исследованием ИФН статуса и оценкой экспрессии генов цитокинов по синтезу их мРНК, у тех же больных раком молочной железы определяли содержание цитокинов (методом ИФА) в сыворотке крови и при культивировании клеток крови (табл.16). При этом у пациентов до лечения были выявлены следующие изменения:

1. Повышенное содержание в сыворотке крови (>50пкг/мл) ИЛ-1, ИЛ-4 и ФНО- у 30больных, а ИЛ-2 и ИФН- – у 60-70% пациентов.

2. Снижение количества ИФН- в сыворотке крови у всех обследованных (50пкг/мл) или клетках крови Примечание: * - снижение количества цитокина, ** - повышение количества цитокина после лечения.

После курса проведенного лечения отмечена нормализация или тенденция к нормализации количества ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ФНО-, ИФН- и ИФН-, определяемых в сыворотке крови, у 20-40% обследованных женщин. При этом показано, что у 10-30% больных содержание этих цитокинов в сыворотке крови повышалось, что могло свидетельствовать об активации клеток иммунной системы.

При сравнении данных, полученных разными методами (биологический, ИФА и ОТ-ПЦР), были отмечены изменения в синтезе некоторых цитокинов, соответствующие положительному или отрицательному клиническому эффекту (табл. 17). Показано, что механизм выработки ИФН- у больных раком молочной железы был нарушен на посттранскрипционном уровне, т.е. у всех пациентов отмечено наличие в МПК мРНК ИФН-, но, в то же время, выявлено снижение продукции этого цитокина клетками крови и в сыворотке крови (биологический метод и ИФА). Выявленные нарушения восстанавливались после курса терапии препаратом арглабин или имели тенденцию к восстановлению у 7 больных из 18 обследованных (40%), что является важным показателем клинического улучшения.

Что касается изменений в синтезе ИФН- и других исследованных цитокинов, у обследованных пациентов в процессе лечения отмечена тенденция к нормализации их синтеза на уровне транскрипции (ОТ-ПЦР) и продукции (ИФА / ИФН статус).

Изменение синтеза цитокинов и эффект лечения у больных раком молочной железы Примечание: * - (активация), (подавление), (активация/подавление), N – норма.

После лечения у 7 из 18 обследованных больных отмечено клиническое улучшение.

Именно у этих пациентов в большинстве случаев отмечено восстановление механизмов синтеза следующих цитокинов (табл.17):

- цитокинов, вырабатываемых Th1-лимфоцитами, как ИФН-, так и ИЛ-2 (обязательно оба);

- антивоспалительного цитокина – ИЛ-4 в большинстве случаев (обязательно – активация до или после терапии);

- ФНО-, обладающего избирательной цитотоксичностью в отношении опухолевых клеток (обязательно – активация до или после терапии), а также - ИЛ-1, способного опосредовать развитие системного острофазного ответа и в значительной степени сходного с ФНО- по функциональной активности.

Данные о состоянии системы интерферона и цитокинов у больных раком молочной железы свидетельствуют о возможности иммунокорригирующей терапии у данной группы больных. При этом необходимо учитывать клиническое состояние больного и индивидуальные нарушения в иммунной системе, которые можно обнаружить при исследовании ИФН, иммунного и цитокинового статуса, что и способствует подбору схем лечения, контролю и прогнозированию эффективности терапии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Изменение синтеза цитокинов при разных формах патологии по сравнению со ИФН- мРНК Продукция ИФН- мРНК Продукция ИЛ-1 мРНК ИЛ-2 мРНК ИЛ-4 мРНК ИЛ-6 мРНК ИЛ-8 мРНК ИЛ-10 мРНК ИЛ-12 мРНК ИЛ-18 мРНК ФНО- мРНК Примечание: ВПГ-2 – генитальный герпес, ОВГС – острый вирусный гепатит С, ХВГС 1b или 3a – хронический вирусный гепатит С с генотипами 1b или 3a, РМЖ – рак молочной железы.

Суммируя основные результаты проведенных исследований, можно заключить, что:

- При всех изученных заболеваниях синтез ИФН- нарушен на посттранскрипционном уровне. У всех пациентов отмечено наличие мРНК ИФН-, но, в то же время, выявлено снижение продукции этого цитокина, регистрируемой биологическим методом и ИФА.

- Синтез ИФН- нарушен на уровне экспрессии гена при генитальном герпесе, ОВГС и ХВГС 1b, а при ХВГС 3а и РМЖ синтез ИФН- нарушен на посттранскрипционном уровне.

- мРНК ИЛ-2 определялась гораздо чаще, по сравнению со здоровыми добровольцами, при генитальном герпесе, ХВГС 3а и РМЖ, и лишь при ОВГС и ХВГС 1b экспрессия гена ИЛбыла отмечена в некоторых случаях на уровне здоровых добровольцев.

- Продукция мРНК ИЛ-12 снижена при всех изученных заболеваниях, кроме ОВГС.

Экспрессия гена ИЛ-18 при всех заболеваниях значительно выше, чем у здоровых добровольцев.

- Механизмы синтеза цитокинов, стимулирующих клеточно-опосредованные реакции (Тип-1 цитокины) в основном нарушены на уровне экспрессии их генов.

- Гены цитокинов, усиливающих гуморальный иммунитет (Тип-2) – ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-10, могут экспрессироваться, в той или иной степени, на уровне здоровых добровольцев при вирусных заболеваниях: генитальном герпесе (ИЛ-6, ИЛ-10), ОВГС и ХВГС 1b (ИЛ-4, ИЛХВГС 3а (ИЛ-10). Лишь при РМЖ продукция мРНК этих цитокинов определяется значительно чаще, чем у здоровых людей.

- Экспрессия генов ряда цитокинов (медиаторов воспаления) отмечалась на уровне нормы:

ИЛ-1 при ХВГС 3а, вероятно, уже не вырабатывается; ИЛ-8 при ОВГС, вероятно, еще не вырабатывается; ФНО- при РМЖ, что является благоприятным прогностическим признаком.

Результаты исследования цитокинового профиля и ИФН статуса наглядно продемонстрировали снижение противовирусного иммунитета практически у всех обследованных больных. Он выражается нарушением механизмов синтеза ИФН- и дисбалансом функций клеточного и гуморального звеньев иммунитета.

Описанные закономерности синтеза цитокинов при всех исследованных заболеваниях свидетельствовали о том, что у большинства больных стадия РЦР завершена и произошло включение специфического иммунного ответа.

Изменение синтеза цитокинов у больных с различными заболеваниями после лечения (по сравнению со здоровыми добровольцами) ИФНмРНК Прод.

ИФН- мРНК Прод.

ИЛ- мРНК ИЛ- мРНК ИЛ- мРНК ИЛ- мРНК ИЛ- мРНК ИЛ- мРНК ИЛ- мРНК ИЛ- мРНК ФНО- мРНК Примечание: ВПГ-2 – генитальный герпес, ОВГС – острый вирусный гепатит С, ХВГС 1b или 3a – хронический вирусный гепатит С с генотипами 1b или3a, РМЖ – рак молочной железы.

Определение тех же показателей цитокинового профиля больных после лечения с применением традиционных методов и новых иммуномодулирующих препаратов показало (табл.19), что:

1. При всех заболеваниях происходит активация экспрессии генов цитокинов, продуцируемых Тh1 (ИФН- и ИЛ-2), приводящая к нормализации в большинстве случаев продукции ИФН-. Лишь при генитальном герпесе в некоторых случаях отмечено снижение числа пациентов с выявленной мРНК ИФН- и как следствие – снижение продукции этого цитокина. А при ХГС 3а в большинстве случаев отмечено нарушение синтеза ИФН- на посттранскрипционном уровне.

2. Выявлена активация либо нормализация экспрессии генов ИЛ-12 и ФНО- при ОВГС и ХВГС разных генотипов вируса.

3. Отмечен синтез мРНК антивоспалительных цитокинов ИЛ-4 и ИЛ-10. Лишь при генитальном герпесе и РМЖ экспрессия гена ИЛ-10 в некоторых случаях наблюдалась на уровне здоровых добровольцев.

4. Экспрессия генов ИЛ-1, ИЛ-6 и ИЛ-8 после лечения при исследованных патологических состояниях оставалась в основном на прежнем уровне, лишь при РМЖ отмечена нормализация синтеза мРНК ИЛ-8.

В целом, проведенный комплекс клинико-лабораторных исследований позволил нам:

1. Определить закономерности изменений в синтезе ИФН и других цитокинов на разных этапах экспрессии их генов (транскрипции и продукции) у больных с разными заболеваниями.

2. Установить существующую взаимосвязь между параметрами ИФН и иммунного статусов, а также цитокинового профиля, и эффективностью проводимой терапии.

3. Выделить основные параметры иммунного, ИФН и цитокинового статусов, нормализация которых коррелирует с положительным эффектом лечения.

Таким образом, индивидуальные исследования ИФН, иммунного и цитокинового статусов больных не только выявляют нарушения в иммунной системе, но и отражают защитный потенциал каждого пациента при конкретном заболевании, являясь основой для подбора рациональных схем лечения, контроля и прогнозирования эффективности терапии.

Предложенный нами комплексный подход позволяет моделировать иммунный ответ на инфекцию и корректировать его с помощью лекарственных средств для предупреждения дальнейшего развития патологического процесса. Мы полагаем, что это достигается при использовании ряда известных лечебных средств (химиопрепараты, препараты ИФН и других цитокинов, индукторы ИФН, иммуномодуляторы). При этом в основе отбора препаратов должно лежать выявление механизмов действия препаратов на систему ИФН и цитокинов.

Исследования, проведенные нами совместно с клиницистами, показали целесообразность предварительного подбора лечебных препаратов in vitro в каждом конкретном случае, т.к. клиническая эффективность терапии при этом возрастает в среднем в 2-3 раза (табл 20).

Клиническая эффективность в зависимости от назначения иммуномодулирующих ЗАБОЛЕВАНИЕ Клинические улучшения при Клинические улучшения без гепатиты В, С Генитальный Урогенитальные заболевания сифилиса гортани В целом, определение индивидуальной чувствительности больных с различными заболеваниями к интерферонам и их индукторам позволяет реально прогнозировать эффективность иммуномодулирующей терапии и создает научно обоснованную возможность подбора наиболее эффективных препаратов для каждого конкретного пациента.

ВЫВОДЫ

2. Обосновано существование клеточной чувствительности или резистентности к действию интерферонов у человека, которые являются индивидуальными показателями и меняются в зависимости от заболевания и тактики лечения. При вирусных инфекциях преобладают больные, чувствительные к ИФН- и ИФН-, а при неинфекционных заболеваниях - резистентные к этим интерферонам.

3. Возрастание риска заболеваемости гриппом и ОРВИ в осенне-зимний период сопровождается нарушениями практически всех показателей ИФН статуса и цитокинового профиля. Полученные данные свидетельствует о подавлении противовирусного иммунитета и о возрастании риска инфицирования возбудителями респираторных инфекций, что требует адекватной коррекции для профилактики инфекционных заболеваний в предэпидемический период.

4. Выявленные у здоровых добровольцев изменения показателей ИФН статуса по сравнению с принятыми ранее и повышенное содержание в сыворотке крови провоспалительных цитокинов ИФН- и ИЛ-1, а также антивоспалительного цитокина ИЛ-4 указывают на возможные механизмы снижения популяционного иммунитета у людей.

5. Впервые установлена зависимость характера изменений показателей системы интерферона и цитокинов от генотипа вируса гепатита С, что является важным при назначении лечения и прогнозировании положительного эффекта терапии.

6. Впервые выявлены общие закономерности изменения показателей интерферонового статуса, отмеченные при наличии и отсутствии эффекта терапии, и определены оптимальные способы иммунокоррекции у больных с разными заболеваниями.

7. У больных вирусными инфекциями (гепатит, герпес) в большинстве случаев отмечается положительный клинический эффект, если на начальном этапе терапии проводимое лечение вызывает стимуляцию активности Тh1-, В-лимфоцитов и естественных киллеров и супрессию Тh2-лимфоцитов.

8. Положительная динамика лечения больных с неинфекционной патологией наблюдается при активации Т-клеточного звена иммунитета (как Тh1, так и Тh2) и ЕКК, а также при нормализации индекса иммунорегуляции и показателей гуморального иммунитета.

9. Разработанные принципы индивидуальной иммунокоррекции больных с различными заболеваниями на основе определения показателей интерферонового, иммунного и цитокинового статусов рекомендуются для подбора рациональных схем лечения, контроля и прогнозирования эффективности терапии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Предложенные методы позволяют изучить ИФН и другие цитокины как сигнальные молекулы, способные контролировать состояние организма при ряде инфекционных и неинфекционных заболеваний.

Предложенные и апробированные новые комплексы доклинических методов определения цитокинового ответа позволяют:

1) исследовать цитокин-индуцирующую активность лекарственных средств in vitro, что важно для предварительной оценки эффективности препаратов;

2) определять предполагаемый терапевтический эффект исследуемых препаратов и обосновывать направление коррекции цитокинового профиля на клетках крови человека.

Расширенное исследование спектра цитокинов, продуцируемых in vitro клеточными культурами различной природы и клетками крови человека под действием лекарственных средств и их комбинаций, позволяет прогнозировать и определять возможность клинического использования исследуемых препаратов при разных формах патологии, а также в доклинических условиях отработать оптимальные схемы введения препарата.

Список работ, опубликованных по теме диссертации 1. Тазулахова Э.Б., Мезенцева М.В., Паршина О.В., Гусева Т.П. Новые подходы к оптимизации схем применения индукторов интерферона. // Материалы конференции «Человек и лекарство», 1995, стр.313.

2. A.N.Narovlyansky, A.M.Amchencova, M.V.Mezentseva, F.I.Ershov. Analisis of Interferon’s sensitivity of Human Beings: the Clinical Test with Interferon Priming Effect. // European Cytokine Network. V.7 N3, 1996, p. 3. M.V.Mezentseva, A.N.Narovlyansky, A.M.Amchencova, F.I.Ershov. Clinical Analisis of IFN-producting and IFN-effected Systems. // там же, p. 4. В.В.Яворский, М.В.Мезенцева, О.В.Короткова, С.В.Амфилов, А.М.Федосюк, А.В.Коржаков, В.В.Малиновская. Применение Виферона в онкологической практике (первый опыт). // в кн. «Новые перспективы применения препаратов интерферона в педиатрии и гинекологии», СПб, 1997, стр.7-8.

5. Тареева Т.Г., Шумина А.В., Ткачева И.И., Котов Ю.Б., Мезенцева М.В., Паршина О.В. Виферонотерапия в профилактике тяжелых форм внутриутробной инфекции. // в кн. «Новые перспективы применения препаратов интерферона в педиатрии и гинекологии», СПб, 1997, стр.22-23.

6. В.Ф.Учайкин, Т.В.Чередниченко, В.В.Малиновская, О.Б.Ковалев, Ф.С.Харламова, Г.В.Чаплыгина, В.А.Конев, О.В.Паршина, М.В.Мезенцева, Т.П.Гусева. Применение рекомбинантного интерферона-альфа-2 при хронических гепатитах В, С и Д у детей. // в кн. «Новые перспективы применения препаратов интерферона в педиатрии и гинекологии», СПб, 1997, стр.34-35.

7. М.В.Мезенцева, Д.Г.Хусаинова, В.В.Малиновская. Иммуностимулирующий эффект препарата Виферон при урогенитальных инфекциях. // Материалы конференции «Человек и лекарство», 1997, стр. 8. М.В.Мезенцева, Л.И.Хреновская, Р.А.Хошабаева, В.А.Мозговой, Л.Ю. Мозговая.

Иммунотерапия детей с ортопедическими нарушениями. // Материалы конференции «Человек и лекарство», 1997, стр.225.

9. М.В.Мезенцева, Н.А.Селиванов, А.Н.Наровлянский. Чувствительность к интерферонам у больных гепатитом С. // Материалы II Рос. практич. конфер.

“Гепатиты В,С,D,G-проблемы диагностики, лечения и профилактики” 10. A.Narovlyansky, M.Mezentseva, T.Kondratieva, F.Ershov. The Influence of Ridostin and Cycloferonum on IFN Production in Cells of Mice with T- and B-immunodeficites. // Jornal of Interferon & Cytokine Research V.17, 1997, p.94.

11. Наровлянский А.Н., Мезенцева М.В., Амченкова А.М., ЕршовФ.И. Клинический тест с использованием прайминг-эффекта интерферонов для анализа ИФНэффекторной системы у людей. // Материалы VII Съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, М., 1997, стр.126-127.

12. М.В.Мезенцева, А.Н.Наровлянский, А.М.Амченкова, В.В.Парфенов, В.В.Малиновская, Ф.И.Ершов. Методические рекомендации «Определение клеточной чувствительности к интерферонам в цельной крови (расширение показателей ИФН-статуса).» // НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи, 1998, С.8.

13. В.В.Макашова, Н.В.Деленян, М.А.Рязанцева, М.В.Мезенцева, Т.С.Гусева, О.В.Паршина, В.В.Малиновская. Применение отечественного препарата Виферон у больных хроническим вирусным гепатитом С. // Материалы конференции «Человек и лекарство», 1998, стр.128.

14. M.V.Mezentseva, V.A.Mozgovoi, L.Yu.Mozgovaya, R.Ya.Podchernyaeva. The New Type of Immunomodulator. // Kluwer Academic Publishers, “New Developments and New Applicatios in Animal Cell Technology.” (780 pages) 1998, p.613-615.

15. M.Mezentseva, A.Narovlyansky, M.Tsvetnova, M.Ryazantseva, F.Ershov. Stimulators of IFN Action as the Factors for Determination of the HCV Infection’s Pathogenesis. // International Conference on Interferons. Biology and Clinical Applicatons. 1998, p.79.

16. A.N.Narovlyansky, M.V.Mezentseva, A.M.Amchencova, M.V.Tsvetnova, F.I.Ershov.

Interferon Sensitivity: Clinical Aspect. // Там же, p.82.

17. M.Tsvetnova, M.Mezentseva, S.Kraevoy, A.Narovlyansky, F.Ershov. Treatment of Patients with Urogenital Infections by IFNs and IFN Inducers. // European Cytokine Network. V.9, N3, 1998, p.529.

18. M.Tsvetnova, M.Mezentseva, E.Troshina, R.Podchernyaeva F.Ershov, A.Narovlyansky.

Individual Correctin of IFN-sensitivity and IFN-production by IFNs and Other Cytokines.

// там же., p. 19. N.Delenian, V.Makashova, L.Pavlova, M.Ryazantseva, M.Mezentseva, V.Malinovskaya.

Pathogenetically Confirmed Therapy of Chronic Viral Hepatitis C by Recombinant Interferon Alpha-2b with Preparations of Antioxidant Action. // там же, p.427.

20. V.Parfenov, V.Malinovskaya, V.Yavorsky, M.Mezentseva, O.Korotkova, S.Amphilov.

Viferon in Oncology. // там же, p.508.

21. A.N.Narovlyansky, M.V.Mezentseva, A.V.Sanin, A.V.Pronin, A.M.Amchencova, L.L.Danilov, S.D.Maltsev, F.I.Ershov. The Influence of Phosprenyl upon the Action of Interferon Inducers. // там же, p.435.

22. M.V.Mezentseva, A.N.Narovlyansky, M.V.Tsvetnova, N.V.Kasyanova, F.I.Ershov. New Method for Determination of Immunoreactivity in Patients with Viral and Other Pathologies. Optimization of Immunotherapy. Havanna-99.

23. Kasyanova N.V., Mezentseva M.V., Bychenko D.V., Narovlyansky A.N., Ershov F.I.The Usage of Cycloferon in Therapy of Active Hepatitis C in Drug Addicts. // Jornal of Interferon & Cytokine Research V.19, 1999, p.109.

24. A.Vasiliev, M.Mezentseva, G.Puchkova, A.Khoduakova, R.Vasilenko, D.Dolgikh, V.Zav’yalov. Antiviral Activity of the Synthetic Peptide -Peptoferon, Corresponding to Amino Acid Sequence 130-137 of Human IFN-. // там же, p.113.

25. Mezentseva M.V., Tsvetnova M.V., Kasyanova N.V., Ershov F.I., Narovlyansky A.N.

Effects of the Blood Serum that Inhibit or Stimulate IFN Action in Patients with Viral Pathology. // там же, p.113.

26. A.N.Narovlyansky, A.M.Amchencova, M.V.Mezentseva, F.I.Ershov. Response of Blood Cells to the Interferon Action in Viral Pathology. // там же, p.113.

27. A.Khoduakova, D.Dolgikh, M.Mezentseva, G.Puchkova, A.Vasiliev, R.Vasilenko, G.Kozlovskaya, A.Vartapetian, V.Zav’yalov. Dinamics of Interferon Production and Formatio of Antiviral Protection, Induced by Human Prothymosin- in Rabbits and Cell Culture. // там же, p.118.

28. Л.Г.Ерохина, Н.С.Чекнева, Н.А.Кобякина, Г.С.Алексеева, М.В.Мезенцева, С.Б.Чекнев. Возможности прогнозирования эффекта бетаферона у больных рассеянным склерозом. // М, Вестник практической неврологии. №5, 1999, стр. 88Мезенцева М.В., Оспельникова Т.П., Кобякина Н.А., Чекнев С.Б., Ершов Ф.И.

Изменение выработки интерлейкина-4 у больных рассеянным склерозом. // СПб, Медицинская иммунол. т.2, №2, 2000, стр. 180-181.

30. Кобякина Н.А., Мезенцева М.В., Чекнев С.Б., Скворцова В.И. Интерфероновый статус и чувствительность клеток к интерферону в ходе иммунотерапии у больных рассеянным склерозом. // СПб, Воен.-Мед. академ., Современ. подходы к диагностике и лечению нервных и психич. заболеваний. 2000, стр. 374-375.

31. Н.А.Кобякина, М.В.Мезенцева, С.Б.Чекнев, В.И.Скворцова. Показатели интерферонового статуса и чувствительность клеток к интерферону у больных рассеянным склерозом, получающих патогенетическую терапию. // СПб, Лики России, Рассеянный склероз: лечение и оздоровление. 2000, стр.62-63.

32. Mezentseva M.V., Ospelnikova T.P., Narovlyansky A.N., Ershov F.I. Determination of Possible Influence of IFN Preparations and IFN Inducers on Cytokines’ Production in Patients with Viral Infections. // European Cytokine Network., V.11, 2000.

33. M.V.Mezentseva, A.N.Narovlyansky, N.V.Kasyanova, M.V.Tsvetnova, M.Yu.Vershinina, O.V.Kalinchuk, V.O.Polonsky, F.I.Ershov. Sensitivity to IFN Preparatins and IFN Inducers in Patients with Different Viral Infections. // там же 34. Narovlyansky A.N., Vershinina M.Yu., Amchencova A.M., Mezentseva M.V., Parfenov V.V., Ershov F.I. The Cytokine mRNAs in Cell Lines with Different IFN-sensitivity. // 35. S.B.Cheknev, N.A.Kobyakina, M.V.Mezentseva, V.I.Skvortsova. Cell Response to Betaferon as an Indication on Prognosis in Multiple Sclerosis. // там же 36. М.В. Мезенцева, Н.В.Касьянова, Д.В.Быченко, А.Л.Коваленко, Ф.И.Ершов.

Циклоферон в терапии острого гепатита С у наркоманов. // Клиническая фармакология и терапия, 2000, №1, 89-91.

37. А.Н.Наровлянский, А.М.Амченкова, М.В. Мезенцева, Ф.И.Ершов. Клеточная чувствительность к действию интерферона при различных формах вирусной патологии. // Вопросы вирусологии, 2000, №3, 20-25.

38. А.Н.Наровлянский, А.М.Амченкова, М.В.Мезенцева, А.В.Санин, Ф.И.Ершов.

Клеточная чувствительность к действию интерферона при иммунодефицитах, аутоиммунных и аллергических заболеваниях. // Russian Journal of Immunology 2000, V.5 N.2, 185-192.

39. С.Б.Чекнев, Н.А.Кобякина, М.В.Мезенцева, Н.С.Чекнева, В.И.Скворцова.

Динамика показателей интерферонового статуса в ходе иммунотерапии рассеянного склероза: индивидуальный анализ. // Russian Journal of Immunology, 2000, V.5, N.4, стр. 399-406.

40. Нурмухаметов Р.Х., Онуфриева Е.К., Солдатский Ю.Л., Мезенцева М.В., Касьянова Н.В., Цветнова М.В., Кольцов В.Д. Оценка образования антител к интерферону и их влияния на эффективность интерферонотерапии у детей, страдающих ювенильным респираторным паппиломатозом. // Вестник оториноларингологии, 2000, №4, 4 стр 41. С.Б.Чекнев, М.В. Мезенцева, А.Н.Наровлянский, Н.А.Кобякина, Ф.И.Ершов.

Выявление корреляции при действии лекарственных форм интерферона и его индукторов на клетки крови больных рассеянным склерозом in vitro. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2001, т.131, №4, 453-456.

42. С.Б.Чекнев, А.Н.Наровлянский, М.В. Мезенцева, А.М.Амченкова, Н.А.Кобякина, В.И.Скворцова, Ф.И.Ершов. Расширенный интерфероновый статус при рассеянном склерозе. // Иммунология, 2001, №1, 36-39.

43. С.Б.Чекнев, М.В. Мезенцева, А.Н.Наровлянский, Н.А.Кобякина, В.И.Скворцова, Ф.И.Ершов. Праймирующее действие медицинских препаратов интерферона на клетки крови больных рассеянным склерозом in vitro. // Иммунология, 2001, №1, 44. С.Б.Чекнев, М.В. Мезенцева, Н.А.Кобякина, Ф.И.Ершов. Выработка интерферона клетками крови больных рассеянным склерозом в присутствии лекарственных форм индукторов in vitro. // Иммунология, 2001, №2, 30-33.

45. Мезенцева М.В., Наровлянский А.Н., Оспельникова Т.П., Касьянова Н.В., Цветнова М.В., Ершов Ф.И. Прогнозирование эффективности интерферонотерапии при различных формах патологии. // Иммунология, 2001, №4, 41-44.

46. Нурмухаметов Р.Х., Онуфриева Е.К., Солдатский Ю.Л., Бродский М.Ю., Кольцов В.Д. Влияние типов вируса папиломы человека и нейтрализующих антител к 2интерферону на эффективность интерферонотерапии у детей, страдающих ювенильным респираторным паппиломатозом. // Материалы 16 Съезда оторинголарингологов России, март 2001, 6 стр 47. А.К.Токмалаев, В.В.Макашова, Л.Е.Павлова, В.В.Малиновская, М.А.Рязанцева, В.Н.Солнцева, М.В.Мезенцева, Л.В.Серебровская, Р.Ф.Максимова. Состояние систем интерферона и иммунитета у больных ХВГС. // Материалы конференции «Человек и лекарство», 2001, стр.273.

48. В.В.Макашова, А.К.Токмалаев, Л.Е.Павлова, В.В.Малиновская, М.А.Рязанцева, В.Н.Солнцева, М.В.Мезенцева, Л.В.Серебровская, Р.Ф.Максимова. Система иммунитета на фоне интерферонотерапии у больных ХВГС. // там же, стр. 235.

49. В.О.Полонский, М.В.Мезенцева, Т.П.Оспельникова, А.Н.Наровлянский, В.Э.Щербенко, В.В.Семернина, Е.Ю.Анохина Ф.И.Ершов. Особенности продукции цитокинов у волонтеров в осенне-зимний период. // Аллергол. и иммунол. т.2 № 2001, стр.18.

50. М.В.Мезенцева, А.Н.Наровлянский, Т.П.Оспельникова, В.Э.Щербенко, М.Ю.Вершинина, Ф.И.Ершов. Продукция цитокинов клетками крови при вирусных инфекциях и других формах патологии. // Медицинская иммунол. т.3, №2, 2001, стр.228-229.

51. М.Ю.Вершинина, А.Н.Наровлянский, А.М.Амченкова, Ф.И.Ершов. Цитокиновые мРНК влияют на чувствительность клеток к альфа-интерферону. // там же, стр. 308.

52. А.Н.Наровлянский, В.Э.Щербенко, Ф.И.Ершов. Исследование эффективности действия иммуномодуляторов, интерферонов и других цитокинов на различные культивируемые клетки. // Цитология т.43 №9 2001, стр.878.

53. Kasyanova N.V., Mezentseva M.V., Narovlyansky A.N., Sherbenko V.E., Ryazantseva M.A., Ershov F.I. Optimization of Treatment of HCV Patients with IFN Preparations. // Jornal of Interferon & Cytokine Research V.21, 54. Mezentseva M.V., Ospelnicova T.P., Narovlyansky A.N., Sherbenko V.E., Semernina V.V., Anokhina E.Yu., Ershov F.I. Cytokine Production in Healthy Volunteers. // там же 55. M.V.Mezentseva, A.N.Narovlyansky, V.E.Sherbenko, F.I.Ershov. Cytokine Production by Volunteer Cells in the Influenza Pre-epidemic Period. // там же.

56. S.B.Cheknev, N.A.Kobyakina, N.S.Chekneva, V.I.Skvortsova, M.V.Mezentseva.

Combination of Human rIFN- and rIFN- in Therapy of Multiple Sclerosis. // там же, 57. A.N.Narovlansky, M.Yu.Vershinina, M.V.Mezentseva, A.A.Sarimsakov, A.M.Amchenkova, T.Kurits, F.I.Ershov. The cytokine-inducing activity of IFN inducers.

58. Н.А.Кобякина, М.В.Мезенцева, А.Н.Наровлянский, С.Б.Чекнев, Н.С.Чекнева, В.И.Скворцова. Интерфероновый статус и праймирующий эффект препаратов интерферона у больных рассеянным склерозом в условиях патогенетической иммунотерапии. // VII Всероссийский съезд неврологов, 2001, стр.75.

59. С.Б.Чекнев, Н.А.Кобякина, М.В.Мезенцева, В.И.Скворцова. Пролонгированное исследование состояния системы интерферона у больных рассеянным склерозом, получающих индивидуальную иммунотерапию человеческим рекомбинантным ИФН-. // Russian Journal of Immunology V.6, N.1, 2001, стр. 39-46.

60. С.Б.Чекнев, Н.А.Кобякина, М.В.Мезенцева, Н.С.Чекнева, В.И.Скворцова.

Возможности комбинирования человеческих рИФН- и рИФН- в комплексной иммунотерапии рассеянного склероза. // Russian Journal of Immunology V.6, N.3, 2001, стр. 271-280.

61. Ершов Ф.И., Мезенцева М.В., Васильев А.Н., Щербенко В.Э., Наровлянский А.Н.

Методические указания по определению индивидуальной чувствительности организма к интерферонам, другим цитокинам и индукторам интерферона. // Ведомости научного центра экспертизы и государственного контроля лекарственных средств, 2002, № 1 (9), стр. 22-26.

62. Ершов Ф.И., Мезенцева М.В., Васильев А.Н., Щербенко В.Э., Наровлянский А.Н.

Методические указания по проведению доклинических исследований цитокининдуцирующей активности антивирусных препаратов // Ведомости научного центра экспертизы и государственного контроля лекарственных средств, 2002, № (9), стр. 26-29.

63. Наровлянский А.Н., Дерябин П.Г., Вершинина М.Ю., Мезенцева М.В., Ф.И.Ершов.

Влияние индукторов интерферона на инфекцию, вызванную вирусом гепатита С, и активность мРНК цитокинов в культурах клеток SW-13 и МТ-4. // Вопросы вирусологии, 2002, № 6, стр. 17-21.

64. Mezentseva M.V., Narovlyansky A.N., Scherbenko V.E., Polonsky V.O., Anokhina E.Yu., Ershov F.I. Analysis of the interferon status and cytokine profile in patients with genital herpes. // Russian Journal of Immunology, 2002, v. 7, n. 2, p.167-174.

65. Наровлянский А.Н., Вершинина М.Ю., Амченкова А.М., Мезенцева М.В., Ершов Ф.И. Роль циокиновых мРНК в чувствительности клеток к альфа-интерферону. // Доклады Академии наук, 2002, т.383, № 5, с. 691-693.

66. Мезенцева М.В., Наровлянский А.Н., Оспельникова Т.П., Ершов Ф.И. Продукция цитокинов клетками крови при герпесе, гепатите С и других формах патологии. // Вопр. вирусол. 2002, т.47, №1, стр. 44- 67. С.Б.Чекнев, М.В.Мезенцева, Ф.И.Ершов. Ответ клеток крови на действие индукторов интерферона в прогнозе эффективности комплексной терапии рассеянного склероза. // Иммунология, 2002, т.23, №5, стр. 293-296.

68. Ершов Ф.И., Мезенцева М.В., Наровлянский А.Н., Щербенко В.Э. Способ определения чувствительности живого организма к цитокину. Патент РФ на изобретение №2181889 от 27.04.2002.

69. Н.А.Кобякина, Н.С.Чекнева, М.В.Мезенцева, С.Б.Чекнев, В.И.Скворцова. Клиникоиммунологические сопоставления в оценке функционирования системы интерферона у больных рассеянным склерозом. // Неврология и психиатрия, 2002, № 11, стр. 38-42.

70. С.Б.Чекнев, М.В.Мезенцева, Н.А.Кобякина. Индукция и прайминг выработки интерферона в группах больных рассеянным склерозом, различающихся по клиническим характеристикам патологического процесса. // Иммунология, № 2, 2002, стр. 115-118.

71. С.Б.Чекнев, М.В.Мезенцева, А.Н.Наровлянский. Чувствительность клеток крови к экзогенному интерферону в прогнозе эффективности комплексной терапии рассеянного склероза. // Иммунология, № 3, 2002, стр. 186-189.

72. Ершов Ф.И., Мезенцева М.В., Наровлянский А.Н., Щербенко В.Э. Способ определения чувствительности живого организма и/или его клеток к воздействию вещества, поля или комбинации веществ и/или полей. Патент РФ на изобретение №2202363 от 20.04.2003.

73. Наровлянский А.Н., Вершинина М.Ю., Дерябин П.Г., Мезенцева М.В., Ершов Ф.И.

Влияние тетрациклина на инфекционные свойства вируса гепатита С и активность мРНК цитокинов в инфицированных культурах клеток SW-13 и МТ-4. // Вопросы вирусологии, 2003, № 1, стр.35-38.

74. Мезенцева М.В., Щербенко В.Э., Наровлянский А.Н., Фарфаровский М.С., Павлов В.И., Павлова С.В., Ершов Ф.И. Особенности продукции интерферонов и цитокинов при генитальном герпесе. // Вопр. вирусол. 2003, т.48, №6, стр. 33-37.

75. Мезенцева М.В., Ломакина Е.А., Наровлянский А.Н., Щербенко В.Э., Семернина В.В., Павлова С.В., Кулагин В.И., Ершов Ф.И. Оценка системы интерферона у больных с серорезистентностью после лечения сифилиса. // Иммунология. 2003, №2, стр. 82-86.

76. Полонский В.О., Оспельникова Т.П., Тутушкина Т.В., Мезенцева М.В. Индуктор интерферона Кагоцел. Результаты клинических исследований. // Научные труды ГИУВ МО РФ, М., 2003, стр.162-164.

77. Бавашева Е.В., Турьянов М.Х., Ватагина О.Н., Семернина В.В., Павлов В.И., Мезенцева М.В. Особенности синтеза цитокинов при хроническом вирусном гепатите С. // Материалы VI Рос. Съезда врачей-инфекционистов, СПб., 2003, стр.22.

78. Mezentseva M.V., Sanin A.V., Scherbenko V.E., Vatagina O.N., Darevskaya A.N., Bavasheva E.V., Turyanov M.H., Narovlyansky A.N. The pattern of cytokine synthesis in patients with chronic viral C hepatitis. // Jornal of Interferon & Cytokine Research V.23, 2003, p.133.

79. Ф.И.Ершов, А.Н.Наровлянский, М.В.Мезенцева. Ранние цитокиновые реакции при вирусных инфекциях. // Цитокины и воспаление, 2004, т.3, №1, стр.3-6.

80. Спицина Е.Г., Перламутров Ю.Н., Мезенцева М.В. Особенности иммунного статуса у больных с серорезистентностью после лечения сифилиса. // Материалы научно-практической конференции «Хронические дерматозы: новые аспекты патогенеза и терапии. Инфекции, передаваемые половым путем», М., 2004, стр.55.

81. Ф.И.Ершов, А.Н.Наровлянский, П.Г.Дерябин, Л.К.Березина, Т.А.Гуськова, И.С.Николаева, М.В.Мезенцева, С.С.Григорян, С.В.Ожерелков, А.Н.Васильев, В.Э.Щербенко, И.А.Ленева. Методические указания по изучению специфической противовирусной активности фармакологических веществ. // в кн. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению фармакологических веществ.

(под редакцией Р.У.Хабриева), М., 2005, стр. 532-557.

82. Ф.И.Ершов, Э.Б.Тазулахова, А.Н.Наровлянский, С.С.Григорян, М.В.Мезенцева, В.Э.Щербенко. Методические указания по изучению специфической активности индукторов интерферона. // там же, стр. 558-571.

83. Н.Ф.Мясоедов, Ф.И.Ершов, О.Н.Учакина, П.Н.Учакин, М.В.Мезенцева, А.А.Зозуля, И.М.Сургучева, О.Ю.Соколов. Изучение цитокинмодулирующих и антивирусных свойств биологически активных пептидов – гипролинов. // Тезисы докладов «Фундаментальные науке – медицине», М., 2005, стр. 175-177.

84. Ершов Ф.И., Мезенцева М.В. Новые подходы к разработке препаратов, регулирующих иммунный ответ при инфекционной патологии. // Международный Междисциплинарный Семинар «Новые технологии в интегративной медицине и биологии. Стресс и экстремальные состояния», Бангкок, 2006, стр. 32-33.

85. Павлова С.В., Мезенцева М.В., Щербенко В.Э., Ершов Ф.И. Индивидуализация терапии при цитомегаловирусной инфекции и генитальном герпесе на основании изучения состояния системы интерферона и цитокинов больных. // там же, стр.55.

86. Чернакова Г.М., Мезенцева М.В., Абаева М.Р., Щербенко В.Э., Сургучева И.М., Ершов Ф.И. Иммунитет при хронической инфекции переднего сегмента глаза. // Выражаю глубокую признательность за постоянные ценные консультации и помощь при оформлении диссертации академику РАМН, доктору медицинских наук, профессору Феликсу Ивановичу Ершову.

Искренне признательна за содействие в проведении исследований по теме диссертации и всестороннюю помощь доктору биологических наук, профессору Александру Наумовичу Наровлянскому.

Благодарю за активную помощь в работе и анализе полученных результатов сотрудников отдела интерферонов и отдела иммунологии НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН, принимавших участие в исследованиях, результатом которых явилась данная работа.

Отдельная благодарность всем клиницистам за предоставленную возможность для исследований и оценку клинического состояния обследованных больных.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ